全血胆碱酯酶活性的测定
6,胆碱酯酶活性测定
实习三有机磷经皮染毒对全血胆碱酯酶活性的影响（一）目的和意义1、学习经皮染毒技术，掌握急性经皮毒性试验的方法。
2、观察有机磷经皮肤吸收后对机体的急性毒性作用。
3、掌握全血胆碱酯酶活性的测定方法及原理。
（二）仪器1．解剖剪刀、弯剪、镊子、灌胃针。
2．恒温水箱(37±0.5℃)。
3．离心机。
4．分光光度计，10mm比色皿。
5．血红蛋白吸管（20μl）；刻度吸管（5.0ml，2.0ml，1.0ml）；离心管（10ml）；容量瓶（10ml，100ml）；试管（10ml）、烧杯等。
（三）试剂1．受试物：有机磷（由指导教师自定）；溶剂，根据受试物的理化性质选定。
2．磷酸盐缓冲液(1/15m mol/L，pH7.40)：称取9.07g无水磷酸二氢钾(KH2PO4)，用水溶解并稀释至1000mL(甲液)；称取23.87g磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)，用水溶解并稀释至1000mL(乙液)。
取甲液19.2mL与乙液80.8mL混合即得。
3．生理盐水：氯化钠8.5g/L。
4．硫代乙酰胆碱(ASCh)：称取72.3mg ASCh(生物试剂)溶于生理盐水中，并稀释到10mL；置冰箱中保存，临用时以生理盐水稀释10倍。
5．5，5′－联硫代－双－2－硝基苯甲酸(DTNB)溶液：称取19.8mg DTNB，滴加磷酸盐缓冲液(4.2)，搅拌，直至完全溶解，溶液透明(大约加2mL)，再用生理盐水(4.3)稀释至10mL，置冰箱中保存，临用时以生理盐水稀释10倍。
出现黄色即弃用。
6．抑制剂毒扁豆碱：取1mg左右柳酸毒扁豆碱，溶于0.5mL生理盐水(4.3)，临用时配制，严防污染其他试剂及器材。
7．1m mol/L谷胱甘肽标准溶液：精确称取3.07mg还原型谷胱甘肽用水溶解，移入10mL容量瓶中，稀释至刻度。
此液1mL相当于1μmol谷胱甘肽。
因其易被氧化，应于用时配制，水必须先经煮沸去氧冷却后使用。
（四）实验步骤1．实验动物的选择实验动物可选择健康豚鼠或家兔，也可用大鼠。
全血、血浆、红细胞胆碱酯酶速率测定法
全血、血浆、红细胞胆碱酯酶速率测定法
顾华强;陈再射;游全程;蒋良述;杨跃林
【期刊名称】《现代预防医学》
【年(卷),期】1992(19)2
【摘要】本文介绍用乙酰硫代胆碱作底物、DTNB作显色剂在405nm处连续监测,建立了全血、血浆、红细胞胆碱酯酶活性的速率测定法。
线性范围全血为600-9000U/L血浆为200-8000U/L,红细胞批内CV2.6-4.3%,批间CV3.4-5.6%,平均回收率96.3%。
与羟胺法比较r=0.92(P<0.001)。
本法灵敏、精确度与线性较满意,操作简易,适于科研、临床应用。
【总页数】4页(P96-99)
【关键词】胆碱酯酶;红细胞;速率法
【作者】顾华强;陈再射;游全程;蒋良述;杨跃林
【作者单位】华西医大职业病防治医院
【正文语种】中文
【中图分类】R446.112
【相关文献】
1.全血、血浆、红细胞胆碱酯酶正常值的探讨 [J], 阿拉塔;张建余;刘彦慧
2.全血、血浆、红细胞胆碱酯酶活性在急性有机磷农药中毒病程中的变化及意义[J], 张在其;梁仁;黄韬;杨华喜;彭巍;陈涤民;尹芙蓉;易高;周玉淑
3.微量动态监测有机磷中毒者全血、血浆、红细胞胆碱酯酶活性的临床研究 [J],
张在其;梁仁;黄韬;杨华喜;彭巍;陈涤民;尹芙蓉;易高;王承志;周玉淑
4.血液胆碱酯酶活力测定方法的进一步研究Ⅰ．红细胞／全血胆碱酯酶活力比例及红细胞计数校正酶活力值的研究 [J], 孙东红;赵丽红;周宏东;薛寿征
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全血胆碱脂酶测定
0
0.8
1.6
2.4
3.2
4.0
（2）各管加碱性羟胺4ml，立即振摇3min
（3）各管加1∶2盐酸溶液2ml，振摇1min
（4）各管加10%三氯化铁溶液2ml，摇匀，过滤
（5）测吸光度：λ——520nm，参比管——第1管
（6）绘制标准曲线
2.样品测定
0.98ml磷缓 20ul血 0.98ml磷缓 20ul血
意 义
有机磷农药中毒的重要诊断指标 中毒者治疗后的效果观察指标 接触有机磷农药人员健康状况的动态观察指标
方 法
Asch-DTNB比色法（GBZ52） 三氯化铁比色法 溴麝香草酚蓝（B· T· B）比色法 纸片法 Biocheck法（便携式分析仪）
三氯化铁比色法
[原理]
乙酰胆碱
碱性羟胺 胆碱酯酶
1. 乙酰胆碱标准曲线的绘制 2. 样品测定
1.乙酰胆碱标准曲线的绘制
（1）取六只具塞试管，配制乙酰胆碱标准色列
管号 乙酰胆碱标准应 用液（ml） 1 0 2 0.2 3 0.4 4 0.6 5 0.8 6 1.0
水（ml）
磷酸盐缓冲液 （ml）1110.81
0.6
1
0.4
1
0.2
1
0
乙酰胆碱含量 （μmol）
诊 断
《职业急性有机磷杀虫剂中毒诊断标准》(GBZ-2002) 职业史 现场职业卫生调查 临床症状体征 实验室检查——全血胆碱酯酶（ChE）活性
诊断分级标准
全血ChE活性范围
急性轻度中毒---50%-70%
急性中度中毒---30%-50%
急性重度中毒---30%以下
实验目的
加深对有机磷农药中毒机制的认识 掌握全血ChE活性测定的意义 掌握全血ChE活性测定原理、方法
全血胆碱酯酶活性测定
注意事项
• 本法检测限为2.4μmol/L，线性范围为2.4～ 1000.0μmol/L。 水冲洗干净后，再用蒸馏水洗三次， 干燥后备用。 • 取血时不应过度挤压耳垂，如果采血时过度挤 压耳垂，采得的血液中血清和组织液所占比例 过多，会使结果偏低。 • 加碱性羟胺和盐酸(1＋2)时，必须严格掌握振 摇时间，使其充分反应，否则会影响结果。
• 按式(2)计算酶活性的相对值：Y= Xs/ Xc
• 式中：Y—酶活性的相对值，%；
• Xs—被测血样中酶活性的绝对值， μmol(0.02mL·37℃· 30min)；
• Xc—正常人血中酶活性绝对值， μmol(0.02mL·37℃· 30min)。 Xc=1.60μmol(0.02mL·37℃· 30min)
四、采样、运输和保存
• 用血色素吸管，取耳垂血20μL，注入比色 管中(事先加入0.98mL磷酸盐缓冲液)，立 即进行测定。 • 如不能立即测定，可静脉取血0.5mL，注入 玻璃管中(含肝素或草酸钾抗凝剂)，混匀。 于保温瓶中加冰运送，置于4℃冰箱中可保 存一周。
五、分析步骤
管号 乙酰胆碱标准 应用液(ml) 磷酸盐缓冲液 乙酰胆碱含量 (umol) 0 0 1.0 0 1 0.1 0.9 0.35 2 0.2 0.8 0.7 3 0.3 0.7 1.05 4 0.4 0.6 1.4 5 0.5 0.5 1.75 样品 A 血 0.02 ml 0.98ml 对照 B 血 0.02 ml 0.98ml
水浴 37℃ 5 分钟 乙酰胆碱 0.5ml 37℃30 分钟 羟胺 2 ml 羟胺 2ml 振摇 3 分钟 乙酰胆碱 0.5 ml 37℃30 分钟
碱性羟胺 1：2 HCl 100g/L FeCl3
2 ml
全血胆碱酯酶活力值校正实验研究
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维普资讯
中 国 职 业 医学
２Ｏ Ｏ２年 ６月 第 ２ 卷 第 ３ ９ 期
Ｃ ｉ ｅｕ ｅ Ｊｎ ， Ｏ２ Ｖ １２ ， ｏ３ ｈｎＯ ｅ ｐＭ ｄ， ｕｅ ２Ｏ ， ｏ．９ Ｎ ．
・２ ・ ５
文章 编 号 ：００—６８ （０２ ０ —０ ２ １０ ４６ ２０ ）３ ０５—０ ２
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全血胆碱酯酶活性的测定
全⾎胆碱酯酶活性的测定全⾎胆碱酯酶活性的测定――羟胺三氯化铁法实验⽬的1. 掌握三氯化铁⽐⾊法的实验原理、分析步骤及酶测定的临床意义。
2. 了解常见全⾎胆碱酯酶活性测定⽅法的优缺点、注意事项。
3. 学会末梢⾎的采集。
实验原理⾎液胆碱酯酶使⼄酰胆碱分解为胆碱和⼄酸。
未被胆碱酯酶⽔解⽽剩余的⼄酰胆碱和碱性羟胺反应，形成红⾊羌酸铁络合物。
颜⾊深度与剩余⼄酰胆碱的量成正⽐。
在波长520nm ⽐⾊定量，由⽔解的⼄酰胆碱的量计算胆碱酯酶活性。
试剂和材料采样、运输和保存⽤⾎⾊素吸管，取指⾎20⼙L ,注⼊⽐⾊管中（事先加⼊0.98mL 磷酸盐缓冲液）, ⽴即进⾏测定。
实验步骤A 样品管+0.98mL 磷酸盐缓冲液+0.02mL 全⾎ ------- 却37C ⽔浴 5min ——> +1.0mL ⼄酰胆碱应⽤液 —— 37C ⽔浴30minB 对照管0.98mL 磷酸盐缓冲液+0.02mL 全⾎ +1.0mL ⽔ ----- > 37C ⽔浴 30minC 标准管1.0mL 磷酸盐缓冲液------ -> 37C ⽔浴5min ----------- > + 1.0mL ⼄酰胆碱应⽤液 ----- > 37C ⽔浴30minD 空⽩管1.0mL 磷酸盐缓冲液 ------- 37C ⽔浴 30min蒸馏⽔盐酸溶液（1 + 2）碱性羟胺溶液磷酸盐缓冲液（PH= 7.20）三氯化铁溶液分光光度计 10mL ⽐⾊管漏⽃恒温⽔浴箱，控温⼟ 05C 采⾎针头⾎⾊素吸管37C ⽔浴5min ——>37 C ⽔浴 5min ⼿+1.0mL ⽔⽔浴之后对A、B、C、D四个试管分别进⾏以下操作:1. 加⼊4.0mL碱性羟胺溶液，充分振摇2min；2. 加⼊2.0mL盐酸溶液，充分振摇2min ；3. 加⼊2.0mL三氯化铁溶液，充分振摇；4. 滤纸过滤，520nm⽐⾊。
实验结果表1-1 520nm波长下样品的吸光度样品编号A B C D吸光度0.2990.0030.5380.000结果计算①计算酶活性的绝对值3.149Y= 100=1971.60Y—酶活性的相对值，%;Xs—被测⾎样中酶活性的绝对值，⼙mol(0.02mL ? 37C?30min);Xc —正常⼈⾎中酶活性绝对值，⼙mol(0.02mL ? 37 C ? 30min)。
胆碱酯酶(CHE)测定操作规程
胆碱酯酶（CHE）测定操作规程一、用途本产品用于体外定量测定血清、血浆样品中胆碱脂酶（CHE）的活性。
二、临床意义（一）概述胆碱脂酶可以分为乙酰胆碱酯酶和假性胆碱酯酶，前类亦称真性胆碱酯酶，主要存在于胆碱神经末梢突触间隙。
乙酰胆碱酯酶可以在神经末梢、效应器接头或突触间隙等部位终止乙酰胆碱作用。
（二）临床意义1. 病理性升高：肾病综合征，甲状腺功能亢进，糖尿病，脂肪肝，原发性家族性高CHE血症，血清CHE变异，原发性肝癌等。
2. 病理性降低：重症肝炎，慢性肝炎活动型，肝硬化，肝脓肿，各种癌，低蛋白血症(营养不良，贫血，感染，皮肌炎，急性心肌梗死)，遗传性血清CHE异常症，有机磷中毒(轻度中毒降低30%，中度中毒降低50%，重度中毒降低70%)，溃疡性结肠炎，肾功能不全，天疱疮，烧伤等。
（三）检验原理胆碱酯酶催化S-碘化丁酰基硫代胆碱水解，生成丁酸与硫代胆碱，硫代胆碱与黄色的铁氰化钾[Fe(CN)6]3-反应后形成无色的[Fe(CN)6]4-，在405nm吸光度下降的速率与标本中胆碱酯酶活性成正比。
四、样品血液样品原则上采集晨起空腹血（禁食12小时）；患者处于平静、休息状态，减少患者由于运动、饮食带来的影响；静脉采血时患者应取坐位或卧位；止血带使用后1分钟内采血，回血后立即松开；正确使用抗凝剂；防止溶血；防止过失性采样。
样品运送过程中应防止过度振荡、防止样品容器的破损、防止样品被污染、防止样品及唯一性标志的丢失和混淆，防止样品对环境的污染、水分蒸发。
CHE测定样品为不溶血的血清、血浆（肝素抗凝）。
样品应在低温条件下运输并及时测定。
不能使用EDTA抗凝剂的标本。
五、试剂（一）试剂组成不同批号试剂中各组份不能互换。
（二）试剂准备R1和R2试剂为即用型液体试剂，开瓶装载即可使用，用后应及时冷藏保存。
（三）试剂的保存及稳定性1. 不能冰冻试剂。
2. 未开瓶的R1和R2试剂应在2～8℃密闭避光贮存，稳定期为瓶签标示的有效期。
全血胆碱酯酶活性的测定讲课讲稿
蒸馏水
盐酸溶液(1＋2)
碱性羟胺溶液
磷酸盐缓冲液(PH＝7.20)
三氯化铁溶液
氯化乙酰胆碱标准液
分光光度计
10mL比色管
漏斗
恒温水浴箱，控温±0.5℃
采血针头
血色素吸管
采样、运输和保存
用血色素吸管，取指血20μL，注入比色管中(事先加入0.98mL磷酸盐缓冲液)，立即进行测定。
实验步骤
A样品管+0.98mL磷酸盐缓冲液+0.02mL全血37℃水浴5min
C：以试剂空白为参比的在波长520nm处标准管的吸光度值。
②计算酶活性的相对值
Y= =197
Y—酶活性的相对值，%；
Xs—被测血样中酶活性的绝对值，μmol(0.02mL·37℃·30min)；
Xc—正常人血中酶活性绝对值，μmol(0.02mL·37℃·30min)。Xc=1.60μmol(0.02mL·37℃·30min)
吸光度0.299 0.003 0.538 0.000
结果计算
①计算酶活性的绝对值
带入得：Xs= =3.149μmol
Xs：水解乙酰胆碱的浓度，μmol(0.02mL·37℃·30min)；
A：以试剂空白为参比的在波长520nm处样品管的吸光度值；
B：以试剂空白为参比的在波长520nm Nhomakorabea对照管的吸光度值；
讨论
1.由于未在网上查到北京市居民胆碱酯酶活性的参考标准，遂以课件上浙江地区健康人胆碱酯酶活性绝对值作为参考。即：女：3.19±0.398μmol；因3.149μmol在3.19±0.398μmol的区间内，故该样本的胆碱酯酶活性属正常范围。
2.各组所测数值偏差较大，可能与操作差异如采血时间、振摇是否充分、加热时间等导致胆碱酯酶活性变化有关。
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全血胆碱酯酶活性的测定
——羟胺三氯化铁法
实验目的
1. 掌握三氯化铁比色法的实验原理、分析步骤及酶测定的临床意义。
2. 了解常见全血胆碱酯酶活性测定方法的优缺点、注意事项。
3. 学会末梢血的采集。
实验原理
血液胆碱酯酶使乙酰胆碱分解为胆碱和乙酸。
未被胆碱酯酶水解而剩余的乙酰胆碱和碱性羟胺反应，形成红色羌酸铁络合物。
颜色深度与剩余乙酰胆碱的量成正比。
在波长520nm比色定量，由水解的乙酰胆碱的量计算胆碱酯酶活性。
试剂和材料
蒸馏水
盐酸溶液(1＋2)
碱性羟胺溶液
磷酸盐缓冲液(PH＝7.20)三氯化铁溶液
氯化乙酰胆碱标准液分光光度计
10mL比色管
漏斗
恒温水浴箱，控温±0.5℃采血针头血色素吸管
采样、运输和保存
用血色素吸管，取指血20μL，注入比色管中(事先加入0.98mL磷酸盐缓冲液)，立即进行测定。
实验步骤
A 样品管+0.98mL 磷酸盐缓冲液+0.02mL全血 37℃水浴 5min +1.0mL乙酰胆碱应用液 37℃水浴 30min
B 对照管0.98mL磷酸盐缓冲液+0.02mL全血 37℃水浴 5min +1.0mL水 37℃水浴 30min
C 标准管 1.0mL 磷酸盐缓冲液 37℃水浴 5min +
1.0mL乙酰胆碱应用液 37℃水浴 30min
D 空白管1.0mL 磷酸盐缓冲液 37℃水浴 5min +1.0mL 水
37℃水浴 30min
水浴之后对A、B、C、D四个试管分别进行以下操作：
1.加入 4.0mL 碱性羟胺溶液，充分振摇 2min；
2.加入 2.0mL 盐酸溶液，充分振摇 2min ；
3.加入 2.0mL 三氯化铁溶液，充分振摇；
4.滤纸过滤，520nm 比色。
实验结果
表1-1 520nm 波长下样品的吸光度
样品编号 A B C D
吸光度 0.299 0.003 0.538 0.000
结果计算
①计算酶活性的绝对值
带入得： Xs=7538
.0299.0003.0538.0⨯-+=3.149μmol Xs ：水解乙酰胆碱的浓度，μmol(0.02mL ·37℃·30min)；
A ：以
试剂空白为参比的在波长520nm 处样品管的吸光度值；
B ：以试剂空白为参比的在波长520nm 处对照管的吸光度值；
C ：以试剂空白为参比的在波长520nm 处标准管的吸光度值。
②计算酶活性的相对值
Y=
10060
.1149.3 =197 Y —酶活性的相对值，%； Xs —被测血样中酶活性的绝对值，μmol(0.02mL ·37℃·30min)； Xc —正常人血中酶活性绝对值，μmol(0.02mL ·37℃·30min)。
Xc=1.60μmol(0.02mL ·37℃·30min)
讨论
1.由于未在网上查到北京市居民胆碱酯酶活性的参考标准，遂以课件上浙江地区健康人胆碱酯酶活性绝对值作为参考。
即：女：3.19 ± 0.398 μmol ；因3.149μmol 在3.19 ± 0.398 μmol 的区间内，故该样本的胆碱酯酶活性属正常范围。
2.各组所测数值偏差较大，可能与操作差异如采血时间、振摇是否充分、加热时间等导致胆碱酯酶活性变化有关。
3. 采血要迅速，防止凝固及氧化；振摇要充分，同时防止液体溅出；比色时有以D 管调零。
注意事项
1.采血前应准备好试管，提前加入磷酸盐缓冲液；
2.采血时严格消毒，用过的采血针放入利器筒中，棉签放入垃圾桶中，不可混放；
3.准确控制水浴的温度和时间，否则会影响实验结果；
4.加入三氯化铁显色后，20 min内比色。