色谱柱的充填和安装
柱色谱的组装及使用步骤
柱色谱的组装及使用步骤
柱色谱是一种常用的分离与纯化技术，其组装与使用步骤如下：
组装步骤：
1. 准备柱：将柱底塞子放置在柱底上，然后把柱管放入柱底，确保柱底与柱管之间无漏气。
2. 注入填料：将柱管倾斜，从顶端注入填料，用手轻轻敲击柱管帮助填料均匀分布，直到填料填满柱管。
3. 压实填料：用柱底塞子或适当大小的塞子在填料顶部轻轻压实填料，使填料紧密结合，防止颗粒流失。
使用步骤：
1. 平衡柱：将柱管与流动相连接，调整流速，通过柱底逐渐注入流动相，直到填料被完全浸泡。
这一步称为平衡柱，旨在保证填料表面与流动相充分接触并达到稳定状态。
2. 样品加载：将待分离的混合物样品通过进样口注入柱管顶端，允许样品进入填料中。
注意，样品浓度应适中，以避免柱塞或样品堵塞柱管。
3. 洗脱操作：控制流动相的流速和组成，通过改变流动相的性质或者使用梯度洗脱方法，逐渐洗脱样品中的目标化合物，使其在填料中有选择性地分离出来。
4. 收集分离物：根据洗脱出的目标化合物的时间窗口进行分馏收集，以得到纯净的目标化合物。
5. 柱后处理：将柱管内的填料用适当的溶剂进行再洗，并对填料重复压实，以备下次使用。
需要注意的是，每次使用前都需要检查柱管是否漏气和填料是
否存在杂质，以确保柱色谱系统的正常运行。
同时，观察流出液的吸光度或检测结果，判断柱色谱的分离效果，并根据需要调整柱床、填料和流动相的选择。
色谱柱的填装------匀浆法
液相色谱柱的填装------匀浆法高压匀浆法：将填料悬浮在适宜的匀浆液中制成匀浆，在其尚未沉降之前，很快地以高压泵将其以很高的流速压进柱中，便可制备出填充均匀的柱子。
高压匀浆法的设备，如图所示。
在装柱之前，先确定所用的柱型，以确定选用多大的匀浆罐体积。
例如，常用的“标准”HPLC柱为φ4.6mm×250mm，其内腔体积约为4.2mL，约需3.5g填料。
一般情况下，为保证填充的成功，需适当过量15%-20%为宜。
如使用4g填料充填它，选择固 - 液比约为1:10，则匀浆罐体积以4mL为宜。
若罐过大，则可在匀浆罐内装入一个以惰性材料（如聚四氟乙烯或不锈钢）制的衬套将其调整至所需体积。
将选用的柱子仔细以乙醇或丙酮清洗干净，并以干净的热风吹干。
如柱管内壁污染较重，也可以用表面活性剂及去离子水依次清洗，并以长竹签或塑料棒扎上棉纱或纱布往复抽擦，以除去污垢。
但应注意不要伤及内壁表面的光洁度，尤其不能造成轴向的划痕。
将清洁的柱管的一端装配上带滤板的柱头，另一端则连接至匀浆罐上。
将涂覆或键合好的硅胶均匀分布在22mL正己烷/异丙醇(90/10，v/v)配比液中，加入约3mL液体石蜡，使其变粘稠，然后超声振荡混合液使硅胶分布均匀，之后迅速把制备的匀浆液倒在匀浆罐内，正己烷/异丙醇(90/10，v/v)为流动相，调整装柱机以400kg t/cm2公斤力，维持约20min装填色谱柱，之后缓慢减小装柱机压力，使压力自动减为零，卸下色谱柱，将柱头安装好即得到手性色谱柱。
称取所需重量的填料，将其置小烧杯中，按其重量的10 倍量（一般也可以按体积计，即10mL 的匀浆液中加入1g 重的填料）加入匀浆液。
摇动或搅拌均匀后，将其移至超声波浴中，以中强的超声波令填料粒子均匀而稳定地悬浮起来。
最后，再以强超声短时间强化一下。
超声处理的时间不宜过长，一般应不超过2-3min，过长则可能造成颗粒的破碎。
将准备好的勾浆液立即倒入匀浆罐中，装满后，将匀浆罐盖好、旋紧，再以针筒抽取一定量的匀浆液，从盖子上的连接孔中插入匀浆罐内部并加注匀浆液至从连接孔中溢出为止。
色谱柱 操作规程
色谱柱操作规程
《色谱柱操作规程》
一、使用前准备
1.1 检查色谱柱是否有损坏或污染
1.2 准备好色谱柱需要用到的溶剂和试剂
1.3 准备好色谱仪器和相关设备
二、装柱操作
2.1 检查柱子的填料是否均匀，如有不均匀情况需重新填料2.2 使用正确的柱子连接件连接色谱柱和色谱仪
2.3 用适当的方法装载样品进入色谱柱
2.4 在装载样品之前，进行柱子的平衡操作，以确保实验的准确性
三、流动相操作
3.1 准备好流动相，确保流动相的纯度和稳定性
3.2 用注射器将流动相缓慢地注入色谱柱中，直到柱子完全充满
3.3 确保流动相的压力和流速在正常范围内
四、运行及维护
4.1 启动色谱仪器，设置好运行参数
4.2 监控运行过程中的色谱柱压力和流速
4.3 如果发现异常情况，立即停止运行并检查色谱柱及相关设备
4.4 实验结束后，用适当的方法对色谱柱进行保养和清洗，以
确保下次使用时的准确性和稳定性
五、安全注意事项
5.1 操作过程中要严格遵守化学品的安全操作规程
5.2 避免色谱柱受到外部物质的污染和损坏
5.3 注意色谱柱及相关设备的维护和保养，确保使用安全和稳定性
六、记录和报告
6.1 在操作过程中要及时记录实验数据和观测结果
6.2 对实验结果进行分析和总结，撰写实验报告
6.3 如有必要，将实验结果提交并交流给相关部门或同行
以上即是《色谱柱操作规程》，希望能够对使用色谱柱的实验人员有所帮助。
色谱柱的充填和安装
将色谱柱连接于色谱仪器上 后，应先试压，试漏，而后在比 正常分析温度高50℃左右，比固 定相最高使用温度低，而且温度 恒定的情况下用载气吹洗数小时 后可承受分析，一般称此为色谱
柱子的老化过程。
B
10
1 不锈钢（SUS）填充柱的安装方法
二、岛津GC-2014填充柱 的安装方法 2 玻璃填充柱的安装方法
B
11
安装前的准备工作
1、准备工作：手套、转换头、隔垫、螺 母、玻璃衬管、柱子、扳手等工具。
2、关闭色谱电源。
B
12
1、不锈钢填充柱的安装
1、在INJ边的不锈钢柱适配器插上玻 璃衬管
B
13
2、安装INJ边的不锈钢柱 至连接口
(1) 将INJ边带有玻璃衬管的不 锈钢柱插入样品入口（从柱箱 一边）。
B
9
3、色谱柱的老化及目的
主要讲 填充柱 的老化
老化目的
是把固定相的残存溶剂， 低沸点杂质，低分子量固定液 等赶走，使记录器基线平直， 并在老化温度下使固定液在担 体表面有一个再分布过程，从 而涂得更加均匀牢固。
特别强调：装填好的色 谱柱，经过老化一段时 间后，柱效及性能均稳 定了，这样才可使用。
端。
（1）将较长的玻璃柱的末端插入安装口（样品入口）
B
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（3）用扳手固定入口 /检测器口的盖螺母。
注意：如果放置了硅O型环， 较松的固定盖螺母；如果放 置了石墨压环，拧紧一半又
1/3圈。
当使用TCD检测器时， 柱安装位置与使用其
它检测器的位置不同。
B
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柱安装位置
B25ຫໍສະໝຸດ 3、毛细管柱的安装1 岛津毛细管柱的安装
B
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色谱柱安装及进样方法
色谱柱安装及进样方法气相色谱仪中色谱柱的安装方法及进样手法，大家都知道，气相色谱仪中色谱柱的安装好坏直接影响分析的效果。
一个小小的密封垫也起到了至关重要的作用。
很多气相色谱仪生产厂家以次充好，使用价格极其便宜的密封垫。
这种密封垫不但不会起到效果。
反而在高温下参与化学分析。
严重影响了分析的效果。
在做进样时很多做色谱分析工作的新手常常会把注射器的针头和注射器杆弄弯一、气相色谱仪中色谱柱的安装。
1.安装拆卸色谱柱必须在常温下。
2.填充柱有卡套密封和垫片密封，卡套分三种，金属卡套，塑料卡套，石墨卡套，安装时不易拧的太紧。
垫片式密封每次按装色谱柱都要换新的垫片。
3.色谱柱两头是否用玻璃棉塞好。
防止玻璃棉和填料被载气吹到检测器中。
4.毛细管色谱柱安装插入的长度要根据仪器的说明书而定，不同的色谱汽化室结构不同，所以插进的长度也不同。
需要说明的如果你用毛细管色谱柱采用不分流，汽化室采用填充柱接口这时与汽化室连接毛细管柱不能探进太多，略超出卡套即可。
如何判断进样口密封垫是否该换进样时感觉特别容易，用TCD检测器不进样时记录仪上有规则小峰出现，说明密封垫漏气该更换。
更换密封垫不要拧的太紧，一般更换时都是在常温，温度升高后会更紧，密封垫拧的太紧会造成进样困难，常常会把注射器针头弄弯。
如何选择合适的密封垫密封垫分一般密封垫和耐高温密封垫，汽化室温度超过300℃时用耐高温密封垫，耐高温密封垫的一面有一层膜，使用时带膜的面朝下。
进样应注意问题手不要拿注射器的针头和有样品部位、不要有气泡(吸样时要慢、快速排出再慢吸，反复几次，10ul注射器金属针头部分体积0.6ul，有气泡也看不到，多吸1-2ul把注射器针尖朝上气泡上走到顶部再推动针杆排除气泡，(指10ul注射器，带芯子注射器平感觉)进样速度要快(但不易特快)，每次进样保持相同速度，针尖到汽化室中部开始注射样品。
二、气相色谱仪做进样分析时怎样防止进样针不弯：1.进样口拧的太紧，室温下拧的太紧当汽化室温度升高时硅胶密封垫膨胀后会更紧，这时注射器很难扎进去。
柱色谱的使用方法
柱色谱的使用方法如下：
装柱。
干装法是在柱内装入2/3溶剂，在管口上放一漏斗，打开活塞，让溶剂慢慢地滴入锥形瓶中，接着把干吸附剂经漏斗以细流状倾泻到管柱内，同时用套在玻璃棒（或铅笔等）上的橡皮塞轻轻敲击管柱，使吸附剂均匀地向下沉降到底部。
填充完毕后，用滴管吸取少量溶剂把粘附在管壁上的吸附剂颗粒冲入柱内，继续敲击管子直到柱体不再下沉为止。
湿装法与干装法类似，所不同的是，装柱前吸附剂需要预先用溶剂调成淤浆状。
加样。
将柱内液面降到与柱面相齐时，关闭柱子。
用滴管小心沿色谱柱管壁均匀地加到柱顶上。
加完后，用少量溶剂把容器和滴管冲洗净并全部加到柱内，再用溶剂把粘附在管壁上的样品溶液淋洗下去。
色谱柱的充填和安装.
手套 1
6 色谱柱切割工具
特别强调：对于不同的进 样口和不同的检测器，毛 细管柱的插入长度是不同 的，而且，要求插入的深 度要准确，因此应配备不 同类型的量具（夹具）， 以保证色谱柱插入深度准
确无误。如：S型用于 SPL进样口，F型用于 FID/FTD检测器，T型用
于TCD检测器。
注意：有尾吹气和无尾 吹气的气体管路连接方
化学键合固定相 不常用
无机吸附剂
高分子多孔小球
1、活性炭、
2、石墨化炭黑、 1、国产型号：GDX系列。 3、碳素：TDX-0X系列
2、美国：Parapak Q， 4、硅胶、
Parapak N，Parapak T； 5、氧化铝、
chromosorb等。
6、分子筛：4A、5A、13X
复习：色谱柱
填充柱：长度：2——3米，内经：2— —4mm。毛细管柱：长度：10—— 100米，内经：0.1——0.8mm，常见 的商品柱是0.18、0.25、0.32、 0.53mm，常用的是后两种。
注意3：如果TCD检测器，放置 TCD石墨压环，在检测器末端放 置套管，因为套管可以起到后部 环的作用，所以不需要配制此环。
2、在柱箱中安装玻璃柱
（2）在柱入口末端插入玻璃衬管 （较短的一端）
通过【玻璃衬管】法连接 在玻璃衬管法中，在样品入口插入玻璃衬管 （1）从柱箱边将玻璃衬管一半插入样品入 口。
将色谱柱连接于色谱仪器上 后，应先试压，试漏，而后在比 正常分析温度高50℃左右，比固 定相最高使用温度低，而且温度 恒定的情况下用载气吹洗数小时 后可承受分析，一般称此为色谱
柱子的老化过程。
1 不锈钢（SUS）填充柱的安装方法 2 玻璃填充柱的安装方法
安装前的准备工作
色谱柱的充填和安装[详尽整齐]
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优质医学
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2、在柱箱中安装玻璃柱
（2）在柱入口末端插入玻璃衬管 （较短的一端）
通过【玻璃衬管】法连接 在玻璃衬管法中，在样品入口插入玻璃衬管 （1）从柱箱边将玻璃衬管一半插入样品入 口。
优质医学
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注意：如果放置了硅橡胶O 型环，较松的固定盖螺母； 如果放置了石墨压环，拧紧
一半又1/3圈。
（4）用扳手在入口/检测器 口固定盖螺母。
老化步骤
将色谱柱连接于色谱仪器上 后，应先试压，试漏，而后在比 正常分析温度高50℃左右，比固 定相最高使用温度低，而且温度 恒定的情况下用载气吹洗数小时 后可承受分析，一般称此为色谱
柱子的老化过程。
优质医学
10
1 不锈钢（SUS）填充柱的安装方法
2 玻璃填充柱的安装方法
优质医学
11
安装前的准备工作
色谱柱的充填和安装
主讲：
优质医学
1
总目录
1 填充柱的充填方法 2 岛津GC-2014填充柱的安装方法
3 岛津GC毛细管柱的安装方法
优质医学
2
复习：色谱柱
不锈钢填充色谱柱
优质医学
玻璃填充色谱柱
3
气固色谱填充柱固定相的种类
想一想：固定相的作用 是什么？技术要求是什 么？颗粒大小有什么要
求？
1、增加与样品接触的表面积； 2、细小、均匀、多孔； 3、标准大小颗粒，60-140目。 常用的是60-80目和80-100目。
优质医学
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3、色谱柱的老化及目的
主要讲 填充柱 的老化
老化目的
是把固定相的残存溶剂，低 沸点杂质，低分子量固定液等赶 走，使记录器基线平直，并在老 化温度下使固定液在担体表面有 一个再分布过程，从而涂得更加
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（4）用扳手在入口/检测器
口固定盖螺母。
（3）、将玻璃柱两端插入安 装口（样品入口/检测器口），用 手拧紧盖螺母
（2）将玻璃柱每一端插入各自的
安装口（入口/检测器口），用手拧
紧螺母。
通过【柱方法】法连接
＊在此方法中，不插入玻璃衬管； ＊此方法中，直接将样品注射入柱会污染柱，因此， 此方法只适用于不易污染柱的气体分析；
2
填充色谱柱的主要填充方法是什么？
3
新装填的色谱柱的老化方法及老化目的？
1、色谱柱失效后的主要表现和失效原因
失效后的主要表现：色谱峰 分离 不好和组分 保留时间 显著变短。
失效的主要原因：
1、对气固色谱来说是 固定相的活性或吸附性能降低了；
2、对气液色谱来说，是使用过程中 固定液逐渐流失所致。
2、填充色谱柱的主要填充方法
柱安装位置
1
岛津毛细管柱的安装
进样口/检测器量具（压环夹具）
石墨压环
3
扳手
4
2 1
安装前准备
5
6
柱螺母
手套
色谱柱切割工具
特别强调：对于不同的进 样口和不同的检测器，毛 细管柱的插入长度是不同 的，而且，要求插入的深 度要准确，因此应配备不 同类型的量具（夹具）， 以保证色谱柱插入深度准 确无误。如：S型用于 SPL进样口，F型用于 FID/FTD检测器，T型用 于TCD检测器。
注意2：当使用铝制柱垫圈 时，放上2至3片后手动上 紧垫圈顶部的GM型螺母。
6、固定不锈钢柱
使用扳手拧紧后固定不锈钢柱和 适配器之间的连接口（共2个连 接口）
2、在柱箱中安装玻璃填充柱
1、在玻璃柱上套上盖螺母 在柱末端放上连接部件：顺序为：盖螺母、 垫圈、后部的环和硅 O型圈。放置后部环边 缘朝向硅O型圈。
切口很好！
切口不符合要求。
毛细管柱上多余石墨的处理
柱子上多余的石墨。 所用工具：镊子，操作时一定要小心！ 切勿损坏毛细管！
特别强调：必须除去残留在色谱柱上 的石墨，否则可能堵塞适配器。 取下柱子上多余 的石墨后。
注意：毛细管内 经不同，应选不 同内经的石墨环， 比如：毛细管柱 内经为0.32和 0.53选内经为 0.5mm的石墨环。 思考：检测器 是TCD时，毛 细管柱如何安 装？
后，应先试压，试漏，而后在比
正常分析温度高50℃左右，比固 定相最高使用温度低，而且温度 恒定的情况下用载气吹洗数小时 后可承受分析，一般称此为色谱 柱子的老化过程。
1
不锈钢（SUS）填充柱的安装方法
2
玻璃填充柱的安装方法
安装前的准备工作
1 、准备工作：手套、转换头、隔垫、螺 母、玻璃衬管、柱子、扳手等工具。
2、关闭色谱电源。
1、不锈钢填充柱的安装
1、在INJ边的不锈钢柱适配器插上玻 璃衬管
2、安装INJ边的不锈钢柱 至连接口
(1) 将INJ边带有玻璃衬管的不 锈钢柱插入样品入口（从柱箱 一边）。
（2）用手拧紧柱适配器螺母。
（3）转动玻璃衬管扳手，拧 紧至一半，固定螺母
3 、安装 DET 边柱适配器 至检测器。
主要讲 填充柱 的老化
特别强调：装填好的色 谱柱，经过老化一段时 间后，柱效及性能均稳 定了，这样才可使用。
老化目的
是把固定相的残存溶剂，低
老化步骤
将色谱柱连接于色谱仪器上
沸点杂质，低分子量固定液等赶
走，使记录器基线平直，并在老 化温度下使固定液在担体表面有 一个再分布过程，从而涂得更加 均匀牢固。
色谱柱的充填和安装
主讲：
1
填充柱的充填方法
总目录
3
2
岛津GC-2014填充柱的安装方法
岛津GC毛细管柱的安装方法
复习：色谱柱
不锈钢填充色谱柱
玻璃填充色谱柱
气固色谱填充柱固定相的种类
想一想：固定相的作用 是什么？技术要求是什 么？颗粒大小有什么要 求？
1、增加与样品接触的表面积； 2、细小、均匀、多孔； 3、标准大小颗粒，60-140目。 常用的是60-80目和80-100目。
注意1：如果分析小于 250℃，使用硅橡胶O型环。
在柱末端放上连接部件：顺序为：盖螺母、垫圈、 后部的环和石墨压环。放置后部环边缘朝向石墨 压环。
在柱末端放上连接部件：顺序为：盖螺母、垫圈、套管和 用于TCD的石墨压环。末端可以选择两种（硅O型环和石 墨压件）部件，根据分析温度而定。
注意2：如果分析超过 250℃，使用石墨压环。
主要填充方法：
固定相填充的好坏，将直接 影响柱效率。
1 2
泵抽填充法
操作步骤
特别强调：装柱要求 要填充得均匀，紧密， 切忌有空隙。
1、把色谱柱的一端塞上玻璃棉，接真空泵； 2、另一端接一漏斗； 3、在抽吸下加入固定相，边装边敲打色谱柱， 至固定相不再进入为止装好后，塞上玻璃棉。
3、色谱柱的老化及目的
注意1：有两种可以安 装在检测器上的不锈钢 柱适配器，用于TCD和 其它检测器。
4、固定检测器边的适配器
用手拧紧柱适配器螺母，用扳 手拧紧一半。
小心：检查螺母类型！如果适 配器用仅用于玻璃柱的螺母固 定时螺母会失灵。
5、安装不锈钢柱至适配 器
在不锈钢柱和适配器间加上垫圈 （共2个接口）。
注意1：当使用橡皮垫圈时， 放上一片后手动上紧垫圈顶 部的GM型螺母。
注意：有尾吹气和无尾 吹气的气体管路连接方 法各有不同。
• 无尾吹气管路的连接方法
• 有尾吹管气路的连接的连接方法
1、抽出石墨压环的换芯，将 色谱柱穿过压环
注意：用手拧紧 后，再用扳手拧 3/4圈
2、将色谱柱穿过压环安装量具（夹具），并在关口伸出约10mm的长度，将螺母拧紧，使石墨 环紧紧的卡在色谱柱上。
问题：为什么要将 夹具中伸出部分截 掉？
答案：在色谱柱穿过 石墨压环孔心时，柱 口可能进入一些石墨 粉！
3、用毛细管柱切割刀将压环安装夹具中伸出部分毛细管切除。
错！毛细管 柱的切口是 有要求的！
毛细管切口合格的标准
只要把伸出部 分毛细管切掉 就行了，这样 的说法对吗？
切口要求：毛细管柱 的切口应平滑，不能 粗糙。
无机吸附剂 高分子多孔小球 化学键合固定相 不常用
1、国产型号：GDX系列。
1、活性炭、 2、石墨化炭黑、 3、碳素：TDX-0X系列 4、硅胶、
2、美国：Parapak Q，
Parapak N，Parapak T； 5、氧化铝、 chromosorb等。 6、分子筛：4A、5A、13X
复习：色谱柱
注意3：如果TCD检测器，放置 TCD石墨压环，在检测器末端放 置套管，因为套管可以起到后部 环的作用，所以不需要配制此环。
2、在柱箱中安装玻璃柱
（2）在柱入口末端插入玻璃衬管 （较短的一端）
通过【玻璃衬管】法连接
在玻璃衬管法中，在样品入口插入玻璃衬管
（1）从柱箱边将玻璃衬管一半插入样品入 口。
注意：如果放置了硅橡胶O 型环，较松的固定盖螺母； 如果放置了石墨压环，拧紧 一半又1/3圈。
FID-201Βιβλιοθήκη 型：检测器侧柱插入长度99mm。 进样口侧螺母 FPD-2014型：检测器侧柱插入长度120mm。
特别提示：色谱柱必须置于柱架上，毛细住的任何部分不能接触柱箱壁！
提示：色谱柱安装好后，别忘了通过工作站或者仪器键盘设置色谱柱的规格。
THANK YOU
填充柱：长度：2——3米，内经：2— —4mm。毛细管柱：长度：10—— 100米，内经：0.1——0.8mm，常见 的商品柱是0.18、0.25、0.32、 0.53mm，常用的是后两种。
复习：色谱柱
想一想：填充柱和 毛细管柱的内经和 长度一般是多少？
Why？
1 问题
色谱柱失效后的主要表现及失效原因？
＊当使用TCD时将TCD柱连接部件放在较短的柱末
端。 （1）将较长的玻璃柱的末端插入安装口（样品入口）
（3）用扳手固定入口 /检测器口的盖螺母。
注意：如果放置了硅O型环， 较松的固定盖螺母；如果放 置了石墨压环，拧紧一半又 1/3圈。
当使用TCD检测器时， 柱安装位置与使用其 它检测器的位置不同。