微小RNA-451在胃癌组织中的表达及其意义(新)
lncRNA与miRNA相互调控作用机制及其在胃癌中的影响
·特别关注·
ｌｎｃＲＮＡ与 ｍｉＲＮＡ相互调控作用机制 及其在胃癌中的影响
陈为凯 张亚男 于建平 汪文杰 余稳稳 徐子鹏 韩博强 刘宏斌
摘 要 微小 ＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）是 一 类 通 过 与 ｍＲＮＡ结 合 从 而 调 控 众 多 编 码 基 因 的 非 编 码 小 ＲＮＡ。 长 链 非 编 码 ＲＮＡ（ｌｎ ｃＲＮＡ）在不同程度上调控基因的表达，包括染色质修 饰、转 录 和 转 录 后 处 理 等，其 转 录 本 长 度 大 于 ２００ｂｐ。 ｍｉＲＮＡ和 ｌｎｃＲＮＡ的 相互调控在肿瘤的发生、发展中也发挥重要作用。本文在介绍 ｌｎｃＲＮＡ与 ｍｉＲＮＡ相 互 调 控 及 机 制 的 基 础 上，总 结 其 对 胃 癌 （ｇａｓ ｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ，ＧＣ）发 生 、发 展 的 影 响 。
通讯作者：刘宏斌，教 授，博 士 生 导 师，电 子 信 箱：ｌｉｕｈｏｎｇｂｉｎ９９９＠ １６３．ｃｏｍ
（ｅｓｏｐｈａｇｅａｌｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＥＳＣＣ）中 ，ｌｎ ｃＲＮＡ－ｌｅｔ与 ｍｉＲ －５４８ｋ的 表 达 呈 负 相 关，ｍｉＲ － ５４８ｋ可直接靶向抑制 ｌｎｃＲＮＡ－ｌｅｔ的 表达，进一 步 下 调 ｐ５３和上调 ＮＦ９０的表达。ｍｉＲ－５４８ｋ的高表达与 肿瘤的浸润深度、淋巴结 转 移、ＴＮＭ 分 期 及 患 者 生 存 率显 著 相 关。 ｍｉＲ－５４８ｋ能 促 进 体 外 培 养 的 ＥＳＣＣ 细胞增 殖 和 迁 移，促 进 肿 瘤 的 体 内 生 长，而 ｍｉＲ － ５４８ｋ对 ＥＳＣＣ的 影 响 则 依 赖 于 其 对 ｌｎｃＲＮＡ－ｌｅｔ的 直接结合并抑制 ｌｎｃＲＮＡ－ｌｅｔ的 表 达。 同 样 在 ＥＳＣＣ 中，Ｗａｎｇ等 ［５］利 用 ＲＮＡ 纯 化 －ｑＰＣＲ 法 分 离 染 色 质，发现 ｍｉＲ－１９６Ａ能 与 ｌｎｃＲＮＡ Ｇａｓ５结 合。 同 时 荧 光 素 酶 报 告 分 析 表 明 ｍｉＲ －１９６Ａ 可 与 ｌｎｃＲＮＡ Ｇａｓ５的第 ７外显子结合，且 Ｇａｓ５和 ｍｉＲ－１９６Ａ都能 与 ＲＮＡ诱 导 的 沉 默 复 合 物 （ＲＮＡ－ｉｎｄｕｃｅｄｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ｃｏｍｐｌｅｘ，ＲＩＳＣ）的 关 键 成 分 Ａｇｏ２结 合。 提 示 Ｇａｓ５ 在 ＥＳＣＣ中起抑癌基因的作用，并受 ｍｉＲ－１９６Ａ参与 ＲＩＳＣ的调控。在 此 之 前，多 项 研 究 证 明 在 各 种 病 理 生理过程中均存在 ｍｉＲＮＡ诱导的 ｌｎｃＲＮＡ表达抑制， 包 括 ｌｎｃＲＮＡ ｐ２１、ｌｎｃＲＮＡ ＨＯＴＡＩＲ、ｌｎｃＲＮＡ ＭＡＬ ＡＴ１、ｌｎｃＲＮＡ ＬＯＣ８５１９４、ｌｎｃＲＮＡ ＰＴＴＣＣ３及 ｌｎｃＲＮＡ Ｈ１９等，提示 ｍｉＲＮＡ对 ｌｎｃＲＮＡ的抑制机制可能是广 泛 存 在 的 。 ［６～８］
MicroRNA 在胃癌中的作用及研究进展
MicroRNA 在胃癌中的作用及研究进展09临八王亚文200900232137 摘要：MicroRNA（miRNA）是一类含有18-25 个核苷酸的小分子非编码RNA，通过与与其靶基因mRNA 3'-非编码区的碱基互补配对，降解靶基因mRNA导致转录后沉默或者抑制靶基因mRNA的翻译过程，影响细胞的增殖、分化、衰老和凋亡。
研究显示部分microRNA 在胃癌组织中确实存在表达异常，且异常表达的microRNA通过对其靶基因表达的调控影响胃癌的发生、发展及转移等过程。
外周血中microRNA检测技术的发展使得microRNA应用于胃癌的临床诊疗具有了一定的可行性。
众多研究提示microRNA在胃癌的演进中的作用可能作为胃癌早期诊断和疗效预测的生物标记物，本文就microRNA在胃癌中的作用及研究进展作一综述。
关键词：胃癌；microRNA；机制；早期诊断；预后预测前言：MicroRNA（miRNA，miR）是最初于1993 年由LEE 等在秀丽线虫中发现的一类含有18-25 个核苷酸的非编码小分子单链RNA，随后研究发现其广泛存在于真核细胞生物中[1]。
miR-NA 虽然不能编码蛋白，但是能够通过与其靶基因mRNA 3’-非编码区（3'-untranslationalregion, 3'-UTR）的碱基互补配对，降解靶基因mRNA 导致转录后沉默或者抑制靶基因mRNA 的翻译过程，影响细胞的增殖、分化、衰老和凋亡等过程。
miRNA 在肿瘤中异常表达及其功能的研究是近年来的热点。
越来越多的证据显示miRNA 在胃癌的发生、发展中发挥重要作用[2-4]。
胃癌是消化道中最常见的恶性肿瘤，深入地探讨其发病机制对于其预防、治疗及提高生存率有着非常重要的意义。
本文就miRNA 在胃癌中的作用及研究进展作一综述。
1. miRNA的生物合成机制与作用机制miRNA 根据编码基因蛋白的基因区域进行转录，合成原始转录本(pri-miRNA)；RNA polymerase II 和RNA polymeraseIII 催化转录pri-miRNA；pri-miRNA 在细胞核中Drosha 的作用下，产生大约70nt 大小的发夹状pre-miRNA；生成的pre-miRNA 在核转运受体Exportin-5 的作用下，通过Ran-GTP依赖方式转运到细胞浆中；在Dicer 的作用下, 胞浆中的pre-miRNA 被剪切成不完整的双链RNA (dsRNA)；dsRNA 中的一条链选择性的转运到miRNA 核蛋白复合体上，并与mRNA 3'-UTR 结合，另一条链发生降解。
及癌旁正常组织中微小RNA表达谱的检测
在收集、保存、提取、芯片杂交等诸多过程中，易受外界因素影响，出现ＲＮＡ降解或污染，影响实验真实性。
为此，我们在实验整个过程都注意避免以上不利因素的影响，并对每例患者样本都单独进行了质量检测，将满足实验要求的样品分别进行芯片实验，最后对数据进行聚类分析，减小了误差，同时能反映出个体情况，丰富了胃癌的ｍｉＲＮＡ差异表达谱。
本研究结果表明，通过对胃癌ｍｉＲＮＡ表达谱检测后，胃癌相对于癌旁正常组织中存在差异表达的ｍｉＲＮＡｓ，这些可能与胃癌的发生、发展有关。
参考文献・１３４１・［１］ＫａｍａｎｇａｒＦ，ＤｏｔｅｓＧＭ，ＡｎｄｅｒｓｏｎＷＦ．Ｐａｔｔｅｒｎｓｏｆｃ柚ｃｅｒｉｎｃｉｄｅｎｃｅ，ｍｏｒｔａｌｉｔｙ，ａｎｄｐｒｅｖａｌｅｎｃｅａｃｒｏｓｓｆｉｖｅｃｏｎｔｉｎｅｎｔｓ：ｄｅｆｉｎｉｎｇｐｒｉｏｒｉｔｉｅｓｔｏｒｅｄｕｃｅｃａｎｃｅｒｄｉｓｐａｒｉｔｉｅｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｇｅｏｇｒａｐｈｉｃｒｅ】ｇｉｏｎｓｏｆｔｈｅｗｏｒｌｄ．ＣｌｉｎＯｎｃ０１．２００６，２４：２１３７－２１５０．［２］ＢａｒｒｅｌＤＰ．ＭｉｃｒｏＲＮＡ：ｇｅｎｏｍｉｃｓ，ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ，ｍｅｃｈａｎｉｓｍ，ａｎｄｆｕｎｃ－ｔｉｏｎ．Ｃｅｌｌ，２００４。
１１６：２８１－２９７．［３］ＦｅｌｅｋｋｉｓＫ，ＴｏｕｖａｎａＥ，ＳｔｅｆａｎｏｕＣＨ，ｅｔａ１．ｍｉｅｒｏＲＮＡｓ：ａｎｅｗｌｙｄｅ－∞ｒｉｂｅｄｃｌａｓｓｏｆｅｎｃｏｄｅｄｍｏｌｅｃｕｌｅｓｔｈａｔｐｌａｙａｒｏｌｅｉｎｈｅａｌｔｈａｎｄｄｉｓ－ｅａ∞．Ｈｉｐｐｏｋｍｍ，２０１０，１４：２３６－２４０．［４］ＴａｋａｇｉＴ，ＬｉｏＡ，ＮａｋａｇａｗａＹ，ｅｔａ１．ＤｅｃｒｅａｓｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｌｃｒｏＲＮＡ・１４３ａｎｄ一１４５ｉｎｈｕｍａｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｓ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２００９，７７：１２－２１．（收稿日期：２０１Ｉ．０Ｉ－１０）ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓａｎ．１００１－９０３０．２０Ｕ．０８．０４９作者单位：４３００３０武汉，华中科技大学同济医学院附属同济医院神经外科通信作者：王胜。
胃癌相关microRNA的研究进展和临床价值
胃癌相关microRNA的研究进展和临床价值冯吉李锐**D0I：12.3969/j.ima.1703-2125.2020.12.029 *本文通信作者,Email:luw@ 苏州大学附属第一医院消化内科(215000)摘要胃癌是全球第5大常见癌症,亦是导致全球癌症相关死亡的第3大原因。
微小RNA(miPNA)是一类内源性非编码小分子RNA,调控多种基因的表达。
诸多研究表明,miRNA表达失调与胃癌的发生、发展、诊断、治疗以及预后密切相关。
本文就胃癌相关miRNA的研究进展和临床价值作一综述。
关键词胃肿瘤；微RNAs；生物学标记Reseerch Prooiss and CUnical Value of M icroRNAs ReUted th Gastric Cancer FENG Ji,LI Rui.Departmeut of GastroeiUeTology,the Fid J^p,liaten Hospitai of S ooc O op University,Suzhoo,Jiangsp Provinco(410022) CoiTespoiidencc th：LI RuR Email:************Abstroct Gastric cancea is the fifth most common ca/cea and the third leading cause of cancea related death in the worlP-MppRNAs(miRNAs)is a kind of endogenoss non-coSPa smal l RNAs；which reyuPtes the expression of many genes.Many studios have shown that the dyspyuPtion of miRNAs is closely related to the occyrrence ,devePpment, diagnosis,treatment and prognosis of gasbic cancea.This ar/clo reviewed the research progress and clinical value of mnRNAteeaidingatienccatce0Key wo O s Stomach Neoplasms；MppRNAs；Biological Marders据2418年全球癌症统计数据显示,胃癌是全球第5大常见癌症,亦是导致全球癌症相关死亡的第3大原因［2。
微小RNA在肝癌发生和发展中的作用
微小RNA在肝癌发生和发展中的作用肝癌是一种高度致命的癌症，它通常是由肝硬化引起的，而肝硬化和肝癌都与某些微小RNA的异常表达相关。
微小RNA是一类长度为20-24个核苷酸的RNA分子，它们通过选择性地靶向mRNA，来调控基因表达。
目前有很多研究表明，miRNA在调控癌症基因表达中起着关键作用。
本文将探讨微小RNA在肝癌的发生和发展中的作用。
1. 微小RNA可以作为肝癌的疾病诊断标志物一些研究表明，对于肝癌的筛查和诊断，微小RNA可以作为一种很有前途的标志物。
例如，miR-122在正常肝脏细胞中表达较高，而在肝癌细胞中表达降低。
因此，miR-122可以作为一种高效的肝癌诊断标志物。
此外，miR-21也广泛被用来识别患有肝癌的患者，因为miR-21在肝癌细胞中表达升高。
2. 微小RNA可以通过调节肝癌细胞存活和凋亡来影响肝癌的发生和发展miRNAs可以影响癌症细胞的存活和凋亡，进而影响肿瘤的发生和发展。
例如，miR-21能促进肿瘤细胞存活，在肝癌细胞中，miR-21的表达升高与治疗失败和不良预后有关。
miR-34a在肝癌细胞中表达下降，可以促进肝癌细胞增殖和侵袭。
miR-29a和miR-122是两个在肝癌细胞中表达下降的miRNAs，它们可以通过调节肝细胞凋亡和肝癌细胞增殖来抵抗肝癌的发生和发展。
3. 微小RNA可以通过调节肝癌微环境来促进肝癌的生长和扩散肝癌的生长和扩散不仅取决于肝癌细胞自身的特性，还与肝癌细胞周围的微环境密切相关。
miRNAs可以通过调节肝癌周围的微环境来影响肝癌的生长和扩散。
例如，miR-221可以通过调节肝癌微环境来促进肝癌的生长和扩散。
miR-221可以刺激肝癌细胞和非肝癌细胞之间的相互作用，从而促进肝癌微环境的形成。
4. 微小RNA可以通过靶向靶向肝癌相关基因来影响肝癌的发生和发展miRNAs可以通过靶向肝癌相关基因来影响肝癌的发生和发展。
例如，miR-101是一种在肝癌组织中表达下降的miRNA，其靶向的mRNA包括MCL1、COX2、ROCK1等，这些都是与肝癌发生和发展相关联的基因。
微小RNA及其在医学中的应用
Jiang C, Guo J，et al. Journal of Gastroenterology. DOI 10.1007/S00535-009-0135-6
筛选微小RNA匹配度最高的肿瘤相关靶基因、检测靶基因在蛋白质水平上的变化
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人类基因组绝大部分被转录成RNA 非编码RNA的数量是编码RNA的数百倍 生物体复杂性被隐藏在它们所输出的非编码RNA内，而非编码序列内。
2006年的诺贝尔生理学奖获得者：
Andrew Z. Fire Craig C. Mello
微小RNA（microRNA, miRNA）的发现
第一个被发现的miRNA (lin-4)由哈佛大学的Victor Ambros 发现的（1993） 第二个被发现的miRNA（let-7）由哈佛大学的博士后Frank Slack (Ruvkun 实验室）发现的（2000)
增加mir-17–19b的表达，加速了c-myc诱导的淋巴瘤形成
微小RNA在肿瘤干细胞中的作用
微小RNA在肿瘤干细胞中的作用张婷婷;卢朝辉;陈杰【摘要】Cancer stem cells are cells with stem cell characteristics within a tumor. With increased proliferative capabilities, they are able to self-renew and develop into various cell types, and thus play important roles in the formation, development, metastasis, and recurrence of tumors. MicroRNAs are a class of endogenous , small non-protein coding RNA molecules. Through regulating the expression of genes depending on the complementation between the microRNAs and their targets, microRNAs play important roles in various human cancers. This article summarizes recent research advances in the roles of microRNAs in cancer stem cells.%肿瘤干细胞是肿瘤中具有干细胞特征的细胞群,其具有自我更新能力、无限增殖能力和形成肿瘤中各种组分的多向分化潜能,在肿瘤的形成、发展、转移和复发中发挥重要作用.微小RNA是一种内源性非编码小分子RNA,通过与靶基因的互补配对调控基因表达,广泛参与多种肿瘤的进程.本文主要综述微小RNA在肿瘤干细胞中的作用.【期刊名称】《中国医学科学院学报》【年(卷),期】2012(034)002【总页数】4页(P174-177)【关键词】微小RNA;肿瘤干细胞;细胞信号通路【作者】张婷婷;卢朝辉;陈杰【作者单位】中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院病理科,北京,100730;中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院病理科,北京,100730;中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院病理科,北京,100730【正文语种】中文【中图分类】R730.2肿瘤的发生、发展和复发是一个复杂的过程，牵涉到诸多信号通路和分子机制，肿瘤干细胞的发现，为目前的研究提供了一个全新的视角。
微小RNA及其在疾病治疗中的应用
微小RNA及其在疾病治疗中的应用近年来，微小RNA逐渐成为了医学领域中备受瞩目的一个研究方向。
微小RNA，简称miRNA，是一类长约22个核苷酸的RNA分子。
由于其体积非常小，且能够通过调控基因表达发挥作用，因此在疾病治疗中具有巨大的潜力。
本文将会详细论述微小RNA及其在疾病治疗中的应用。
一、微小RNA的特征和功能微小RNA是一类细胞内调节基因表达的重要分子。
在多种生物中广泛存在，包括人类、动物、植物等。
它主要通过与靶基因的mRNA结合，从而抑制其转录、翻译或者加速其降解。
基因表达调控的是生命的核心过程，因此微小RNA在细胞内的调节作用非常重要。
微小RNA主要由多种酶进行合成，其中主要的酶包括Drosha和Dicer。
Drosha主要参与初级的miRNA前体RNA的加工，Dicer则参与miRNA的生物合成的终止阶段。
此外，一个大约72个核苷酸的二级结构也是miRNA产生的必要之处。
这个结构的稳定性和正确性对miRNA的功能发挥至关重要。
二、微小RNA在疾病诊断中的应用miRNA通过对基因表达的调控，间接地影响了许多生理和病理过程。
众多研究表明，许多肿瘤、神经退行性和心血管疾病都与miRNA的功能异常有关。
与传统基因诊断方法相比，微小RNA的特异性更高，而且可以通过简单的技术手段检测到血液、尿液、唾液等生物样本中的miRNA，将其作为疾病的“指纹”来进行诊断。
例如，miR-21是一种常见的肿瘤相关miRNA。
许多研究表明，它的高表达与肺癌、肝癌、人类黑色素瘤等多种肿瘤的发生有关。
miR-21的检测可以在早期确定疾病的风险，以指导患者进行个体化的治疗。
三、微小RNA在疾病治疗中的应用已经有多项研究表明，miRNA作为基因治疗的重要手段，可以在靶向治疗中发挥关键作用。
miRNA的靶向治疗分为两种：一种是通过转染改变miRNA的表达水平，另一种是通过选择性的miRNA模拟剂和拮抗剂来靶向调节miRNA的功能。
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Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ
ｔｏ
Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ｆｉｎａｎ ２５００２１，
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【Ａｂｓｔｒａｃｔ】
ｗａｓ
ａｎｄ ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ（ＧＣ）．
９．８２０，Ｐ＜０．０５：０．８６３±０．０２６ ＶＳ．１．０６０±０．０５４，ｔ＝４．３６９，Ｐ＜０．０５）ａｎｄ ｉｎｖａｓｉｏｎ
ｒａｔｅｓ（１．０４０±
０．０５５ ＶＳ．１．５２２±０．００１，ｔ＝５．８４，Ｐ＜０．０５；１．０４０±０．０５５ ＶＳ．１．６９６±０．０７８，ｔ＝１０．１６，Ｐ＜０．０５）ｉｎ ＢＧＣ一８２３ ｃｅｌｌｓ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ ｍｉＲ．４５ １ ｍａｙ ａｃｔ
万方数据
主堡董塑！！型苤查！！！！至！！旦箜！！鲞笙！！塑坠ｉ！』壁！！！！ｇ：Ｑ！！！迪！！！！！！∑！！：！！：堕！：！Ｑ
１．２ １．４
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粤Ｉ．２
一１．Ｏ
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誊０．２
０
图１
不同ｍｉＲ．４５１表达胃癌患者的术后生存曲线
图２
各组细胞随培养时间延长相应Ａ４９０值的变化曲线２Ａ：胃癌ＢＧＣ－８２３
Ｒｅｓｕｌｔｓ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ
ＧＣ ｔｉｓｓｕｅｓ ＶＳ．ｐｅｒｉｅａｒｃｉｎｏｕｓ
ｔｉｓｓｕｅｓ ｆ ０．０１０±０．００７
０．０１４±０．００８．ｔ＝３．０１５，Ｐ＜０．０５），ａｎｄ ｉｔｓ ｄｏｗｎ—ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
ｄｉｄ ｎｏｔ ｉｍｐａｃｔ
ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ
ＬＶ—ＮＣ感染的细胞组（ＮＣ组）的ＲＮＡ。应用 ＭＭＬＶ及相应引物合成ｅＤＮＡ。应用ＳＹＢＲ
Ｅｘ
ｐｒｅｍｉｘ
二、ｍｉＲ．４５１表达与胃癌患者临床病理因素及 术后生存时间的关系
根据肿瘤组织与正常组织ｍｉＲ一４５１表达率的
比值，将１０７例患者分成ｍｉＲ一４５１高表达组（表达 率≥１，２６例）及ｍｉＲ．４５ｌ低表达组（表达率＜１， ８ｌ例）。结果显示，ｍｉＲ一４５１低表达与肿瘤大小、淋 巴结转移、ＴＮＭ分期及临床分期呈正相关，但与患 者的年龄、性别和浸润深度无关（表１）。应用 Ｋａｐｌａｎ．Ｍｅｉｅｒ方法绘制生存曲线，结果表明ｍｉＲ．４５１ 低表达患者的生存时间缩短（Ｐ＝０．０４２，图１）。 三、ｍｉＲ．４５１表达与胃癌细胞的增殖 通过慢病毒方法．我们建立了稳定高表达ｍｉｌｌ一
ｒａｉｎ，４℃终止。应用ＳＹＢＲ
ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑ
试剂盒（Ｔａｋａｒａ公司，日本）进行ｑＲＴ—ＰＣＲ。步骤如
下：９５℃３ ｒａｉｎ变性，９５℃１２
ｓ．６２ ｏＣ ４０
ｓ．扩增
一、胃癌及癌旁组织中ｍｉＲ一４５１的表达 相比癌旁组织，胃癌组织ｍｉＲ．４５１表达水平降 低（０．０１０±０．００７比０．０１４±０．００８），差异有统计学
应用实时定量聚合酶链反应检测胃癌及癌旁组织中ｍｉＲ一４５１的表达，分析ｍｉＲ一４５１表达与胃癌患者 临床病理因素及预后的关系。应用慢病毒ＬＶ．ｍｉｒ．４５１感染人胃癌细胞株ＢＧＣ一８２３、ＭＫＮ－４５，建立稳 定高表达ｍｉＲ一４５１的细胞株，检测其增殖、迁移及侵袭能力。结果胃癌组织中ｍｉＲ．４５１表达水平 比癌旁组织降低（０．０１０±０．００７比０．０１４±０．００８，ｔ＝３．０１５，Ｐ＜０．０５），且其下调与淋巴结转移、临床 分期及患者生存时间缩短呈正相关。ＢＧＣ一８２３和ＭＫＮ－４５细胞内ｍｉＲ一４５１的高表达对细胞增殖无影 响，但降低了ＢＧＣ．８２３细胞的迁移率（０．８６３－Ｉ－０．０２６比１．１０７－Ｉ－０．０３２，ｔ＝９．８２０，Ｐ＜０．０５；０．８６３± ０．０２６比１．０６０土０．０５４。ｔ＝４．３６９，Ｐ＜０．０５）和侵袭率（１．０４０±０．０５５比１．５２２±０．００１，ｔ＝５．８４，Ｐ＜ ０．０５；１．０４０±０．０５５比１．６９６＂４－０．０７８，ｔ＝１０．１６，Ｐ＜０．０５）。结论ｍｉＲ．４５１可能作为一种新的判断 胃癌预后的标志物。
４５１的胃癌细胞株。ｑＲＴ—ＰＣＲ结果显示，在ＢＧＣ一 ８２３细胞的Ｍｉｃｒｏ ｕｐ组、ＣＯＮ组和ＮＣ组，ｍｉｒ．４５１
Ｔａｑ试剂盒进行ｑＲＴ．ＰＣＲ。 四、细胞增殖率的检测 用ＭＴｒ实验检测细胞增殖率。将Ｍｉｃｒｏ ｕｐ组
和两个对照组细胞培养终止前４ ｈ加入２０“ｌ ５ ｇ／Ｌ 的Ｍ１Ｔｒ于孔中。形成蓝紫色结晶并沉淀在细胞中。
Ｍｉｃｒｏ
ｕｐ组基因分别是ＣＯＮ组、ＮＣ组的３．１５４倍（ｔ
＝３．３０４，Ｐ＜０．０５）、６．５０２倍（ｔ＝３．４９６，Ｐ＜０．０５）。 ＭｒＩＴ结果显示．５ ｄ内两种细胞增殖率相比差异无 统计学意义（Ｐ＞０．０５），见图２。
ｈ，染色小室转移细胞，１０％醋酸溶解，Ａ㈣检测。
迁移率＝Ｇｉｅｓｍａ染色后Ａ锕／接种时ＭＴｒ Ａ４９０。侵 袭实验步骤与迁移实验相似，除了上室覆盖有
【关键词】
胃肿瘤；微ＲＮＡｓ；肿瘤标记，生物学
Ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｍｉｃｒｏＲＮＡ－４５１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｉｔｓ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ Ｒｏｎｇ Ｚｈｏｎｇｈｏｕ． Ｓｕ Ｚｈｏｎｇｘｕｅ，ＧＢ昭Ｗｅｎｍａｏ，Ｘｉａｎ Ｇｕｏｚｈｅ，Ｗａｎｇ Ｚｈｉｙｉ，Ｗｕ Ｙａｇｕａｎｇ，Ｑｉｎ Ｃｈｅｎｇｋｕｎ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙ Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｃｈｉｎａ
ｍｉＲ．４５ １
ｉｎｆｅｃｔ ｈｕｍａｎ ｇａｓｔｒｉｃ
ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ｄｅｔｅｃｔ ｃｅｌｌ
ＢＧＣ一８２３ ａｎｄ
ＭＫＮ．４５．ａｎｄ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ
ｉｎｖａｓｉｏｎ．
ＶＳ．
ｏｖｅｒ—ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｍｉＲ．４５１
ｓｔａｂｌｅ
ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ．Ｆｉｎａｌｌｙ．ｔｏ
ｉｎ
ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ａｎｄ
参考文献
０．０５）和ＮＣ组（ｔ＝４．３６９，Ｐ＜０．０５）低。
ａｓ ａ
ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ
ｍａｒｋｅｒ ｉｎ ＧＣ．
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】
Ｓｔｏｍａｃｈ ｎｅｏｐｌａｓｍｓ；
ＭｉｃｒｏＲＮＡｓ；Ｔｕｍｏｒ ｍａｒｋｅｒｓ，ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
最近研究表明．ｍｉＲ一４５１由于在乳腺癌［１］、非小
细胞肺癌［２。、鼻咽癌［３］及胃癌［４－５］等发生、发展中起 重要作用而为人们所关注。Ｂａｎｄｒｅｓ等［４］研究发现， ｍｉＲ一４５１在胃癌细胞中的表达比非肿瘤细胞降低。 本研究旨在了解ｍｉＲ．４５１对胃癌生物学行为的
４
２“们‘值分别为２５．８８７±３．２７２、１．９２１±０．１９４、
１．０１０±０．１６６．Ｍｉｃｒｏ
ｈ后吸去培养液，加１５０斗ｌ二甲基亚砜溶解结晶， 酶标仪４９０ ｎｍ检测吸光度（Ａ）值。
五、细胞迁移和侵袭能力的检测
ｕｐ组基因表达分别是ＣＯＮ
组、ＮＣ组的１３．４７６倍（ｔ＝５．３１７，Ｐ＜０．０５）、２５．６３１ 倍（ｔ＝５．４１９，Ｐ＜０．０５）。在ＭＫＮ一４５细胞的
细胞株；２Ｂ：胃癌ＭＫＮ一４５细胞株 Ｍｉｃｒｏ
ｕｐ组细胞迁移率比ＣＯＮ组（ｔ＝９．８２０，Ｐ＜ ｕｐ组、ＣＯＮ组和ＮＣ组细胞侵袭率分别
癌复发及预后的标志物。 Ｂａｎｄｒｅｓ等［４】研究发现．ｍｉＲ．４５１在胃癌和结直 肠癌组织中的表达下降，并且它的下调与预后不良相 关，与本研究结果一致。此外，他们发现ｍｉＲ一４５１的 高表达抑制了癌细胞增殖［４］。但是本研究结果提 示，ｍｉＲ．４５１并未对细胞增殖有影响，ｍｉＲ．４５１高 表达抑制了胃癌细胞的迁移和侵袭能力。
万方数据
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德国）提取总ＲＮＡ。应用鼠白血病病毒反转录酶 （ＭＭＬＶ，Ｐｒｏｍｅｇａ公司，美国）及相应引物合成 ｃＤＮＡ。实验步骤如下：７０℃５０ ｒａｉｎ．４ ｏＣ ３ ｒａｉｎ．
４２℃６０
用配对样本ｔ检验，计数资料采用疋２检验，用
ｌｏｇ．ｒａｎｋ方法行生存分析。Ｐ＜０．０５为差异有统计
学意义。 结 果
影响。 一、一般资料
资料与方法
选取山东大学附属省立医院２０１０－－２０１２年收 治的１０７例接受手术的胃癌患者，均未进行术前治
疗。收集的肿瘤及瘤周组织经过甲醛处理、石蜡包 埋。收集患者的临床病理资料，包括肿瘤直径、浸润
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ
ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－６３１Ｘ．２０１６．１０．０１５
深度、ＴＮＭ分期、淋巴结转移及临床分期。生存时 间是指患者从外科手术开始至死亡的时间。
二、胃癌组织中ｍｉＲ．４５１表达的检测 应用ｍｉＲＮｅａｓｙ ＦＦＰＥ试剂盒（Ｑｉａｇｅｎ公司。
基金项目：山东省科技厅科技发展计划资助项目 （２０１３ＧＳＦｌｌ８６２） 作者单位：２５００２１济南，山东大学附属省立医院肝胆外科 通信作者：苏忠学．Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈｏｎｇｈｏｕｌ９８１＠１６３．ｅｏｍ
意义（ｔ＝３．０１５，Ｐ＜０．０５）。
４０个循环。从６２℃。９５℃绘制融解曲线，Ｕ６小片
段ＲＮＡ为内参基因。应用２以们‘方法来计算结果。 三、ｍｉＲ．４５１高表达稳定细胞株的建立 将人胃癌细胞株ＢＧＣ．８２３和ＭＫＮ．４５（山东 大学医学院）接种于６－ｗｅｌｌ中培养，待细胞融合度达 到约３０％时加入适宜量的慢病毒ＬＶ．ｍｉＲ一４５ １以及 阴性对照病毒ＬＶ．ＮＣ（ＧｅｎｅＰｈａｒｍａ公司，中国）。感 染３ ｄ后观察慢病毒荧光标记基因绿色荧光蛋白的 表达情况，荧光率＞８０％者用于ＲＮＡ提取。提取慢 病毒ＬＶ．ｍｉＲ一４５１感染的细胞组（Ｍｉｃｒｏ ｕｐ组）、未 感染任何病毒的细胞组（ＣＯＮ组）和阴性对照病毒
Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍｉＲ一４５ １ ｉｎ