探讨荧光定量PCR在结核菌检测中的应用
荧光定量PCR检测技术在结核诊断中的应用探讨
临床医药文献杂志Journal of Clinical Medical2019 年 第 6 卷第 8 期2019 Vol.6 No.8155荧光定量PCR 检测技术在结核诊断中的应用探讨吴 利1，葛章文2，廖 萍1（1.遵义市播州区人民医院，贵州 遵义 563100；2.贵州省人民医院，贵州 贵阳 550000）【摘要】目的 分析荧光定量PCR 检测技术应用于结核诊断中的价值。
方法 将本院作为研究区域，在本院中选择120例结核患者作为研究对象，并将其选择范围定为2015年12月～2017年9月期间在本院接受治疗的患者。
并要求这120例结核患者拥有完整的临床治疗资料，且他们需要全部接受过结核分枝杆菌DNA 进行检测，而且这120例结核患者也接受过结核菌培养以及涂片查找抗酸杆菌进行检查。
之后根据涂片查找抗酸杆菌的结果对这120例研究对象进行分组，可以将其分为涂阳组与涂阴组，涂阳组中包括30例患者，而涂阴组中包括90例患者。
之后再次检验耐药基因，针对结核杆菌DNA 阳性患者进行检验。
实施非结核分枝杆菌菌种的鉴定，针对涂阳组中的结核分枝杆菌DNA 阴性患者，最后将所得结果进行比较。
结果 就结核杆菌DNA 阳性率以及结核杆菌培养阳性率等方面来看，涂阳组要高于涂阴组。
在结核分枝杆菌DNA 阳性中，检测出耐药株。
结论 将荧光定量PCR 检测技术应用于结核诊断之中，拥有较多优点，应用荧光定量PCR 检测技术能够及时的发现耐药情况，进而能够为临床治疗用药提供相关依据。
所以荧光定量PCR 检测技术值得 推广。
【关键词】荧光定量PCR 检测技术；结核诊断；耐药【中图分类号】R378.91 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-8242.2019.08.155.021 资料与方法1.1 一般资料将本次研究区域定为本院，研究对象为2015年12月～2017年9月期间在本院接受治疗的120例结核患者。
在这120例结核患者之中，包括47例女性患者以及73例男性患者，其年龄在20～83岁之间。
荧光定量PCR法用于诊断肺结核患者痰液中结核分枝杆菌DNA的临床价值
荧光定量PCR法用于诊断肺结核患者痰液中结核分枝杆菌DNA的临床价值1. 引言1.1 背景肺结核是由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，全球范围内仍然是公共卫生问题。
传统的肺结核诊断方法包括痰涂片检测和培养，但这些方法存在着一定的局限性，比如对于低菌载量的患者可能无法及时诊断。
需要发展一种更加灵敏、特异且快速的诊断方法来提高肺结核患者的早期诊断率和治疗效果。
本研究旨在探讨荧光定量PCR法在肺结核患者痰液中结核分枝杆菌DNA诊断中的临床应用及其优势与局限性，为肺结核的早期诊断和治疗提供更为可靠的辅助手段。
1.2 研究目的本研究旨在探讨荧光定量PCR法在肺结核患者痰液中检测结核分枝杆菌DNA的临床价值。
具体目的包括：1. 评估荧光定量PCR法在肺结核病原体检测中的敏感性和特异性，以及其与传统的细菌培养方法的比较。
通过比较两种方法的结果，评估PCR法的准确性和可靠性。
2. 探究荧光定量PCR法在痰液样本中检测结核分枝杆菌DNA的效率，分析其在早期诊断和治疗监测中的应用前景。
3. 检验荧光定量PCR法在肺结核患者中具有的快速、灵敏度高、操作简便等优势，以及其在临床实际操作中可能遇到的局限性。
通过对研究目的的实际操作和数据分析，本研究旨在为开展更有效的肺结核患者诊断和治疗提供科学依据和临床指导。
2. 正文2.1 荧光定量PCR法在结核病诊断中的应用qPCR可快速检测结核分枝杆菌DNA的存在并定量其数量，对结核病早期诊断具有重要意义。
传统的痰涂片检测方法需要耗时较长且存在一定的假阴性率，而qPCR技术能够在数小时内从样本中提取出结核分枝杆菌的DNA并定量检测，大大缩短了诊断时间，提高了诊断准确性。
qPCR还可以实现对结核菌株的分型和耐药基因的检测，为制定个体化的治疗方案提供重要依据。
通过qPCR技术可以快速判断结核病患者感染的结核菌株类型，以及是否存在耐药基因，进而为合理选择抗结核药物提供指导。
qPCR技术还可以在结核病治疗过程中监测患者的治疗效果，及时调整治疗方案，防止病原体耐药或复发。
结核PCR定量测定在结核病诊断中的应用
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北方药学 ２ ０ １ ３年第 １ ０卷第 １ ０崩
结核 Ｐ ＣＲ定 量 测定 在 结核 病 诊 断 中的应 用
张 建 武 魏 存 乐 吉焕 英 邢 福 泰 王志 刚 李玉 树 （ ｍ ｌ 省大同市 第四 人民 医院 大 ０ ３ ７ ０ ０ ０ ）
摘要 ： 目的 ： 评 价 荧 光定 量 Ｐ Ｃ Ｒ技 术 在 结 核 病诊 断 中 的应 用价 值 。 方 法 ： 采 用 荧 光定 量 Ｐ Ｃ Ｒ （ Ｆ Ｑ — Ｐ Ｃ Ｒ） 、 涂 片 法 和 培 养 法 同 时检 测５ ８ ０ 例 结核 患者 、 疑似 结核 患者的痰、 胸腹水、 脑脊液标本 ， 对检 测结果进行 比较。结果 ： 荧光定量 Ｐ Ｃ Ｒ检 测阳性 率要 高于涂
片法和培养法的阳性率 ， 统计分析有显著性 （ 尸 ＜ ０ ． ０ １ ） 。结论 ： 应用 荧光定量 Ｐ Ｃ Ｒ方法检 测结核杆菌 ， 具有特异、 灵敏、 简便 、 快速
的特点 ， 可 作 为 结 核病 诊 断 的常 规 方 法 。 关键词 ： 荧光定量 Ｐ Ｃ Ｒ 结核分枝杆 菌 涂片法和培养法
中图 分 类 号 ： Ｒ ５ ２ １ 文 献标 识 码 ： Ｂ 文章编号 ： １ ６ ７ ２ — ８ ３ ５ １ （ ２ ０ １ ３ ） １ ０ — ０ ０ ５ ８ — ０ ３
荧光定量PCR技术检测结核杆菌临床应用
荧光定量PCR技术检测结核杆菌临床应用摘要：目的：探讨荧光定量PCR技术检测结核杆菌的方法及应用。
方法：建立检测结核杆菌的荧光定量PCR技术，并与培养法、涂片镜检法进行效果对比。
结果：本方法检测结核杆菌具有较高的特异性、敏感性和重复性。
对120例结核标本进行检查，荧光定量PCR法阳性率高达52.50%，培养法涂阳性率达24.17%，片镜检法阳性率达15.00%。
结论：相对于传统的结核杆菌检查方法，荧光定量PCR技术具有高特异性，高敏感性等优势，对于结核病的诊断具有重要意义，值得临床推广应用。
关键词：荧光定量PCR；结核杆菌；检测结核杆菌也叫做结核分枝杆菌，是结核病的致病菌。
相关研究表明[1]，结核病以肺结核较常见，是一种严重的传染性疾病，根据世界卫生组织的报道，全球每年仍有近700万的新发病例，死亡200万人左右，我国目前大约有500万结核病患者，每年因结核病死亡大约20万人[2]，且发病率呈现出逐年上升的趋势。
由于结核病危害大，及早的诊治就显得尤为重要，目前临床主要依据患者的病史，痰液、涂片抗酸染色等方法来进行诊断，但是误诊、漏诊的情况仍时有发生[3]。
因此，寻找特异性高、敏感性高、简单实用的结核杆菌检测方法成为了研究热点。
本文应用荧光定量PCR技术检测结核杆菌，进行了特异性、敏感性、重复性实验，并和传统的检测方法进行了比较，取得了较好的效果，现报道如下。
1.资料与方法1.1研究对象随机选取2016年2月至2018年2月在我院住院治疗的结核患者120例，其中，男性64人，女性56人，年龄28～78岁，平均（53±25）岁。
所有入选患者均确诊为结核病，且自愿参加本次研究，签署有知情同意书。
1.2 主要试剂仪器质粒纯化试剂盒（L00420-50，金斯瑞生物科技），Taq DNA聚合酶（BG10101S，北京全式金生物），ExTaq DNA聚合酶，dNTPs（DBI-2055，北京鑫磊众森生物科技有限公司），Mx3000P实时荧光定量PCR仪（美国安捷伦）。
荧光定量PCR检测结核杆菌临床应用价值探究
荧光定量PCR检测结核杆菌临床应用价值探究倪德胜【摘要】目的探讨荧光定量PCR法检测结核杆菌在临床标本中的使用价值,提高临床检测诊断阳性率。
方法对128例疑似结核病患者晨痰进行荧光定量PCR法检测,所有患者均做痰涂片抗酸染色检测并进行对比分析。
结果PCR荧光法检测阳性率(22.66%)明显高于痰直接涂片法(7.8%),P<0.05。
结论荧光定量PCR在结核检测阳性率明显高于传统染色法,PCR在临床检测中值得推广应用。
【期刊名称】《临床检验杂志(电子版)》【年(卷),期】2019(008)003【总页数】2页(P71-72)【关键词】荧光定量PCR;结核杆菌;检测【作者】倪德胜【作者单位】[1]湖南省永州市双牌县人民医院检验科,湖南永州425200;【正文语种】中文【中图分类】R446.5结核分枝杆菌，俗称结核杆菌，是引起结核病的病原菌，可侵犯全身各器官，以肺部受累形成结核最为常见。
当前社会环境中，结核病已经成为感染人数仅次于乙型肝炎的第二大传染性疾病，具有传染性强，空气传播等特点。
传统方法学中，多以直接涂片抗酸染色为常规方法。
虽快速简便，但阳性率低，假阴性高，只适合大规模普查。
而金标准罗氏培养法，却又存在5%-10%的污染率，且培养时间长。
目前，结核病的实验室诊断方法不外乎结核分枝杆菌痰涂片法和改良罗氏培养法。
然而，涂阳率低，培养费时已成人们的共识。
本院去年引进的夹层杯法检测抗酸杆菌，虽具有安全简便的特点，但易受人工误差影响，操作人员熟练程度与染色阅片经验直接影响阳性结果的判定。
近年来，随着分子生物学的发展，基于结核分歧杆菌核酸的荧光定量PCR方法越来越受到重视，以其快速，简便的优点在结核病早期诊断中发挥着越来越重要的作用。
本次研究针对我院疑似结核病患者标本检测分析如下。
1 资料与方法1.1 标本与仪器主要选取本院2017年1月-2018年4月疑似结核病患者晨痰于无菌样本盒密封保存送检，年龄15岁-85岁，男88例，女40例。
荧光定量PCR法用于诊断肺结核患者痰液中结核分枝杆菌DNA的临床价值
荧光定量PCR法用于诊断肺结核患者痰液中结核分枝杆菌DNA的临床价值荧光定量PCR（qPCR）法是一种高灵敏度和高特异性的分子生物学技朵，被广泛应用于医学诊断和疾病监测领域。
肺结核是一种由结核分枝杆菌引起的传染病，对于肺结核患者，及时准确地诊断和监测病情是非常重要的。
近年来，荧光定量PCR法在肺结核患者痰液中结核分枝杆菌DNA的检测中得到了广泛应用，具有其独特的临床价值。
本文将从qPCR法的原理、应用和临床应用价值等方面探讨其在肺结核患者痰液中结核分枝杆菌DNA检测中的意义。
一、qPCR原理qPCR法是在传统PCR技术的基础上发展而来的一种新型技术，它结合了PCR扩增技术和荧光探针技术，可以实现对特定DNA片段定量检测。
其原理主要包括DNA扩增、荧光探针结合和荧光检测三个步骤。
通过PCR扩增技术对目标DNA片段进行复制，然后在扩增过程中引入荧光探针，当靶标DNA扩增时，荧光探针与其结合，释放荧光信号。
通过荧光检测系统对荧光信号进行定量分析，从而得到目标DNA的相对数量。
相比传统PCR技术，qPCR法具有更高的灵敏度、更广的动态范围和更低的污染风险，是一种非常理想的DNA定量检测方法。
二、qPCR在肺结核患者痰液中结核分枝杆菌DNA检测中的应用在qPCR法的应用中，首先需要从痰液中提取结核分枝杆菌DNA，然后进行PCR扩增和荧光检测，最后根据荧光信号的强度进行结核分枝杆菌DNA的定量分析。
由于qPCR法具有高灵敏度和高特异性，可以检测到非常低浓度的结核分枝杆菌DNA，并且可以排除其他可能存在的污染物，因此能够有效地避免假阳性和假阴性结果的产生。
qPCR法还可以进行高通量检测，大大提高了检测效率，使得其在临床应用中更加方便快捷。
1. 提高诊断准确性qPCR法可以对痰液中结核分枝杆菌DNA进行准确的定量检测，能够在短时间内得到结果，并且具有高度的特异性和灵敏度。
可以提高肺结核的早期诊断率，对于那些病情较轻或初期感染的患者，尤其是对于难以培养出结核分枝杆菌的患者，qPCR法具有更高的诊断准确性。
荧光定量PCR法用于诊断肺结核患者痰液中结核分枝杆菌DNA的临床价值
荧光定量PCR法用于诊断肺结核患者痰液中结核分枝杆菌DNA的临床价值1. 引言1.1 研究背景肺结核是一种由结核分枝杆菌引起的传染病，在全球范围内具有较高的发病率和死亡率。
目前，肺结核的诊断主要依靠痰液培养和酸杆菌染色等传统方法，但这些方法存在着一定的局限性，例如需要较长的检测时间、易受外界因素干扰等。
寻求一种更加准确、灵敏和快速的诊断方法对于减少肺结核的传播和提高患者的治疗效果至关重要。
本研究旨在通过荧光定量PCR法对肺结核患者的痰液样本进行分析，探讨该技术在肺结核诊断中的应用及其临床意义，并为未来临床应用提供重要的借鉴。
1.2 研究目的研究目的旨在探究荧光定量PCR法在诊断肺结核患者痰液中结核分枝杆菌DNA方面的临床应用价值。
具体地，通过比较荧光定量PCR 法与传统方法在检测肺结核患者痰液中结核分枝杆菌DNA的效果，分析荧光定量PCR法的优势和不足之处。
考察痰液中结核分枝杆菌DNA 的检测结果对肺结核患者疾病状况的影响，以及对肺结核的早期诊断和治疗的指导作用。
通过研究，旨在为临床医生提供更准确、快速、可靠的诊断手段，提高肺结核患者的治疗效果和预后，为肺结核的防控工作提供科学依据，促进公共卫生健康事业的发展。
1.3 研究意义肺结核是一种严重的传染病，严重威胁着全球人类的健康。
目前，肺结核的诊断主要基于临床症状、痰液检测和影像学检查，然而这些方法存在着一定的局限性，包括诊断灵敏度不高、操作复杂、耗时长等问题。
需要开发新的快速准确的诊断方法来提高肺结核的诊断率，降低传染性病例的传播风险。
荧光定量PCR法在诊断肺结核患者痰液中结核分枝杆菌DNA方面具有重要的临床应用价值。
通过本研究的深入探讨，我们可以更好地认识其在肺结核诊断中的作用，为临床提供更准确、更快速的诊断方法，促进肺结核的早期发现和及时治疗。
2. 正文2.1 荧光定量PCR法的原理荧光定量PCR法的原理是基于聚合酶链式反应（PCR）技术的基础上，通过引入荧光探针来实现DNA的定量检测。
荧光定量PCR技术在结核杆菌检测中的应用
（ ７ ／ ３ ） ３ ．％（ ４ ２ ５ 、 ６９ ６ ／ ８ ） 经统 计 学 比 较 分析 ， １６ ３２ 、 ４４ ７ ／ １ ） ３ ．％（ ９ １７ ， ３种 方 法检 测 率 差异 有 统 计 学 意 义 （ Ｐ＜ ００ ） 结论 ： ．１ 荧光 定量 Ｐ Ｒ技 术 具有 简便 、 Ｃ 快速 、 污染 、 感性 与特 异性 高等 优点 ， 防 敏 是结 核病诊 断的有 效方 法
配。
１１ 菌 株 标 准 株 Ｈ３ Ｒ 、 准 株 Ｈ３Ｒ 、 分 枝 ． ７ｖ标 ７ａ牛 杆菌 、 卡介 苗共 ４ 。非结核分枝 杆菌 ： 株 戈登分枝杆 菌 、 内分 枝 杆 菌 、 分 枝 杆 菌 、 分 枝 杆 菌 、 垢 核 胞 草 鸟 耻 分 枝杆 菌 共 ５株 。 １２ 标 本 收 集 ２ ０ ． ０ ６年 ４月 至 ２０ ０ ８年 ２月 我 院 住 院 的 ３２例 活 动 性 肺 结 核 患 者 晨 痰 ３～ ５ｍＬ， ３ ２５例 活 动 性 肺 结 核 患 者 外 周 血 （ Ｄ Ａ一 钠 抗 １ Ｅ Ｔ 二 凝 ） １７例 结 核 性 胸 膜 炎 患 者 胸 水 ； 吸 科 、 瘤 ，８ 呼 肿 科 住 院 的 １０例 非 结 核 性 呼 吸 系 统 疾 病 患 者 （ ０ 其 中肺癌 ４ ０例 、 他 呼 吸 系 疾 病 ６ 其 Ｏ例 ） 痰 。 全 部 晨 病 例根 据 ｘ线 、 细菌 学 、 疫学 、 免 病理 学 等 检 查进
１ 标 本 处 理 痰 液 中加 入 ２～４倍 体 积 的 ４ ． ５ ％ Ｎ Ｏ 摇 匀 ， 温 液 化 ２ ｎ 取 １～１ Ｌ， ５０ ０ ａ Ｈ， 室 ０ｍｉ ， ． ｍ １ ０ ５ ｒｍ ｎ 心 １ ｉ， 上 清液 ， Ｔ ／ ｉ离 ０ｍｎ 弃 用 Ｅ缓 冲液 洗 涤沉 淀 ２ 。抗凝 血标本直接用淋 巴细胞分 离液分离沉 次 淀 白细胞 ， 含少量红细胞 ， 若 用双蒸馏水 洗涤沉 淀 ２ 次 。胸水 直接离 心沉 淀 ， 若含 少量 红细胞 ， 用双蒸馏 水 洗 涤 沉 淀 ２次 。 １ 靶 Ｄ Ａ的提取 参见文献 『 — ］ ． ６ Ｎ ３４。 １ 荧 光定量 Ｐ Ｒ的扩 增体 系及 扩增 条件 扩增 ． ７ Ｃ 体 系 ： 用 的是 ５ Ｌ的反应 体 系 ， 中主要 的几 采 Ｏ 其 种 反 应 物 Ｍｇ １，Ｎ Ｐ ，引 物 和 探 针 的终 浓 度 分 别 Ｃ ｄ Ｔ ｓ 为 ： ．５ ｍｍｏ／ ２ ０ ｔ ｏ／ ０４ ｐ ｌＬ 和 ０２ １２ ｌ Ｌ，０ ｘ ｌＬ． ． ， ／ ｍ ｍｏ ． Ｉ Ｔ ｑＤ Ａ聚合 酶为 １ Ｄ Ａ模板 ： ｘ Ｍ；ａ Ｎ ＯＵ； Ｎ 菌株 Ｄ Ａ Ｎ １０ Ｌ，标 本 Ｄ Ａ ４０ Ｌ ． Ｎ ． 。扩 增 条 件 ：４Ｉ ｎ； ９ ｃ ｍｉ ＝２ ９ ℃ ３ ， ８ ３ ， ０ Ｃ ４ ， ０个 循 环 ；０ Ｃ， ４ ０ Ｓ ５ ℃ ０ Ｓ ７ ｏ ５ Ｓ ４ ７ｏ
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定 ３０ ５ 株临床分离株 ， 进行结核分枝杆菌的菌种鉴定和定量 分析 ， 同时进行抗酸染色和培养法 。结果 鉴定 特异性 实验符合率 为 １ ％ 。结论 ０ ０
养法阳性检出率分别 为 ３．％ （２／３ ）２． ％（２３０ ， ．％ （８３０ ， ８８ １８３０ ，１８ ７／３ ）２ ７ ９／３ ） 提高 阳性检 出率 （ ９ 涂阴 ）６９ ％（６３０ ， 种 １．７ ５／３ ）菌
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一
二 、 法 方
严格 按照 中山大 学达 安基 因诊 断 中心提 供 的 Ｔ Ｂ定量 Ｐ Ｒ诊断试剂说 明书操作 ， Ｃ 同时与博 日对照 试剂和 临床痰涂
１３ ４６
临床肺科杂志 ２０ 年 Ｉ 月 第 ｌ 卷第 １ 期 ０８ １ ３ １
探 讨 荧光 定 量 Ｐ Ｒ在 结核 菌 检 测 中的应 用 Ｃ
李洪敏 王治伟 张霞 苗青 刘银 萍
通过荧光定 量 Ｐ Ｒ技术 鉴 Ｃ
荧光定量 Ｐ Ｒ 染色和培 Ｃ、
【 摘要】 目的 探讨荧光定量 Ｐ Ｒ技术在检测临床标本 中结核分枝杆菌的应用价值 。方法 Ｃ
ｂｅ ｃｅｓｄ１． ７ ５／ ３ ）ｈｇ ａ ｔ ｎｎ ， ｅｃｉｃｄｎｅｒｔ ｏ ｅｓｅｉｃｙｏ ｅ ｔｉａｏ ｔ ｉ ｂ ｅｌｔ —Ｑ Ｐ Ｒ ｅｎｉ ｒａｅ ６ ９ ％（ ６３ ０ ｉ ｔｎ ｓ ｉｇｔ ｏ ｉｅｃ ｅ ｆｔ ｐ ｃｉｉ ｆ ｄｎｉｃｔ ｎｓａｎ ｙｒａ ｉ Ｆ —Ｃ ｎ 【 ｈ ｈ ｉ ａ ｈ ｎ ａ ｈ ｆｔ ｉ ｆ ｉ ｒ ｍｅ
荧光定量 Ｐ Ｒ技术是一种快速、 ｅ 敏感、 特异性强的结 核分枝杆菌辅 助诊断方法 。 【 关键 词】 结核分枝杆菌 ； 荧光定量 Ｐ Ｒ 定量分析 ； ｅ ； 菌种鉴定
Ｒ ａ ｍｅＦ Ｐ Ｒ Ａｐ ｌ ａｉｎ ｉ ｈ ｅｅｔ ｎ ａ ｄ Ｓｕ ｙ ｏ ｔｂ ｒｕｏｉ ｅｌ ｉ －Ｑ－ Ｃ ｐｉ ｔ ｎ ｔｅ Ｄ ｔｃｉ ｎ ｔｄ ｆＭ． ｕ ｅｃｌｓ ｔ ｃ ｏ ｏ ｓ
【 ｅ ｏｄ 】 Ｍ ｔ ｅ ｕ ｓ ； ｅｌｉ ｅ ＱＰ Ｒ ｑ ａｔ ｔｅａａ ｓ ； ｒ ｎｉ ｎ ｆ ａｏ ． Ｋ ｙｗ ｒ ｓ ｂ ｍ ｌ ｉ Ｒ ａ ｔ — —Ｃ ；ｕｎ ｔ ｉ ｎ ｙｉ ｓａ ｅｔ ｃｔ ｎ ａ ｏｓ ｍ Ｆ ｉ ｖ ｌ ｓ ｔｉ ｄ ｉ ｉ ａ ｉ
结核病是严重危及全球 的公共卫生 问题 之一 ， １８ 自 ９５年
３ 标本来源 ： 本院住院患者 ３０例临床痰液、 ３ 脑脊 液 、 胸 水及尿液标本． ２ 另 ０例 为 已确诊 为 分枝 杆菌感 染 的 临床标
本。
以来结核病疫情在全球 范 围内急剧上 升 ， 世界 卫生组织 估 据 计， 目前全世 界约有 ２ ０亿人受结 核分枝 杆菌感 染 ，０ ０万 人 ５０ 感染耐药结核杆菌 ， 每年有 ８０万人新感 染结 核杆菌 ，０ ０ ３０万 人死于结核病 。结核病 的细菌学检测是发现传染 源的主要 途 径和手段 ， 是确定结核病诊 断的治疗 依据 ， 在结核病 防治工 作 中起着不可缺少 的重要 作用 。检 出痰 液 中结 核分 枝杆 菌