三种基质测定血清胆碱酯酶活力的比较
胆碱酯酶干化学法3400_解释说明以及概述
胆碱酯酶干化学法3400 解释说明以及概述1. 引言部分内容：1.1 概述：胆碱酯酶干化学法3400是一种用于测定胆碱酯酶活性的方法。
胆碱酯酶是一类重要的生物催化剂，负责降解和转化神经递质乙酰胆碱。
该方法通过测定胆碱酯酶对底物的代谢速率，可以评估其在生理和病理过程中的作用。
胆碱酯酶干化学法3400具有简单、灵敏且高效的特点，已经得到了广泛的应用。
1.2 文章结构：本文将围绕胆碱酯酶干化学法3400展开介绍和阐述。
首先，在引言部分对该方法进行概述，并明确文章结构。
接下来，我们将详细解释和说明胆碱酯酶干化学法3400的定义、发展历程以及原理和机制。
随后，我们将重点讨论该方法的主要特点以及在医学领域和农业领域的应用情况。
在实验操作和结果分析部分，我们将介绍该方法的操作步骤、结果分析方法，以及对实验结果的讨论和推论。
最后，在结论部分，我们将总结胆碱酯酶干化学法3400的重要性和应用前景，并给出对未来研究的建议和展望。
1.3 目的：本文的目的是全面介绍和概述胆碱酯酶干化学法3400，包括在定义、发展历程、原理与机制、主要特点、应用领域以及实验操作和结果分析方面的内容。
通过对该方法的详细说明，旨在提供一个清晰而全面的胆碱酯酶干化学法3400知识框架，促进人们对该方法的理解与研究。
并且探索其在医学领域和农业领域中的更广泛应用，并为未来研究提供建议与展望。
2. 胆碱酯酶干化学法3400 解释说明2.1 胆碱酯酶干化学法3400的定义胆碱酯酶干化学法3400（acetylcholinesterase dry chemical method 3400）是一种常用的生物化学检测方法，用于测定体内的胆碱酯酶活性。
该方法基于胆碱和乙酰胆碱等底物在胆碱酯酶作用下水解生成乙酸和胆碱，反应产生的乙酸与对羟基苯甲开发出一定强度的颜色反应，可以通过比色反应来测量或计算出样品中的胆碱酯酶活性。
2.2 胆碱酯酶干化学法3400的发展历程胆碱酯酶干化学法3400是在传统湿化学方法基础上发展起来的一种快速、高效、简便且准确度较高的检测方法。
胆碱酯酶测定的一般临床意义
胆碱酯酶测定的一般临床意义一、简介胆碱酯酶(cholinesterase，ChE)是一类催化酰基胆碱水解的酶类，故又称为酰基胆碱水解酶。
人体内存在两种胆碱酯酶，一种是乙酰胆碱酯酶，又称“真性胆碱酯酶”或“特异性胆碱酯酶”，主要作用于乙酰胆碱，存在于红细胞及中枢神经系统的灰质中；另一种为血清胆碱酯酶，除可作用于乙酰胆碱外，还能作用于其他胆碱酯类，故又称“假性胆碱酯酶”或“非特异性胆碱酯酶”，此酶主要由肝脏产生。
血清胆碱酯酶是由肝脏合成后释放到血液中的非特异性脂酶，半衰期约为10d，较白蛋白半衰期21d短，因此，其能够敏感反应肝脏合成代谢功能，它的检测是评价肝细胞蛋白合成功能的灵敏指标。
有学者认为肝脏受损时肝细胞合成功能下降，血清胆碱酯酶的活性降低。
二、临床意义当肝细胞受损时，肝细胞变性坏死，间质炎性细胞浸润，纤维组织和结缔组织增生，导致血清白蛋白和胆碱酯酶合成减少。
和白蛋白相比较，胆碱酯酶半衰期短，且合成后立即释放入血，其活性降低程度与肝细胞受损程度相一致，肝病越严重，胆碱酯酶下降的幅度越大，甚至胆碱酯酶比白蛋白在反应肝脏合成功能方面还要灵敏。
肝硬化患者在输血或血浆蛋白治疗后，血清白蛋白浓度出现暂时升高或恢复正常，而胆碱酯酶则不受影响，如果出现胆碱酯酶持续下降，则预后不良，胆碱酯酶在反应肝硬化程度上是一个灵敏、稳定的指标。
胆碱酯酶是肝脏病变后惟一下降的酶。
由于血清胆碱酯酶由肝脏合成，故此酶活性降低常常反映肝脏受损。
胆碱酯酶活性降低的一般原因：1、急性病毒性乙肝：乙肝患者血清胆碱酯酶降低与病情严重程度有关，与黄疸程度不一定平行，若持续降低，常提示预后不良。
2、慢性乙肝：慢性迁延型乙肝患者此酶活力变化不大，慢性活动性乙肝患者此酶活力与急性乙肝患者相似。
3、肝硬化：若处于代偿期，血清胆碱酯酶多为正常，若处于失代偿期，则此酶活力明显下降。
4、亚急性重型乙肝：亚急性重型乙肝患者特别是肝昏迷患者，血清胆碱酯酶明显降低，且多呈持久性降低。
血清碱性磷酸酶活力测定
实验操作
1.取试管4支，按下表操作
测定管 血清（ml） 酚标准液 蒸馏水 pH10碳酸盐缓冲液 0.100 —— —— 1.00 标准管 —— 0.100 —— 1.00 空白管 —— —— 0.100 1.00 对照管 —— —— —— 1.00
混匀，37℃水浴保温5min，同时将底物预热
底物液
1.00
1.00
1.00
1.00
混匀，37℃水浴保护15min 铁氰化钾溶液 血清 3.00 —— 3.00 ——— 3.00 —— 3.00 0.100
2.立即混匀。在510nm波长处比色，以蒸馏水调零点，读取各 管吸光度。
计算 ALP活性=（A测定—A ）/（A —A ） *0.05*100(金氏单位）
酶的比活力：单位质量酶蛋白或单位体积酶制剂所含有酶 活力单位数，即酶活力浓度。 酶活力的测定方法 1.终止测定法（定时法或终点法） 2.动力学分析法（连续监测法或速率法）
实验目的
熟悉酶活性测定方法的一般原理 掌握血清ALP测定原理与临床意义
实验原理
碱性磷酸酶在碱性环境中作用于磷酸苯二钠，使 之水解生成酚和磷酸。酚在碱性溶液中与4-氨基 安替比林作用，经铁氰化钾氧化形成红色醌类化 合物，其颜色深浅与ALP活性成正比。
磷酸苯二钠+H2O
ALP 苯酚+磷酸氢二钠 pH=10 铁氰化钾
苯酚+4-氨基安替比林红色醌亚胺衍生物源自实验器材和试剂：
（一）器材： 5ml移液管，1ml移液管，100或200ul微量可调式移液器， 721E分光光度计，1cm比色皿，37℃ 恒温水浴 （二）试剂： 1．0.1mol/L碳酸盐缓冲液(pH10.0) 称取无水碳酸钠 6.36g，碳酸氢钠3.36g，4-氨基安替比林1.5g，溶于 800mL蒸馏水中，定容至1L。置棕色瓶中保存。 2．20mmol/L磷酸苯二钠溶液 先将500ml蒸馏水煮 沸，迅速加入磷酸苯二钠2.18g(磷酸苯二钠如含2分子结 晶水，则应称取2.54g) ，冷却后加氯仿2ml防腐，在4℃ 冰箱保存。（用剩的溶液不应再倒回瓶中） 3．铁氰化钾的硼酸溶液 称取铁氰化钾2.5g，硼酸17g， 各自溶于蒸馏水400ml中，两液混合后，加蒸馏水至1L， 置棕色瓶中避光保存(如出现蓝绿色即弃去)。 4．酚标准工作液（0. 05mg/ml）：购买合格的二级 标准品。
血清胆碱酯酶和碱性磷酸酶的测定及临床观察
血清胆碱酯酶和碱性磷酸酶的测定及临床观察摘要目的：胆碱酯酶（ChE）和碱性磷酸酶（ALP）的临床应用。
方法：运用速率法；使用雅培Abbott型全自动生化分析仪进行批量测定，并与正常对照组比较，结论是各种肝病、肝胆疾病、骨骼疾病患者血清中ChE和ALP活力分别有不同程度的下降和升高。
有助于分析各种肝病及肝胆疾病，骨骼疾病的分析及疗效的观察。
关键词胆碱酯酶碱性磷酸酶肝病肝胆疾病骨骼疾病胆碱酯酶（ChE）是存在于血清或血浆中的由肝细胞生成的水解酶，因而能反映出肝脏机能，在急慢性肝炎、肝硬化、低蛋白血症、肾病等情况下其活力下降，表明肝细胞合成酶的能力已受损。
人体碱性磷酸酶(ALP)主要存在于成骨细胞内。
本室通过美国雅培Abbott型全自动生化分析仪对50例正常人及203例不同肝病及骨骼疾病患者进行ChE和ALP活力的检测，各种肝病患者的血清中ChE 活力有不同程度下降，ALP活力有不同程度增高。
急性肝炎组ChE与正常对照组无明显差异，变化不大。
但肝硬化及肝癌组与正常对照组有明显差异，ChE活力明显下降可达3～5倍左右，而ALP活力不同程度增高，与正常对照组有差异，其ALP活力在肝癌阻塞性黄疸、骨骼疾病中增高较为明显。
所以ChE和ALP 活力指标检测对观察患者病情，判断疗效及预后有一定价值。
资料与方法一般资料：对照组50例，男28例，女22例，年龄26～65岁。
健康检查末发现心肝肾脏及内分泌疾病。
观查组203例，均选自我院住院及门诊就诊患者病例，急性肝炎52例，男32例，女20例，年龄26～66岁。
慢性迁延性肝炎25例，男19例，女6例，年龄25～71岁，慢性活动性肝炎40例，男28例，女12例，年龄27～65岁，肝硬化38例，男29例，女9例，年龄35～75岁，肝癌8例，男6例，女2例，年龄35～72岁，阻塞性黄疸10例，男6例，女4例，年龄35～60岁，骨骼疾病12例，男6例，女6例，年龄35～55岁，两组与性别年龄等方面均有可比性。
血清胆碱酯酶测定
血清胆碱酯酶测定1．检验目的：半定量检测血清中的胆碱酯酶的活力。
2．检验原理：3．方法学认可：4．标本要求：4．1. 标本：4．1．1 病人准备：无特殊要求。
最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。
4．1．2 类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。
4．2 标本存放：15～25℃保存可稳定2天；2～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！。
4．3标本运输：常温条件下避光保存运输。
4．4标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保存运输的标本。
5试剂和器材5．1仪器5．1．1离心机5．1．2恒温水浴箱5．2器材5．2．1试管（带盖）5．3试剂血清胆碱酯酶试纸（潍坊市康华生物技术有限公司）6．校准程序：7．操作步骤：7．1 将病人血液用3000转离心机进行离心分离血清。
7．2 将试纸浸入少量血清中，浸透（约1秒钟）后取出，在试管口揩去过量血清后放在试管中，并盖好试管口，置37℃水浴箱并开始记时。
7．3 11分30秒后所呈现的色泽与标准色版比较，即得胆碱酯酶活力单位7．4 如低于30单位的标本，欲求得较精确结果，可将孵育时间延长一倍，再观察结果。
7．5 如无水浴箱的情况下，根据实验室的温度查下表确定反应时间，达到反应时间立即比色。
8．干扰温度及时间对结果有影响，故应放在温度均匀处操作，并严格控制时间。
9．结果判定9．1检测时间到后立即将呈现的色泽与标准色版比较，即得胆碱酯酶活力单位。
活力单位75 60 45 30 15 0颜色卡延长一倍时间 38 30 23 15 8 09．2报告方式：XX活力单位10．参考区间30-80活力单位。
11．警告值：当检测的结果低于30活力单位时，提示有有机磷中毒的可能，应及时通知临床医生进行相应的措施，并作好登记。
12．医学解释12．1胆碱酯酶活力降低见于肝实质细胞损害性疾病，如重型肝炎，肝硬化。
12．2 胆碱酯酶活力降低见于有机磷中毒时。
血清胆碱酯酶
血清胆碱酯酶文章目录*一、血清胆碱酯酶的基本信息1. 定义2. 专科分类3. 检查分类4. 适用性别5. 是否空腹*二、血清胆碱酯酶的正常值和临床意义1. 正常值2. 临床意义*三、血清胆碱酯酶的检查过程及注意事项1. 检查过程2. 注意事项*四、血清胆碱酯酶的相关疾病和症状1. 相关疾病2. 相关症状*五、血清胆碱酯酶的不适宜人群和不良反应1. 不适宜人群2. 不良反应血清胆碱酯酶的基本信息1、定义血清胆碱酯酶是肝细胞合成的酶类之一,能够反映肝细胞合成的功能。
肝脏有问题时,肝细胞合成胆碱酯酶减少,血清中胆碱酯酶活性下降,由于血清胆碱酯酶半衰期短,所以它是肝内损害时一种极为敏感的指标,可反映肝细胞的合成功能,用于估计肝的储备功能和肝病的预后。
2、专科分类消化3、检查分类生化检查4、适用性别男女均适用5、是否空腹空腹血清胆碱酯酶的正常值和临床意义1、正常值酶速率法(37℃): 4300-10500U/L。
试纸法: 38-80U/ml。
比色法: 血清:130-310U/ml, 全血:8-120U/ml。
(注:具体参考值请根据各实验室而定。
)2、临床意义急、慢性肝炎时,血清胆碱酯酶降低程度往往与病情严重程度相一致,与黄疸程度不一定平行。
若血清胆碱酯酶活性持续降低,则提示预后不良。
肝硬化失代偿期,血清胆碱酯酶活性明显下降,肝性脑病时最为显着。
亚急性重症肝炎,特别是肝性脑病时,血清胆碱酯酶明显降低,且多呈持久性。
肝外胆管梗阻性黄疸,血清胆碱酯酶正常,伴有胆汁性肝硬化时则降低。
原发性肝癌时,血清胆碱酯酶活性取决于肝原来的情况和损害程度。
如伴有肝硬化或原有慢性活动性肝炎,酶活性常降低。
病理性升高:肾病综合征、甲状腺功能亢进、糖尿病、脂肪肝、原发性家族性高CHE血症、血清CHE变异、原发性肝癌等。
病理性降低:重症肝炎、慢性肝炎活动型、肝硬化、肝脓肿、各种癌、低蛋白血症(营养不良、贫血、感染、皮肌炎、急性心肌梗死)、遗传性血清CHE异常症、有机磷中毒(轻度中毒降低30%、中度中毒降低50%、重度中毒降低70%)、溃疡性结肠炎、肾功能不全、天疱疮、烧伤等。
胆碱酯酶活力测定的中毒标准
胆碱酯酶活力测定的中毒标准
胆碱酯酶（ChE）活力测定可以用于检测有机磷农药、神经毒剂等对胆碱酯酶的抑制作用，从而判断暴露者是否中毒。
根据WHO的建议，胆碱酯酶活力的下限可以作为暴露标准的参考。
下面是常用的胆碱酯酶活力参考值：
胆碱酯酶活力正常参考值：在25℃下，健康人血浆中胆碱酯酶活力的正常范围为3300~12,000 U/L。
有机磷农药中毒参考值：血浆中胆碱酯酶活力下降到正常值的30%以下，表示中毒程度较轻；下降到正常值的10%以下，表示中毒程度较重。
神经毒剂中毒参考值：血浆中胆碱酯酶活力下降到正常值的50%以下，表示中毒程度较轻；下降到正常值的20%以下，表示中毒程度较重。
需要注意的是，由于胆碱酯酶活力受多种因素影响，如个体差异、性别、年龄等，因此，这些参考值仅供参考，具体应根据实际情况进行判断。
同时，在实际应用中，还应结合其他检测方法和中毒症状进行综合分析。
血清胆碱酯酶的检测和临床应用
血清胆碱酯酶的检测和临床应用发表时间：2017-08-22T15:36:17.340Z 来源：《心理医生》2017年19期作者：莫竞华[导读] 胆碱酯酶的检测可作为多种临床常见疾病的监测与预后判断的指标，值得推广应用及后续的进一步研究。
（广西河池市第三人民医院广西河池 547000）【摘要】血清胆碱酯酶是临床生化检查中的一个常规项目，广泛应用于有机磷农药中毒、肝功能损害的诊断与预后观察。
近年来的研究表明，血清胆碱酯酶与许多临床疾病都有一定的相关性，如脑梗死、慢性阻塞性肺疾病、心力衰竭、感染、恶性肿瘤等。
本文就血清胆碱酯酶的变化与临床相关疾病的研究进展做一综述，为研究人员及临床医生对血清胆碱酯酶的认识提供新的思路。
【关键词】胆碱酯酶；临床应用【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2017）19-0098-02胆碱酯酶(Cholinesterase，ChE)是一类催化酰基胆碱水解的酶类。
对胆碱酯酶的研究早期主要集中在有机磷农药中毒和肝脏疾病方面，近年来血清胆碱酯酶在神经系统、呼吸系统、心血管系统、感染等方面的研究也取得了一定进展。
1.胆碱酯酶的生物学特性胆碱酯酶分为两种，一种为乙酰胆碱酯酶(AChE)，主要分布于神经组织，小部分分布于红细胞和血清等非神经组织中。
另一种为丁酰胆碱酯酶（PchE），大多数分布于肝、脑白质和血清中，对乙酰胆碱（ACh）的特异性较低，PchE能与有机磷毒剂或杀虫剂结合，并能水解许多酯类、肽类等化合物，参与某些药物的代谢过程。
血清中的胆碱酯酶主要来源于PChE，AChE含量极少。
2.胆碱酯酶的检测方法胆碱酯酶的检测，早期有放射化学测定法，灵敏度高，但因其放射性对人体的危害，不利于大范围推广；临床上也有用试纸法或干片法测定全血和血清中胆碱酯酶，但灵敏度和特异性均受到限制；后续又研发有乙酰胆碱酯酶(AChE)ELISA测定试剂盒，灵敏度和特异性均得到了提高，但因其操作繁琐且耗时较长，不利于大批量标本的检测及基层医院的开展。
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一类是真性胆碱酯酶(AChE EC.3.1.1.7),或胆碱酯酶Ⅰ。
它分布于红细胞和中枢神经系统的灰质内,支配肌细胞的交感神经节的运动神经终板。
此酶仅水解胆碱酯类,不水解芳基或烷基酯类。
另一类是拟胆碱酯酶(PChE EC.3.1.1.8)亦称胆碱酯酶Ⅱ,或特异性胆碱酯酶,分布于肝、血浆、肠粘膜和中枢神经系统的白质内。
乙酰胆碱酰基水解酶可分解胆碱酯类,还包括苯甲酰胆碱、丁酰胆碱和烷基酯类。
与其它酶活力增高反映病理改变的情况相反,血清胆碱酶测定的临床意义在于酶活力降低。
肝脏合成PChE,肝实质细胞损害时酶活力降低。
有机磷毒剂是两类胆碱酯酶的激烈抑制剂,测定血清胆碱酯酶与测定全血一样,是临床诊断有机磷农药中毒及予后评价重要手段[1]。
测定血清胆碱酯酶(SChE)活力的方法有多种,传统的pH法、羟胺比色法比较成熟。
近年出现了新方法,如:表面光伏传感器法[2]、膜电位分析法[3]、流动注射动力学光度法[4]等。
这些新方法都需要特殊设备,而且操作比较麻烦。
1990年以后,许多国外厂家SChE测定试剂盒的引入,应用Ellman’s试剂,使测定方法简化,而且可以很方便地使用生化分析仪测定血清胆碱酯酶活力。
据文献介绍用乙酰、丙酰、丁酰硫代胆碱的碘化物作基质均可测定SChE,但最好选用碘化丙酰硫代胆碱[5,6]。
但是,现国内外试剂厂家提供的测定SChE试剂盒均使用碘化丁酰硫代胆碱。
为此,我们应用乙酰、丙酰、丁酰三种硫代碘化物测定SChE,并对其结果进行了比较。
1 材料和方法1.1 材料来源 血清样本为健康人体检查,肝功能正常,H BS Ag阴性,年龄25-50岁,均为男性。
1.2 检测方法 COU LTER2Beckman CX9全自动生化分析仪测定胆碱酯酶活力,试剂均为SIG M A公司产品。
A.碘化乙酰硫代胆碱(Acethlthiochaline iodide)、B.碘化丙酰硫代胆碱(Propionylthiocholine iodide)、C.碘化丁酰硫代胆碱(S2Butyzylthiocholine iodide)、D.5, 5’2二硫代双(22硝基)苯甲酸(DT NB)参照资料[7]自配试剂,连续监测法进行测定。
1.3 统计学处理 所有数据用x—±s表示,组间差异应用t检验。
2 结果2.1 3种基质对同一分血清样品测定 结果见表1。
2.2 3种基质对不同病理样本的测定分别用A、B、C3种基质按上述条件对57例疾病患者测定SChE活力,结果见表2。
—94—Chin J Lab Diagn,April,2007,V ol11,N o.4表1 3种基质测定SChE活力的比较substrate n RANGE x—±s A30 3.26-6.15 4.6147±0.90693B30 1.14-5.968.5883±1.636933C30 1.09-5.858.3429±1.6719 3P<0.01:The serum cholinesterase activity dem onstrated statistics significant difference between the A and B,C;33P>0.05:The B and C make no difference.表2 3种疾病SChE活力测定的数值SChE Activity (ku/L)Hepatocirrhosis n=15Renalsyndrome n=18Diabetesn=24A 2.151±0.752 6.743±1.282 5.453±1.665B 3.154±1.3928.945±1.9637.524±1.842C 3.652±1.4519.457±2.2157.846±2.1133 讨论血清胆碱酯酶是一种肝脏合成酶,其血清活性取决于所有肝实质细胞的正常功能。
在健康人群有一较大的参考值范围。
由于SChE其半衰期短(约10天),较白蛋白15-19天短,可以从患者SChE活性过程的监测获得肝脏功能更多的信息[8]。
肝脏对白蛋白和SChE的合成是偶联的,与肝脏无关的原因引起的SChE改变时,血清白蛋白浓度不会出现相同的变化,所以SChE活力测定是一项诊断治疗肝脏疾病敏感而有价值的指标[9]。
在评价肝硬化病人SChE活性过程监测时,SChE持续下降提示病情恶化,升高则为病情改善或治疗有效的标志。
血清胆碱酶活力的测定可用于:①可疑肝实质受损,并有器官功能受损;②农药中毒及接触农药工人的监护;③评估病人对麻醉药琥珀酰胆碱的敏感性,为临床能否应用此类药物提供依据。
自Ellman’s试剂应用,使测定SChE的方法简化,并且可适用于全自动生化分析仪。
现许多医院已将其组合为肝功能项目之一。
由于其测定方法使用乙酰、丙酰、丁酰硫代胆碱的碘化物均可,加之各厂家的基质浓度的差别,参考值各不相同。
现国内厂家提供SChE试剂盒均以碘化丁酰硫代胆碱为基质。
我们应用三种基质测定SChE活力结果表明,三种基质均可应用,仅测定值有所不同,碘化乙酰硫代胆碱与碘化丁酰硫代胆碱有差别,碘化丁酰硫代胆碱与碘化丙酰硫代胆碱基本无差别,碘化乙酰硫代胆碱数值低,碘化丙酰硫代胆碱结果最高。
肝硬化、肾病综合症、糖尿病等病例(见表2)结果显示,由于数值不同,用碘化乙酰硫代胆碱测定结果低,用碘化丙酰硫代胆碱和碘化丁酰硫代胆碱测定结果高。
其中,用碘化丙酰硫代胆碱测定值最高。
这与健康组(表1)测定结果的变化一致。
SChE活力测定在临床除用于肝脏功能检测外还主要用于急诊检验有机磷农药中毒的诊断观察。
作者简介:谢萍(1961-),女,吉林长春人,博士研究生,高级工程师。
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