水蛭素
水蛭素
水蛭素
水蛭素对凝血酶有高亲和性，可与凝血酶形成极稳定的复合物，在低浓度下即有抑制凝血酶活性的作用，是天然的凝血酶特效抑制剂。
药理作用：
①抗凝血及抗血栓：水蛭素可延长或抑制凝血过程。
由于水蛭素直接靶向凝血酶，可有效地防止纤维蛋白和血细胞结合形成血凝块，因此可防止各类血栓的形成及延伸。
②水蛭素可降低血小板表面活性，抑制血小板聚集，降低血小板粘附性。
③对血液变流的影响：水蛭煎剂可降低血液粘稠度，减少血浆中纤维蛋白原的含量。
④降低血脂：灌胃给予实验动物水蛭水煎剂可降低大鼠血液中甘油三酯及脂蛋白的含量，亦可降低食饵高脂血症家兔血液中胆固醇及甘油三酯的含量，使实验动物的主动脉及冠状动脉粥样硬化斑块消失，胆固醇结晶减少。
⑤水蛭素可增加脑血流量，促进大鼠实验性脑血肿的吸收，减轻血肿周围炎性反应性水肿，缓解颅内高压，改善局部血液循环，保护脑组织。
水蛭素对血液的作用主要体现在以下几个方面。
1.抗凝血作用，阻碍血液凝固；
2.抑制血小板凝聚，防止血栓的形成；
3.溶解血栓作用，对于已经形成的血栓，水蛭素能显著的对其进
行溶解；
4.降低血液的全血粘度和血浆粘度，改善血液的流动性和粘稠度；
5.增加心肌的供氧，对缺氧缺血具有保护作用，防止心肌缺氧缺血；。
水蛭素一些资料
水蛭素之所以能成为医学材料研究的一个热点，主要是因为它的抗凝血性，它是现已知道的作用最强的的凝血酶特异性抑制剂。
人们在远古时代就开始利用水蛭治疗疾病，但真正意义上水蛭素是在1904年由Jocoby发现并命名的。
1955年Markwardt才从医蛭头部分离出水蛭素纯品，开始进行基础生化和药理学的研究。
1986年Harvey分离出对水蛭素进行编码的纯系补体cDNA，从此利用基因工程技术较大量的制备重组水蛭素，这个发现使水蛭素的开发和研究进入迅速发展的阶段。
从医蛭头部提取出来的水蛭素是一种单链环钛化合物。
肽链由六十五个氨基酸组成，但不含精氨酸，色氨酸和蛋氨酸。
分子N端有三个二硫桥键，使N端肽链绕迭成密集形核心环钛结构。
C端富含酸性氨基酸残基，63位的酪氨酸被硫酸化。
研究认为水蛭素肽链的二级和三级结构对其抗凝活性起决定性作用，其N 端的三个二硫桥键则是决定分子二级和三级结构及其稳定性的关键。
将二硫键氧化，或分子发生蛋白降解，则失去抗凝活性。
若C端羧基被酯化或是去C端氨基酸也会失去与凝血酶结合的能力，可见水蛭素的C端部分是抗凝活性所必须的，含二硫键的N端疏水结构对水蛭素抗凝血酶作用亦有很重要的影响。
水蛭素的作用机制，研究表明水蛭素对凝血酶的作用分两步。
最初的作用是凝血酶带正电荷的非催化位点部分，与水蛭素带相反电荷的极性C端部分产生静电作用，形成初始结合体，是反映的决速步骤，其形成取决于离子浓度。
第二步，该结合体通过控制扩散，迅速重拍形成同凝血酶活性位点紧密结合的复合物。
在该复合物中，C端结合在凝血酶的纤维蛋白原识别位点，抑制凝血酶对纤维蛋白原的激活作用。
被二硫桥键稳定的N端密集链段，则同凝血酶催化位点结合，抑制凝血酶的催化作用。
靠近凝血酶催化位点的精氨酸侧链袋带负电荷的碱基，同水蛭素47位赖氨酸残基作用。
由于Lys47被两侧的脯氨酸包围，这一特殊三肽段Pro-Lys-pro不被一般蛋白酶所降解，也很难在反应中断裂，其稳定性具有重要的生物学意义。
水蛭素
水蛭素的核心环肽结构如下：
• 1986年科学基酸 密码子 基因探针 提取基因
2、选择基因载体获得重组DNA
• 在体外将含目的基因的DNA片段和具 有自我复制功能、并带有选择标记的 载体分子进行酶切连接，获得重组 DNA分子。 • 可以作为载体的主要有质粒、噬菌体、 黏粒、病毒载体等。
水蛭素
在古代医书《神农 本草经》中早有水 蛭素的记载，为我 国传统中药。中医 认为它有破血、逐 瘀、通经的功能。 它是迄今为止所发 现最强的凝血酶天 然特异抑制剂。
水蛭素的临床应用
• 预防外科手术后的静 脉血栓形成 • 预防和治疗（阻断） 急性或慢性血管内凝 血（DIC） • 预防血栓溶解后再栓 塞 • 预防经皮血管腔内形 成术（PTCA）后的再 狭窄 • 作为透析和体外循环 中的抗凝剂
基因工程技术获Leabharlann 水蛭素• 1、获得具有遗传信息的目的基因 • 2、选择基因载体获得重组DNA • 3、将重组DNA分子导入宿主细胞 • 4、鉴定带有目的基因的克隆 • 5、目的基因的扩增及获得目的产物
1、获取目的基因
现已知水蛭素有11种类型，其中3种具 有抗凝血活性，它们分别命名为HV1、 VH2和VH3。 天然水蛭素是酸性多肽，其一级结构中 含有6个半胱氨酸，形成3对链内二硫键， 位于肽键N端；另一特点是在63位酪氨酸 处有硫酸酯化。
• 导入方法：
该菌主要采用形成圆 球体、在有氯化锂和 聚乙二醇-1000的条件 下用整体细胞以及电 穿孔等方法进行基因 转化。
• 载体选择：
毕赤酵母载体均为大 肠杆菌-毕赤酵母穿梭 质粒。故在上一步的 载体选择中应选取质 粒。
4、鉴定带有目的基因的克隆
• 从大量的细胞繁殖群体中，筛选出克隆有 重组DNA分子的寄主细胞。 • 方法： 采用各自特有的测活方法确定其生物活性； 采用酶联免疫方法确定其抗原性； 以目的基因为探针，通过DNA杂交方法可以 直接确定重组子。
水蛭素
水蛭素中文名称：水蛭素英文名称：hirudin定义：水蛭体内的一种蛋白质，含65个氨基酸残基和3对二硫键，具有高度特异的抗凝血酶活性，抑制凝血酶结合底物，故有抗凝血作用。
所属学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；氨基酸、多肽与蛋白质（二级学科）本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布百科名片水蛭素(hirudin)是水蛭（Leech）及其唾液腺中已提取出多种活性成分中活性最显著并且研究得最多的一种成分，它是由65—66个氨基酸组成的小分子蛋白质(多肽)。
水蛭素对凝血酶有极强的抑制作用，是迄今为止所发现最强的凝血酶天然特异抑制剂。
1.作用动物试验与临床研究表明，水蛭素能高效抗凝血、抗血栓形成，以及阻止凝血酶催化的凝血因子活化和血小板反应等进一步血瘀现象。
此外，它还能抑制凝血酶诱导的成纤维细胞的增殖和凝血酶对内皮细胞的刺激。
与肝素相比，它不仅用量少，不会引起出血，也不依赖于内源性辅助因子；而肝素则有引起出血的危险，在弥漫性血管内凝血的发病过程中抗凝血酶III往往减少，这将限制肝素的疗效，采用水蛭会有较好的效果。
编辑本段2.应用水蛭素是一类很有前途的抗凝化瘀药物，它可用于治疗各种血栓疾病，尤其是静脉血栓和弥漫性血管凝血的治疗；也可用于外科手术后预防动脉血栓的形成，预防溶解血栓后或血管再造后血栓的形成；改善体外血液循环和血液透析过程。
在显微外科手术中常因为吻合处血管栓塞而导致失败，采用水蛭素可促进伤口愈合。
研究还表明，水蛭素在肿瘤治疗中也能发挥作用。
它能阻止肿瘤细胞的转移，已证明有疗效的肿瘤如纤维肉瘤，骨肉瘤，血管肉瘤，黑素瘤和白血病等。
水蛭素还可配合化学治疗和放射治疗，由于促进肿瘤中的血流而增强疗效。
动物试验和临床研究表明，静脉或皮下注射水蛭素均无明显毒副作用，无论急性、亚急性的毒性试验，对血压、心率、血相、出血时间和血液化学成分均不受影响，呼吸系统也没有影响，无过敏反应，一般无特异抗体发现。
半致死剂量LD50＞50mgAg，远大于治疗所用的剂量(1mgAg)。
水蛭素成分
水蛭素成分全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：水蛭素是一种半合成的化合物，它主要来源于水蛭体内的唾液腺分泌物。
水蛭素具有许多药用价值，被广泛用于药物制剂中。
水蛭素的化学成分十分复杂，其中包含了多种生物活性物质，如蛋白质、糖类、脂肪、胺类等。
这些成分结合在一起，赋予水蛭素独特的药理作用。
水蛭素主要作用于血液循环系统，具有抗凝血和抗血栓的作用。
其活性成分能够改善血液流动性，减少血小板聚集，阻止血栓形成，从而预防心脑血管疾病的发生。
水蛭素还具有消炎、镇痛、抗菌、解痉等多种药理作用，被广泛应用于临床治疗。
水蛭素中的蛋白质是其主要生物活性物质之一。
这些蛋白质具有独特的酶活性，能够分解血液中的蛋白质和碳水化合物，从而起到清热解毒、消肿止痛的作用。
水蛭素中的脂肪和胺类物质还能促进伤口愈合，加速组织修复，提高人体免疫力。
水蛭素含有丰富的糖类成分，其中的多糖物质具有明显的免疫调节作用。
这些多糖能够刺激机体产生干扰素、白细胞介素等免疫因子，增强机体的抵抗力，对于免疫功能低下的患者具有显著的治疗效果。
水蛭素中的糖类还能够调节血糖平衡，降低血糖浓度，对于糖尿病患者具有一定的辅助治疗作用。
在传统中医药中，水蛭素被视为一种珍贵的药材，可以单独使用，也可以与其他药物搭配使用，以增强疗效。
现代药理研究证实，水蛭素中的活性成分具有广泛的药理作用，对于多种疾病有一定的治疗效果。
水蛭素仍然存在一些副作用和禁忌症，患者在使用时应遵医嘱，避免不当使用造成不良后果。
水蛭素是一种具有多种生物活性物质的药用成分，具有广泛的药理作用。
它对于血液循环系统、免疫系统和炎症反应有显著的调节作用，可以用于治疗心脑血管疾病、免疫功能低下等疾病。
患者在使用水蛭素时应注意合理用药，避免不当使用造成不良后果。
希望未来能够有更多的研究揭示水蛭素的药理作用机制，为其在临床治疗中的应用提供更多的科学依据。
第二篇示例：水蛭素是一种由水蛭分泌的天然活性物质，具有明显的药用价值。
水蛭素提取工艺流程
1、传统方法
由于天然水蛭素存在于吸来自血水蛭唾液、-譬腺及其所分泌溶体纪室依道演的唾液中，传统提取天然水蛭素的方法通常是采用日本医蛭头部或整体进行提取天然水蛭素。
其常改维呼需棉规提取方法是：以吸血水蛭的头部为原料，因为水蛭躯体中有较大量的结构与水蛭素类似，但无生物活性的“伪水蛭素”组分存在，食的存存熔增加水蛭素分离的难度。
利用水—丙酮混合剂萃360问答取或经过乙醇分级沉淀，即得水蛭素粗制品溶液，然后采用层析法、等电聚焦等方法提取天然水蛭素。
2、仿生诱导法
仿生诱导法即指用仿生诱导的方法对活体水蛭进行诱导，从而得到水蛭养殖素的一种方法。
它避免了传统方法对水蛭的一次性掠杀，既保护了水蛭的野生资源，又带动了水蛭养殖业的发展，为明水蛭素的产业化提供了理论基础节影歌总依长田护弱同。
具体方法是：将日本医蛭在否错先身听争距补怀材充氧条件下饥饿一周，再利用猪血与螺类混合做成的诱导体系，在25℃，pH土7. 2的条件下对其进行诱导30分钟，使其分泌唾液。
然后将唾液进一步分离纯化制限老件春医敌结进得天
然水蛭素。
这是对天然水蛭素传统钱征儿给修照提取领域的一次革命，它既不杀死水蛭，又可后每利用，且在分离纯化过程中减少了水—丙酮的萃取或乙醇分级沉淀等工序，操作简便、方法独特，明显降低了生产成本，从而使天席实轮银也尼目然水蛭素的规模化生产变为现器请规蒸右落响术实。
水蛭素的作用与功能主治视频讲解
水蛭素的作用与功能主治视频讲解1. 水蛭素的基本介绍水蛭素，又称为水蛭胶原酶，是一种由水蛭产生的生物酶。
它主要存在于水蛭的体液和唾液中，具有强力的胶原蛋白酶活性。
水蛭素可以通过调节酶活性，发挥一系列的作用和功能，并在医学领域中得到广泛应用。
2. 水蛭素的作用与功能水蛭素作为一种生物酶，具有多种作用和功能。
以下是水蛭素的主要作用与功能：•抗血小板聚集作用：水蛭素可以抑制血小板的聚集，减少血小板凝集，从而降低血液的黏稠度，防止血栓形成。
•抗炎作用：水蛭素能够抑制炎症反应，减轻炎症症状，具有较好的抗炎效果。
•促进创伤愈合：水蛭素能够刺激皮肤组织修复，促进创伤的愈合。
它可以加速伤口的形成和修复，减少疤痕的产生。
•增加血液循环：水蛭素可以促进血液循环，扩张血管，增加血流量，改善组织供血和氧气供应。
•调节免疫功能：水蛭素对免疫功能有一定的调节作用，可以增强机体的免疫力，提高抵抗力。
3. 水蛭素的主治领域水蛭素由于其多种作用和功能，在医学领域中被广泛应用于以下主治领域：•心脑血管疾病：水蛭素可以抑制血小板聚集，减少血栓形成，降低心脑血管疾病的风险，如心肌梗死、脑中风等。
•关节炎：水蛭素具有较好的抗炎作用，可以缓解关节炎引起的疼痛和炎症，改善关节活动度。
•皮肤创伤：水蛭素能够促进创伤的愈合，减少疤痕的产生，对于创伤、擦伤、烧伤等皮肤创伤有良好的疗效。
•血液循环问题：水蛭素可以增加血液循环，改善组织供血和氧气供应，有助于解决血液循环问题，如冷手冷脚、静脉曲张等。
•免疫调节：水蛭素能够调节免疫功能，增强机体的免疫力，对于提高抵抗力、减少感冒症状等具有一定的效果。
4. 视频讲解为了更直观地了解水蛭素的作用与功能，以下是一段介绍水蛭素的视频讲解：[视频链接]在这个视频中，专家对水蛭素的作用与功能进行了详细的讲解。
他提到水蛭素的多种作用和功能，并解释了其在不同领域的应用。
通过观看这个视频，可以更全面地了解水蛭素的作用与功能，进一步认识水蛭素在医学领域的重要性和应用前景。
天然水蛭素百问百答
天然⽔蛭素百问百答1．⽔蛭素是否纯度越⾼越好？答：⽔蛭素产品的配⽅组合是要依据科学、定量并结合使⽤⼈群的安全耐受度进⾏恰当配⽐研制，不能盲⽬追求⾼纯度。
2．含量多少是最好？答：经过我们接近⼗年的研究和实践总结：⼀般情况下，每⽚（粒）⽔蛭素的含量为50到100 AT-U是⽐较合适的。
主要原因：若⽔蛭素含量太低，效果不好；若是太⾼，⼀些有特别严重问题的⼈群在不知情或过量服⽤的情况下，有可能会出现意外情况。
3． AT-U是指什么？答：⽔蛭素的⼀个抗凝⾎酶活⼒单位是⼀个国际单位(简称为AT-U)，是指在37°C下，使⼀个单位的凝⾎酶失活所需⽔蛭素的量。
4. 天然⽔蛭素产品的⼈群定位？答：⽔蛭素来源有限且珍贵稀缺，成本极其⾼昂。
⽬前⽔蛭素产品的定位⼈群只能是那些有缘的⼩众⼈群，他们对健康有认知但⼜没有机会遇到天然⽔蛭素。
他们普遍存在隐性⾎液疾病的潜在成因，既⾼频率应酬并缺乏定量持久地健⾝锻炼。
⾝体普遍存在“三⾼”、亚健康、痛风及⼼脑⾎管疾病的问题，但并⽆⾃⾝意识和警觉。
5.我们的⽔蛭素和市场上的有什么特别之处？答：市场上（包括⽹上）的绝⼤多数⽔蛭素产品都是挂⽺头卖狗⾁，打着⽔蛭素的旗号，其实就是⽤⽔蛭（⾍体）的整体磨成粉做成的劣质冒牌⽔蛭素产品。
这些产品也许有⼀定的功效，因为⽔蛭本⾝就有⾮凡的活性。
但是⽔蛭整体使⽤由于其⾃⾝的重⾦属及其残留农药超标，对⾝体肝脏和肾脏等其它器官的伤害远远⼤于产品本⾝的作⽤，本来产品是⽤来保健的，但是没有想到购买到的是低价冒牌质次的号称是⽔蛭素的产品却伤害了⾃⼰的⾝体。
它们只是打着⽔蛭素旗号⽽已，因为它们没有办法保留天然⽔蛭素的有效成分，所以，即使花了不少冤枉钱，也不可能解决⾎液⾥垃圾的根本问题。
⼴西科康天然⽔蛭素研究院不仅仅拥有⽬前世界唯⼀的⽔蛭活体多次提取天然⽔蛭素国家发明专利技术，还拥有⾃家的⾦边蚂蟥养殖基地，拥有⼗⼏年的吸⾎⽔蛭养殖经验，同时拥有⼗⼏年的⽔蛭素产品研发经验，是全球第⼀个将⽔蛭素应⽤于健康保健领域的开拓者，科康将⽔蛭素开发应⽤于保健领域今年是第⼗周年了，开发的⽔蛭素产品已经出⼝到了港澳台、东南亚和欧美等⼗⼏个国家和地区，在社会上拥有⼴泛的⼗分良好的⼝碑，⽽且是唯⼀主持承担过多项有关⽔蛭素研究国家重⼤科技攻关项⽬公司，在天然⽔蛭素领域是名符其实的第⼀品牌，是⾼质量的⽔蛭素专业品牌，是⼤众信得过的⽔蛭素品牌！是真正的净⾎专家！6.⽔蛭素产品有没有毒副作⽤？答：动物实验和临床研究表明，静脉或⽪下注射和⼝服⽔蛭素均⽆明显药毒副作⽤，⽆论急性、亚急性的毒性实验，对⾎压、⼼率、⾎相、出⾎时间和⾎液化学成分均不受影响，呼吸系统也没有影响，⽆过敏反映，⼀般⽆特异抗体发现。
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染色
考马斯亮蓝G250：20mg溶于10ml 95％ 乙醇，加入20ml磷酸，用双蒸水定容至 200ml，定容前用玻璃棒搅溶。（在恒温箱 中染色20分钟）
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脱色
25％甲醇，7.5％乙酸，室温振摇下脱色， 总共配置200ml。
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总结
1.在进行水蛭粉末获取时，是否直接将整个水蛭搅碎就能 使用了。 2.当抽干仪温度为52度会不会改变水蛭素的性质 3.在水液减压浓缩蒸压干燥得纯化样品A和B时，应用小离 心管或称量纸收集精品A和B 4.点样时加可溶性淀粉对水蛭素的水性溶是否有影响
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精制
将粗品A和B分别溶于250和200ml蒸馏水中，各装入已捡漏的透析 袋(析袋MW值为6000)，扎紧上口，放置有蒸馏水的烧杯中，4度冰箱
放置，每隔8小时换水，连续透析48h，取出透析袋，水液减压浓缩蒸
压干燥得纯化样品A和B,A得量1.19克，收率7.9％，B得量0.21克，收 率1.4％。（按书上介绍;A的收率应为0.104％，B收率为0.0825％)
水蛭素
水蛭素抗凝血物质的提取
粗品提取： 粉碎水蛭样品15g，生理盐水225ml，4度冰箱放置24h，倾出上清 （上清液的PH为7.4)，同法提取3次，合并提取液，磷酸调PH至4.4， 冷贮12h，取上清（上清液的PH为4.6) ，加入无水乙醇使其含量为61 ％，（加入乙醇后溶液的PH为6.6）（无水乙醇本身的PH为8.4）用稀 盐酸调PH至6，放置过夜，倾出上清（该上清的PH为6.1），沉淀用61 ％的乙醇洗涤3次，抽干得粗品A，滤液合并于上清液，再加入乙醇使 其含量为85％，静置24h后同同前处理取沉淀物洗涤抽干（抽干时仪 器调的温度为52度）得到粗品B。 加入无水乙醇使其含量为61％,用稀盐酸调PH至6
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精制
将粗品A和B分别溶于250和200ml蒸馏水中，各装入已捡漏的透析袋内
(透析袋MW值为6000)，扎紧上口，放置有蒸馏水的烧杯中，4度冰箱放置， 每隔8小时换水，连续透析48h，取出透析袋，水液减压浓缩蒸压干燥得纯 化样品A和B,A得量1.19克，收率7.9％，B得量0.21克，收率1.4％。(按书 上介绍;A的收率应为0.104％，B收率为0.0825％)（得到的A为深棕色粉末状
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胶的制作（制作分离胶5%）
1.分离胶缓冲液：10毫升 2.单体贮液： 21.36毫升 3.双蒸水： 48.66毫升 4. TEMED: 150毫升 5.过硫酸铵： 150毫升
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制作浓缩胶(3%)
1.浓缩胶缓冲液： 2.单体贮液： 3.双蒸水： 4.TEMED: 5.过硫酸铵： 2.5毫升 2.76毫升 14.68毫升 10毫升 60毫升
5.在下次点样时取大于0பைடு நூலகம்20克的A和B充分溶于蒸馏水，并 取上清进行点样。
固体，B的颜色比A要淡也为棕色固体;)，(起始时配置的水蛭样品与生理盐水比例 越高最后得到的A和B的颜色越深)
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水蛭样品与生理盐水1:5和1:15得到的最后产物A的图片
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电泳时溶液的配置
（1）0.005MTris—Hcl溶液（pH=8.8）：称取0.06055g Tris溶于50mL水， 用2N盐酸调pH至8.8，定容至100mL。 （2）分离胶缓冲液（pH=8.9）：称取36.3g Tris溶于60mL双蒸水中，用 2N盐酸调pH至8.9，再用双蒸水定容至100mL，4°C保存备用。 （3）单体贮液：称取30g丙烯酰胺和0.8g甲叉双丙烯酰胺，先用70mL双 蒸水溶解，再用双蒸水定容至100mL，过滤后用棕色瓶装，于4°C下 保存备用。 （4）电极缓冲液：称0.6gTris和2.88g甘氨酸溶于双蒸水，调pH至8.3，定 容至1000mL。 （5）10%过硫酸铵溶液：称取1g过硫酸铵溶于10mL双蒸水中，使用前 现配。 （6）浓缩胶缓冲液：称6.06gTris溶于60mL双蒸水中，调pH至6.8，再用 双蒸水定容至100mL，于4°C下保存备用。 （7）0.0252%七水硫酸亚铁溶液：称0.0252g七水硫酸亚铁溶于100mL双 蒸水中即可。
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用两块普通玻璃作为制备板框的材料。大小为23×23×0.3cm的方 形玻璃一块，23×23×0.3cm的凹型玻璃一块。
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◆ 点样：先将提取的 A和B溶解在含有7.5％可溶性淀粉的双 蒸水中，取20uL样品点样，marker的尺度为3到10 ◆ 不连续电泳：电泳开始前，加0.2%溴酚蓝作指示剂。采用 不连续电泳，初始电压为161V，电流为32mA，时间1小时 35分钟，当溴酚蓝通过浓缩胶与分离胶界面时，立即将电 压升高至200V，电流为32mA，时间1小时35分钟，时间为 4小时30分钟，待溴酚蓝电泳至凝胶底部时，电泳结束， 电泳时间约6小时。