GCHSAP-无菌室沉降菌检测规程
沉降菌检测操作规程
●1、目的规范洁净区和洁净室沉降菌测试条件和测试方法。
●2、适用范围适用于公司洁净区、洁净室或局部空气净化区域（如：洁净工作台）的沉降菌的测试和环境验证。
●3、引用文件⏹化妆品卫生规范-2007⏹GB/T 16294-2010 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法●4、定义⏹ 4.1 沉降菌：用本测试规定的方法收集空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖的可见菌落数。
⏹ 4.2 沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以（个/皿）表示●5、仪器和设备⏹ 5.1 灭菌培养皿90mm *15mm⏹ 5.2 培养基。
⏹ 5.3 恒温培养箱。
⏹ 5.4 高压灭菌器。
⏹ 5.5 放大镜●6、培养基和试剂⏹ 6.1 生理盐水：成份﹕氯化钠 8.5g蒸馏水加至 1000ml制法﹕溶解后﹐分装到加玻璃珠的三角瓶内﹐每瓶90ml﹐121℃（15 1b）2 0 mi n，高压灭菌。
⏹ 6.2 卵磷脂、吐温80—营养琼脂培养基6.2.1 成分：蛋白胨20g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂15g卵磷脂1g吐温80 7g蒸馏水1000mL6.2.2制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80，将其他成分（除琼脂外）加到其余的蒸馏水中，溶解。
加入已溶解的卵磷脂、• 吐温80，混匀，调pH 值为7.1～7.4，加入琼脂，103.43kPa（121℃15 lb）20min 高压灭菌，储存于冷暗处备用。
●7、操作步骤⏹7.1 取样：7.1.1 取样点的设置：A) 最少取样点数：灌装间、制造间3个，其他洁净区2 个；B) 取样点的位置：取样点应均匀分布在待测试区域内，一般离地高度为0.8m左右，关键设备处可增加取样点；C）每个取样点一般取样一次，每次一般为2个取样皿；D) 布置采样点时，应避免回风口；7.1.2 取样时间：可采用动态取样和静态取样：A) 动态取样：正常生产，且空气净化系统正常运转30分钟后开始取样；B）静态取样：员工己撤离生产区域，且空气净化系统正常运转至少20分钟后；静态取样时人员不得多于2人；7.1.3 取样A）将制备好的培养皿逐个放置到采样点，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养皿暴露在空气中；B）静态测试时，培养皿的暴露时间为30分钟以上；动态测试时，培养皿的暴露时间不得大于4个小时⏹7.2 置于37±1℃恒温培养箱内培养至少48小时，记录每个平皿的菌落数；●8、菌落计数方法：⏹8.1先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5 倍～10 倍的放大镜检查，以防遗漏；⏹每个测点的沉降菌总数为该测点所有培养皿菌落数的平均数；●9、结果评定：⏹9.1 每个测点的菌落数必需低于该洁净区的标准时判定符合要求；⏹9.2 静态测试时，如某测点的的菌落平均数超过标准，应再重新取样两次，两次都低于标准时才能判定符合；。
沉降菌测试标准操作规程
版本号
修订原因
修订日期
01
新订
附录
测试区域 测试依据 测试日期
沉降菌测试记录
编码：SOP-ZL-HJ-006-01-R1
测试人员 培养基用量
测试状态
培养时间
培养温度
报告日期
测试房间
现场操 采样点
房间编 作人员 布置类
号数
型
沉降菌菌落数/cfu
a b 测点1 测点2 测点3 测点4
符合规定
更鞋间
PLES123
8.1将已制备好的培养皿按采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐个
打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。
8.2静态测试时，培养皿暴露时间为30min，动态测试时，培养皿暴露时
间为不大于4h。
9、培养：取样结束后将平皿倒置于生化培养箱内35℃培养72小时，并
以未采样的营养琼脂平皿作对照皿。
10、结果计算
培养时间
报告日期现场操 采样点Fra bibliotek房间编 作人员 布置类
号数
型
沉降菌菌落数/cfu
a b 测点1 测点2 测点3 测点4
更衣 PLEQ003
缓冲间1 PLEQ004
取样间 PLEQ005
缓冲间2 PLEQ006 阴性对照
洁净度级别
AB
C
标准
＜1 5
50
沉降菌
警戒限
-- 3
40
cfu/4小时
纠偏限
-- 4
二更2 PLEZ122
缓冲间1 PLEZ123
缓冲间2 PLEZ124
微生物限度 室
PLEZ125
净化操作台 PLEZ125
阳性对照室 PLEZ126
沉降菌检测操作规程
沉降菌检测操作规程编号：版本：编制：日期：审定：日期：批准：日期：生效日期：管理部门：发放部门：生产部 质管部 工程部 研发部 PMC 采购部 仓库 营销中心 人事行政中心 财务部1 适用范围适用洁净车间及无菌实验室沉降菌的动态及静态检测。
2 参考文件2.2 GB/T 16294-20103 职责3.1 实验员负责对洁净间及无菌实验室细菌进行检测。
4 测试方法4.1 方法概述本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。
4.2 所用的仪器和设备4.2.1 高压消毒锅使用时应严格按照仪器说明书操作。
4.2.2 恒温培养箱必须定期对培养箱的温度计进行检定。
4.2.3 培养皿一般采用Æ90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。
4.2.4 培养基大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）或沙氏培养基（SDA）4.3 测试步骤4.3.1 采样方法将已制备好的培养皿按5.4.4的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5h，再将培养皿盖盖上后倒置。
4.3.2 培养4.3.2.1 全部采样结束后，将培养倒置于恒温培养箱中培养。
4.3.2.2 采用大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）配制的培养基，在30℃～35℃培养箱中培养，时间不少于2d；采用沙氏培养基（SDA）配制的培养基，在20℃～25℃培养箱中培养，时间不少于5d。
4.3.2.3 每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。
可每批选定3只培养皿作对照培养。
4.3.3 菌落计数4.3.3.1 用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，有必要时用5～10倍放大镜检查进行检查。
5 测试规则5.1 测试状态5.1.1 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。
沉降菌检测操作规程
沉降菌检测操作规程沉降菌检测操作规程一、实验材料和仪器设备准备1. 培养基：选择适合于沉降菌生长的培养基，如营养琼脂、脑心提取物琼脂等。
2. 试管：清洁且干燥的试管，用于制备培养基和盖儿。
3. 平板培养皿：密封性好、无明显污损的平板培养皿。
4. 无菌纱布：用于对培养皿进行覆膜。
5. 显微镜：高倍显微镜，用于观察沉降菌。
6. 其他常规的无菌操作用具和试剂。
二、实验操作步骤1. 准备培养基：根据所选的培养基配方，按照要求将培养基配制成液体状态，并进行无菌过滤。
将液体培养基倒入试管中，每个试管约倒满的1/3，悬挂液体培养基放置在试管架上，待培养基凝固后，封闭试管盖儿。
2. 取样：将待检测的样品进行无菌采样，如空气、水、土壤、食品等，确保取样时避免污染和杂菌的进入。
3. 塑料膜覆盖：将待检测的培养基倒入平板培养皿中，约倒满1/2，然后用无菌纱布覆盖培养皿口，并用橡皮筋固定好。
确保培养基表面整齐平坦，无明显凸起或凹陷。
4. 样品接种：将取样时采集的样品（空气、水、土壤等）用滴管或铁丝等工具，均匀地接种到培养基的表面上，每个培养皿大约接种2～3滴，然后迅速盖上试管上的盖子。
5. 培养条件：将培养皿置于恒温箱中，一般温度设定为30-35°C，培养时间为24小时至72小时不等，具体视沉降菌生长速度而定。
三、结果判读1. 观察培养皿：取出培养皿，观察上面是否出现菌落。
正常情况下，如果检测的样品中存在沉降菌，培养皿上会出现可见的菌落。
2. 菌落形态观察：使用高倍显微镜观察菌落的形态特征，确定是否为沉降菌。
3. 菌种的鉴定：对形态特征与已知的沉降菌标准比对，进行菌种鉴定。
四、注意事项1. 所有操作必须在无菌条件下进行，避免外界杂菌的污染。
2. 严格控制培养基、试管和平板培养皿等材料的无菌。
3. 样品采集要避免手部接触，使用无菌工具进行采样。
4. 培养条件要保持稳定，避免温度、湿度等因素对实验结果的影响。
5. 观察菌落时要细心，准确判断是否为沉降菌。
沉降菌检测规程
1目的通过对环境进行沉降菌检测，作为确认环境是否符合规定要求及改善环境的依据。
2范围沉降菌检测3职责检验人员按本规程操作，实验主管监督本规程的实施。
4程序4.1洁净（区）clean room(area)对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。
其建筑结构、装备及其使用均具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。
4.2洁净工作台cleaning work station一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区。
其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流置、水平层流罩、垂直层流洁净工作、水平层流洁净工作台、自净器等。
4.3洁净度cleanliness洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。
4.4菌落colony forming units细菌培养后，有一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。
通常用个数表示。
4.5沉降菌settling microbe用本标准提及的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。
4.6单向流unidirectional air flow(曾称为层流laminar flow)沿着平行流线，以单一通路以一定流速向单一方向流动的气流。
4.7非单向流nonumidirectional air flow(曾称为乱流turbulent flow)具有多个通路循环特性或气流方向不平行的，不满足单向流定义的气流。
4.8静态测试at-rest test洁净室（区）净化空气调节系统已处于正常运行状态，工艺设备已安装，洁净室（区）内没有生产人员的情况下进行的测试。
4.9动态测试operational test洁净室（区）已处于正常生产状态下进行的测试。
4.10洁净室环境要求、测试项目和频次。
见表1表1洁净室环境要求、测试项目和频次4.11检测流程4.11.1检测条件4.11.2检测仪器、设备、培养基恒温培养箱、蒸汽高压消毒锅、电热恒温干燥箱、百级超净工作台、Φ90mm×15mm培养皿、胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）、沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）。
洁净度(沉降菌)测试的标准操作规程
洁净度（沉降菌）测试的标准操作规程目的：建立洁净度（沉降菌）测试的标准操作规程，为沉降菌检查人员提供正确的标准操作方法。
范围：适用于本公司洁净区(室)的沉降菌的监测的全过程。
职责：QA对本规程的有效执行承担监督检查责任，沉降菌检查人员对本规程的实施负责。
依据：GB/T16294－2010、2013-2017年环境监测数据及2016-2017年洁净区（室）环境监测回顾报告。
1定义：本规程采用下列定义：1.1菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。
1.2沉降菌：用GB/T16294－2010提及的方法收集空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数1.3沉降菌菌落数：在规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以cfu//4小时表示。
1.4洁净室：对尘粒及微生物污染需进行控制的房间或区域。
1.5洁净工作台：一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区。
其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流洁净罩、水平层流罩、垂直层流洁净工作台、水平层流洁净工作台等。
1.6洁净度：洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子和微生物的允许统计数。
2、测试方法：2.1 方法概述：本测试方法按国家技术监督局发布的《医药工业洁净室（区）沉降菌测试方法》采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室(区)的洁净度。
2.2使用的仪器和设备：2.2.1恒温培养箱：必须定期对恒温培养箱进行校验。
2.2.2高压蒸汽灭菌器：使用时应严格按照仪器操作规程进行操作。
2.2.3培养皿：2.2.3.1.一般采用￠90mm×15mm 规格的硼硅酸玻璃培养皿。
2.2.3.2.使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20min。
沉降菌测试标准操作规程
1.1目的：建立沉降菌测试的标准操作规程。
1.2范围：本标准规定了医药工业洁净室和洁净区中沉降菌的测试条件，测试方法。
本标准适用于医药工业洁净室和洁净区，无菌室或无菌区域(包括洁净工作台)的沉降菌的测试和环境验证。
1.3责任人：检验员、化验室负责人。
2、引用标准：GB/T16294－2010 ，新版GMP3、定义：本标准采用下列定义：3.1沉降菌：用本标准提及的方法收集空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数3.2沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以个/皿表示。
4、测试方法：4.1 方法概述：本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室(区)的洁净度。
4.2 人员的职责及培训：洁净室(区)的测试人员应进行本专业的培训并获得相应资格后才能履行对洁净室（区）测试的职责，其中包含涉及的卫生知识和基本微生物知识。
洁净室(区)的测试人员应选择与生产操作的空气洁净度级别要求相适应的穿戴方式，外面的衣服不能带进100000级以上的区域。
4.3仪器：4.3.1培养皿：一般采用￠90mm×15mm 规格的培养皿。
4.3.2培养基：大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）或沙氏培养基（SDA）或用户认可并经验证了的培养基。
其配制方法见附录B。
4.3.3恒温培养箱：必须定期对恒温培养箱进行校验。
4.3.4高压蒸汽灭菌器：使用时应严格按照仪器说明书操作。
4.4 测试步骤：4.4.1 测试前培养皿表面必须严格消毒。
4.4.2将已制备好的培养皿按采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。
4.43.3静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上，动态测试时，培养皿暴露时间为不大于4h。
沉降菌检测操作规程
沉降菌检测操作规程1. 引言沉降菌是指在液体中沉淀并附着在容器底部的微生物。
在许多行业中，沉降菌的检测是非常重要的，例如制药、食品加工、饮水安全等领域。
本文档旨在介绍沉降菌检测的操作规程，以确保检测结果准确可靠。
2. 检测设备和试剂准备在进行沉降菌检测之前，需要准备以下设备和试剂：•沉降菌检测容器：一般选择具有透明底部和标有刻度的容器，容量不小于100 mL。
•色谱纸：用于制作沉降菌检测培养基。
•高温灭菌器：用于灭菌沉降菌检测容器和试剂。
•干燥烘箱：用于干燥沉降菌检测容器和试剂。
•取样器：用于抽取待检测样品。
•生物安全柜：用于操作中的生物安全。
试剂准备：•培养基：可根据需要选择适当的培养基，例如Luria-Bertani（LB）培养基。
•蒸馏水：用于制备培养基和洗涤操作。
•山梨醇盐溶液：用于沉降菌悬浮液的稀释。
3. 检测操作步骤步骤1：沉降菌检测容器准备1.将需要检测的沉降菌检测容器放入高温灭菌器中，设定适当的温度和时间进行灭菌。
2.灭菌后，将沉降菌检测容器取出，放入干燥烘箱中进行干燥，确保容器完全干燥。
步骤2：制备培养基1.准备适量的色谱纸，切成小块。
2.在高温灭菌器中加热蒸馏水至沸腾，将色谱纸块放入烧杯中，倒入足够的蒸馏水。
3.候色谱纸块充分吸水后，取出备用。
步骤3：取样1.在生物安全柜内，使用取样器抽取待检测样品，确保样品干净无杂质。
2.将样品转移到沉降菌检测容器中，注意不要沾到容器外表面。
步骤4：制备沉降菌悬浮液1.取一定量的山梨醇盐溶液，进行稀释，制备合适的浓度。
2.将制备好的山梨醇盐溶液加入沉降菌检测容器中，使样品充分悬浮。
步骤5：培养和观察1.将沉降菌检测容器放入培养箱中，设定适当的温度和时间进行培养。
2.观察培养后的沉降菌情况，记录菌落数量和特征。
4. 结果记录和分析根据观察到的沉降菌情况，记录菌落数量和特征。
根据结果进行分析和判断，判断样品是否符合标准要求。
5. 安全注意事项•操作过程中要戴好实验手套和口罩，避免直接接触待检测样品。
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无菌室沉降菌测试标准操作规程
1目的：建立无菌室中沉降菌的测试标准操作规程，保证产品在规定洁净级别内进行检测。
2范围：无菌室的沉降菌的监测。
3依据：国家标准GB/T 16294-2010《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》 GB/T16292-2010《医药工业洁净室（区）悬浮粒子的测试方法》4职责：质检员、微生物检验人员对本制度的实施负责。
5内容
5.1测试方法
5.1.1方法概述：本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的
生物粒子于培养基平皿，经48小时以上培养，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室的洁净度。
5.1.2 所用的仪器和设备
5.1.2.1电热压力蒸汽消毒器：使用时按《电热压力蒸汽消毒器操作规程》进行
操作。
5.1.2.2恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。
5.1.2.3直径90mm培养皿：使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌30分钟或180℃
干热灭菌2小时。
5.1.2.4培养基：大豆酪蛋白琼脂培养基。
将培养基灭菌，冷却至约60℃以下在
无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
待培养基凝固后，
将培养基平皿放入30～35℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿
上确无菌落生长，即可供采样用。
5.1.3测试步骤
5.1.3.1采样方法：将已制备好的培养皿放置在预先确定的取样点，打开培养皿
盖，使培养基表面暴露30分钟，再将培养皿盖上盖后倒置。
5.1.3.2培养：全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
在30～35℃
培养箱中培养，时间不少于48小时。
每批培养基应有对照试验，检查培
养基本身是否污染，可每批选定3只培养皿作对照培养。
1个平板做搬
运过程中的对照，确保搬运过程中琼脂平板未被污染。
5.1.3.3菌落计数：用肉眼直接计数。
若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，
可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。
5.2注意事项
5.2.1测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。
5.2.2采取一切措施防止人为对样本的污染。
5.2.3对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。
5.2.4由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面
仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。
5.2.5采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。
5.3测试规则
5.3.1测试状态
5.3.1.1沉降菌测试前：被测试洁净室（区）的温、湿度须达到规定的要求，静
压差必须控制在规定值内。
被测试洁净室（区）已消毒。
5.3.1.2测试状态有静态和动态两种，应在报告中注明测试状态。
5.3.1.3测试人员：测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。
静态测试
时，室内测试人员不得多于2个人。
5.3.2测试时间
5.3.2.1对单向流，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。
5.3.2.2对非单向流，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟后开始。
5.4沉降菌计数
5.4.1最少采样点数目：可按表1确定。
在满足最少采样点数的同时，还宜满足最少培养皿数（见表2）。
洁净度级别所需培养皿数
100 14
10000 2
100000 2
采样点数N=√a
N：代表每个房间的取样点数
房间名称房间面积（m2）取样点数
无菌室8.7 3.0 微生物限度室 5.5 2.0
阳性对照室 5.5 2.0
走廊 5.2 2.0
缓冲 2.0 1.0
洁具间0.85 1.0
洗衣间0.85 1.0
二更 3.0 2.0
房间名称房间面积（m2）取样点数
无菌室8.7 3.0 微生物限度室 5.5 2.0
阳性对照室 5.5 2.0
走廊 5.2 2.0
缓冲 2.0 2.0
洁具间0.85 2.0
洗衣间0.85 2.0
二更 3.0 2.0
5.4.2采样点的布置：工作区测试点位置应略高于工作台面。
可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点，采样点的布置应力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中或稀疏（见表3）。
表3 布点图
5.4.3记录：测试报告中应记录房间温度、相对湿度、压差、测试状态及测试数
据。
5.4.4测试结果：用计数方法得出各个培养皿的平均菌落数。
5.4.5结果评定：用平均菌落数判断洁净室空气中的微生物。
5.4.6洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准（见表3）。
5.4.7若某洁净室（区）的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先行消毒，
然后重新测试，测试结果应符合规定。