转录组学主要技术与应用研究

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单细胞转录组学的技术及应用

单细胞转录组学的技术及应用

单细胞转录组学的技术及应用随着科技发展的不断推进,人们对于生物学领域的研究也越来越深入。

在这个领域中,单细胞转录组学技术是一个备受关注的革命性技术,可以为生物学研究提供更加深入细致的了解与理解。

一、单细胞转录组学技术的定义和意义单细胞转录组学技术(Single-cell transcriptomics)是一种能够对单个细胞进行分析的生物信息学技术,可以测定其转录组水平,因此也又被称为转录组测序技术。

这种技术能够对细胞的基因表达进行高通量、高灵敏的研究,其主要应用领域是生物医学、致病机制的解析以及个性化医疗的发展等领域。

单细胞转录组学技术的意义在于:在了解每一个细胞的基础上,可以更加感性地了解组织和系统方面的更多相关信息。

比如疾病的研究,单细胞转录组学就可以从一个个细胞的角度看到病变细胞和正常细胞之间的差异。

这可以为转化医学研究提供重要的基础数据。

二、单细胞转录组学技术的研究方法单细胞转录组学技术要求对细胞进行隔离或者微量处理后,通过高通量测序技术获取每个单独细胞的转录本信息,从而建立一个具有生物学意义的单细胞图谱。

这种方法主要有以下几种:1. 微流控技术微流控技术是目前应用比较广的单细胞分离技术,可以将单个细胞分离到微小单元中,进一步完成单细胞转录组学研究。

该技术在去年发表在Nature上的文章中,首次使用混合式多层微流控芯片,实现了超过6万个肺癌瘤细胞(filter cells)的测序,并对这些细胞进行了分类。

2. 磁性珠技术磁性珠技术利用通过连接到表面上的选择性抗体来挑选出感兴趣的单个细胞,这样可以保证筛选出的细胞单一性。

但是该技术在筛选过程中也会影响单细胞的RNA浓度。

因此在使用这种技术时,需要充分考虑上述问题。

3. 转移部分细胞原型尽管微流控和磁性珠技术在单细胞分离上表现出色,但分离效率相对不太高。

因此,一些新兴技术引人注目,例如SPOT,即区分细胞不同阶段的技术。

相比Sanger技术和Illumina高通量测序,该技术在处理细胞材料方面具有明显优势。

转录组学微生物

转录组学微生物

转录组学微生物转录组学微生物是一门研究微生物基因表达的学科,通过对微生物转录组的分析,可以深入了解微生物在不同环境中的基因表达模式,揭示微生物的生理特性和生物功能。

本文将从转录组学的基本原理、研究方法和应用领域等方面进行介绍。

一、转录组学基本原理转录组是指一个生物体在某个时刻的所有基因的转录产物,即所有mRNA的总和。

转录组学研究的主要目标是通过高通量测序技术,对微生物的转录产物进行全面和系统地分析,以获得微生物在特定环境中的基因表达谱。

转录组学的研究基于以下两个基本原理:1. 基因表达的可变性:微生物在不同环境中的基因表达模式会发生变化,这种变化可以通过转录组学的分析来揭示。

通过比较不同条件下的转录组数据,可以了解微生物对环境的适应机制,以及其在不同生长阶段或不同环境中的适应策略。

2. 基因调控网络:微生物的基因表达受到复杂的调控网络控制,包括转录因子、信号传导通路和代谢途径等。

转录组学可以揭示这些调控网络的结构和功能,帮助我们理解微生物的生物学过程和生物功能。

二、转录组学研究方法转录组学的研究方法主要包括以下几个步骤:1. RNA提取:从微生物样品中提取RNA,包括mRNA和非编码RNA等。

2. RNA测序:使用高通量测序技术对RNA样品进行测序,得到大量的短序列数据。

3. 数据分析:对测序数据进行质控、比对和注释等分析,得到基因表达谱和差异表达基因。

4. 功能注释:对差异表达基因进行功能注释和富集分析,了解微生物的生物学功能和代谢途径等。

5. 转录因子预测:通过分析转录因子结合位点和转录因子基因的表达数据,预测微生物的转录因子和调控网络。

三、转录组学在微生物研究中的应用转录组学在微生物研究中有广泛的应用,主要包括以下几个方面:1. 研究微生物的适应机制:通过比较不同环境下的转录组数据,可以了解微生物对环境的适应机制和适应策略。

例如,研究细菌在不同营养条件下的基因表达模式,可以揭示其对不同营养物质的利用方式和代谢途径。

转录组学 表观组学研究方法和技术路线

转录组学 表观组学研究方法和技术路线

转录组学表观组学研究方法和技术路线1. 引言1.1 研究背景转录组学和表观组学作为生物学研究领域的新兴技术,在基因调控和表观遗传学研究中发挥着越来越重要的作用。

随着高通量测序技术的发展和成熟,研究人员可以更深入地了解细胞内基因的表达调控和表观遗传修饰,为解决生物学中的重大科学问题提供了强大的工具和方法。

转录组学研究方法主要关注细胞内所有基因的转录活动,通过测定RNA的种类和数量来揭示基因表达的模式,从而帮助揭示基因调控网络和疾病发生机制。

而表观组学研究方法则更多关注基因组DNA的表观遗传修饰,如DNA甲基化和组蛋白修饰,这些修饰能够影响基因的表达和染色体结构,从而影响细胞功能和生物表现。

在当前生物技术发展的大背景下,转录组学和表观组学的研究方法和技术路线不断完善和创新,为生命科学研究开辟了新的领域。

随着应用的深入和研究者对这些技术的掌握,转录组学和表观组学的未来发展前景广阔,但也面临着一系列挑战和机遇。

【研究背景】中的2000字内容到此结束。

1.2 研究意义研究表观组学和转录组学的方法和技术路线对于理解基因组的调控机制、揭示疾病发生的分子机制,以及发展个性化医学具有重要的意义。

随着高通量测序技术的不断发展,研究者们能够更加全面地解读基因组中的信息,揭示基因和环境之间的相互作用,从而为疾病的预防、诊断和治疗提供更为精准的依据。

表观组学的研究方法能够揭示基因组中的表观修饰在基因表达调控中的作用,为我们理解基因组不同部分之间的相互联系提供了重要线索。

转录组学的研究方法则可以帮助我们了解细胞中基因的表达情况,进一步揭示基因功能和调控机制。

这些研究方法和技术路线的持续发展,为科学家们提供了更多的工具和资源,帮助他们更好地解读基因组中的信息,并将其应用于疾病的研究和治疗中。

深入研究表观组学和转录组学的研究方法和技术路线不仅对于推动基础科学研究具有重要意义,更对于促进医学领域的发展和进步具有积极的意义。

通过这些研究,我们可以更好地理解生命的奥秘,为人类健康和生命质量的提高做出更为重要的贡献。

转录组学主要技术与应用研究

转录组学主要技术与应用研究

转录组学主要技术与应用研究转录组学是一种研究生物体转录组的学科,它主要通过采用高通量测序技术,对细胞中所有基因的RNA表达进行全面和系统地研究。

通过对转录组的研究,我们可以全面了解基因在特定组织、特定时期和特定环境下的表达情况,可以揭示基因在生物体发育、生理活动和适应环境等方面的机制,以及与疾病发生发展相关的分子基础。

下面将对转录组学的主要技术和应用研究进行详细介绍。

一、转录组学的主要技术1. RNA测序技术(RNA-Seq):RNA测序是转录组学研究的核心技术,它通过将RNA反转录成DNA,并进行文库构建和测序,得到RNA的全长序列信息。

RNA-Seq技术相比传统的Microarray技术,具有更高的灵敏度和准确性,可实现低丰度基因的检测和定量,同时可以鉴定新转录物和变异。

2.转录组组装和注释:对RNA测序得到的序列进行数据处理,包括序列质量控制、去除低质量序列、去除污染序列等,然后对测序得到的短序列进行组装和注释,得到基因的表达信息和基因的结构信息。

3.管理基因和差异表达基因分析:将样品的RNA序列比对到参考基因组或转录组,利用比对结果和参考基因组的注释信息,挖掘出差异表达的基因,进而进行差异表达基因的验证和功能解析。

4. 其他技术:包括RNA亚转录组测序(sub-transcriptome sequencing)、全长转录组测序(full-length transcriptome sequencing)、单细胞转录组测序(single-cell transcriptome sequencing)等技术。

二、转录组学的应用研究1.基因功能解析:通过分析转录组数据,可以研究基因的表达模式、调控网络和与其他基因的相互作用,进而揭示基因在生物体发育、生理功能和适应环境等方面的作用和机制。

2.疾病诊断和预测:转录组学可以揭示疾病发生和发展的分子基础。

通过比较疾病组织和正常组织的转录组差异,可以鉴定与疾病相关的基因和通路,为疾病的早期诊断和治疗提供新的靶点和策略。

基因组学和转录组学的应用和发展

基因组学和转录组学的应用和发展

基因组学和转录组学的应用和发展基因是个有趣的话题。

我们都知道基因是遗传物质的单位,其含有的DNA序列在生命过程中发挥着重要的作用。

然而,仅仅了解基因的存在并不足够,要发挥其潜能,就必须进一步探索基因组学和转录组学。

基因组学是指对基因组的研究和分析,包括了基因的序列、染色体结构、基因在细胞中的位置以及基因与表现型之间的关系。

转录组学则是研究基因的转录过程,包括了细胞内的RNA发生的方式、RNA可变剪接、转录因子的调节等。

基因组学和转录组学的应用和发展,可以从三个方面来探讨。

一、人类健康领域基因组学和转录组学已经成为人类健康领域的研究重点。

通过对人类基因组和转录组的深入研究,科学家们已经可以检测到数百种致病基因,这些发现将给人类健康领域带来革命性的变革。

例如,人类可以通过基因检测了解自己的遗传背景,避免患上一些遗传病。

同时,基因组学和转录组学也可以为开发新的治疗方案提供基础。

例如,永生疗法已经成为治疗一些不治之症的新希望。

综合了基因组学和转录组学的技术,科学家可以通过软件和算法组合进行分析,找出致病基因和RNA,进而开发新的治疗方案。

二、生物多样性的研究基因组学和转录组学也成为生物多样性研究的重要工具。

生物多样性是指某一生态环境下的生物物种多样性和相关性差异的总和。

通过对生命体系的研究,我们可以探索物种在进化过程中的策略。

例如,基因组学和转录组学应用于研究的“稻谷”领域已经初步确定了防虫智慧、种植新品种和增加总产量的途径。

在这些领域中,基因组学和转录组学的研究已经有了非常重要的进展,为多样性研究提供了有力支持。

三、环境生态学领域基因组学和转录组学可以作为环境生态学领域的研究工具。

环境生态学研究主要关注生态系统、自然资源和生物群落对环境变化的影响,因此对环境保护和管理具有重要意义。

例如,近年来,世界各地的农业产出都受到了气候变化的影响。

利用基因组学和转录组学的相关技术,科学家可以对天气、土地和微生物等因素进行研究,并通过这些技术开发新的农作物品种和种植模式等,从而提高粮食产量和保障食品安全。

转录组学的新进展与应用

转录组学的新进展与应用

转录组学的新进展与应用转录组学是一种研究生物体细胞中所有基因转录产物的高通量技术。

近年来,随着测序技术的发展和生物信息学工具的完善,转录组学在基础研究和应用研究中得到了越来越广泛的应用。

本文将介绍转录组学的新进展以及其在生命科学和医疗领域的应用。

一、转录组学的新进展1.应用单细胞转录组学技术深入研究细胞异质性单细胞转录组学技术(scRNA-seq)可以在对单个细胞进行转录组测序后,生成大量详细的分子信息。

在研究细胞异质性等方面,scRNA-seq显得尤为重要。

2018年,科学家们使用scRNA-seq技术对小鼠胚胎干细胞进行测序,成功地从中分离出多种“原始”细胞群体,并从中再分化出具有特定功能性的细胞群体。

这一研究结果为治疗癌症、糖尿病等多种疾病打下了基础。

2.甲基化转录组学技术的发展基因组DNA的甲基化成为影响基因的表达的重要因素之一。

甲基化转录组测序技术可以同时检测基因组DNA的甲基化和基因转录产物,达到了探究基因是否受甲基化调制的目的。

2018年,科学家在大肠杆菌纯化出甲基化转录因子并对其进行结构分析,从而揭示出其精细的结构与功能调节机制,为将来这一技术在药物治疗中的应用提供了理论基础。

3.新进展的平衡转录组技术平衡转录组测序技术可以同时检测基因组DNA的甲基化和基因转录产物,而它是改进版的甲基化转录组技术。

这项技术用于研究人类受精卵发育的胚胎表观遗传学时,发现用于标识成熟植物的基因也会在早期的胚胎发育阶段被激活,进一步推进了对干细胞时期转录组的理解,为治疗遗传学疾病提供了新思路。

二、转录组学在生命科学中的应用1.转录组学在基因治疗和细胞治疗中的应用许多基因疾病都可以通过转录组学技术来加以研究解决。

细胞免疫治疗、基因修补和癌症治疗潜力都在应用转录组学技术。

科学家们可以运用转录组学技术研究内源性mRNA的表达变化,同时运用CRISPR-Cas9干预内源性基因,从而最大限度地改善疾病症状,实现基因治疗和细胞治疗的目的。

转录组学 表观组学研究方法和技术路线

转录组学 表观组学研究方法和技术路线

转录组学表观组学研究方法和技术路线全文共四篇示例,供读者参考第一篇示例:转录组学和表观组学是现代生物学领域中非常重要的研究方向,通过研究基因的转录和表观调控,揭示生物体内基因的表达模式和调控机制。

本文将介绍转录组学和表观组学的研究方法和技术路线,希望能够为相关领域的研究工作者提供一些参考和帮助。

一、转录组学研究方法和技术路线转录组学是研究特定生物体内所有基因的转录水平和表达模式的学科,可以帮助科研人员深入了解生物体内所有基因的功能和调控关系。

转录组学的研究方法和技术路线主要包括以下几个方面:1. RNA测序技术RNA测序技术是转录组学研究中最为重要的技术之一,可以帮助研究者高通量的分析样本中所有基因的mRNA表达水平。

常见的RNA 测序技术包括Sanger测序、芯片微阵列、RNA-seq等。

RNA测序技术不仅可以揭示不同组织、不同生理状态下的基因表达模式,还可以发现新的基因和转录本。

2. 数据分析和生物信息学技术转录组学研究产生的大量数据需要通过生物信息学技术进行分析和解读。

生物信息学技术包括对RNA测序数据的质控、比对、组装、差异表达基因分析等。

科研人员需要掌握各种生物信息学工具和软件,对转录组学数据进行合理的处理和解读。

3. 功能注释和通路分析转录组学研究的结果需要进一步进行功能注释和通路分析,以揭示基因的功能和调控网络。

常见的功能注释工具包括Gene Ontology (GO)、KEGG Pathway等。

通过对基因的功能进行注释和通路分析,可以更好地理解基因之间的相互作用和调控关系。

4. 转录因子和miRNA分析转录组学研究可以揭示生物体内转录因子和miRNA的作用机制,科研人员可以通过RNA测序数据分析转录因子和miRNA的结合位点,探索其在基因表达调控中的作用。

转录因子和miRNA的分析可以帮助科研人员更好地理解基因表达调控的复杂性和精细性。

表观组学是研究基因表观调控的学科,通过对DNA甲基化、组蛋白修饰等表观标记的分析,揭示基因的表观遗传调控机制。

基因组学中的转录组分析技术使用方法

基因组学中的转录组分析技术使用方法

基因组学中的转录组分析技术使用方法转录组分析是基因组学研究中的重要领域,它通过系统地研究生物体在给定条件下的转录产物,揭示基因表达的整体模式和调控机制。

转录组分析技术的快速发展使其成为深入理解基因功能和疾病发生机制的有力工具。

本文将介绍几种常用的转录组分析技术及其使用方法。

1. RNA测序(RNA-Seq)RNA测序是转录组分析中最常用的方法之一。

它通过将RNA转录本逆转录成cDNA,并进行高通量测序,得到转录本的序列信息。

RNA测序可用于定量和鉴定基因表达,以及寻找新的转录本和外显子。

以下是RNA测序的基本步骤:1.1 样品制备首先,需要从生物样品中提取RNA。

常用的RNA提取方法包括酚/氯仿法、磁珠法等。

提取到的RNA应经过质量检测,以确保其完整性和纯度。

1.2 cDNA合成与文库构建将RNA逆转录为cDNA是RNA测序的关键步骤。

可以使用逆转录酶和随机引物进行逆转录,或者采用寡核苷酸为引物进行选择性合成。

随后,通过文库构建将cDNA进行序列化准备。

1.3 测序和数据处理使用Illumina或其他平台进行高通量测序,得到转录本的序列信息。

然后,对测序结果进行质量控制、序列比对、表达量计算和差异表达分析等数据处理步骤。

最后,利用生物信息学工具和数据库进行功能注释和转录本定位。

2. 微阵列芯片分析微阵列芯片是一种广泛使用的转录组分析平台。

它基于杂交原理,通过将已知基因序列的探针固定在芯片表面,与待测样品中的RNA分子杂交,从而检测基因表达水平。

以下是微阵列芯片分析的基本步骤:2.1 样品制备样品制备与RNA测序相似,同样需要提取RNA并检测质量。

然后,将RNA转录为cRNA,并进行荧光染色。

2.2 杂交将样品中的cRNA与芯片上的探针进行杂交。

采用专业设备将样品加热至设定温度,以使cRNA与探针结合。

2.3 扫描和数据处理使用激光扫描芯片,记录荧光信号的强度和颜色。

然后对原始数据进行预处理和标准化,包括背景校正、探针归一化等。

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转录组学主要技术及其应用研究姓名:梁*专业:微生物学年级:2013学号:*******二零一四年六月十五日转录学主要技术及其应用研究摘要:转录组(transcriptome)是特定组织或细胞在某一发育阶段或功能状态下转录出来的所有RNA的集合。

转录组学研究能够从整体水平研究基因功能以及基因结构,揭示特定生物学过程以及疾病发生过程中的分子机理。

目前,转录组学研究技术主要包括两种:基于杂交技术的微阵列技术(microarray)和基于测序技术的转录组测序技术,包括表达序列标签技术(Expression Sequence Tags Technology,EST)、基因表达系列分析技术(Serial analysis of gene expression,SAGE)、大规模平行测序技术(Massively parallel signature sequencing,MPSS)、以及RNA 测序技术(RNA sequencing,RNA-seq)。

文章主要介绍了以上转录组学主要研究技术的原理、技术特点及其应用,并就这些技术面临的挑战和未来发展前景进行了讨论,为其今后的研究与应用提供参考。

关键词:转录组学;微阵列技术;转录组测序技术;应用Study on the main technologies of transcriptomicsand their applicationAbstract: The transcriptome is the complete set of transcripts for certain type of cells or tissues in a specific developmental stage or physiological condition. Transcriptome analysis can provide a comprehensive understanding of molecularmechanisms involved in specific biological processes and diseases from the information on gene structure and function. Currently, transcriptomics technology mainly includes microarry -based on hybridization technology and transcriptome sequencing-based on sequencing technology, involving Expression sequence tags technology, Serial analysis of gene expression, Massively parallel signature sequencing and RNA sequencing. The detailed principles, technical characteristics and applications of the main transcriptomics technologies are reviewed here, and the challenges and application potentials of these technologies in the future are also discussed. This will present the useful information for other researchers. Keywords: transcriptomics ; microarray ; transcriptome sequencing; application随着后基因组时代的到来,转录组学、蛋白质组学、代谢组学等各种组学技术相继出现,其中转录组学是率先发展起来以及应用最广泛的技术[1]。

1 转录组和转录组学转录组概念是最先由V eclalesuc和Kinzler等人于1997年提出[2]。

转录组(transcriptome)广义上是指某个组织或细胞在特定生长阶段或生长条件所转录出来的RNA总和,包括编码蛋白质的mRNA和各种非编码RNA,如rRNA、tRNA、snoRNA、snRNA、microRNA及其他非编码RNA等。

但狭义上通常仅以mRNA为研究对象。

由转录组的定义可见,其包含了特定的时间和空间限定,这与基因组的概念不同。

因此,同一组织或细胞在不同生长条件、生长阶段,其转录组是不同的。

通过遗传学中心法则我们可以知道,遗传信息的传递是以信使RNA(mRNA)为“桥梁”,从DNA传递到蛋白质。

由此可见,转录组的研究不仅可以解释细胞或组织的基因组的功能元件,揭示分子成分,还可以用来认识生物学进程和疾病发生机制[3,4]。

转录组学(transcriptomics)是功能基因组学(Functional Genomics)研究的重要组成部分,是一门在整体水平上研究细胞中所有基因转录及转录调控规律的学科[5,6]。

随着人类基因组计划HGP( Human Genome Project)的完成,科学家也逐渐认识到对基因结构序列的研究仅仅是基因组学研究的一部分,并不能揭示所有的生命奥秘,所以接下来需要解决的问题是:研究这些基因序列的功能、参与的生命过程、表达调控方式,以及这些基因在不同的时空条件下的表达差异等。

这些问题都需要功能基因组学技术来解决,而转录组学技术是功能基因组学研究的重要组成部分。

对基因及其转录表达产物功能研究的功能基因组学,将为疾病控制和新药开发、作物和畜禽品种的改良提供新思路,为人类解决健康问题、食物问题、能源问题和环境问题提供新方法。

2 转录组学研究的方法在早期,由于测序价格昂贵、基因序列数目有限,转录组学研究者只能进行极少数特定基因的结构功能分析和表达研究。

最近十几年,分子生物学技术的快速发展使高通量分析成为可能,这为真正意义上的转录组学的研究奠定了基础。

这些高通量研究方法主要可以分为两类:一类是基于杂交的方法,主要是指微阵列技术(Microarray);一类是基于测序的方法,这类方法包括表达序列标签技术(Expression Sequence Tags Technology,EST)、基因表达系列分析技术(Serial analysis of gene expression,SAGE)、大规模平行测序技术(Massively parallel signature sequencing,MPSS)、RNA 测序技术(RNA sequencing,RNA-seq)。

其中,Microarray 和EST 技术是较早发展起来的先驱技术,SAGE、MPSS 和RNA-seq 是高通量测序条件下的转录组学研究方法转录组学研究有助于了解特定生命过程中相关基因的整体表达情况,进而从转录水平初步揭示该生命过程的代谢网络及其调控机理。

2.1 微阵列技术(Microarry)微阵列技术是分子生物学领域具有里程碑式意义的重大突破,它可以同时测量不同样本中成千上万个基因在不同环境和不同状态下的表达水平。

基因表达数据是基于DNA 微阵列技术而产生的反映基因转录产物mRNA 丰度值的一组数据。

数据中蕴含着丰富的基因活动信息,通过对这些数据中所隐含的基因活动信息进行分析,就可以解答一些生物学领域的问题。

如基因的表达在不同环境中有哪些差异,基因的表达在特定条件下有哪些变化,基因之间有哪些相关性,以及在不同条件下基因的活动受到哪些影响等等[7]。

2.1.1 原理和方法DNA微阵列基本制作原理为大规模集成电路所控制的机器人在尼龙膜或硅片固相支持物表面,有规律地合成成千上万个代表不同基因的寡核苷酸“探针”,或液相合成探针后由阵列器(arrayer)或机器人点样于固相支持物表面。

这些“探针”可与用放射标记物32P或荧光物如荧光素、丽丝胺等标记的目的材中的DNA或cDNA互补核酸序列相结合,通过放射自显影或激光共聚焦显微镜扫描后,对杂交结果进行计算机软件处理分析,获得杂交信号的强度及分布模式图,以此反映目的材料中有关基因表达强弱的表达谱。

该技术仍以基因连锁、连锁不平衡、限制性长度多态性、可变串联重复序列及单核苷酸多态性标记等基因定位方法为基础,采用分子杂交等多种技术方法为手段,进行遗传作图,对不同材料中的多个基因表达模式进行平行对比分析,是一种高产出的、新的基因分析方法。

以尼龙膜为固相支持物的DNA微阵列和以硅片为固相支持物的DNA芯片,二者在原理上相同,仅在支持物及检测手段等方面略有不同。

在微阵列里最大的一类DNA microarray根据探针分子的构成又可以分为cDNA微阵列和寡核苷酸微阵列。

(1)cDNA微阵列cDNA微阵列是指对各种生物随机克隆和随机测序所得的cDNA片段进行归类,并把每一类cDNA 片段的代表克隆(代表一个独立基因)经过体外扩增,得到大小和序列不同的片段分别经过纯化后,利用机械手高速将它们高密度有序地点样固定在玻片硅晶片或尼龙膜上,从而制备成cDNA微阵列,以此对各基因的表达情况进行同步分析。

它的特点是造价低、适用面广、研制周期短、灵活性高。

而缺点是点阵密度相对比较低。

同时,cDNA微阵列由于基因长短不一,导致溶解温度Tm各异,众多的基因在同一张芯片上杂交,使得杂交条件很难同一,这样也使得其分辨能力受到限制。

(2)寡核苷酸微阵列寡核苷酸微阵列的主要原理与cDNA微阵列类似,主要是通过碱基互补配对原则进行杂交,来检测对应片断是否存在、存在量的多少。

它与cDNA芯片的本质差别在于寡核苷酸的探针片断相对较短(一般是20-70nt的寡聚核苷酸序列)。

寡聚核苷酸微阵列的探针经过优化,长度基本一致,并且Tm也相差不大,所以相比较cDNA微阵列它具有以下优点:1.无需扩增,防止扩增失败影响实验;2.减少非特异性杂交,能够有效的区分同源序列的基因;3.杂交温度均一,提高了杂交效率;4.减少了微阵列片上探针的二级结构。

上述特点使得寡核苷酸微阵列的应用日益广泛。

但是当寡核苷酸序列较短时,单一的序列不足以代表整个基因,所以又需要用多段序列,从而提高了制作成本。

2.1.2 应用(1)表达差异的研究1995年Schena等用了48个PCR扩增的cDNA探针点制的微阵列片分析了野生型和转基因的拟南芥中基因表达差异,并与Northern blot作了比较。

发现Microarray能够很好的检测到基因表达水平上的差异,并且能够在同一张玻片上使用不同的荧光染料同步进行差异比较。

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