560484人TH1TH2TH17细胞因子CBA分析试剂盒原理及方法
麻风病患者外周血中Th1,Th2及Th17相关细胞因子检测分析
附表
料， Ｐ ＜ ０ ． ０ ５表示差异具有统计学意义 。 试 验组 血清 细胞 因子 Ｉ Ｌ 一 ２ 、 Ｉ Ｌ 一 ４ 、 Ｉ Ｌ 一 ６ 、 Ｉ Ｌ 一 １ ０ 、 Ｔ Ｎ Ｆ 、 Ｉ Ｆ Ｎ 一 、 Ｉ Ｌ 一 １ ７水 平 与 对 照 组 比较 ， 差 异 有 统 计 学 意 义 ｆ Ｐ ＜ ０ ． ０ ５ ） 。见 附表 。
关键 词 ： 麻风病 ； 外周血 ； 相关 细胞 因子 ； 检测分析 中图分类号 ： Ｒ ７ ５ ５ 文献标识码 ： Ｂ 文章编号 ： １ ０ ０ １ — ８ １ ７ ４ （ ２ ０ １ ５ ） １ ３ — ３ ０ ６ ２ — ０ １
麻风病是 一种慢性传 染病 ， 主要 由麻风分枝杆 菌引起 ， 表 现为皮损 、 浅感觉 障碍 、 闭汗。麻风病严 重影响患者 的生
样本分析工作 ， 并借助 Ｃ ｅ ｌ ｌ Ｑ ｕ ｅ ｓ ｔ 软件收集相关数据 ， 最后应
用Ｂ Ｄ Ｃ Ｂ Ａ软件进行结果 的运算 。 １ ． ３ 统 计学处 理
２ 结 果
患者中的检测价值 ， 报告如下 。
１ 资料 和方 法
１ ． １ 一 般资料
收集 ２ ０ １ ２年 ６月～ ２ ０ １ ４年 １ ０月 我 院 皮
Ｉ ． ２ 方法
试验组 于 系统治疗 前 、 病情稳 定时进 行外周 血
相关细胞因子检测 ， 准备并调整流式细胞仪 ， 设定各项参数 ， 按 照梯 度法 将试 剂盒 内的 细胞 因子稀 释为 １ ： ｉ ， ｉ ： ２ ， Ｉ ： ４ ，
Ｉ ： ８ ， Ｉ ： １ ６ ， Ｉ ： ３ ２ ， Ｉ ： ６ ４ ， Ｉ ： １ ２ ８ ， １ ： ２ ５ ６九 种 浓 度 。 将 ５ ０ ｍ ｌ
细胞因子检测试剂盒的原理及操作流程解析
细胞因子检测试剂盒的原理及操作流程解析细胞因子检测试剂盒是一种用于检测细胞因子水平的重要工具，它可以帮助科研人员了解细胞因子在生物体内的表达水平和功能。
本文将为您解析细胞因子检测试剂盒的原理和操作流程，以帮助您更好地理解和应用该检测方法。
一、细胞因子检测试剂盒的原理细胞因子是细胞间相互作用的信号分子，它们在生物体内起着重要的调节和传递功能。
细胞因子的异常表达与多种疾病的发生和进展密切相关，因此检测细胞因子的水平对于研究疾病的机制和评估治疗的疗效具有重要意义。
细胞因子检测试剂盒一般基于酶联免疫吸附测定法（ELISA）或流式细胞术（FACS）原理进行检测。
以ELISA为例，其原理如下：1. 抗原夹心法：将目标细胞因子捕获抗体固定在微孔板上，样品中的细胞因子与固相抗体发生特异性结合。
经过洗涤去除非特异性结合的物质。
2. 二抗法：加入与目标细胞因子结合的二抗，例如HRP（辣根过氧化物酶）标记的兔抗小鼠IgG。
3. 三抗法：加入HRP底物，例如TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺），与HRP酶发生反应，生成蓝色物质。
4. 加入终止剂：添加硫酸或其他酸性溶液终止反应，产生黄色终止产物。
基于这一原理，通过测定产生的蓝色或黄色产物的光吸光度或荧光信号，可以间接测定细胞因子的含量。
二、细胞因子检测试剂盒的操作流程操作细胞因子检测试剂盒需要按照特定的步骤进行，下面将介绍一般的操作流程：1. 准备样品：根据检测需要，准备待测样品，可以是细胞培养上清液、血清、血浆等。
样品的收集、保存等步骤要符合规范和实验要求。
2. 样品处理：根据检测要求，对样品进行必要的处理，如离心、稀释等。
注意避免样品的冻融循环，以免影响检测结果。
3. 制备标准品：根据检测试剂盒的要求，制备一系列已知浓度的标准品，用于绘制标准曲线。
4. 实验操作：将标准品、样品和空白对照依次加入已经被固定抗体的微孔板中，充分混合后覆盖反应盖板，进行孵育。
细胞因子检测试剂盒的原理与应用
细胞因子检测试剂盒的原理与应用细胞因子是一类可溶性蛋白质分子，能够调节和调控细胞间的通讯，参与调节免疫反应和炎症反应等生理过程。
细胞因子在细胞生物学研究和临床试验中具有重要作用。
细胞因子检测试剂盒是一种常用的实验工具，用于检测和量化细胞因子的含量和活性。
下面将从原理和应用两个方面介绍细胞因子检测试剂盒。
一、细胞因子检测试剂盒的原理细胞因子检测试剂盒的原理主要分为几个步骤：细胞培养、处理样本、荧光标记以及检测。
首先，细胞培养是细胞因子检测试剂盒的基础，可以使用细胞培养技术获得大量的细胞。
不同的细胞因子需要不同的细胞系进行检测。
其次，在处理样本的过程中，需要对样本进行预处理，以提取细胞因子并去除杂质。
对于细胞培养上清液或组织样本，可以通过离心等操作去除细胞和细胞碎片。
对于血液样本，可以通过离心或其他方法去除红细胞和凝块。
然后，荧光标记是细胞因子检测试剂盒中非常重要的一步。
荧光标记可以使用特异性的抗体或荧光染料。
抗体可以与细胞因子发生特异性结合，并用荧光染料进行标记。
荧光标记后的细胞因子可用于检测和定量。
最后，检测是细胞因子检测试剂盒的最后一步。
常用的检测方法有酶联免疫吸附实验（ELISA）、流式细胞术以及生物成像等。
ELISA是一种将细胞因子与特异性抗体结合测定的方法，具有灵敏度高、特异性好等特点。
流式细胞术可用于分析单个细胞的细胞因子含量和产生细胞因子的细胞类型。
生物成像可以通过引入荧光染料或放射性示踪剂进行成像，实现对细胞因子的可视化定量。
二、细胞因子检测试剂盒的应用细胞因子检测试剂盒在许多生物领域有广泛的应用，包括免疫学、癌症研究、炎症反应、药物开发等。
在免疫学研究中，细胞因子检测试剂盒可用于定量分析和表征不同细胞因子的生物学功能。
通过测定细胞因子的含量和活性，可以了解免疫细胞之间的相互作用和调节机制。
同时，在疫苗研究和免疫治疗中，细胞因子检测试剂盒也起到了重要的作用。
通过定量细胞因子的表达水平和作用机制，可以评估和优化免疫治疗的效果。
人酪氨酸羟化酶(TH)酶联免疫分析. 试剂盒使用说明书
人酪氨酸羟化酶（TH）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围：0.78ng/ml-50ng/ml最低检测限：0.195ng/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人TH，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中TH含量。
说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗TH抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗TH抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的TH呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板（Assay plate）：一块（96孔）。
2.标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。
3.样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）8.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9.浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
常用的细胞因子检测试剂盒及其特点
常用的细胞因子检测试剂盒及其特点细胞因子检测是研究细胞间相互作用和通信的重要手段。
细胞因子是一类由多种细胞分泌的蛋白质，它们在细胞间传递信息、调节免疫应答、细胞增殖和分化等生物学过程中发挥着重要的作用。
为了准确、方便地检测细胞因子的表达水平和功能，研究人员广泛使用细胞因子检测试剂盒。
下面我将介绍一些常用的细胞因子检测试剂盒及其特点。
1. ELISA检测试剂盒：ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的细胞因子检测方法。
ELISA检测试剂盒可以快速、准确地检测细胞因子的水平。
这种检测方法基于酶标记的抗体与待测细胞因子结合，通过颜色反应指示细胞因子的含量。
ELISA检测试剂盒操作简单、灵敏度高，适用于大规模筛选或快速筛选细胞因子。
2. 蛋白芯片：蛋白芯片是一种高通量的细胞因子检测技术。
它将多种细胞因子蛋白质固定在芯片上，待测样品中的细胞因子与芯片上的蛋白质相互作用并形成信号，通过扫描仪或荧光显微镜等设备读取信号强度。
蛋白芯片具有高通量、高灵敏度、多样化和自动化等特点，适用于同时检测多个细胞因子的表达水平。
3. 流式细胞术：流式细胞术是一种利用流式细胞仪检测细胞因子的方法。
流式细胞术通过将待测样品细胞与荧光染料标记的抗体一起流经流式细胞仪，测量细胞因子的表达水平。
它具有高通量、多参数、高灵敏度和快速等特点，适用于单细胞水平的细胞因子检测。
4. PCR检测试剂盒：PCR（聚合酶链反应）是一种用于扩增DNA序列的技术，也可以应用于细胞因子检测。
PCR检测试剂盒通过引物特异性扩增目标序列，在荧光信号和GAPDH 校正的基础上计算细胞因子的表达量。
这种检测方法灵敏度高，适用于低表达细胞因子的检测。
5. 生物传感器：生物传感器是一种利用生物分子识别和信号传导机制检测细胞因子的方法。
生物传感器可以将待测细胞因子转化为电子信号、光信号或质子信号等，通过检测传感器输出信号来测量细胞因子的表达水平。
生物传感器具有高灵敏度、高特异性和实时监测等特点。
细胞因子的检测与应用CBA
a
5
流式细胞术流程
样本收集及处理 制备单细胞悬液
免疫荧光染色
上机检测
数据分析
a
6
流式细胞术检测样本
可检测的样本种类多样
各种细胞（如外周血，骨髓，细针穿刺，灌洗液，实体组 织，悬浮或贴壁培养的细胞），微生物，人工合成微球等
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7
流式细胞仪的检测范围
细胞结构
• 细胞大小 • 细胞颗粒度 • 细胞表面积 • 核浆比例 • DNA含量与细胞周
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36
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CBA应用相关中文文献
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CBA特点
• 液相中反应，同时检测多种蛋白 • 操作简单(标本制备和上机检测），省时省力 • 微量样本(5-50ul) • 灵敏度2.8pg/ml • 所有分析只需一组标准曲线 • 避免酶联反应信号放大带来的假阳性 • 更好的线性度和更宽的检测范围(5000pg/ml) • 流式细胞仪和CBA软件自动分析
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传统的ELISA与CBA相比
ELISA
单一 样本量体积大
CBA
多元和同步 Elisa样本体积的1/6
灵敏度低，稳定性差
灵敏度高，稳定性好
每个蛋白分别检测，样本浓度 芯片式集成测定，所需样本浓度低
高，时间长，效率低 酶联放大效应，结果易失真
缩短时间，提高效率 流式荧光定量检测，避免假阳性
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F L -3H o r -NAI R
BD CBA Flex Set
1 2 3 4 56 78 9
A B C D E F G H I
F L4-H or R ed-A
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CBA Flex Set的分析软件 － FCAP Array Software
细胞因子检测中常用的试剂盒及其原理
细胞因子检测中常用的试剂盒及其原理细胞因子检测是研究生物体内细胞间相互作用以及免疫和炎症反应的重要工具。
试剂盒是细胞因子检测中常用的实验工具，通过检测细胞因子的表达水平，可以了解细胞因子在机体免疫调节、疾病发展以及治疗效果等方面的作用。
本文将介绍几种常用的细胞因子检测试剂盒及其原理。
1. ELISA试剂盒ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种常用的细胞因子检测方法，其原理是利用酶标记的抗体与待测细胞因子结合，通过底物反应等方法来测定细胞因子的浓度。
ELISA试剂盒一般包括固相酶标板、抗体、酶标记抗体、底物等多个组分。
首先，在固相酶标板上固定特异性的抗体，然后加入待测样品和酶标记抗体，待测样品中的细胞因子与抗体结合形成免疫复合体。
随后，通过底物反应产生荧光或色素等信号，测定底物反应的光强度或吸光度，从而确定细胞因子的浓度。
2. PCR试剂盒PCR（Polymerase Chain Reaction）是一种用于扩增DNA片段的技术，也常用于细胞因子的检测。
PCR试剂盒包括DNA聚合酶、引物、模板DNA等多个组分。
PCR试剂盒的原理是在适当的温度条件下，利用DNA聚合酶酶活性，引物定向结合至待扩增的DNA片段，然后进行反复的变温扩增，分别进行DNA的变性、引物的结合和DNA片段的合成等步骤，最终扩增得到相应数量的特定DNA片段。
通过测定PCR产物的数量，可以推断细胞因子的表达水平。
3. 流式细胞术试剂盒流式细胞术是一种广泛应用于细胞因子检测的方法，也称为流式细胞仪。
流式细胞术试剂盒包括荧光染色剂、抗体等。
流式细胞术试剂盒的原理是将待测样品进行细胞标记，通常使用荧光染色剂标记细胞表面的某些蛋白，或者使用特异性的抗体标记细胞表面的特定细胞因子。
然后，通过流式细胞仪检测细胞标记的荧光强度或颜色，以及细胞数量，通过对流式细胞仪所得数据的分析，可得出细胞因子的表达水平。
细胞因子检测试剂盒的原理及实验操作流程
细胞因子检测试剂盒的原理及实验操作流程细胞因子检测试剂盒是一种用于检测细胞因子水平的实验试剂盒。
细胞因子是一类具有调节和介导免疫、炎症和细胞增殖等生物学功能的蛋白质分子，它们在机体免疫应答、疾病发展以及药物研究等领域具有重要的意义。
细胞因子检测试剂盒通过特定的试剂和技术，可以快速、准确地检测细胞因子的水平，为科学研究和临床诊断提供有力的支持。
细胞因子检测试剂盒的原理主要包括两个方面：免疫学方法和酶联免疫吸附测定法（ELISA）。
免疫学方法是通过免疫学反应原理来检测细胞因子的水平。
具体步骤包括：1. 样品收集和预处理：收集需要检测的样品，如血液、血清、血浆或细胞上清等。
对样品进行预处理，例如离心、稀释或加标等，以提高检测的灵敏度和准确性。
2. 抗体结合：将与目标细胞因子相关的抗体加入样品中，通过抗原-抗体结合的方式，形成特异性复合物。
这些抗体通常是特异性识别目标细胞因子的单克隆或多克隆抗体。
3. 洗涤：对于非特异性结合的物质，通过洗涤步骤将其除去，以减少干扰并提高检测的特异性。
4. 信号产生：添加特定的辅助试剂，如酶标记的二抗或荧光标记的二抗等，在免疫结合复合物中形成信号物质。
5. 信号检测：利用光谱设备或荧光显微镜等仪器对信号物质进行检测和定量分析。
检测的方法根据试剂盒的不同而有所差异，常见的包括酶标记法、荧光法、放射免疫法等。
ELISA法是目前最常用的细胞因子检测方法之一，其原理基于酶标记物介导的免疫反应。
ELISA法可以快速、准确地检测细胞因子的水平，并且具有灵敏度高、重复性好的特点。
具体步骤如下：1. 吸附：将经预处理的样品加入包被了特异性抗体的微孔板孔中，目标细胞因子会与抗体结合。
2. 洗涤：将非特异性结合的物质通过洗涤步骤除去，以减少背景干扰。
3. 检测：添加特异性酶标记的二抗，它会与目标细胞因子结合。
通过酶底物的作用，产生可定量测定的颜色反应。
4. 反应终止：通过反应终止剂停止酶反应，阻止进一步的颜色反应产生。
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3
FITC 阳性质控（E2）：FITC 标记抗体质控品，流式细胞仪调整仪器补偿 时使用。4C 保存，勿冷冻。 Human TH1/TH2/TH17 细胞因子标准品（C）：为人类细胞因子重组蛋白 冻干品。一瓶用 0.2mL 分析稀释液稀释，成为 10标准品（人 IL-2、IL-4、 IL-5 (Kit I)或 IL-6 (Kit II)、IL-10、TNF-、IFN-和 IL-17A 蛋白各含 50ng/mL）。4C 保存。 Human TH1/TH2/TH17 细胞因子标准品可以存放至有效期。复溶后的 10标 准品在 2-8C 保存，可存放 12 个小时。
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80 80 80 80 80 80 80 80
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20 20 20 20 20 20 20 20
2. Human TH1/TH2/TH17 细胞因子捕获微球混悬液的制备 捕获微球分为（A1）-（A7）七瓶，制备捕获微球混悬液之后应立即进行下 一步操作，加入 PE 信号抗体、标准品和待测样本。 1) 计算分析实验管数（包括标准品和质控品），例如分析 8 个待测样本，加 9 个标准管和 1 个阴性质控管，共计 18 管； 2) 充分摇匀各捕获微球试剂瓶（A1）-（A7）； 3) 每个测试需加入（A1）-（A7）捕获微球各 10L，制成捕获微球混悬液， 例如 18 管实验需要（A1）-（A7）捕获微球各 180L； 4) 如果是血清或血浆，先 300g 离心混匀的捕获微球，轻轻吸出上清，加入等 量的 H 富集血清，室温避光 30 分钟。
2
为了满足不同用户的实际需要，BD 公司 2005 年初推出了可以自由组合的 CBA Flex set。它改变了 CBA KIT 的固定形式，成为自由组合、灵活搭配的自助餐。 CBA Flex set 的原理与 KIT 相似，捕获微球用来定性目的蛋白，检测抗体的荧光强 度来定量目的蛋白。与 KIT 不同的是，Flex set 微球是带有两种荧光，分别在流式 细胞仪的 FL3 和 FL4 通道检测，通过这两个二维矩阵来对捕获微球定性。PE 检测 抗体在 FL2 通道来对目的蛋白定量。(如下图)
1) 各管加入 50L 捕获微球混悬液，注意加样之前混匀微球； 2) 各管加入 50L 的 Human TH1/TH2/TH17（I 或 II）PE 信号抗体（B）； 3) 各管加入 50L 相应的 Human TH1/TH2/TH17 细胞因子标准品稀释液； 4) 各管加入 50L 检测样本； 5) 室温避光孵育 3 小时；
5000 5000 5000 5000 5000 5000 5000 5000
2500 2500 2500 2500 2500 2500 2500 2500
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625 625 625 625 625 625 625 625
312.5 312.5 312.5 312.5 312.5 312.5 312.5 312.5
3. 缓冲液： 分析稀释液（G）：30mL 蛋白缓冲液（1），用于 Human TH1/TH2/TH17 细胞因子标准品的复溶和稀释，还用于待测样本的稀释。4C 保存。 洗液（F）：130mL 磷酸盐缓冲液（PBS），含有蛋白和表面活性剂，用于 CBA 分析中微球的洗涤和重悬。4C 保存。 富集血清（H）:10ml 血清缓冲液（1），用于检测血清或血浆样品时，稀 释捕获微球 实验用具 Human TH1/TH2/TH17 细胞因子 CBA 分析试剂盒 I（货号：550749）或 II（货 号：551809） 流式细胞仪（如 FACScan、FACSort、FACSCalibur）和 BD CellQuest 软件 1275mm FALCON 进样管（货号：352008） BD CBA 分析软件（货号：550065） BD CaliBRITE 三色微球（货号：340486）
Human TH1/TH2/TH17 细胞因子 CBA 分析试剂盒操作步骤
4
图2
Human TH1/TH2/TH17 细胞因子 CBA 分析试剂盒操作步骤示意图
1. Human TH1/TH2/TH17 细胞因子标准品的制备 Human TH1/TH2/TH17 细胞因子标准品冻干粉需要复溶并倍比稀释后使用。 1) 一瓶 Human TH1/TH2/TH17 细胞因子标准品（C）用 0.2mL 分析稀释液 （G）复溶成为 10标准品。充分混匀溶解，放置至少 15 分钟； 2) 1275mm FALCON 进样管顺序标记：原倍标准品、1:2 稀释、1:4 稀释、1:8 稀释、1:16 稀释、1:32 稀释、1:64 稀释、1:126 稀释、1:256 稀释； 3) 在原倍标准品管内加入 900L 分析稀释液； 4) 在其余管内各加入 300L 分析稀释液； 5) 在原倍标准品管内加入 100L 的 10标准品，充分混匀； 6) 倍比稀释：取原倍标准品 300L，加入到 1:2 稀释管中，充分混匀；取 1:2 稀释液 300L，加入到 1:4 稀释管中，充分混匀；依此类推，直至 1:256 稀 释管，充分混匀；分析稀释液为阴性标准管。 Nhomakorabea6
5) 捕获微球混悬液充分混匀，待用。 实验时每测试管需要 Human TH1/TH2/TH17 细胞因子捕获微球混悬液 50L。详见第 4 部分——Human TH1/TH2/TH17 细胞因子 CBA 操作步骤。 3. 待测样本制备 标准曲线的检测范围是 20-5000 pg/mL。如果待测样本细胞因子的含量超过 了检测范围，则样本需要稀释。稀释步骤如下： 1) 使用分析稀释液（G）按照理想浓度稀释样本（如 1:2、1:10、1:100）； 2) 在加样前充分混匀稀释样本。 4. Human TH1/TH2/TH17 细胞因子 CBA 操作步骤 准备好标准品倍比稀释液、捕获微球混悬液和待测样本，就可以按照以下步 骤进行 CBA 分析样本制备和分析了。为了保证流式细胞仪的定量分析结果，要求 每次实验时都要运行仪器调整程序，并定标。 标准管试剂用量一缆表： 管 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 号 20 pg/mL 40 pg/mL 80 pg/mL 156 pg/Ml 312 pg/mL 625 pg/mL 1250 pg/mL 2500 pg/mL 5000 pg/mL 试 剂 组 成 （所 有 试 剂 用 量 均 为 50 L） 阴性 0 pg/mL 捕获微球混悬液、PE 检测试剂、分析稀释液 捕获微球混悬液、PE 检测试剂、细胞因子标准品 1:256 稀释液 捕获微球混悬液、PE 检测试剂、细胞因子标准品 1:128 稀释液 捕获微球混悬液、PE 检测试剂、细胞因子标准品 1:64 稀释液 捕获微球混悬液、PE 检测试剂、细胞因子标准品 1:32 稀释液 捕获微球混悬液、PE 检测试剂、细胞因子标准品 1:16 稀释液 捕获微球混悬液、PE 检测试剂、细胞因子标准品 1:8 稀释液 捕获微球混悬液、PE 检测试剂、细胞因子标准品 1:4 稀释液 捕获微球混悬液、PE 检测试剂、细胞因子标准品 1:2 稀释液 捕获微球混悬液、PE 检测试剂、细胞因子原倍标准品
5
图3
Human TH1/TH2/TH17 细胞因子标准品的倍比稀释
稀释后的细胞因子标准品浓度：
蛋白(pg/ml) 原倍 标准 1:2 稀释 1:4 稀释 1:8 稀释 1:16 稀释 1:32 稀释 1:64 稀释 1:128 稀释 1:256 稀释
Human IL-2 Human IL-4 Human IL-5 Human IL-6 Human IL-10 Human TNF- Human IFN- Human IL-17A
细胞因子捕获微球、PE 标记的信号抗体和标准品或待测样本共孵育，形成 双抗夹心复合物。在流式细胞仪上获取数据，并使用 BD CBA 分析软件得到各分 析参量的标准曲线和各样本中七种细胞因子的分析结果。 与传统 ELISA 方法相比较，BD CBA 的优点是： 一个样本可以做七种细胞因子的分析，与 ELISA 方法相比较，大大节省 了样本用量 只需要做一组标准品，七种细胞因子的标准曲线同时得到 用传统 ELISA 方法，需要做七种不同细胞因子的实验，而 CBA 实验一 次就可以得到七种细胞因子的分析结果，大大节省了操作时间 BD CBA Flex set 试剂
分析试剂 1. CBA 微球： 人类细胞因子捕获微球（A1-A7）：七种特异性捕获微球的 FL3 荧光强度不 同，从强到弱依此为：（A1）IL-2；（A2）IL-4；（A3）IL-5（Kit I）或 IL-6（Kit II）；（A4）IL-10；（A5）TNF-；（A6）IFN- 和(A7)IL17A。4C 保存，勿冷冻。使用前注意混匀 3-5 秒。 流式细胞仪 CBA 仪器调整微球（D）：调整仪器 PMT 电压和荧光补偿，用 量为 50L/test。 2. 抗体和标准品： Human TH1/TH2/TH17（I 或 II）PE 信号抗体试剂（B）：PE 标记的抗人 IL-2、IL-4、IL-5（Kit I）或 IL-6（Kit II）、IL-10、TNF-、IFN-和 IL17A 特异抗体，用量为 50L/test。4C 保存，勿冷冻。 PE 阳性质控（E1）：PE 标记抗体质控品，流式细胞仪调整仪器补偿时使 用。4C 保存，勿冷冻。
BD CBA 流式细胞仪微球捕获芯片技术
例：人 TH1/TH2/TH17 细胞因子 CBA 分析试剂盒
Human TH1/TH2/TH17 Cytokine CBA Kit （货号：560484，80 Tests/Kit）：检测 人血清、血浆或培养上清液中的 IL-2、IL-4、IL-5、IL-10、TNF-、IFN-和 TH17。 A1 A2 A3 A4 A5 A6 A7 B C D E1 E2 F G H 概述 流式细胞仪可以通过细胞大小和荧光信号的不同将各种细胞群体区分开来。 另外，在流式细胞仪上还可以使用单管多色分析的技术。利用流式细胞仪的特点， BD 推出了流式细胞仪微球捕获芯片技术 CBA（Cytometric Bead Array），使用标 有不同荧光强度的一系列微球，同时检测多种可溶性蛋白，极大提高了检测效率。 BD CBA 系统利用流式细胞仪荧光检测灵敏度高的特点，通过微球表面免疫 分析，达到检测可溶性蛋白的目的。在微球上包被有捕获抗体，提供了类似 ELISA 包被微孔板的捕获表面。这样，只需很小体积的样本两，就可以用 CBA 捕 Human IL-2 捕获微球； Human IL-4 捕获微球； Human IL-5 捕获微球； Human IL-10 捕获微球； Human TNF-捕获微球； Human IFN-捕获微球； Human IL-17A 捕获微球； Human TH1/TH2/TH17 PE 信号抗体； Human TH1/TH2/TH17 细胞因子标准品； 流式细胞仪校正微球； PE 阳性质控品 FITC 阳性质控品 洗液 分析稀释液 细胞因子富集血清