胆碱酯酶的测定
胆碱酯酶测定试剂盒(丁酰硫代胆碱底物法)标准化操作规程,SCHE-SOP
胆碱酯酶测定试剂盒(丁酰硫代胆碱底物法)标准化操作规程1 目的规范实验室操作，保证检验工作顺利有效进行特制定此规程。
2 授权操作人经培训且考核通过的临床检验人员。
3 适用范围本试剂用于体外定量检测人血清或血浆中胆碱酯酶的活力。
4 检验方法本试剂采用丁酰胆碱底物测定胆碱酯酶的活力。
5 检验原理样本中胆碱酯酶水解丁酰硫代胆碱生成硫代胆碱，硫代胆碱与二硫代双硝基苯甲酸反应生成黄色的硫代硝基苯甲酸，通过测定405nm处吸光度值的升高，可以计算出样本中胆碱酯酶的活力。
6 标本要求6.1 样本为血清或血浆。
及时离心分离样本，不得使用溶血或被污染的样本。
血浆样本可采用肝素或EDTA抗凝。
6.2 血清密闭贮存于2℃~8℃可稳定1周，经稀释后，在室温可稳定2小时。
7 试剂及配套品7.1试剂来源长春迪瑞医疗科技股份有限公司胆碱酯酶试剂盒（丁酰硫代胆碱底物）7.2含非反应性保护剂和稳定剂7.3试剂的稳定性与贮存：7.3.1 试剂在2℃~8℃条件下，干燥、避光、密封贮存，有效期为18个月。
7.3.2 试剂开封后在2℃~8℃条件下可稳定30天。
7.4试剂的变质指示：试剂混浊，或以纯水为空白，试剂在405nm处的吸光度大于0.800A（1.0cm光径）时，表明试剂已失效。
8 实验仪器及性能指标8.1 实验仪器迪瑞CS系列全自动生化分析仪8.2试剂性能指标8.2.1空白吸光度：A≤0.800。
8.2.2空白吸光度变化率：△A/min≤0.020。
8.2.3分析灵敏度：测试1U/L被测物时，吸光度变化率（△A/min）＞0.00005。
8.2.4 线性范围：50U/L～15000U/L；线性相关系数r≥0.9900；[50,2000] U/L 范围内，线性绝对偏差应不超过±500U/L；（2000,15000] U/L范围内，相对偏差不超过±15％。
8.2.5 准确度：80%≤回收率≤120%。
8.2.6 测量精密度重复性：CV≤5.0%。
胆碱酯酶CHE测定
胆碱酯酶CHE测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确2 原理碳化丁酰胆碱+H2O 胆碱酯酶硫代胆碱+丁酸硫代胆碱+亚铁氰化钾 (Ⅲ) 亚铁氰化钾（II）+胆碱胆碱酯酶催化水解硫代胆碱和碳化丁酰胆碱。
硫代胆碱与黄色亚铁氰化钾（III）反映生成无色的亚铁氰化钾（II），这种颜色的减少可以在405和415纳米之间测得。
3 标本要求3.1使用新鲜血清,不使用血浆.3.2在采集血液后2h分离血清.3.3 8h内不能及时测定血清可存放于2—80C冰箱保存,3天后测定的血清置-150C―-200C 冰冻保存,但冰冻血清只能复融一次.3.4严重溶血或脂血的标本不能作测定.4 试剂4.1 试剂：上海罗氏诊断产品有限公司CHE试剂盒,国械注进20142405056YZB/GER 5724-2014）4.1.1试剂盒组成如下:R1 焦磷酸缓冲液:92 mmol/L,pH 7.7；亚铁氰化钾（III）：2.4 mmol/L。
R2 GOOD缓冲液：10 mmol/L，pH 4.0；碳化丁酰胆碱：46 mmol/L；稳定剂4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：2-8°C下保存期限：见试剂标签上的有效期；机上稳定期：4周4.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染则试剂不能使用。
4.2 校准品：使用罗氏多项生化校准品提供的CHE校准品对自动分析仪进行校准。
4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。
5 仪器AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪6 操作步骤6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。
6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。
6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。
6,胆碱酯酶活性测定
实习三有机磷经皮染毒对全血胆碱酯酶活性的影响（一）目的和意义1、学习经皮染毒技术，掌握急性经皮毒性试验的方法。
2、观察有机磷经皮肤吸收后对机体的急性毒性作用。
3、掌握全血胆碱酯酶活性的测定方法及原理。
（二）仪器1．解剖剪刀、弯剪、镊子、灌胃针。
2．恒温水箱(37±0.5℃)。
3．离心机。
4．分光光度计，10mm比色皿。
5．血红蛋白吸管（20μl）；刻度吸管（5.0ml，2.0ml，1.0ml）；离心管（10ml）；容量瓶（10ml，100ml）；试管（10ml）、烧杯等。
（三）试剂1．受试物：有机磷（由指导教师自定）；溶剂，根据受试物的理化性质选定。
2．磷酸盐缓冲液(1/15m mol/L，pH7.40)：称取9.07g无水磷酸二氢钾(KH2PO4)，用水溶解并稀释至1000mL(甲液)；称取23.87g磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)，用水溶解并稀释至1000mL(乙液)。
取甲液19.2mL与乙液80.8mL混合即得。
3．生理盐水：氯化钠8.5g/L。
4．硫代乙酰胆碱(ASCh)：称取72.3mg ASCh(生物试剂)溶于生理盐水中，并稀释到10mL；置冰箱中保存，临用时以生理盐水稀释10倍。
5．5，5′－联硫代－双－2－硝基苯甲酸(DTNB)溶液：称取19.8mg DTNB，滴加磷酸盐缓冲液(4.2)，搅拌，直至完全溶解，溶液透明(大约加2mL)，再用生理盐水(4.3)稀释至10mL，置冰箱中保存，临用时以生理盐水稀释10倍。
出现黄色即弃用。
6．抑制剂毒扁豆碱：取1mg左右柳酸毒扁豆碱，溶于0.5mL生理盐水(4.3)，临用时配制，严防污染其他试剂及器材。
7．1m mol/L谷胱甘肽标准溶液：精确称取3.07mg还原型谷胱甘肽用水溶解，移入10mL容量瓶中，稀释至刻度。
此液1mL相当于1μmol谷胱甘肽。
因其易被氧化，应于用时配制，水必须先经煮沸去氧冷却后使用。
（四）实验步骤1．实验动物的选择实验动物可选择健康豚鼠或家兔，也可用大鼠。
胆碱酯酶活性测定试纸干化学法使用说明书
胆碱酯酶活性测定试纸（干化学法）使用说明书【产品名称】通用名：胆碱酯酶活性测定试纸（干化学法）【包装规格】1人份/袋、10-100袋/盒；25人份/筒、50人份/筒、1-20筒/盒。
【预期用途】用于体外定性检测人血清、血浆中胆碱酯酶活性。
【检验原理】胆碱酯酶催化水解乙酰胆碱（Ach）生成乙酸和胆碱，乙酸能使指示剂溴百里香酚蓝（BTB）发生颜色变化，通过颜色的改变反映生成乙酸的量，乙酸量的多少即可表示酶活力的高低；反应结果可与胆碱酯酶活性测定比色表直接进行比色测定。
【主要组成成份】本产品系由20%乙酰胆碱(Ach)、3%溴百里香酚蓝等试剂固定在通过双面胶粘贴有中速滤纸的PVC板上，干燥后裁切成胆碱酯酶活性测定试纸。
【储存条件及有效期】在2-30℃干燥、阴凉、无酸碱腐蚀的条件下密封保存，有效期二年。
试纸开封铝箔袋后在无酸碱腐蚀的条件下可保存3小时，有酸碱腐蚀的条件下开封即用。
【样本要求】1、在无菌条件下采集静脉血样本，尽快分离血清或血浆以避免溶血。
2、检测时应使用新鲜标本。
3、常规抗凝剂不影响检测结果。
【检验方法】在进行测试前必须先完整阅读使用说明书。
1、取测定试纸一片，放在培养皿中，向反应纸片中央加上8～10μl待测新鲜血清或血浆，盖上培养皿盖保持密封（保持一定的湿度以防血清蒸发，同时防外界酸碱影响），放置37℃水浴箱中并开始记时。
2、11分30秒后取出，所呈现色泽与胆碱酯酶活力比色表(见图一)比较，即得胆碱酯酶活力单位。
3、如无水浴箱，根据测定时室温，查附表确定反应所需时间，在到达反应所需时间后立即比色。
4、正常值30-80单位，如低于30单位的标本，欲求得较精确的结果，可将时间延长一倍，再观察结果。
附表：20～40℃内反应终点时间表温度(℃) 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 时间22′15″21′19′45″18′45″17′45″16′45″16′15″15′45″15′15″14′45″14′15″温度(℃) 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40时间14′13′30″13′12′30″12′15″12′11′30″11′15″10′45″10′30″【检验结果的解释】阳性：胆碱酯酶活力单位小于30。
全血胆碱酯酶活性测定
注意事项
• 本法检测限为2.4μmol/L，线性范围为2.4～ 1000.0μmol/L。 水冲洗干净后，再用蒸馏水洗三次， 干燥后备用。 • 取血时不应过度挤压耳垂，如果采血时过度挤 压耳垂，采得的血液中血清和组织液所占比例 过多，会使结果偏低。 • 加碱性羟胺和盐酸(1＋2)时，必须严格掌握振 摇时间，使其充分反应，否则会影响结果。
• 按式(2)计算酶活性的相对值：Y= Xs/ Xc
• 式中：Y—酶活性的相对值，%；
• Xs—被测血样中酶活性的绝对值， μmol(0.02mL·37℃· 30min)；
• Xc—正常人血中酶活性绝对值， μmol(0.02mL·37℃· 30min)。 Xc=1.60μmol(0.02mL·37℃· 30min)
四、采样、运输和保存
• 用血色素吸管，取耳垂血20μL，注入比色 管中(事先加入0.98mL磷酸盐缓冲液)，立 即进行测定。 • 如不能立即测定，可静脉取血0.5mL，注入 玻璃管中(含肝素或草酸钾抗凝剂)，混匀。 于保温瓶中加冰运送，置于4℃冰箱中可保 存一周。
五、分析步骤
管号 乙酰胆碱标准 应用液(ml) 磷酸盐缓冲液 乙酰胆碱含量 (umol) 0 0 1.0 0 1 0.1 0.9 0.35 2 0.2 0.8 0.7 3 0.3 0.7 1.05 4 0.4 0.6 1.4 5 0.5 0.5 1.75 样品 A 血 0.02 ml 0.98ml 对照 B 血 0.02 ml 0.98ml
水浴 37℃ 5 分钟 乙酰胆碱 0.5ml 37℃30 分钟 羟胺 2 ml 羟胺 2ml 振摇 3 分钟 乙酰胆碱 0.5 ml 37℃30 分钟
碱性羟胺 1：2 HCl 100g/L FeCl3
2 ml
血清胆碱酯酶的检测和临床应用
血清胆碱酯酶的检测和临床应用摘要】血清胆碱酯酶是临床生化检查中的一个常规项目，广泛应用于有机磷农药中毒、肝功能损害的诊断与预后观察。
近年来的研究表明，血清胆碱酯酶与许多临床疾病都有一定的相关性，如脑梗死、慢性阻塞性肺疾病、心力衰竭、感染、恶性肿瘤等。
本文就血清胆碱酯酶的变化与临床相关疾病的研究进展做一综述，为研究人员及临床医生对血清胆碱酯酶的认识提供新的思路。
【关键词】胆碱酯酶；临床应用【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2017）19-0098-02胆碱酯酶(Cholinesterase，ChE)是一类催化酰基胆碱水解的酶类。
对胆碱酯酶的研究早期主要集中在有机磷农药中毒和肝脏疾病方面，近年来血清胆碱酯酶在神经系统、呼吸系统、心血管系统、感染等方面的研究也取得了一定进展。
1.胆碱酯酶的生物学特性胆碱酯酶分为两种，一种为乙酰胆碱酯酶(AChE)，主要分布于神经组织，小部分分布于红细胞和血清等非神经组织中。
另一种为丁酰胆碱酯酶（PchE），大多数分布于肝、脑白质和血清中，对乙酰胆碱（ACh）的特异性较低，PchE能与有机磷毒剂或杀虫剂结合，并能水解许多酯类、肽类等化合物，参与某些药物的代谢过程。
血清中的胆碱酯酶主要来源于PChE，AChE含量极少。
2.胆碱酯酶的检测方法胆碱酯酶的检测，早期有放射化学测定法，灵敏度高，但因其放射性对人体的危害，不利于大范围推广；临床上也有用试纸法或干片法测定全血和血清中胆碱酯酶，但灵敏度和特异性均受到限制；后续又研发有乙酰胆碱酯酶(AChE)ELISA测定试剂盒，灵敏度和特异性均得到了提高，但因其操作繁琐且耗时较长，不利于大批量标本的检测及基层医院的开展。
目前胆碱酯酶的检测主要是采用羟戊酸铁比色法和改良的Ellman法，反应时间短，且可以在全自动生化分析仪上检测，保证了检测的时效性和结果的准确性。
3.胆碱酯酶的临床应用3.1 胆碱酯酶与有机磷农药中毒有机磷农药是目前被广泛应用的农药，也引起了目前临床上最常见的农药中毒。
胆碱酯酶测定方法
胆碱酯酶测定方法
胆碱酯酶测定方法一般分为以下几种：
1.电化学法：该方法利用电化学传感器测定胆碱酯酶在体外水溶液中所釋放出的胆碱量。
2.比色法：该方法使用乙酰胆碱（ACh）作为底物，使其在胆碱酯酶作用下分解为胆碱和乙酸。
其中生成的乙酸与酶促色反应物（Ellman's reagent）发生反应，并生成黄色的苯硫酚盐（thioamato compounds），在一定波长下可测定其吸光度。
3.放射性测定法：该方法使用放射性标记的底物，如3H-ACh或14C-ACh作为标记，使其在胆碱酯酶的作用下分解，再通过放射计测量放射性底物和产生的放射性胆碱数目的差别，得出胆碱酯酶的活性。
4.光学测定法：该方法利用胆碱酯酶和重组胆碱酯酶能够在基质中催化反应，并通过检测基质中的光学旋光度或发光度来测定胆碱酯酶的活性。
总之，胆碱酯酶测定方法根据测量原理和技术手段的不同，应用范围和测量精度也会有所区别。
具体选择何种方法应根据实际需要和实验条件来选择。
血清胆碱酯酶测定
血清胆碱酯酶测定1．检验目的：半定量检测血清中的胆碱酯酶的活力。
2．检验原理：3．方法学认可：4．标本要求：4．1. 标本：4．1．1 病人准备：无特殊要求。
最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。
4．1．2 类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。
4．2 标本存放：15～25℃保存可稳定2天；2～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！。
4．3标本运输：常温条件下避光保存运输。
4．4标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保存运输的标本。
5试剂和器材5．1仪器5．1．1离心机5．1．2恒温水浴箱5．2器材5．2．1试管（带盖）5．3试剂血清胆碱酯酶试纸（潍坊市康华生物技术有限公司）6．校准程序：7．操作步骤：7．1 将病人血液用3000转离心机进行离心分离血清。
7．2 将试纸浸入少量血清中，浸透（约1秒钟）后取出，在试管口揩去过量血清后放在试管中，并盖好试管口，置37℃水浴箱并开始记时。
7．3 11分30秒后所呈现的色泽与标准色版比较，即得胆碱酯酶活力单位7．4 如低于30单位的标本，欲求得较精确结果，可将孵育时间延长一倍，再观察结果。
7．5 如无水浴箱的情况下，根据实验室的温度查下表确定反应时间，达到反应时间立即比色。
8．干扰温度及时间对结果有影响，故应放在温度均匀处操作，并严格控制时间。
9．结果判定9．1检测时间到后立即将呈现的色泽与标准色版比较，即得胆碱酯酶活力单位。
活力单位75 60 45 30 15 0颜色卡延长一倍时间 38 30 23 15 8 09．2报告方式：XX活力单位10．参考区间30-80活力单位。
11．警告值：当检测的结果低于30活力单位时，提示有有机磷中毒的可能，应及时通知临床医生进行相应的措施，并作好登记。
12．医学解释12．1胆碱酯酶活力降低见于肝实质细胞损害性疾病，如重型肝炎，肝硬化。
12．2 胆碱酯酶活力降低见于有机磷中毒时。
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胆碱酯酶（CHE）的测定
一、原理：血清及组织中CHE使乙酰胆碱水解成胆碱和乙酸，未被水解的剩余乙酰胆碱与羟胺作用生成乙酰羟胺，再与铁离子在酸性溶液中形成棕色复合物，根据颜色深浅推算出酶的活力。
二、试剂：
1、试剂一：溶液60ml×1瓶，室温保存。
2、试剂二：乙酰胆碱粉剂×1支，-20℃保存，稀释液5ml×1瓶，4℃保存。
80μmol/ml 乙酰胆碱底物贮备液的配制：将一支乙酰胆碱碱粉剂倒入5ml稀释液中即成，4℃。
8μmol/ml 乙酰胆碱应用液的配制：贮备液：试剂=1：9稀释。
3、试剂三：甲粉剂×1支；乙液30ml×1瓶；丙液30ml×1瓶；室温保存。
试剂三应用液的配制：每次测试前将甲粉倒入乙液中，充分摇匀，根据需要量将甲乙混合液与丙液等量混合，充分混匀，配成试剂三应用液，现用现配。
4、试剂四：溶液30ml×1瓶，室温保存。
5、试剂五：溶液20ml×1瓶，室温保存。
6、试剂六：粉剂×1瓶，稀释液30ml×1瓶，测试前将稀释液倒入粉剂中，充分混匀，避光
4℃冷藏。
测各管吸光度值。
四、计算：
1、定义：血清中CHE的计算：每毫升血清在37℃和底物作用20分钟，分解1μmol乙酰胆
碱为1个活力单位。
2、计算公式：
血清中CHE活力。