seahorse能量代谢实验步骤
Seahorse海马代谢仪使用说明
配制XF细胞线粒体压力测试盒中药物 母液
检测液体积 Oligomycin FCCP Rotenone/Ant imycin A 630 μL 720 μL 540 μL
终浓度 100 μM 100 μM 50 μM
将药物稀释为10×浓度，用于加到加药孔中
1.按左边表格，用3 mL 检测液将 oligomycin稀释为所需浓度（或使 用大多数细胞都适用的1 μM）。
3.放入无CO2的培养箱，37℃过夜（使校准液能浸没在sensors 中；保证培养箱湿度，防止干燥）
培养细胞
1.100ul 培养液收集细胞，按最佳细胞 密度重悬细胞（10,000 - 80,000个细胞/ 孔）。 2.每孔接种100 μL细胞悬液，背景校正 孔（A1, B4, C3, D6）不接种细胞。将 细胞板室温静置在超净台上1 h。
实验当天 准备XF检测液
一个培养板 手动加液需100ml，仪器加液需 200ml
1.使用NaOH调节pH值至7.35±0.05 2.检测液中所需要添加的底物及浓度取决于细 胞类型和实验设计，或者与生长培养基保持一 致。 3.37℃放置备用。
NO sodium bicarbonate Low phenol red (3 mg/L)
Review Run-----Plate Information-----Well Volume-----Plate by----Start Run，放入测试板。当软件出现校准完成提示时，将Utility板 换为细胞培养板。点击Continue。仪器完成OCR值测定，数据分析。
寡霉素：ATP合酶抑制剂； FCCP：解偶联剂 ； 抗霉素A/鱼藤酮：呼吸链抑制剂；
How do I know whether the cell density is good?
seahorse 图片结果的分析
seahorse 图片结果的分析（OCR）（ECAR)
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•更新：2014-03-10 23:48
seahorse系列的细胞能量代谢检测仪器，对于检测细胞的糖酵解及氧化磷酸化等比较方便，根据本人的经验给大家讲解一下具体代表的意义希望对做试验的人们有用的。
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一、首先是耗氧量的检测，
在加oligo之前显示的数值，代表的是细胞的基础耗氧量，包括线粒体氧化磷酸化及质子漏耗氧。
即质子在线粒体膜通过呼吸链形成电势能后，一部分质子回流可以通过ATP合酶形成ATP，将势能转化为ATP中的能量。
一部分通过线粒体膜但是只是发生氧化，势能转化为热量，但是没有用于合成ATP。
oligo是ATP合酶抑制剂，加入此药后减少的耗氧代表的是机体用于ATP合成的耗氧量，间接显示此时细胞的ATP产量。
FCCP是一种解偶联剂，作为一种质子载体使得大量质子回流，大量耗氧，但是这种质子回流不能形成ATP，FCCP后耗氧的增加，代表线粒体的最大耗氧能力，间接显示最大的呼吸能力，
而其相对与基础值的高值代表其还具有的呼吸潜力。
最后加入是抗霉素A和寡霉素，二者是呼吸链抑制剂，完全阻止线粒体耗氧。
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二、细胞的胞外产酸能力间接显示糖酵解能力
基础值代笔的是细胞的非糖酵解产酸值，加入葡糖糖后代表的是此时细胞的糖酵解能力，而加入oligo后，氧化磷酸化被抑制，此时细胞完全靠糖酵解供氧，此时产酸增加，增加值代表细胞的还具有的糖酵解能力即潜力，总的数值代表细胞的最大糖酵解能力，最后加的是糖酵解抑制剂，此药之后的数值表明完全是由糖酵解之外的机理产酸所致的。
Seahorse XFe96 申报资料-药物
5.可调温控检测室，温度控制在30-37℃。
6.药物注入系统：气体驱动，自动注入药物。每孔整合4个独立加药窗口，加药体积为20-25l。
7.全程非接触式设计，免去使用任何染料、标签和报告子，摒除放射线或有毒化学物质对操作人员的伤害。
2.软件：windows 7.0操作系统；XFe96数据获取及分析软件。
主要功能、应用范围
主要功能：海马XFe96细胞能量代谢分析系统以96孔微孔板为平台，实时同步检测细胞以及线粒体中的有氧呼吸以及糖酵解功能。主要通过检测细胞或线粒体中代谢指标变化，如ECAR(细胞外酸化率)和OCR（耗氧率），进而解析线粒体的功能，从而了解代谢变化的真实内涵或做出药物毒性评价。检测快速、灵活、通量及灵敏高，能广泛应用于基础研究的各个方面。
美国海马生物技术公司拥有细胞多种生理指标同时检测等多项专利。海马XFe96细胞能量代谢分析系统使用高灵敏度微型传感器及首创的检测原理，革命性地在不破坏样本、不侵入细胞、实验条件无生物危害性的前提下实现实时、高通量、多样本来源的细胞有氧呼吸以及糖酵解作用的检测。在一次实验中能够得到样本的基础呼吸能力、ATP转换、质子渗漏、极限呼吸能力、储备呼吸能力、糖酵解通量、最大糖酵解能力及糖酵解储备能力等细胞代谢主要指标的检测值，并得到细胞生物能量的变化图。并通过这两大能量生成途径的实时对比，揭示它们之间的动态互动变化。
8.耗材一次性使用，用后无须清洗，杜绝交叉污染可能性。
9.检测后细胞保持活性，可以用于后续的其它检测。
10.可以无限次地重复测试以检测动力学反应。
测试样品制备工作站：
包括无二氧化碳培养箱、自动培养基更换系统和温控系统。
海马能量代谢测试流程
海马能量代谢测试流程英文回答：The process of conducting a seahorse energy metabolism test involves several steps. First, the seahorse is placed in a specially designed respirometry chamber, which is a closed system that allows for the measurement of oxygen consumption. The chamber is equipped with sensors to monitor the oxygen levels inside.Once the seahorse is settled in the chamber, the next step is to establish a baseline oxygen consumption rate. This is done by measuring the oxygen levels for a certain period of time while the seahorse is at rest. This baseline measurement provides a reference point for comparison during subsequent stages of the test.After establishing the baseline, the seahorse is then subjected to physical activity, such as swimming or hunting for food. The oxygen consumption is continuously monitoredduring this active phase. This allows researchers to determine the metabolic rate of the seahorse during different levels of activity.The final step of the test involves analyzing the data collected during the rest and active phases. By comparing the oxygen consumption rates during these two phases, researchers can gain insights into the energy expenditure and metabolic efficiency of the seahorse. This information can be used to study the impact of various factors, such as temperature or diet, on the seahorse's energy metabolism.In conclusion, the process of conducting a seahorse energy metabolism test involves placing the seahorse in a respirometry chamber, establishing a baseline oxygen consumption rate, subjecting the seahorse to physical activity, and analyzing the data collected. This test provides valuable information about the seahorse's energy expenditure and metabolic efficiency.中文回答：海马能量代谢测试的流程包括几个步骤。
Seahorse XF实验流程
Seahorse XF实验流程（此为简略版实验流程，详细步骤参见培训手册）XF实验前一天1.种细胞：将细胞接种到Seahorse XF细胞培养板中，在生长培养基中过夜培养。
注：细胞接种时间和培养时间可根据细胞处理要求进行选择。
2.预热仪器：打开Seahorse仪器和电脑，并打开软件，使仪器升温至37℃，过夜预热。
3.水化探针：在Utility Plate中加入Seahorse XF校准液，将测试板放回Utility Plate上，置于37℃无CO2培养箱中过夜水化探针。
XF实验当天1.准备检测液：用Seahorse XF Base Medium配制检测液，加入所需要的底物，将溶液加热至37℃，用NaOH调pH值至7.4，过滤，置37℃水浴中备用。
注：检测液中所需要添加的底物及浓度取决于细胞类型和实验设计，或者与生长培养基保持一致。
2.观察细胞：将细胞板从CO2培养箱中取出，在显微镜下观察细胞状态。
3.细胞换液：将生长培养基换为检测液，然后将细胞放置在37℃无CO2培养箱中1小时。
4.配药：根据试剂盒说明书，配制并稀释药物至所需浓度。
5.加药：将稀释好的药物分别加入测试板上的A，B，C，D 四个加药孔中。
注：根据实验设计选择所用加药孔数量。
6.设计实验模板：用软件记录实验条件和设计实验程序。
7.上机：开始运行实验程序，将加过药的测试板和装有校准液的Utility Plate一起放置到仪器托板上。
8.仪器自动校准探针。
9.换细胞板：当软件出现提示信息时，将Utility Plate换为细胞板。
10.实验完成时根据软件提示信息退出测试板和细胞板，并在显微镜下观察细胞状态。
11.数据分析：采用wave软件和report generator对实验数据进行分析。
基于能量代谢系统评价延胡索乙素对人肝癌细胞的影响
doi：10.3969/j.issn.1000-484X.2021.04.009•肿瘤免疫学•基于能量代谢系统评价延胡索乙素对人肝癌细胞的影响①尹逊哲刘作家②郭焱（长春中医药大学，长春130117）中图分类号R73⁃3文献标志码A文章编号1000-484X（2021）04-0426-05［摘要］目的：利用Seahorse XFp体外细胞能量代谢分析系统探讨延胡索乙素（THP）对人肝癌（HCC）SMMC-7721细胞能量代谢的影响。
方法：不同浓度的THP作用SMMC-7721细胞后，CCK-8法检测THP对SMMC-7721细胞增殖的影响；采用Seahorse XFp细胞能量代谢分析系统检测THP对SMMC-7721细胞线粒体呼吸和糖酵解的影响；优化Seahorse XFp细胞能量代谢分析系统检测SMMC-7721细胞线粒体压力（OCR）和糖酵解条件；流式细胞术检测THP诱导SMMC-7721细胞的凋亡率及细胞周期；Western blot检测SMMC-7721细胞中caspase-3、caspase-9及cytochrome c蛋白的表达差异。
结果：THP处理后的SMMC-7721细胞增殖明显受到抑制，且具有时间和剂量效应关系；OCR最优条件为：葡糖糖浓度2.5mol/L、谷氨酰胺0.2mol/L、丙酮酸钠0.1mol/L，寡霉素1µmol/L、FCCP1µmol/L、鱼藤酮0.5µmol/L；ECAR最优条件为：葡糖糖10mmol/L、寡霉素10µmol/L、2-DG50mmol/L。
THP（150µg/ml）作用SMMC-7721细胞24h后，线粒体呼吸作用被抑制，线粒体基础呼吸、ATP产量及最大呼吸能力均下降；同时抑制糖酵解作用，糖酵解能力、最大糖酵解能力及糖酵解储备均下降；流式细胞术结果显示细胞凋亡率升高，G1期细胞增多，且阻滞在G1期；同时，caspase-9及cytochrome c蛋白表达水平显著升高，形成凋亡小体上调caspase-3表达。
seahorse xf pro工作原理
Seahorse XF Pro是一款高端的代谷细胞分析仪，它采用了新颖的技术，可以实时监测细胞的代谢状态和功能。
Seahorse XF Pro的工作原理是基于代谷细胞的特异性代谷测定技术，它能够实时测定细胞内ATP产生速率和氧化磷酸化水平，从而揭示细胞的能量代谢和功能活性。
下面将逐步介绍Seahorse XF Pro的工作原理：1. 原理概述Seahorse XF Pro利用代谷细胞分析技术，通过测定细胞内ATP产生速率和氧化磷酸化水平来实时监测细胞的能量代谢和功能活性。
它采用了荧光探针技术和高通量检测系统，可以在短时间内对细胞进行多参数测定，为细胞代谷研究提供了重要的工具和技术支持。
2. 测定原理Seahorse XF Pro通过测定细胞内ATP产生速率和氧化磷酸化水平来实时监测细胞的代谢状态和功能活性。
它利用荧光探针技术，通过不同荧光信号的变化来反映细胞内代谷物质的浓度和动态变化。
Seahorse XF Pro采用了高通量检测系统，可以对多个样品进行同时测定，提高了测定效率和数据可靠性。
3. 适用范围Seahorse XF Pro主要应用于生物医学研究领域，可以用于细胞代谷、药物筛选、毒性评价和疾病模型研究等方面。
它可以对不同类型的细胞和生物样品进行分析，为科研人员和生物制药企业提供了一种快速、准确、可靠的细胞功能分析方法。
4. 工作流程Seahorse XF Pro的工作流程一般包括样品处理、实验设置、反应测定和数据分析四个步骤。
在样品处理阶段，需要对细胞进行适当的处理和预处理，以保证实验的准确性和可靠性。
在实验设置阶段，需要根据实验的要求进行合理的参数设置和实验方案设计。
在反应测定阶段，需要将样品加入到测定盘中，通过Seahorse XF Pro进行代谷测定实验。
在数据分析阶段，需要对测定结果进行分析和解读，得出实验结论和科研成果。
5. 应用前景Seahorse XF Pro作为一种新型的细胞分析仪器，具有广阔的应用前景和市场潜力。
seahorse实验原理
seahorse实验原理Seahore细胞能量代谢分析仪是检测线粒体功能和细胞代谢的有力工具，在代谢研究中广泛使用。
因为其检测过程中用到了一系列氧化磷酸化和电子传递抑制剂，也涉及到糖酵解、氧化磷酸化等不同代谢途径，所以了解其基本原理和分析方法对理论学习和科研实践都很有帮助。
Seahore Fe96Seahore检测时将细胞培养在专用的微孔板上，实时检测加入不同药物后的耗氧率（O2 conumption rate，OCR）和胞外酸化率（etracellular acidification rate，ECAR），来表征细胞的代谢状况。
其中OCR由线粒体电子传递造成，ECAR则源自乳酸发酵（糖酵解酸化）和线粒体产生的二氧化碳（线粒体酸化）。
OCR用来研究线粒体氧化磷酸化功能。
检测时一般先测定正常状态下的基础呼吸（baal repiration），然后加入寡霉素（oligomycin）抑制ATP合酶，这是OCR显著下降，仅余下质子渗漏（proton leak）造成的耗氧率。
降低部分即为氧化磷酸化的耗氧率（ATP production）。
加入解偶联剂FCCP后，电子传递失去质子梯度的约束，就会以最大速率进行。
所以OCR急剧升高，达到最大耗氧量（maimal repiration）。
此值与基础呼吸之差，称为呼吸潜力（pare repiratory capacity）。
最后加入电子传递抑制剂，如抗霉素A（antimycin A），完全抑制电子传递，耗氧率降至最低。
ECAR经常用来研究糖酵解等代谢状况。
加入葡萄糖之前的基础值是非酵解产酸，如线粒体呼吸产生的二氧化碳造成的线粒体酸化。
之后加入葡萄糖，升高的值就代表糖酵解。
加入寡霉素后，因为氧化磷酸化被抑制，细胞被迫完全采用乳酸发酵供能，所以产酸增加。
此时的值称为酵解容量（glycolytic capacity），与糖酵解之差称为酵解储备（glycolytic reerve）。
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seahorse能量代谢实验步骤
Seahorse能量代谢实验步骤
引言：
Seahorse能量代谢实验是一种常用的方法，用于研究细胞的能量代谢过程。
该实验通过测量细胞的氧耗和酸化速率，可以得到细胞的能量代谢状态、线粒体功能以及细胞对不同药物的敏感性等信息。
本文将详细介绍Seahorse能量代谢实验的步骤。
实验步骤：
一、细胞处理
1. 培养细胞：首先，需要培养所需的细胞系。
将细胞种植在含有适宜培养基的培养皿中，并在恒温恒湿的培养箱中培养细胞至达到所需的细胞数目。
2. 细胞收获：当细胞生长至适当密度时，用胰酶等方法将细胞从培养皿中收获下来，并转移到含有适宜培养基的离心管中。
3. 细胞计数：使用细胞计数仪或显微镜等设备，对收获的细胞进行计数，以确定细胞的浓度。
二、Seahorse载体处理
1. 准备Seahorse载体：将Seahorse载体放入预先恢复的培养基中，并在无菌条件下进行孵育。
2. 加载细胞：将细胞悬液与Seahorse载体混合，并将混合液转移
到Seahorse载体板中的各孔中。
三、实验参数设置
1. 选取适当的实验条件：根据实验要求，设置Seahorse仪器的参数，如预运行时间、采样间隔、时间点数等。
2. 添加药物：根据需要，可以在实验过程中添加不同的药物，以研究细胞对药物的反应和影响。
四、Seahorse能量代谢测量
1. 氧耗测量：将Seahorse载体板放入Seahorse仪器中，并进行氧耗测量。
Seahorse仪器会通过微量注射将氧浓度计和酸碱浓度计等传感器插入到载体孔中，测量细胞的氧耗情况。
2. 酸化速率测量：在氧耗测量结束后，继续进行酸化速率测量。
Seahorse仪器会通过微量注射将酸碱浓度计插入到载体孔中，测量细胞的酸化速率。
五、数据分析与结果解读
1. 数据处理：将Seahorse仪器得到的原始数据导入数据处理软件中，进行数据清洗、校正和归一化等处理，以得到可靠的结果。
2. 结果解读：根据处理后的数据，分析细胞的能量代谢状态、线粒体功能以及细胞对药物的敏感性等信息，并进行结果解读。
结论：
Seahorse能量代谢实验是一种重要的实验方法，可以用于研究细胞
的能量代谢过程。
通过测量细胞的氧耗和酸化速率，可以获得有关细胞的能量代谢状态、线粒体功能以及细胞对药物的敏感性等重要信息。
这些信息对于深入理解细胞生物学和疾病机制具有重要意义。
希望本文对Seahorse能量代谢实验的步骤有所帮助。