红细胞渗透脆性检验试剂盒(一管法)
实验四：地中海贫血与红细胞渗透脆性试验解析
地中海贫血确诊试验
• 地贫诊断基因芯片(Thalachip); • 地贫基因诊断条膜(反向点杂交)/一管法多 重PCR • ASO寡核苷酸探针点杂交 • DNA测序
鉴别诊断(Differential diagnosis)
• 缺铁性贫血 • 遗传性球形红细胞增多症 • 传染性肝炎或肝硬化
Hale Waihona Puke 实验：红细胞渗透脆性检验 (试剂盒一管法)
溶血 ％ = D1 D2 X 1.25 ×100 ％
【参考值（参考范围）】 溶血率％ >65％为正常溶血率；<55％为溶血率降低；（注 56-
64％为溶血率轻度降低）。
【检验结果的解释】 正常溶血率：指红细胞渗透脆性在正常范围。 溶血率降低：指红细胞渗透脆性降低；常见于地贫或低频基因 携带者、严重缺铁性贫血者，小性红细胞增多症贫血者等。
• 其特点是由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋
白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少
或不能合成，导致血红蛋白的组成成分改
变。本组疾病的临床症状轻重不一，大多
表现为慢性进行性溶血性贫血。
地中海贫血的病理生理
α-地中海贫血
重型α地贫 （HbBart’s胎儿水肿综合征） 4个α基因都缺失了(--/--) ， 在孕后期或出生后即死亡。
【检验原理】
贫血症者常伴有红细胞渗透脆性的改变。
测定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率， 可筛查是否贫血，特别是溶血率降低引起
的贫血（如地贫症、严重缺铁性贫血症）
【主要组成成分】 组成： 由SG-A母液（红细胞渗透脆性检测液）； SG-B母液（终止红细胞溶血液）； SG-C母液（红细胞溶血液）组成； 成分： SG-A母液采用氯化钠（NaCl）、磷酸氢二 钠（Na2HPO4）、磷酸二氢钠（NaH2PO4） 制成； SG-B母液采用氯化钠制成； SG-C母液采用皂素（saponin）制成。
红细胞渗透脆性(仅供参照)
红细胞渗透脆性试验[实验目的]：学习测定红细胞渗透脆性的方法[实验原理]：将红细胞放置于等渗溶液中，红细胞的形态不发生改变。
放置于高渗和低渗盐溶液中红细胞的形态均出现改变，置于高渗液中，红细胞出现皱缩；置于低渗液中则发生膨胀，最后破裂，细胞内容物溢入血浆或溶液，这种现象称为溶血。
将血液滴入不同浓度的低渗盐溶液中，可以检查红细胞对低渗溶液的抵抗力。
开始出现溶血现象的低渗盐溶液浓度，为该血液红细胞的最小抵抗力（约0.40%~0.45%NaCl 溶液），而完全溶血则为该血液红细胞的最大抵抗力（约0.30%~-0.45%NaCl溶液）。
对低渗盐溶液的抵抗力小表示红细胞的脆性大，反之表示脆性小，最大抵抗力到最小抵抗力的范围，称脆性范围。
[实验对象]家兔[实验器材]试管架、5 ml试管十支、2 ml吸管两支、注射器、1%NaCl溶液、蒸馏水、枸椽酸钠。
[实验步骤]（一）低渗盐溶液的配制取试管十支，洗净烤干，用玻璃铅笔编号，排在试管架上，参照下表向各试管中加入1%NaCl溶液，然后再加入蒸馏水，每管溶液均2 ml。
试管号1 2 3 4 5 6 7 8 9 10试管蒸馏水（ml）0.60 0.70 0.80 0.90 1.00 1.10 1.20 1.30 1.40 1.50 NaCl浓度（%）0.70 0.65 0.60 0.55 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25（二）枸椽酸钠血的制备家兔颈部解剖，剥离颈总动脉，插管，将血放入烧杯内，烧杯内事先加入3.8%枸椽酸钠溶液，血与枸椽酸钠溶液的比例为9:1，轻摇烧杯使之混匀。
[观察项目]用注射器向每个试管内加入兔血一滴，用拇指堵住试管口，将试管颠倒2~3次（不要用力振荡以免溶血），在室温下静置1小时，然后观察各试管的透明度以判断是否溶血。
1、试管内下层为混浊红色，上层为无色或淡黄色液体，说明红细胞尚未破坏。
2、试管内下层为混浊红色，上层为透明淡红色，则表明红细胞部分溶解，才出现溶血的低渗盐溶液的浓度，为红细胞的最小抵力（最大脆性）。
地中海贫血与红细胞渗透脆性试验课件
33
PCR-ASO
Normal
Mutant
2
诊断(Diagnosis)
· 临床特点+ 实 验 室 检 查 + 父 母 调 查 阳 性 + (基因分析)
地中海贫血初筛检查
· MCV<80fl 和/或MCH<27pg ,则高度怀疑 为地贫；
· 红细胞渗透脆性试验阳性(Red cell os motic fragility test,ROFT;<0.60): 即可 怀疑为地贫；
实验四地中海贫血 与红细胞渗透脆性
试验
地贫的发病率、地域分布及危害
·地中海沿岸国家、东南亚及中国南方多见； ·广西发病率为20%; ·重型地贫给家庭社会带来沉重的经济负担
和难以估量的精神负担；
地贫患者的困境
4 0 0 0 元：重型地贫患儿平均每月需4000元的治疗费用以维持生
命。成年人每月的治疗费用接近万元，每年治疗费用至少10万元，每例 重症地贫患儿出生给社会和家庭带来的经济负担高达100-300万元。
■ 实验室检查
● 小细胞低色素贫血，有核红细胞和网织红细胞明显升
高
● 红细胞渗透脆性明显降低
· Hb电泳：大量Hb brat's、少量HbH,
无HbA 、HbF
12
β-地贫病理生理
β-珠蛋白基因缺陷
β珠蛋白肽链合成减少或缺如
珠蛋白肽链合成间的平衡异常
HbF比例显著增高，
HbA2增高
正常Hb A生 物合成降低
HbA:a₂ β₂) 合成降低的一种遗传性血红 蛋白病。
· 其特点是由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋 白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少
或不能合成，导致血红蛋白的组成成分改 变。本组疾病的临床症状轻重不一，大多 表现为慢性进行性溶血性贫血。
红细胞渗透脆性的测定
红细胞渗透脆性的测定[目的与原理] 掌握测定红细胞渗透脆性的方法，测定不同鱼类红细胞渗透脆性并理解细胞外液渗透压对维持细胞正常形态与功能的重要性。
正常情况下，动物红细胞内的渗透压与血浆的渗透压相等，哺乳动物约相当于0.9％NaC1溶液的渗透压，鱼类的等渗溶液为0.85％～1.0％NaC1溶液。
将红细…[目的与原理]掌握测定红细胞渗透脆性的方法，测定不同鱼类红细胞渗透脆性并理解细胞外液渗透压对维持细胞正常形态与功能的重要性。
正常情况下，动物红细胞内的渗透压与血浆的渗透压相等，哺乳动物约相当于0.9％NaC1溶液的渗透压，鱼类的等渗溶液为0.85％～1.0％NaC1溶液。
将红细胞置于等渗溶液中，其形态和容积可保持不变。
若将红细胞悬浮于低渗的NaC1溶液中，则水分进入红细胞使之膨胀甚至破裂溶解，但红细胞对低渗溶液具有一定的抵抗力，其抵抗力大小与红细胞膜脆性有关。
通常用不同浓度的NaC1溶液来测定红细胞膜的渗透脆性，红细胞膜渗透脆性大的，则对低渗NaC1溶液的抵抗力小，NaC1溶液的渗透压稍有降低，此类红细胞便发生破裂而溶血。
反之，脆性小的则对NaC1溶液的抵抗力大，Nac1溶液的渗透压降到很低时才使这些红细胞破裂溶血。
刚能引起一部分红细胞溶解的低渗NaCl的浓度可以代表最小抵抗值；使全部红细胞溶解的NaCl浓度为最大抵抗值。
通常就以抵抗值表示红细胞的渗透脆性。
在刚成熟的红细胞，其膜的渗透脆性较小，而衰老的红细胞膜的渗透脆性较大。
[实验对象]鲤、鲫或草鱼。
[试剂与器材]5毫升无菌注射器，消毒棉球，中试管，小试管，试管架，滴管，1%NaCl，蒸馏水，75%酒精，碘酒，凹瓷盘，1%肝素钠或10%草酸钾溶液，3.8% 枸橼酸钠。
[实验步骤]滴血，将试管夹在两掌心中迅速搓动，使血液与管内NaCl溶液混匀（切勿用力震荡），室温下放置2小时后观察结果。
多余血液注入盛有0.1毫升3.8% 枸橼酸钠的试管内。
加以混合，以备重复实验使用。
红细胞渗透脆性实验
红细胞渗透脆性实验
一.原理：
本实验是测定红细胞对不同浓度低渗盐水溶液的抵抗力，这种抵抗力与红细胞表面积和体积的比值有密切关系，表面积大而体积小者对低渗盐水抵抗力较大（脆性减低）；反之，则抵抗力较小（脆性增加）.球形细胞表面积/体积比值减少,脆性显著增加.
二.试剂:
171mmol/LNaCl溶液(10g/L):
取经100度烘干的分析纯氯化钠置100ml容量瓶中,加少量双蒸溜水溶解后,再加双蒸溜水至刻度
三.操作:
于各管中,每管1滴(贫血病人可加2滴),轻轻摇匀,室温静置.
3.每次试验均应同时作正常对照.
结果判断
静置室温2小时,观察结果,从高浓度管开始观察,上层溶液开始出现透明红色且管底有红细胞者为开始溶血管;溶液透明红色,管底完全无红细胞者为完全溶血管.。
红细胞渗透脆性实验
红细胞渗透脆性实验红细胞渗透脆性实验是一种常用的血液分析方法，用于评估红细胞膜的稳定性和弹性。
该实验利用了红细胞在不同渗透压下的脆性变化，可以对红细胞膜的功能、水平和吸收能力进行评估和分析，具有重要的临床意义。
实验原理：红细胞内部有一定的渗透压，当红细胞分离出体外时，如果外部环境的渗透压高于红细胞内的渗透压，则会通过半透膜透过膜进入红细胞内部，使红细胞体积膨胀，红细胞膜被撑开。
反之，当外部环境的渗透压低于红细胞内的渗透压时，水会从红细胞内部流出，红细胞体积缩小。
实验过程：1、准备标准盐水浓度，即0.9%的氯化钠溶液。
2、取一定量的患者血液样本，离心去上清液，弃去上清液后，将沉淀物用相同体积的0.9%氯化钠溶液洗涤3次。
3、取少量的红细胞沉淀，加入不同浓度的盐水，称出每种浓度的盐水加入相应的样本内。
4、使样本和盐水充分混合，放置不同的时间（一般为30分钟），孵育后进行离心处理。
5、标记沉淀物的红细胞体积，对分离出的上清液测定其吸光度（或乳胶凝集率）。
6、计算红细胞的溶血率，溶血率越高，表示红细胞的渗透脆性越高。
实验结果：在不同盐水浓度下孵育后，红细胞和盐水发生渗透压差异，导致红细胞脆性变化，失去完整性。
通过测定溶血率，可以得到红细胞的溶血程度，从而分析红细胞渗透脆性的高低，反映红细胞膜的稳定性和弹性。
一般来说，红细胞膜的完整性越强，渗透脆性越低，溶血程度越小；反之，红细胞膜的完整性越弱，渗透脆性越高，溶血程度越大。
实验注意事项：1、样本应在离心前密闭保存，避免污染。
2、孵育时间需控制在一定范围内，过长过短都会影响实验结果。
3、盐水和样本的比例应准确。
4、实验过程需严格按照操作流程，避免误差。
结论：红细胞渗透脆性实验可以反映红细胞膜的稳定性和弹性，对于临床疾病诊断、治疗和预后评估有着很高的应用价值。
在具体应用时，需结合其他临床检测项目综合分析，才能准确地诊断疾病并制定科学的治疗方案。
两种方法联合检测在婚前、产前筛查地中海贫血中的应用
两种方法联合检测在婚前、产前筛查地中海贫血中的应用李亚;李忠;何晓明【摘要】目的探讨采用平均红细胞体积(MCV)和红细胞脆性试验(一管法)联合检测在婚前、产前筛查地中海贫血中的临床应用价值.方法对婚前和产前检查的1 738名受检者,进行血常规检测和红细胞脆性试验,比较其MCV与红细胞脆性试验结果.结果 MCV法的轻型地中海贫血检出率为11.2%(149/1328),红细胞脆性试验检出率为10.3%(137/1328).采用两法串联,轻型地中海贫血检出率为9.8%(130/1 328).两法串联的灵敏度、特异度、阳性似然比、符合率,均高于单独MCV法、红细胞脆性试验.结论 MCV和红细胞脆性试验(一管法)联合检测是筛查地中海贫血的快速、经济,且有一定特异性、敏感性的方法,具有推广意义.%Objective To explore the use of mean corpuscular volume (MCV) and red blood cell fragility test (simple tube method) combined detection in the prenatal detection and pre-marital sc reening of thalassemia. Methods 1 738 individuals in pre-marital screening and prenatal examinations were underwent routine blood examination and erythrocyte fragility test,so asto compare the MCV and erythrocyte fragility test. Results The detection rate of slight-duty Mediterranean anaemia in MCV was 11.2％ (149/1 328), and in erythrocyte fragility test was 10. 3％ (137/1 328). By combining two methods series (both MCV and erythrocyte fragility test were positive), the detection rate of slight-duty Mediterranean anaemia was 9.8％ (130/1 328). In the evaluation of three tests, the combined detection had more higher sensitivity, specificity, positive likelihood ratio, consistent rates than the other tests. So the use of MCV and red blood cell fragility test (a method)combined detection was better in the prenatal detection and pre-marital screening of thalassemia. Conclusion The combined detection of MCV and red blood cell fragility test (simple tube method) is fast, economic,specific and sensitive method in thalassemia screening.【期刊名称】《临床输血与检验》【年(卷),期】2011(013)001【总页数】2页(P21-22)【关键词】地中海贫血;婚前检查/产前筛查;平均细胞体积;红细胞脆性试验【作者】李亚;李忠;何晓明【作者单位】523330,广东省东莞市石排医院检验科;523330,广东省东莞市石排医院检验科;523330,广东省东莞市石排医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R556.6+1;R446.11地中海贫血为珠蛋白基因缺失或突变所造成的遗传性疾病,临床常见类型有α和β型。
生理学实验教案——红细胞的渗透脆性
红细胞的渗透脆性一、实验目的及原理目的：测定动物的红细胞对低渗溶液的脆性。
原理：将红细胞放置于等渗溶液中，红细胞的形态不发生改变。
放置于高渗和低渗盐溶液中红细胞的形态均出现改变，至于高渗液中，红细胞出现皱缩；置于低渗液中则发生膨胀，最后破裂，细胞内容物溢入血浆或溶液，这种现象称为溶血。
将血液滴入不同浓度的低渗盐溶液中，可以检查红细胞对低渗溶液的抵抗力。
开始出现溶血现象的低渗盐溶液浓度，为该血液红细胞的最小抵抗力（约0.40％~0.45％ NaCl溶液），而完全溶血则为该血液红细胞的最大抵抗力（约0.30％~0.35％ NaCl溶液）。
对低渗盐溶液的抵抗力小表示红细胞的脆性大，反之表示脆性小，最大抵抗力到最小抵抗力的范围，称脆性范围。
二、实验准备1.实验对象：家兔2.实验药品：1％氯化钠、蒸馏水3.实验器材：5ml试管10支、2ml滴管2支、5ml注射器、试管架、棉签4.环境：安静的实验室三、实验学时1学时四、实验方法1.低渗盐溶液的配制取试管10支，洗净烤干，编号后依次排列于试管架上，参照下图向各试管中加入1％ NaCl溶液，然后再加入蒸馏水，每管溶液均2ml。
2.采血从家兔颈总动脉取血2ml，立即向每个试管各加血液1滴，轻摇试管，使血液与盐溶液充分混合。
静置30分钟。
3.实验观察按各试管液体颜色和透明度判断是否溶血、部分溶血或完全溶血。
①未发生溶血试管内下层为混浊红色，上层为无色或淡黄色液体，说明红细胞尚未破坏。
②部分溶血试管内下层为混浊红色，上层为透明淡红色，表示红细胞部分溶解，最先出现部分溶血的盐溶液为红细胞的最大脆性（即最小抵抗力）。
③完全溶血试管内溶液呈透明红色，管底无红细胞，说明红细胞全部破裂。
最先出现完全溶血的盐溶液为红细胞的最小脆性（即最大抵抗力）。
五、实验结果认真完成实验，将实验结果记录于下表。
红细胞的渗透脆性观察项目试管编号未发生溶血部分溶血完全溶血六、思考1.什么是红细胞的渗透脆性？红细胞的渗透脆性一般是指红细胞，在低渗溶液中发生溶血的性能，称为渗透脆性。
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适用于体外检测贫血等引起地红细胞渗透脆性病变，特别是红细胞渗透脆性降低一类地贫血症筛查.（如地贫症、严重缺铁性贫血症）
【检验原理】
贫血症者常伴有红细胞渗透脆性地改变.测定红细胞在一定渗透浓度下地溶血率，可筛查是否贫血，特别是溶血率降低引起地贫血.个人收集整理勿做商业用途
【主要组成成分】
组成
由母液（红细胞渗透脆性检测液）；母液（终止红细胞溶血液）；母液（红细胞溶血液）组成；成分
母液采用氯化钠（）、磷酸氢二钠（）、磷酸二氢钠（）制成；母液采用氯化钠制成；母液采用皂素（）制成.个人收集整理勿做商业用途
【贮存条件及有效期】
避光贮存在℃℃环境中，其保质期个月.
和试验液可在室温保存，试验液在℃℃保存；试剂开瓶后有效期为个月.
【适用仪器】
具有波长地分光光度计；普通离心机；水浴箱.
、【样品要求】
新鲜抗凝全血（肝素、、），置℃℃保存.已发生溶血或有血凝块地标本为不合格样品.标本采集后，测试应在三日内完成.个人收集整理勿做商业用途
【检测方法】
【试验液配制】
试验液：
用一个容量瓶（不要用量筒！），上放一个小漏斗.将母液倒入漏斗中.用纯化水洗净装母液地管和盖，将管内余液倒入容量瓶，然后加纯化水于容量瓶中，准确至刻度，混匀后即为试验液.个人收集整理勿做商业用途
试验液：
将母液倒入容量瓶中，加入纯化水，混匀后，即为试验液.
试验液：
将母液倒入容量瓶中，加入纯化水，混匀后，即为试验液.
【实验操作】
取试管一只，加入试验液，放℃，预热分钟.
加入待测抗凝全血μ，立刻混匀，继续放在℃保温分钟.
分钟后，加入试验液.混匀，转分钟，离心分钟.
将上清液轻轻倒入×地比色杯中（切勿搅动试管底地红细胞），于波长读取光密度（以纯化水作空白对照）.（勿倒掉比色杯中地溶液）个人收集整理勿做商业用途
向试管中加入试验液，混匀，待血液全部溶血（透明红色）后，将比色杯中已比色地溶液倒入试管中混匀.个人收集整理勿做商业用途
将混匀后地溶液，倒入比色杯中，再于波长比色，读取光密度.
按下列公式计算出溶血率百分比.
溶血％×％
【参考值（参考范围）】溶血率％>％为正常溶血率；<％为溶血率降低；（注％为溶血率轻度降低）.个人收集整理勿做商业用途
【检验结果地解释】
正常溶血率：指红细胞渗透脆性在正常范围.
溶血率降低：指红细胞渗透脆性降低；常见于地贫或低频基因携带者、严重缺铁性贫血者，小性红细胞增多症贫血者等.个人收集整理勿做商业用途
溶血率轻度降低：指红细胞溶血率不明显减低，在正常与可疑贫血症之间.
、【检验方法地局限性】
本试剂盒仅用于红细胞渗透脆性地检测.使用非新鲜或凝血血标本，可导致结果不可靠.
、【产品性能指标】
试剂变色或有浑浊沉淀则应判断为失效.
、【注意事项】
、本法对血液标本地新鲜度要求高，应采用小时内采集地，℃保存地血液进行测试.
、所有母液放℃保存.此时有结晶析出.用时，必须放在℃加温摇动至完全溶解后才能使用.和试验液可放室温保存，试验液放℃保存.个人收集整理勿做商业用途
、有效期内地不同批次试剂可疑互相使用.
【参考文献】
杜传书增瑞萍华小云等.地中海贫血一管筛查法《一种简易筛查人群地中海贫血地方法年》. . 个人收集整理勿做商业用途
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撰写人：陈丽忠
审核人：谭少仪
批准人：肖增磺
批准日期年月日。