细胞工程复习题
生工细胞工程复习题
生工细胞工程复习题《细胞工程》复习参考第一章绪论1、细胞工程的定义及分类。
定义：以细胞为基本单位，在体外条件下进行培养、繁殖，或人为地使细胞的某些生物学特性按人的意愿发生改变从而达到改良生物品种或创造新品种，加速繁育动植物个体，或获得某种有用的物质的过程。
分类：根据生物类型的不同分为动物细胞工程、植物细胞工程和微生物细胞工程。
2、请简单谈谈植物细胞工程在在育种、食品工业等方面的应用。
在植物育种上的应用：将植物常规育种技术和植物组织培养技术相结合，可以获得常规技术难以获得或无法获得的种质材料，缩短育种周期，提高育种效率。
其优势有快速获得特殊倍性材料，克服远缘杂交不亲和，克服杂种胚早期夭折，导入外源基因，种质资源保存，种苗脱病毒与快速繁殖。
在食品工业中的应用：有不受地理、气候、季节条件的影响，节约土地、减低成本、提高经济效益，容易获得诱变突变体等优点。
但许多技术还停留在实验室阶段，生产规模待扩大。
应用有利用植物细胞工程生产香料、调料、食品添加剂、天然食品等。
第二章细胞培养的设备和操作技术1、细胞培养的营养成分主要包括哪些？各有什么功能作用？细胞培养的营养成分包括无机盐、有机化合物和生长调节剂。
无机盐：一是组成各种化合物，成为结构物质；二是构成一些特殊的生理活性物质，参与植物的代谢活动；三是这些元素之间互相协调，以维持离子浓度平衡、胶体稳定、电荷平衡等生物电化学方面的作用；四是在发育过程中影响组织器官的建成。
有机物质：（1）糖：维持培养基合适的渗透压，为细胞提供合成新物质的碳骨架，为细胞呼吸代谢提供底物和能量。
（2）维生素：利于细胞代谢和器官分化。
（3）氨基酸：组成蛋白质及其他代谢功能。
（4）肌醇：促进糖类的相互转化，维生素、激素的利用作用，是培养物快速生长。
（5）腺嘌呤、硫酸盐的激素：促进芽、根的形成和生长。
（6）附加物：为非细胞生长所必需，但对细胞生长有利。
琼脂：使培养基在常温下凝固，不参与代谢。
细胞工程学复习题
细胞工程学习题1．诱导试管苗生根时，培养基的调整应A．加大盐的浓度B．加活性炭C．加大分裂素的浓度D．加大生长素的浓度2．下列实验中可能获得三倍体植株的是A．小麦的茎尖培养B．番茄花药培养C．玉米胚乳培养D．玉米花粉培养3．动物体内各种类型的细胞中，具有最高全能性的细胞是A．体细胞B．生殖细胞C．受精卵D．干细胞4．下列哪个是植物离体培养常用的主要糖类A．葡萄糖B．果糖C．麦芽糖D．蔗糖5．农杆菌介导的转化方法主要适用于A．草本植物B．木本植物C．单子叶植物D．双子叶植物6．原生质体纯化步骤大致有如下几步：①将收集到的滤液离心，转速以将原生质体沉淀而碎片等仍悬浮在上清液中为准，一般以500r／min离心15min。
用吸管谨慎地吸去上清液。
②将离心下来的原生质体重新悬浮在洗液中(除不含酶外，其他成分和酶液相同)，再次离心，去上清液，如此重复三次。
③将原生质体混合液经筛孔大小为40～100um的滤网过滤，以除去未消化的细胞团块和筛管、导管等杂质，收集滤液。
④用培养基清洗一次，最后用培养基将原生质调到一定密度进行培养。
一般原生质体的培养密度为104～106／ml。
正确的操作步骤是：（）A ①②③④B②③①④C③①②④D③②①④7．常用的细胞融合剂是A．刀豆球蛋白B．聚乙二醇（PEG）C．细胞松弛素B D．脂质体8．利用细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体过程中，HAT培养基用来进行A．细胞融合B．杂交瘤选择C．检测抗体D．动物免疫9．下列过程中，没有发生膜融合的是A．植物体细胞杂交B．受精过程C．氧进入细胞中的线粒体D．单克隆抗体的产生10．科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体。
与骨髓瘤细胞融合的是A．经过免疫的B细胞B．没经过免疫的T细胞C．经过免疫的T淋巴细胞D．没经过免疫的B淋巴细胞二填空题1、在植物组织培养基中，添加_____细胞分裂素_____ 能促进合成细胞分裂素，有利于细胞的分裂与分化，促进芽的形成2、在植物组织培养基中，添加_____肌醇_____ 能促进糖类物质的转化，也能促进愈伤组织的生长以及胚状体的形成3、生长素是由__色氨酸_____通过一系列中间产物形成，在植物组织培养中生长素主要是用来刺激细胞的分裂和诱导根的分化，吲哚乙酸（IAA）、2、4-二氯苯养乙酸（2、4-D）、吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸(NAA)、吲哚丁酸（IBA）等为类生长素。
细胞工程题库
细胞工程题库一、名词解释细胞工程：是指应用细胞生物学和分子生物学的方法，通过某种工程学手段，在细胞水平或细胞器水平上，按照人们的意愿来改变细胞内遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术。
细胞全能性：是指已经分化的细胞仍然具有发育成完整个体的潜能。
动物细胞培养：是指将取自不同组织、具有分裂能力的动物细胞，在一定条件下进行体外培养，使细胞增殖的技术。
干细胞：是一类具有自我更新和分化潜能的细胞，它能够产生高度分化的功能细胞。
根据来源不同，干细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞。
核移植：是指将一个细胞的核遗传物质转移到另一个细胞中，使后者获得前者的遗传信息并表现出前者的某些遗传特征的过程。
二、简答题简述动物细胞培养的基本过程。
动物细胞培养的基本过程包括：（1）原代培养，即从动物组织中分离出单细胞，在培养基中形成细胞悬浮液；（2）传代培养，即对原代培养的细胞进行扩增培养，使细胞数量增多；（3）细胞株培养，即通过选择特定的培养条件，使某些具有特定性质的细胞在培养基中大量扩增；（4）细胞系培养，即通过克隆培养技术，将具有相同遗传特征的细胞进行大量扩增。
简述干细胞的分类及特点。
根据来源不同，干细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞。
胚胎干细胞具有发育的全能性，能够分化为各种类型的组织细胞；成体干细胞则具有多能性，能够分化为特定的组织细胞。
干细胞的特点是具有自我更新和分化的能力，可以在体外进行培养和扩增。
三、论述题论述动物细胞工程的主要应用领域及前景。
动物细胞工程的主要应用领域包括：（1）生产生物制品，如疫苗、抗体等；（2）用于疾病治疗，如基因治疗、细胞治疗等；（3）用于药物筛选和研究，如建立药物筛选模型、药物作用机制研究等；（4）用于组织工程和再生医学，如人工器官、组织修复等。
动物细胞工程的前景非常广阔，随着技术的不断发展和完善，它在未来的医疗、生物制品生产、药物研究等方面将会发挥越来越重要的作用。
细胞工程期末复习-名词解释
细胞工程复习题一、名词解释[1]细胞工程：是指主要以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。
[2]细胞融合：是指使用人工方法使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的技术。
[3]细胞重组：从活细胞中将细胞器及其组分分离出来，再在体外一定条件下将不同来源的细胞器及其组分重新组合，使之重新装配成为具有生物活性的细胞或细胞器的一种实验技术[4]细胞培养：泛指所有体外培养，其含义是指从动物活体体内取出组织，于模拟体内生理环境等特定的体内条件下，进行孵育培养，使之生存并生长[5]细胞全能性：指分化细胞保留全部的核基因组，具有生物个体生长、发育所需要的全部遗传信息，具有发育成完整个体的潜能。
[6]细胞分化：是指细胞在形态、结构和功能上发生差异的过程，包括时间上和空间上的分化。
[7]细胞核移植：是一种利用显微操作技术将一种动物的细胞核移入同种或异种动物的去核成熟卵细胞内的技术。
主要包括胚胎细胞核移植和体细胞核移植。
[8]细胞悬浮培养：是将细胞接种于液体培养基中并保持良好的分散状态的培养方式[9]细胞系：由原代培养经传代培养纯化，获得的以一种细胞为主的、能在体外长期生存的不均一的细胞群体。
第一次传代培养后的细胞即称之为细胞系[10]细胞株：是指从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群，称细胞株[11]细胞凋亡：也叫程序性细胞死亡是机体维持环境稳定、有基因控制的细胞自主的有序性死亡[12]细胞团培养：细胞培养时，本身代谢就慢或者脆弱，细胞密度太低或者太高都会导致细胞的凋亡，死亡的细胞裂解物包裹未凋亡的细胞形成絮状物，这些絮状物在显微镜下看就是细胞聚集。
[13]体细胞核移植：体细胞核移植又称体细胞克隆，原理即细胞核的全能性，是动物细胞工程技术的常用技术手段[14]冠瘿组织：是由根癌农杆菌感染引起的植物肿瘤组织，它能在无外加植物激素的培养基上生长。
细胞工程学复习题
细胞工程学习题1．诱导试管苗生根时，培养基的调整应A．加大盐的浓度B．加活性炭C．加大分裂素的浓度D．加大生长素的浓度2．以下实验中可能获得三倍体植株的是A．小麦的茎尖培养B．番茄花药培养C．玉米胚乳培养D．玉米花粉培养3．动物体内各种类型的细胞中，具有最高全能性的细胞是A．体细胞B．生殖细胞C．受精卵D．干细胞4．以下哪个是植物离体培养常用的主要糖类A．葡萄糖B．果糖C．麦芽糖D．蔗糖5．农杆菌介导的转化方法主要适用于A．草本植物B．木本植物C．单子叶植物D．双子叶植物6．原生质体纯化步骤大致有如下几步：①将收集到的滤液离心，转速以将原生质体沉淀而碎片等仍悬浮在上清液中为准，一般以500r／min离心15min。
用吸管慎重地吸去上清液。
②将离心下来的原生质体重新悬浮在洗液中(除不含酶外，其他成分和酶液一样)，再次离心，去上清液，如此重复三次。
③将原生质体混合液经筛孔大小为40～100um的滤网过滤，以除去未消化的细胞团块和筛管、导管等杂质，收集滤液。
④用培养基清洗一次，最后用培养基将原生质调到一定密度进展培养。
一般原生质体的培养密度为104～106／ml。
正确的操作步骤是：〔〕A ①②③④B②③①④C③①②④D③②①④7．常用的细胞融合剂是A．刀豆球蛋白B．聚乙二醇〔PEG〕C．细胞松弛素B D．脂质体8．利用细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体过程中，HAT培养基用来进展A．细胞融合B．杂交瘤选择C．检测抗体D．动物免疫9．以下过程中，没有发生膜融合的是A．植物体细胞杂交B．受精过程C．氧进入细胞中的线粒体D．单克隆抗体的产生10．科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体。
与骨髓瘤细胞融合的是A．经过免疫的B细胞B．没经过免疫的T细胞C．经过免疫的T淋巴细胞D．没经过免疫的B淋巴细胞二填空题1、在植物组织培养基中，添加_____细胞分裂素_____ 能促进合成细胞分裂素，有利于细胞的分裂与分化，促进芽的形成2、在植物组织培养基中，添加_____肌醇_____ 能促进糖类物质的转化，也能促进愈伤组织的生长以及胚状体的形成3、生长素是由__色氨酸_____通过一系列中间产物形成，在植物组织培养中生长素主要是用来刺激细胞的分裂和诱导根的分化，吲哚乙酸〔IAA〕、2、4-二氯苯养乙酸〔2、4-D〕、吲哚乙酸〔IAA〕、萘乙酸(NAA)、吲哚丁酸〔IBA〕等为类生长素。
细胞工程复习题
《细胞工程》复习题一、选择题：1．在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（Ｂ) A．结果是相同的B．杂种细胞的形成过程基本相同C．操作过程中酶的作用相同D．诱导融合的手段相同2。
单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞,在这种培养基上不能存活增殖的细胞是( C ）①淋巴细胞②小鼠骨髓瘤细胞③B淋巴细胞自身融合细胞④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞⑤杂交瘤细胞A．②④ B．①③⑤C．①②③④ D．②③3．动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的有（ D ）A．诱导融合的方法完全相同B．所用的技术手段完全相同C．所采用的原理完全相同D．都能形成杂种细胞4.单克隆抗体是指（ C )A．单个骨髓瘤细胞增殖产生的抗体B．单个B淋巴细胞增殖产生的抗体C．单个杂交瘤细胞增殖产生的抗体D．单个抗体通过克隆化,产生大量抗体5.将小鼠骨髓瘤细胞与一种B淋巴细胞融合,可使融合的细胞经培养产生单克隆抗体，其依据是（多选）(AC ）A．B淋巴细胞可以产生抗体,但不能无限增殖B．B淋巴细胞只有与骨髓瘤细胞融合后才能产生抗体C．骨髓瘤细胞可以无限增殖，但不能产生抗体D．骨髓瘤细胞可以产生抗体，但不能无限增殖6.要想获得大量的单克隆抗体就必须用单个的B淋巴细胞进行无性繁殖，形成细胞群.其原因是（ D ）A．在体外培养条件下B淋巴细胞可以无限增殖B．在动物体内B淋巴细胞可产生多达百万种以上的抗体C．每一个B淋巴细胞都参与特异性免疫反应D．每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体7。
关于单克隆抗体，下列叙述不正确的是(D ）A、可以制成诊断盒．用于疾病的珍断B、可以与药物结合，用于病变细胞的定向治疗C、可以利用基因工程技术生产D、可以在生物体内生产，不能体外生产8。
以下不属于生长素的是（D)A IAAB NAAC 2，4—D D 6—BA9.植物细胞有而动物细胞没有的结构是（D）A细胞质 B线粒体 C内质网 D叶绿体10。
高考生物一轮总复习 专题二 细胞工程试题(含解析)新人教版选修3
高考生物一轮总复习专题二细胞工程试题（含解析）新人教版选修3考点分类抓基础点点击破我能行1．下面所列过程是植物组织培养的简略过程。
请据此回答：①→脱分化→②→再分化→③→④(1)①表示__________________________________，它能被培养成④的根本原因是______________________________。
(2)②表示__________，它的细胞特点是______________________________________________，它的颜色特点是______________________________。
(3)若想制造人工种子，应该选择(写编号)__________。
(4)若①是花药，则④是______________，这项技术可用在__________上。
(5)若①是胡萝卜根尖细胞，则培养成的④叶片的颜色是__________，这说明根尖细胞__________________________________。
(6)若利用此项技术制造治疗烫伤的药物——紫草素，培养将进行到(写编号)__________。
答案：(1)离体的植物器官、组织或细胞植物细胞具有全能性(2)愈伤组织细胞排列疏松、高度液泡化、细胞壁薄、呈无定形状态色浅(3)③(4)单倍体植株单倍体育种(5)绿色含有表达叶绿体的基因(6)②解析：此题考查了对植物组织培养过程有关知识的理解。
植物组织培养必须用离体的植物细胞、组织或器官，因为细胞中含有本物种的全套遗传物质，因此可以被培养成植株。
制造人工种子必须选择再分化后的胚状体。
2．如图为植物体细胞杂交过程示意图。
据图回答：(1)步骤①是__________，最常用的方法是__________。
(2)步骤②一般常用的化学试剂是__________，目的是________________________。
(3)在利用杂种细胞培育成为杂种植株的过程中，运用的技术手段是__________，其中步骤④相当于__________，步骤⑤相当于__________。
细胞工程复习题
1、哺乳动物的克隆方法有哪些？（1）胚胎干细胞核移植；（2）胚胎细胞核移植；（3）胎儿成纤维细胞核移植；（4）体细胞核移植2、胚胎工程的意义（1）发挥优良母畜的繁殖能力——胚胎移植技术是提高母畜繁殖潜力的有效方法，扩大良种雌性配子的推广利用。
（超数排卵、同步发情）。
（2）促进家畜改良的速度（泌乳高的奶牛、瘦肉型猪、毛肉兼用的细毛羊等）。
（3）作为胚胎操作的基础（卵子切割、性别控制、嵌合体制作、细胞核移植、转基因操作等）。
（4）保存遗传资源——胚胎超低温冷冻技术的运用，给长期保存和运输、异地移植带来方便，还可用于建立“胚胎库”等。
3、动物细胞培养基成分有哪些？（1）氨基酸类（2）维生素类（3）大量元素----是调节培养液渗透压的主要成分。
（4）微量元素-----由血清提供的，在低血清或无血清培养液中，则需添加铁、铜、锌、硒等微量元素。
（5）葡萄糖----能量来源之一，也是某些氨基酸合成的原料。
（6）有机类（7）激素类----血清中含有许多激素。
（8）生长因子类4、血清的主要用途及注意事项（1）维持体外细胞生长；（2）提供细胞生存、生长和增值所必需的激素和生长因子；（3）补充基础培养液中没有或量不足的营养成分；（4）含有一些可供贴壁依赖型细胞在培养器皿表面粘附和铺展的生长基质成分；（5）还能为细胞提供载体蛋白，补充细胞外基质；（6）血清中还含有糠蛋白酶成分，起到中和作用；（7）为培养液提供良好的缓冲坏境；（8）血清还有一定的黏度，可以保护细胞免受机械损伤。
5、细胞培养的作用意义（1）有害物质的快速检测；（2）大面积皮肤烧伤的修复；（3）遗传病的产前诊断；（4）建立各种医学模型；（5）大量生产生物活性物质；（6）细胞与细胞之间的相互作用；（7）细胞内部与细胞外界之间的作用；（8）细胞内胞质的活动；（9）胞质与核质之间的流动6、细胞重组的方式与意义（1）方式：1）胞质体与完整细胞的融合形成胞质杂种；2）微细胞与完整细胞的融合形成微细胞异核体；3）胞质体与核体（小细胞）融合形成重组细胞（核质杂种（2）意义：1）研究核质关系；2）研究细胞器的功能及相互作用关系；3）研究细胞器的组装，甚至细胞的自我装配机理，以揭示细胞起源与进化的机制；4）结合基因转移技术，可人为地使细胞表达新的性状和产生新的产物，实现掌握细胞、利用细胞、改造并进而创造出具有特定性状和功能的工程细胞。
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第二章2、简要说明MS培养基的基本组成。
1）大量元素母液配制MS培养基的大量元素主要包括硝酸铵（NH4NO3）、硝酸钾(KNO3)、磷酸二氢钾（KH2PO4）、硫酸镁（MgSO4•7H2O）和氯化钾（CaCl2,CaCl2•2H2O）五种化合物。
2）微量元素母液配制MS培养基的微量元素由7种化合物（除Fe外）组成MnSO4•4H2O、ZnSO4•7H2O、H3BO3、KI、NaMoO4•2H2O、CuSO4•5H2O、CoCl2•6H2O。
3）铁盐母液配制MS培养基中的铁盐是硫酸亚铁（FeSO4•4H2O）和乙二胺四乙酸二钠（Na2•EDTA）的螯合物，必须单独配成母液。
4）有机母液的配制MS培养基的有机成分有甘氨酸、肌醇、烟酸、烟酸硫胺素和盐酸吡哆素。
5）激素母液配制MS培养基中的激素有生长素类、细胞分裂素6、初代培养时，接种的一般程序是什么？1）在接种前打开超净工作台紫外灯照射20~30min，关闭紫外灯后，打开超净工作台的风机10min以上，开始无菌操作。
2）接种人员先洗净，在缓冲室内换好经过消毒的工作服，带上口罩，并换上拖鞋等。
3）上超净工作台后，用酒精棉球认真擦拭双手，特别是指甲处，然后擦拭工作台面及四周，装有培养基的培养器皿和盛外植体的烧杯也要用酒精擦拭消毒后，再放进工作台。
4）先用酒精棉球擦拭接种工具，然后在酒精灯火焰上进行灼烧灭菌或放在接种器械灭菌器中灭菌，灭菌后放在器械架上使其自然冷却。
5）把植物材料放在75%乙醇中浸泡约30s，再用0.1%的升汞中浸泡5~10min，浸泡时刻进行搅动，使植物材料与消毒剂有良好的接触，然后用无菌水冲洗3~5次。
6）接种时培养瓶瓶口要在酒精灯火焰附近，并在接种前后灼烧瓶口。
7）接种结束后，清理和关闭超净工作台。
第三章1.基本概念细胞的全能性：是指细胞具有发育成完整个体的遗传潜能。
细胞分化：是指发育起始状态的合子沿个体发育方向不断分化出形态结构、生理功能不同的细胞、组织、器官而最终形成完整植株的过程。
即由于细胞的分工而导致其结构和功能改变或发育方式改变的过程。
去分化：已有特定结构和功能的植物组织，在一定的条件下，其细胞被诱导改变原有的发育途径，逐步失去原有的分化状态，转变为具有分生能力的胚性细胞的过程叫脱分化或去分化。
体细胞胚： (somatic embry)又称胚状体，是指离体培养条件下没有经过受精过程而形成的胚胎类似物。
人工种子：（artificial seeds）又称合成种子（synthetic seeds）或体细胞种子（somatic seeds）。
就是将离体培养中产生的胚状体或芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中形成的类似种子的颗粒。
7、离体培养条件下，茎、芽和根的再生方式有几种？答:在组织培养中，通过茎芽和根而再生植株的方式大致有3种：1.先芽后根：多数植物；2.先根后芽：颠茄；3.在不同部位分别形成芽和根，最后通过微管组织联系形成再生植株。
9、何谓胚状体？胚状体与合子胚有何异同？答：胚状体离体培养条件下，没有经过受精过程，但是经过了胚胎发育过程所形成的胚状类似物，此现象无论在体细胞培养还是生殖细胞培养中均可以看到，因而统称为体细胞胚或胚状体。
异同细胞胚具有两极性，而器官发生是单极的。
细胞胚维管组织分布是独立的Y 字形结构，形成的再生植株遗传性比器官发生的稳定。
与合子胚相比体细胞胚子叶不规范，胚小、含水量高、对脱水敏感、没有休眠。
15、控制胚性细胞同步化的方法有哪些？答：①抑制剂法促进细胞同步分裂；②低温处理促进细胞同步分裂；③渗透压控制同步化法；④同步胚的分段收集筛选法；⑤通气法。
16、人工种子繁殖体如何处理？人工种子的制备要点有哪些？答：繁殖体的处理：①体细胞胚形成后，需要在无激素培养基上经过一定阶段的后熟培养，然后进行脱水干燥，再将畸形胚选出后才能进行包埋。
在脱水之前用ABA处理体细胞胚强迫其进入休眠，更有利于长期储存。
②微型变态器官繁殖体不能过度脱水，但亦需要适当干燥，除去表面多余的水分，同时要进行表面消毒处理以防止包被后的感染。
为了延长储存时间，需根据使用季节进行适当的休眠处理。
③以微芽为繁殖体时，不能进行脱水处理，但必需筛选生长健壮、组织充实的芽进行包埋。
第四章1.名词概念：微繁殖：是指在离体培养条件下，将来自优良植株的茎尖、腋芽、叶片、鳞片等器官、组织和细胞进行无菌培养，经过不断地切割和重复培养，使其增殖并再生形成完整植株，在短期内获得大量遗传性均一的个体的方法。
原球茎：兰科植物的种子在萌发初期并不出现胚根，只是胚逐渐膨大，以后种皮的一端破裂，膨大的胚呈小圆锥状，称作原球茎。
4、离体无性繁殖一般可分为哪几个阶段？简述其操作的一般程序。
离体无性繁殖一般可分为5个阶段：1、植株的准备：供体植株应生长旺盛、健壮、不病虫害，并尽可能生长在干净的环境中。
2、无菌培养物的建立：获得无菌材料并诱导外植体生长和发育。
包括从供体植株上采取外植体进行消毒、接种及启动外植体生长等程序。
3、培养物的增殖：通过反复培养使第一阶段获得的数量有限的嫩枝、芽苗、胚状体或原球茎等培养物的总量增加。
4、生根培养：将增殖阶段形成的无根芽苗转移到生根培养基上诱导产生不定根，获得健壮的具有根、芽、茎的完整小植株。
5、试管苗的移栽及鉴定：移栽是将具根试管苗转移到土壤中的过程，是试管苗从离体培养逐步适应温室或田间生长环境的过程6 、离体繁殖中常见得技术问题有哪些? 如何克服或防止其发生？污染问题和褐变、玻璃化污染问题预防措施：１）通风２）去湿３）光照４）防霉5）改进外植体消毒方法或使用抗生素褐变防治措施：1）选择合适的外植体：一般来说，最好选择生长处于旺盛的外植体。
2）合适的培养条件：无机盐成分、植物生长物质水平、适宜温度和光照、及时继代培养均可以减轻材料的褐变现象。
3）使用抗氧化剂：在培养基中，使用半胱氨酸、抗坏血酸等抗氧化剂能够较为有效地避免或减轻很多外植体的褐变现象。
（4）使用吸附剂：使用聚乙烯基吡咯烷酮、0.1%-0.5％的活性炭对防止褐变也有较为明显的效果玻璃化防治措施：1）降低细胞分裂素的浓度，调节激素配合2）增加培养基中的溶质水平，以降低培养基的渗透势3）降低氨态氮，提高硝态氮的含量；4）增加容器的气体交换，降低容器内相对湿度5）降低培养温度，增加自然光照。
6）在培养基中添加间苯三酚、根皮苷或生长抑制剂等物质。
7、要提高某种植物离体快繁的效率，可以采取哪些措施？9、脱除植物病毒病有哪些方法？其原理是什么？物理方法（1）、高温处理又称热疗法原理:一些病毒对热不稳定,在高于常温的温度下(35-40 ℃)即钝化失活,繁殖力下降,失去侵染能力,而植物基本不受伤害.(2)、低温处理又称冷冻疗法原理：降低温度能使病毒活力下降。
化学处理(1).病毒抗血清预处理：用齿舌兰环斑病毒（ORV）的血清处理兰属离体分生组织，提高了再生株中无ORV的植株频率。
(2).RNA抑制剂处理：烟草愈伤组织培养基中加入2-硫脲嘧啶，可除去组织中马铃薯Y病毒（PVY）。
放线菌D和放线菌酮能抑制原生质体中病毒的复制。
（3）.三氯唑核苷：病毒唑，化学名称1,2,4-3唑-3-酰胺-1-β-D-呋喃核苷，防治动物RNA 病毒和DNA病毒病的广谱性抗病毒制剂。
生物脱毒方法（原理：培养材料中通常不含病毒，可通过植物组织培养就行脱毒）（1）、茎尖分生组织培养（2）、微体嫁接脱毒（3）、愈伤组织培养脱毒（4）、珠心胚培养脱毒（5）、花药培养脱毒第六章体细胞杂交：是指在人工控制条件下，不经过有性过程，两种体细胞原生质体相互融合产生杂种细胞，并使之分化再生,形成新物种或新品种的技术。
原生质体：植物原生质体(protoplast):指将植物细胞壁去掉后得到的裸露的球形细胞。
7、试分析影响原生质体培养的主要因素⑴供试材料的基因型和外植体⑵酶解条件：酶质量、组合、浓度、pH、光照和温度⑶渗透压稳定剂⑷质膜稳定剂⑸分离条件：离心次数、离心速度、纯化方法、分离纯化持续时间。
⑹分离用具11、PEG融合与电融合各有何特点？电融合的原理是什么？PEG法特点：融合频率高；诱发融合无特异性；毒性较低电融合特点：(1)融合率高、重复性强、对原生质体伤害小。
(2)装置精巧、方便简单、可在显微镜下观察或录像融合过程。
(3)免去PEG诱导后的洗涤过程、诱导过程可控制性强等。
电融合的原理：①交流电场使原生质体表面电荷偶极化，沿着电极排列，形成串珠。
②施加直流电场后，形成串珠的原生质体在质膜接触处发生穿孔，开始遗传物质的交流。
12、PEG融合法的技术关键是什么？电融合的关键技术是什么？13、对称融合与非对称融合的细胞杂交有何异同？18.体细胞杂交有何意义？答：（1）实现远缘杂交，形成新的物种。
（2）创造细胞质杂种。
（3）培育作物新种质和新品种。
第七章2、花药培养和花粉培养的区别是什么？花药培养指用植物组织培养技术将发育到一定阶段的花药剥离下来（切去花丝部分），接种在培养基上进行培养，最终形成完整植株的技术花粉培养：又称小孢子培养，或游离小孢子培养，指在无菌条件下，将花粉从花药中分离出来使其成为分散或游离态，发育成单倍体植株的过程。
就培养材料而言，花药培养属于器官培养，花粉培养属于细胞培养。
4、花药培养时蔗糖和激素浓度如何选择？依据是什么？10. 如何对获得的花粉植株进行倍性鉴定？染色体加倍的方法有哪些？答：倍性鉴定有直接鉴定法和间接鉴定法两大类，其中间接鉴定法分为1.植株形态观察法 2.细胞形态鉴定法 3.DNA含量测定 4.核体积测量法 5.生化与分子标记鉴定染色体加倍的方法有1.小苗处理法 2.茎尖处理法 3.培养基处理法第八章5.未授粉子房培养与授粉后子房培养有何不同?答: 传粉和受精后的子房,仍需进行表面消毒后再接种未授粉的子房可将花被表面消毒后,在无菌条件下直接剥取子房接种6.植物胚乳有哪些类型?答:①被子植物胚乳：双受精产物，属三倍体组织②裸子植物胚乳：很特殊，在受精前就形成，是配子体的一部分，由大孢子直接分裂发育而成，因而是单倍体组织10.离体授粉与离体受精有何区别?答:离体授粉是指在无菌条件下培养离体的未受精子房或胚珠和花粉，使花粉萌发产生的花粉管进入胚珠完成受精而结实的过程。
由于从花粉萌发、到精卵细胞融合形成种子，直至种子萌发产生幼苗都是在试管内完成的，所以也称其为试管受精。
离体受精是指离体及人工控制的环境下，精卵细胞融合形成合子的过程。
它包括配子的分离、雌雄配子融合和合子培养三个阶段。
第九章1、什么是植物体细胞无性系变异？引起或影响植物体细胞无性系变异的因素有哪些？植物细胞、组织、器官在无菌条件下进行离体人工培养，经过脱分化和再分化过程，重新形成愈伤组织和完整植株时所产生的变异称为植物体细胞无性系变异。