细菌药敏试验幻灯片课件
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药敏试验说课教案PPT课件
药敏试验说课教案ppt课件
目录 Contents
• 药敏试验概述 • 药敏试验的步骤 • 药敏试验的临床应用 • 药敏试验的注意事项 • 药敏试验的发展趋势
01
药敏试验概述
药敏试验的定义
药敏试验
是一种检测细菌对抗生素敏感性的试 验，用于指导临床医生选择合适的抗 生素进行治疗。
定义补充
药敏试验通过测量细菌在接触不同浓 度的抗生素时生长情况的变化，来判 断细菌对抗生素的敏感程度，从而帮 助医生选择最有效的抗生素。
接种方法
将制备好的菌液均匀涂布在培养基上， 或使用定量接种环接种。
培养
培养条件
根据不同病原体设定适宜的培养 温度和时间。
培养观察
定期观察培养基上是否有细菌生长， 以及生长情况是否符合预期。
防止污染
确保培养过程的无菌操作，避免杂 菌污染。
结果解读
结果判定
根据培养结果，判断细菌是否对 某种药物敏感或耐药。
耐药性的监测
总结词
药敏试验有助于监测病原微生物的耐 药性变化，为抗生素的更新换代和临 床用药提供依据。
详细描述
随着病原微生物耐药性的不断增加， 药敏试验能够监测耐药性的发展趋势， 及时发现新的耐药菌株，为临床用药 提供更新换代的选择。
治疗效果的评估
总结词
通过药敏试验可以评估治疗效果，及时调整治疗方案，提高治愈率。
THANKS
结果记录
及时、准确地记录实验结果， 为后续数据处理和分析提供依
据。
实验后的数据处理与分析
数据处理
对实验数据进行整理、分类和 统计，确保数据准确无误。
结果分析
根据实验目的和要求，对实验 结果进行分析，得出结论。
结果报告
目录 Contents
• 药敏试验概述 • 药敏试验的步骤 • 药敏试验的临床应用 • 药敏试验的注意事项 • 药敏试验的发展趋势
01
药敏试验概述
药敏试验的定义
药敏试验
是一种检测细菌对抗生素敏感性的试 验，用于指导临床医生选择合适的抗 生素进行治疗。
定义补充
药敏试验通过测量细菌在接触不同浓 度的抗生素时生长情况的变化，来判 断细菌对抗生素的敏感程度，从而帮 助医生选择最有效的抗生素。
接种方法
将制备好的菌液均匀涂布在培养基上， 或使用定量接种环接种。
培养
培养条件
根据不同病原体设定适宜的培养 温度和时间。
培养观察
定期观察培养基上是否有细菌生长， 以及生长情况是否符合预期。
防止污染
确保培养过程的无菌操作，避免杂 菌污染。
结果解读
结果判定
根据培养结果，判断细菌是否对 某种药物敏感或耐药。
耐药性的监测
总结词
药敏试验有助于监测病原微生物的耐 药性变化，为抗生素的更新换代和临 床用药提供依据。
详细描述
随着病原微生物耐药性的不断增加， 药敏试验能够监测耐药性的发展趋势， 及时发现新的耐药菌株，为临床用药 提供更新换代的选择。
治疗效果的评估
总结词
通过药敏试验可以评估治疗效果，及时调整治疗方案，提高治愈率。
THANKS
结果记录
及时、准确地记录实验结果， 为后续数据处理和分析提供依
据。
实验后的数据处理与分析
数据处理
对实验数据进行整理、分类和 统计，确保数据准确无误。
结果分析
根据实验目的和要求，对实验 结果进行分析，得出结论。
结果报告
药敏试验科普ppt课件
药敏试验
2016.6.14
目录
一、什么是药敏试验 二、药敏试验怎么做 三、药敏试验的结果代表什么 四、常见致病菌的药敏结果
一、什么是药敏试验
药敏试验的概念
通过模拟体内环境条件，测试分离自病 人体内感染部位的病原菌对常用抗生素 的敏感性，即抗生素对目标细菌的抑制 能力，从而预测抗生素治疗效果的一种 体外试验方法。
02
常规经验治疗 效果不佳或又 较高失败风险 时
03
对感染菌的耐 药性无法估计 时
04
需要了解微生 物耐药性变迁 时
二、药敏试验怎么做
纸片扩散法
原理：
✓ 一定药物含量的碟形抗生素纸片贴在涂布一定浓度菌液的琼脂上，过夜培养后抗生素扩散 到纸片周围的琼脂中，形成一定浓度区域，越靠近纸片的浓度越高，反之越低。
药敏试验的目的
查出耐药，减少治疗错误，便于医生选择个体 化疗方案、节省费用
01
进行耐药监测，为医院感染控制部门提供防治 依据，为经验用药提供可靠依据。
02
利用耐药监测结果控制抗菌药物应用，减少耐 药菌株的出现，延长新药使用寿命。
03
为新药的研究和评估提供有价值的信息。
04
药敏试验什么时候做
01
分离菌是感染 菌而不是定植 菌或污染菌
常见致病菌的药敏结果
肠球菌属
✓ 药敏结果：青霉素（S）；青霉素（R）万古霉素（S）；青霉素（R）万古霉素（R）；高浓度氨基糖苷类（S） ；高浓度氨基糖苷类（R） ✓ 抗生素选择： • 青霉素（S）/氨苄青霉素（S）：轻症感染可选择青霉素、氨苄青霉素；重症感染可选择高剂量青霉素或氨苄青霉素联合，
氨基糖苷类，亚胺培南。 • 青霉素（R）万古霉素（S）：其严重感染可以选择万古霉素联合氨基糖苷类抗生素。 • 青霉素（R）万古霉素（R）：可以选择新生霉素联合庆大霉素、氟喹诺酮类治疗；或利福平、四环素、氯霉素也可作为联
2016.6.14
目录
一、什么是药敏试验 二、药敏试验怎么做 三、药敏试验的结果代表什么 四、常见致病菌的药敏结果
一、什么是药敏试验
药敏试验的概念
通过模拟体内环境条件，测试分离自病 人体内感染部位的病原菌对常用抗生素 的敏感性，即抗生素对目标细菌的抑制 能力，从而预测抗生素治疗效果的一种 体外试验方法。
02
常规经验治疗 效果不佳或又 较高失败风险 时
03
对感染菌的耐 药性无法估计 时
04
需要了解微生 物耐药性变迁 时
二、药敏试验怎么做
纸片扩散法
原理：
✓ 一定药物含量的碟形抗生素纸片贴在涂布一定浓度菌液的琼脂上，过夜培养后抗生素扩散 到纸片周围的琼脂中，形成一定浓度区域，越靠近纸片的浓度越高，反之越低。
药敏试验的目的
查出耐药，减少治疗错误，便于医生选择个体 化疗方案、节省费用
01
进行耐药监测，为医院感染控制部门提供防治 依据，为经验用药提供可靠依据。
02
利用耐药监测结果控制抗菌药物应用，减少耐 药菌株的出现，延长新药使用寿命。
03
为新药的研究和评估提供有价值的信息。
04
药敏试验什么时候做
01
分离菌是感染 菌而不是定植 菌或污染菌
常见致病菌的药敏结果
肠球菌属
✓ 药敏结果：青霉素（S）；青霉素（R）万古霉素（S）；青霉素（R）万古霉素（R）；高浓度氨基糖苷类（S） ；高浓度氨基糖苷类（R） ✓ 抗生素选择： • 青霉素（S）/氨苄青霉素（S）：轻症感染可选择青霉素、氨苄青霉素；重症感染可选择高剂量青霉素或氨苄青霉素联合，
氨基糖苷类，亚胺培南。 • 青霉素（R）万古霉素（S）：其严重感染可以选择万古霉素联合氨基糖苷类抗生素。 • 青霉素（R）万古霉素（R）：可以选择新生霉素联合庆大霉素、氟喹诺酮类治疗；或利福平、四环素、氯霉素也可作为联
药敏试验_PPT幻灯片
因此，在使用抗菌药物的过程中，必须加强细菌对 抗菌药物敏感性的实验室监测，为临床上合理使用 抗菌药物提供试验依据。而细菌对抗菌药物的敏感 试验，就是对抗菌药物进行实验室监测的主要手段 之一。
二、 几个概念
1.敏感（sensitive，S）:某菌株能被某抗菌药物常用剂 量或途径可达到的治疗浓度杀死或抑制称为敏感。 （敏感度的分级：三个程度，敏感、中敏、耐药）
马，兔等）
＊嗜血杆菌属，100ml MHA＋fildes增菌液5ml(含脱纤维羊血， 胃蛋白酶等)
培养基厚度：4mm(9cm平板倾25 ml；15cm平 板倾70 ml)
7. “抑菌商数”（Inhibitory Quotient，简称 IQ），是指某抗菌药物在局部组织或体液 中的浓度除以该药物对感染菌的最小抑菌 浓度所得的商数。即：
局部组织或体液中的药物浓度
IQ =
MIC
抑菌商数越大，抑菌效果越明显；反之， 抑菌商数越小，抑菌效果越差。
三、血药浓度与MIC之间的关系
从本质上讲：细菌对某种抗菌药物是 敏感还是耐药，常以该抗菌药物的治疗浓 度（抗菌药物通过常用途径和常用剂量所 能达到的血药浓度）与该抗菌药物对细菌 的最小抑菌浓度（MIC）的关系而定
血药浓度与MIC之间的关系
中毒浓度
致死量 最小中毒量
极量
R
治疗安
全范围
治疗浓度
（常用剂量）
I
S 最小有效量 无效浓度
但是药物在局部组织和组织液中的浓度， 往往只有血清浓度的1/2～1/10，故在治疗 局部组织感染时，仅仅以MIC小于血清治 疗浓度定为敏感往往会产生一定的误差， 应该以MIC小于血清治疗浓度的2～10倍， 才是敏感。因此，在治疗局部组织或组织
二、 几个概念
1.敏感（sensitive，S）:某菌株能被某抗菌药物常用剂 量或途径可达到的治疗浓度杀死或抑制称为敏感。 （敏感度的分级：三个程度，敏感、中敏、耐药）
马，兔等）
＊嗜血杆菌属，100ml MHA＋fildes增菌液5ml(含脱纤维羊血， 胃蛋白酶等)
培养基厚度：4mm(9cm平板倾25 ml；15cm平 板倾70 ml)
7. “抑菌商数”（Inhibitory Quotient，简称 IQ），是指某抗菌药物在局部组织或体液 中的浓度除以该药物对感染菌的最小抑菌 浓度所得的商数。即：
局部组织或体液中的药物浓度
IQ =
MIC
抑菌商数越大，抑菌效果越明显；反之， 抑菌商数越小，抑菌效果越差。
三、血药浓度与MIC之间的关系
从本质上讲：细菌对某种抗菌药物是 敏感还是耐药，常以该抗菌药物的治疗浓 度（抗菌药物通过常用途径和常用剂量所 能达到的血药浓度）与该抗菌药物对细菌 的最小抑菌浓度（MIC）的关系而定
血药浓度与MIC之间的关系
中毒浓度
致死量 最小中毒量
极量
R
治疗安
全范围
治疗浓度
（常用剂量）
I
S 最小有效量 无效浓度
但是药物在局部组织和组织液中的浓度， 往往只有血清浓度的1/2～1/10，故在治疗 局部组织感染时，仅仅以MIC小于血清治 疗浓度定为敏感往往会产生一定的误差， 应该以MIC小于血清治疗浓度的2～10倍， 才是敏感。因此，在治疗局部组织或组织
病原性球菌 药敏试验PPT.ppt
位置，再灭菌后可取另一药片放置。 4、37℃，过夜培养，观察结果。
药敏实验结果
+ ） 大肠杆菌 （ G- ）
纸片法抑 菌环直径
抗药 中度敏感 高度敏感
青霉素 (10ug/
片) ≦20
21-28
≧29
链霉素 氯霉素 庆大霉素 (10ug/片) (30ug/片) (10ug/片)
药敏试验（纸片扩散法）
材料：
普通琼脂平板(2块平板/组） 大肠杆菌、金葡菌 青霉素、链霉素、氯霉素、庆大霉素药片
方法：
氯青 庆链
G- 大肠杆菌
氯青 庆链
37℃×18~24h
葡菌球菌 G+
药敏实验（纸片扩散法）
步骤： 1、在培养基平皿上做标记。 2、接种；用棉签分别沾取菌液（G+，G-）均匀分
别涂布于2个平皿上。 3、贴药片；镊子灭菌取药片放置于平皿上的标记
≦11 12-14 ≧ 15
﹤ 10 10-17 ﹥ 17
≦ 12 13-14 ≧ 15
实验报告
绘制标本片镜下图 记录药敏试验结果
病原性球菌 药敏试验
实验内容
病原性球菌标本片观察 链球菌、 脑膜炎双球菌、
药敏试验（纸片扩散法）
目的要求
掌握病原性球菌的基本形态。 掌握药敏实验操作技术与判断。
链球菌
药敏实验
不同的细菌种类或菌株，对同一药物的敏感性 不同，测定细菌对药物的敏感程度，简称药敏实验。
纸片扩散法 试管稀释法
药敏实验结果
+ ） 大肠杆菌 （ G- ）
纸片法抑 菌环直径
抗药 中度敏感 高度敏感
青霉素 (10ug/
片) ≦20
21-28
≧29
链霉素 氯霉素 庆大霉素 (10ug/片) (30ug/片) (10ug/片)
药敏试验（纸片扩散法）
材料：
普通琼脂平板(2块平板/组） 大肠杆菌、金葡菌 青霉素、链霉素、氯霉素、庆大霉素药片
方法：
氯青 庆链
G- 大肠杆菌
氯青 庆链
37℃×18~24h
葡菌球菌 G+
药敏实验（纸片扩散法）
步骤： 1、在培养基平皿上做标记。 2、接种；用棉签分别沾取菌液（G+，G-）均匀分
别涂布于2个平皿上。 3、贴药片；镊子灭菌取药片放置于平皿上的标记
≦11 12-14 ≧ 15
﹤ 10 10-17 ﹥ 17
≦ 12 13-14 ≧ 15
实验报告
绘制标本片镜下图 记录药敏试验结果
病原性球菌 药敏试验
实验内容
病原性球菌标本片观察 链球菌、 脑膜炎双球菌、
药敏试验（纸片扩散法）
目的要求
掌握病原性球菌的基本形态。 掌握药敏实验操作技术与判断。
链球菌
药敏实验
不同的细菌种类或菌株，对同一药物的敏感性 不同，测定细菌对药物的敏感程度，简称药敏实验。
纸片扩散法 试管稀释法
实验二 抗菌药物敏感性试验 ppt课件
染的流行病学,以控制和预防耐药菌感染的发生和流 行。
2020/12/2
临床微生物学教研室
纸片琼脂扩散法原理
▪ 将定量抗菌药敏纸片贴在已接种的测试菌 的MH琼脂平板上，纸片所含药物吸收琼 脂水分溶解并不断向纸片周围扩散形成递 减的梯度浓度，在纸片周围抑菌范围内测 试菌生长被抑制而形成的无菌生长抑菌圈， 抑菌圈大小反应测试菌对测定药物的敏感 性。
于血液和组织 中1可6达~2到0的水
≥时浓21达度到能的抑体制内或
平，高于正常
杀灭被测菌
给药量进行治临床微生物学教研室
疗
实验内容
三、注意事项
1、培养基的质量，如pH、厚度、表面湿度和保存等均 会影响抑菌圈大小；
2、药敏纸片的药量、吸水性、直径、保存等会影响测定 结果；
3、接种菌量也是影响结果的重要因素； 4、采用标准菌株同时进行药敏试验作为质控； 5、操作因素
2020/12/2
临床微生物学教研室
E-TEST
2020/12/2
临床微生物学教研室
联合药敏试验
2020/12/2
临床微生物学教研室
联合药敏试验
2020/12/2
临床微生物学教研室
联合药敏试验
2020/12/2
临床微生物学教研室
2020/12/2
20
抗菌药物敏感试验的意义
❖ 可预测抗菌治疗的效果; ❖ 指导抗菌药物的临床应用; ❖ 监测细菌耐药性,分析耐药菌的变迁,掌握耐药菌感
2020/12/2
临床微生物学教研室
?纸片扩散法kb法的操作方法结果的判读和临床意义纸片扩散法kb法的操作方法结果的判读和临床意义目的要求重点难点临床微生物学教研室实验材料菌株大肠埃希菌培养基水解酪蛋白琼脂mh琼脂纸片环丙沙星头孢唑啉万古霉素其他菌株大肠埃希菌培养基水解酪蛋白琼脂mh琼脂纸片环丙沙星头孢唑啉万古霉素其他载玻片无菌生理盐水镊子无菌棉签游标卡尺毫米尺载玻片无菌生理盐水镊子无菌棉签游标卡尺毫米尺临床微生物学教研室ciz50ugmlciz50ugml实验原理?贴药敏纸片?药物扩散?形成抑菌圈临床微生物学教研室实验内容一操作方法挑混比涂贴量临床微生物学教研室实验内容二纸片扩散法结果判读及临床意义?用游标卡尺量取抑菌圈直径?参照标准解释结果按抗菌药物敏感性分为敏感中介和耐药
2020/12/2
临床微生物学教研室
纸片琼脂扩散法原理
▪ 将定量抗菌药敏纸片贴在已接种的测试菌 的MH琼脂平板上，纸片所含药物吸收琼 脂水分溶解并不断向纸片周围扩散形成递 减的梯度浓度，在纸片周围抑菌范围内测 试菌生长被抑制而形成的无菌生长抑菌圈， 抑菌圈大小反应测试菌对测定药物的敏感 性。
于血液和组织 中1可6达~2到0的水
≥时浓21达度到能的抑体制内或
平，高于正常
杀灭被测菌
给药量进行治临床微生物学教研室
疗
实验内容
三、注意事项
1、培养基的质量，如pH、厚度、表面湿度和保存等均 会影响抑菌圈大小；
2、药敏纸片的药量、吸水性、直径、保存等会影响测定 结果；
3、接种菌量也是影响结果的重要因素； 4、采用标准菌株同时进行药敏试验作为质控； 5、操作因素
2020/12/2
临床微生物学教研室
E-TEST
2020/12/2
临床微生物学教研室
联合药敏试验
2020/12/2
临床微生物学教研室
联合药敏试验
2020/12/2
临床微生物学教研室
联合药敏试验
2020/12/2
临床微生物学教研室
2020/12/2
20
抗菌药物敏感试验的意义
❖ 可预测抗菌治疗的效果; ❖ 指导抗菌药物的临床应用; ❖ 监测细菌耐药性,分析耐药菌的变迁,掌握耐药菌感
2020/12/2
临床微生物学教研室
?纸片扩散法kb法的操作方法结果的判读和临床意义纸片扩散法kb法的操作方法结果的判读和临床意义目的要求重点难点临床微生物学教研室实验材料菌株大肠埃希菌培养基水解酪蛋白琼脂mh琼脂纸片环丙沙星头孢唑啉万古霉素其他菌株大肠埃希菌培养基水解酪蛋白琼脂mh琼脂纸片环丙沙星头孢唑啉万古霉素其他载玻片无菌生理盐水镊子无菌棉签游标卡尺毫米尺载玻片无菌生理盐水镊子无菌棉签游标卡尺毫米尺临床微生物学教研室ciz50ugmlciz50ugml实验原理?贴药敏纸片?药物扩散?形成抑菌圈临床微生物学教研室实验内容一操作方法挑混比涂贴量临床微生物学教研室实验内容二纸片扩散法结果判读及临床意义?用游标卡尺量取抑菌圈直径?参照标准解释结果按抗菌药物敏感性分为敏感中介和耐药
细菌药敏试验 ppt课件
细菌药敏试验
3.所选药物具有代表性：实验室不 需要也不可能对每种抗菌药物均进 行测试。原则上在各类抗菌药物中 选择一种代表性药物作测试，可反 映一类药物的抗菌特性。如大环内 脂类选红霉素，喹诺酮类选环丙沙 星或氧氟沙星，头孢菌素选1、2、 3代头孢菌素的代表药物，同时还 应考虑价格因素。
细菌药敏试验
细菌药敏试验
3.需要修订的结果：耐庆大霉素的革兰 阳性菌即使出现对阿米卡星、奈替米星 敏感，也要报告耐药；耐甲氧西林葡萄 球菌，应报告对所有β-内酰胺类药物耐 药。
细菌药敏试验
用折点解释药敏试验结果的意义
1.预测抗菌药物的临床治疗效果，如果某种药物 敏感，则该药治疗可能有效。如果耐药，则可能 导致治疗失败。 2.指导临床医生选择使用抗生素，避免用药不当， 延误治疗，并诱导产生耐药菌株。 3.提供选择药物的依据。 4.监测耐药性，掌握耐药菌的流行趋势。
试验结果的评价与报告
由于细菌耐药机制的不同及试验中影响ห้องสมุดไป่ตู้因素的干扰，药敏试验的表型可能出现 错误或矛盾，应加以注意！
细菌药敏试验
1.由于方法对某些药物还不够精确，或由于没 有收集到足够的耐药菌株来制定折点，CLSI药 敏指南对这些药物除了“敏感”以外没有标明 任何其他分类，如果检测结果提示“非敏感”， 应确证微生物鉴定和药敏试验结果（证实药敏 试验在控）随后送上级实验室证实其结果。 2.出现不可能的结果：如铜绿假单胞菌对头孢 唑林、氨苄西林敏感；MRSA对青霉素敏感； 肠杆菌科细菌对第一代喹诺酮敏感而对环丙沙 星耐药等，此类结果须找出原因加以纠正。
细菌药敏试验
3.进行细菌耐药性调查和抗菌药物疗效时 需要进行药敏试验。
4.当引起感染的致病菌的种属特征提示其 对某种抗菌药物高度敏感而从来未见有耐 药情况报告时，通常不需要进行药敏试验。
3.所选药物具有代表性：实验室不 需要也不可能对每种抗菌药物均进 行测试。原则上在各类抗菌药物中 选择一种代表性药物作测试，可反 映一类药物的抗菌特性。如大环内 脂类选红霉素，喹诺酮类选环丙沙 星或氧氟沙星，头孢菌素选1、2、 3代头孢菌素的代表药物，同时还 应考虑价格因素。
细菌药敏试验
细菌药敏试验
3.需要修订的结果：耐庆大霉素的革兰 阳性菌即使出现对阿米卡星、奈替米星 敏感，也要报告耐药；耐甲氧西林葡萄 球菌，应报告对所有β-内酰胺类药物耐 药。
细菌药敏试验
用折点解释药敏试验结果的意义
1.预测抗菌药物的临床治疗效果，如果某种药物 敏感，则该药治疗可能有效。如果耐药，则可能 导致治疗失败。 2.指导临床医生选择使用抗生素，避免用药不当， 延误治疗，并诱导产生耐药菌株。 3.提供选择药物的依据。 4.监测耐药性，掌握耐药菌的流行趋势。
试验结果的评价与报告
由于细菌耐药机制的不同及试验中影响ห้องสมุดไป่ตู้因素的干扰，药敏试验的表型可能出现 错误或矛盾，应加以注意！
细菌药敏试验
1.由于方法对某些药物还不够精确，或由于没 有收集到足够的耐药菌株来制定折点，CLSI药 敏指南对这些药物除了“敏感”以外没有标明 任何其他分类，如果检测结果提示“非敏感”， 应确证微生物鉴定和药敏试验结果（证实药敏 试验在控）随后送上级实验室证实其结果。 2.出现不可能的结果：如铜绿假单胞菌对头孢 唑林、氨苄西林敏感；MRSA对青霉素敏感； 肠杆菌科细菌对第一代喹诺酮敏感而对环丙沙 星耐药等，此类结果须找出原因加以纠正。
细菌药敏试验
3.进行细菌耐药性调查和抗菌药物疗效时 需要进行药敏试验。
4.当引起感染的致病菌的种属特征提示其 对某种抗菌药物高度敏感而从来未见有耐 药情况报告时，通常不需要进行药敏试验。
《实验三：药敏》课件
药敏实验方法
介绍药敏实验的常用方法，如纸片扩 散法、稀释法、E试验等，并比较各种 方法的优缺点。
实验步骤
实验前准备
介绍实验前的准备工作，包括实验器 材的准备、试剂配制、菌种复苏等。
实验操作步骤
详细介绍药敏实验的操作步骤，包括 接种细菌、药物敏感性试验、结果观 察和记录等。
数据分析与报告撰写
讲解如何对实验数据进行处理和分析 ，以及如何撰写规范的实验报告。
了解误差范围，判断实验结果的 可靠性。
结果分析与应用
分析耐药机制
分析耐药菌株的耐药机制，为临 床用药提供参考。
指导临床用药
根据药敏结果，选择敏感的药物用 于临床治疗。
监测耐药趋势
监测细菌耐药性的变化趋势，为抗 菌药物的研发和合理使用提供依据 。
CHAPTER 05
实验总结与反思
实验收获与体会
知识理解深化
实验室安全与注意事项
强调实验室安全的重要性，提出在实 验过程中应注意的事项和突发情况的 应急处理措施。
CHAPTER 02
实验材料
实验器材
01
培养皿
用于培养细菌，观察其生长情 况。
02
接种环
用于转移细菌。
03
04
显微镜
用于观察细菌形态。
药敏试纸
用于测试细菌对不同药物的敏 感性。
实验试剂
生理盐水
培养实验素养
在实验过程中，培养学生 的实验素养，包括实验操 作规范、实验记录、实验 结果分析等方面的能力。
实验原理
微生物药敏实验原理
药敏实验结果解读
介绍微生物药敏实验的基本原理，包 括药物作用机制、细菌对药物的敏感 性和耐药性机制等。
讲解如何正确解读药敏实验结果，包 括抑菌圈大小、MIC值等指标的测量 和意义。
细菌培养与药敏试验解读ppt课件
30
细菌培养
患有外耳炎患者：需要深部耳拭子，因为浅表拭子可能遗漏链球菌 引起的蜂窝织炎。
鼻标本：用一根无菌拭子，伸进一侧鼻孔约2.5cm，与鼻黏膜接触， 轻轻地旋转拭子，蘸取黏膜上分泌物，缓慢抽出，直接送检。
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31
细菌培养
脓液及创伤分泌物标本 开放脓肿：用无菌盐水或75%酒精擦去表面渗出物，
置于无菌容器中送实验室，滞留导管会使膀胱带有 细菌，尽可能不采用。
尿标本采集后，常规是2h内送交细菌室，4℃冷 藏的尿标本，不超过24h。
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26
细菌培养
下呼吸道标本
标本的来源有多种：痰、支气管肺泡灌洗液、 肺穿刺液等。尤其是痰标本，采集痰标本前，先要 检查口腔和咽部是否有感染灶（如口腔念珠菌病）， 以免对标本造成污染。
用拭子深入溃疡基底部或边缘部，采集二个拭子*， 分别做培养和革兰染色。 闭锁脓肿：用注射器抽取脓液，刺入无菌橡皮塞中送 检。
可编辑课件PPT
32
细菌培养
无菌体液
无菌体液是指除血液、骨髓和脑脊液外的羊膜液、 后穹隆穿刺液、透析液、心包液、腹膜穿刺液和滑 膜液。
留取标本时，为防止无菌体液凝固，在无菌容器 内预先加入灭菌肝素0.5mg（可抗凝5ml标本），再 注入各种穿刺液，轻轻混合。
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37
苯唑西林耐药的葡萄球菌对现今所有的β-内酰氨类 抗生素耐药。
因此，针对金黄色葡萄球菌，对β-内酰氨类耐药 情况只需对青霉素和苯唑西林做药敏。
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抗菌药物敏感试验
抗菌药物敏感试验方法： 1、测量含药纸片周围抑菌圈直径大小的K—B纸片琼
脂扩散法； 2、测量药物最小抑菌浓度（MIC）的琼脂稀释法和肉
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敏感性分类（2）
中介 (Intermediate)
MIC接近血、体液中药物的浓度，治
疗反应率低于敏感株
药物生理浓集部位有效 (尿-FQ) 加大用药剂量可能有效
缓冲区：防止操作的系统误差造成重
大结果的判定错误
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药敏试验的方法学
半定量…纸片扩散法 (抑菌圈直径)
MIC法：
laboratory Standards）
美国临床实验室标准委员会 已经被我国卫生部指定为部颁标准 每年有新版 CLSI （Clinical and Laboratory Standards Institute） 美国临床实验室标准化研究所 2012年
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CLSI临床微生物检验标准及操作规范
床医生选择合适的药物，避免产生或加重细 菌的耐药； 监测细菌耐药性，分析耐药菌的变迁，掌握 耐药菌感染的流行病学，以控制和预防耐药 菌感染的发生和流行。
3
药敏试验
MIC：在与微生物生长速率有关的特定
时间间隔内，通常是18～24小时，能够 抑制被测菌生长的最低药物浓度。
对倍稀释的优点：
操作容易 敏感株的MIC呈正态分布 区分异常(R)与敏感(S)的菌群
评价敏感时较保守 更强调检测出耐药株（即特定的耐药群） 技术因素：接种、培养基
在我国主要遵循临床实验室标准化委员会（Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI）制定的抗菌药 物选择原则。
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CLSI的简单介绍
NCCLS （The National Committee for clinical
抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，
并与该药对测试菌的MIC呈负相关关系。
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操作方法 ：
1.将在约56℃恒温的无菌M-H琼脂倾注直径为90mm的平板，其 厚度4mm。 2.无菌挑取孵育16～24h的血平板上4~5个菌落。
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3.置于无菌生理盐水中，校正其浊度于McFarland No 0.5管。
12 3
药物分组
判断折点
标准菌株质控范围
特殊的耐药监测
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14
敏感性分类(CLSI的定义)
敏感（Susceptible）
用常规用量治疗有效 常规用药时达到的平均血药浓度超过细菌的
MIC 5倍以上。
耐药（Resistance）
用常规用量治疗不能抑制细菌的生长 MIC高于药物在血、体液中可能达到的浓度
Log2. MIC
R
I
v
S
耐药
中介 D1 d2
敏感 抑菌圈直径（mm)
8
抑菌圈直径与MIC的关系
MIC (ug/ml)
>256 256 128 64 32 16 8 4 2 1 0.5 0.25 6 8 10 12 14 18 20 22 24 26 28 30 32 34
9
1 2 2 2 3 5 2 1 2
0. 0.
MIC的分布
6
药代动力学和药效学
药代动力学：药物吸收，分布，代谢，排泄 药效学：药物对机体的作用
时间依赖型（％T>MIC〕：β-内酰胺类，大环内酯类
浓度依赖型（AUC/MIC比率〕：AGS, FQ
这些参数可用于计算具有最佳药效的给药方案
7
MIC与抑菌圈直径的线性关系
稀释法(肉汤、琼脂) 自动化仪法 抗生素连续梯度法 (Etest ) 流式细胞仪
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纸片扩散法（Kirby-Bauer法）
将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼
脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后 不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周 围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无 菌生长的透明圈即为抑菌圈。
4
药敏试验折点的建立
1. MIC的分布 2. 药代动力学和药效学 定 MIC的折点 3. 临床疗效和细菌清除率 4. 抑菌圈直径的分布 ………定抑菌圈折点
统计学的线性回归 计算错误率：尽可能减少极重要误差 (假敏感率)
5
0.
10
15
20
0
5
00 8 2 5 5 03 12 0. 2 8 32 12 51 8 2
M100-S20Tables：抗菌药物敏感性试验的实施标准 M2-A10：纸片扩散法敏感性试验的实施标准 M07-A8：需氧菌稀释法敏感性试验方法 M11-A7: 厌氧菌敏感性试验方法 M47-A8: 血培养的原则和步骤
M35-A2: 细菌及酵母样真菌的鉴定方法简本
* M100 每年更新一次 **M2, M7 每三年更新一次
抗菌药物敏感试验
1
抗菌药物敏感试验
测定抗菌药物在体外对病原微生物有无
抑菌或杀菌作用的方法称为抗菌药物敏
感性试验（Antimicrobial Susceptibility
Test），简称药敏试验（AST）。
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药敏试验的意义
预测抗菌治疗的效果；
指导抗菌药物的临床应用； 发现或提示细菌耐药机制的存在，能帮助临
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4.用无菌棉签浸入细 菌悬液中，将拭子在 试管上壁轻轻挤压以 挤去过多的菌液。棉 签在三个方向均匀抹 琼脂表面（每次转 60℃）使菌液均匀分 布，最后沿平板内缘 涂抹一周。
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5.平板置室温干燥3~5分钟，用无菌镊子或纸片分配器 将抗菌纸片粘贴于M-H琼脂的表面，一旦纸片贴上，不 能移动；各抗菌纸片中距离应大于24mm，纸片距平板 内缘应大于15mm。
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纸片扩散法－影响因素
MIC 接种菌量 细菌生长率 抗生素含量、扩散性 平皿厚度 温度，预孵育时间
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5 9
不同国家的判定折点 －可能不同
原因：
用药剂量不同，服药的间隔不同
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6.盖上平板的盖子，置35℃培养箱内孵育16~18小时后 阅读结果，对苯唑西林和万古霉素敏感等应孵育24小 时。
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7.用游标卡尺或直尺量取 抑菌环直径，根据CLSI标 准，报告细菌对该抗生素
敏感(susceptible,S)、 耐药(resistant,R)、
中介(intermediate,I)。