黄粉虫水溶性低聚糖的提取及其对大肠杆菌抑菌作用研究

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黄粉虫抗菌肽对耐药粪肠球菌抑菌效果的研究_何晓辉

利用 SPSS 17. 0 统计软件进行显著性检验，
以 P ＜ 0. 05 作为差异显著性判断标准。
2 结果与分析
2. 1 粪肠球菌培养的黄粉虫抗菌肽粗提液浓度试验组粪肠球菌培养的黄粉虫提取抗菌肽并
测定其浓度，用麸皮培养 24 h 后的黄粉虫组抗菌肽粗提液的浓度（（ 0. 47 ± 0. 01） mg / mL）显著低于粪肠球菌培养的黄粉虫抗菌肽粗提液的浓度（ 0. 92 ± 0. 06） mg / mL（ P ＜ 0. 05），提示粪肠球菌可以有效的刺激黄粉虫产生高表达量的抗菌肽。黄粉虫在一定病原微生物的刺激下能够产生具有免疫作用的高浓度抗菌肽。
导的对照组（ P ＜ 0. 05），其抑菌活性也显著高于对照组（ P ＜ 0. 05），并且诱导黄粉虫抗菌肽组对耐青霉素、庆
大霉素粪肠球菌的抑菌效果显著高于抗生素组（ P ＜ 0. 05）。【结论】黄粉虫抗菌肽对耐药粪肠球菌具有显著
的抑菌效果。
关键词：黄粉虫；粪肠球菌；抗菌肽；耐药菌；抑菌
尤其是对耐药细菌也具有杀伤作用［2］。【前人研究进展】自 Mcon H J 等［3］报道黄粉虫通过诱导可以产生抗菌肽后，国内很多学者对黄粉虫体内的抗菌活性物质进行研究，王小平等［4］研究发现，黄粉虫幼虫用大肠杆菌诱导可产生抗菌物质，这种抗菌物质能够对多种植物和动物病原微生物产生抑制作用；韩润林等［5］用超声波和饥饿后饲喂大肠杆菌的方式处理黄粉虫，发现经处理后的黄粉虫产生了具有抗菌活性的抗菌肽。【本研究切入点】肠球菌属（ Enterococcus）是医院引起感染的常见病原菌，主要感染对象是过量使用抗生素的患者或免疫力低下的人群，可以引起菌血症、尿道感染、腹腔感染等［6］，也可导致败血症、心内膜炎等疾病的产生甚至可危及生命，死亡率达 21. 0% ～ 27. 5%［7］。粪肠球菌是肠球菌感染的临床分离株中最常见的菌株，由于肠球菌具有天然和获得性耐药的特性，并且新的抗生素开发速度缓慢，在临床治疗由肠球菌引起的感染就变得越来越困难。【拟解决的关键问题】研究以黄粉虫为材料，

浅析黄粉虫综合提取物的研究与应用

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浅析黄粉虫综合提取物的研究与应用
作者：陈荣陈重光
来源：《中国新技术新产品》2012年第01期
摘要：黄粉虫作为高端养殖业的蛋白质饲料具有悠久历史，使其作为食用昆虫已有一定的研究进展，但尚未形成规模。

为了充分开发和利用黄粉虫这一昆虫资源，采用生物工程技术进行综合提取出蛋白质、油脂和几丁聚糖，又经主要营养成分的分析与对比，确定该提取物的营养价值与同类产品相比具有一定的优势，可广泛应用于药品、保健品及化妆品等多个领域，拓展新资源物质。

关键词：黄粉虫；综合提取；应用；食用昆虫；昆虫资源
中图分类号：Q96 文献标识码:A。

黄粉虫不同生长阶段诱导抗菌肽的效果分析

Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｐｕｒｐｏｓｅｏｆｔｈｅｓｔｕｄｙＷａｆｔｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｅｅｅｒｏｐｉｎａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｍｐｏｎｅｎｔ
ｓｔａｇｅｓ．‰ｂｒｉｏｏｆａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｐｅｐｔｉｄｅｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｇｒｏｗｔｈ
（１）标准蛋白质的相对迁移率见表２
圈ｌ黄粉虫不同生长阶段提取抗菌肽的电泳分析注，０所指的带为标准蛋白被分离的区带：ｌ所指带的是黄粉虫成虫期所提取的抗苗肽被分离的区带：２所指的是黄粉虫蛹期所提取的抗菌肽被分离的区带；３所指的是黄粉虫幼虫期所提取的抗菌肽被分离的区带。
表２标准蛋白质ＳＤＳ一聚丙烯酰胺的相对迁移率
（１）原理将含有抗菌液的纸片贴在已经接种菌种的培养基平板上，纸片中所含有的抗菌物质不断向纸片周围扩散，形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌生长被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映抗菌物质对该菌种的最小抑菌浓度（ｍｉｎｉｍａｌｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ＭＩＣ），并与该菌种对抗菌物质的敏感程度呈负相关，即抑菌圈愈大，ＭＩＣ愈小。
凰ｅｒｅｓｕｌｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｖａｒｉｅｔｙｏｆａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｐｅｐｆｉｄｃｓｏｆＴｅｎｅｂｒｉｏｍｏｌｉｔｏｒｉｎｐｕｐａａｎｄａｄｕｌｔｗａｓｌｅｓｓｔｈａｎ
ｔｈａｔｏｆｉｎｌａｒｖａｅ．ｈｏｗｅｖｅｒ＇ｍｏｒｅｌｉｔｄｅｐｅｐｔｉｄｅｗｅｒｅｎｏｔｓｅｐａｒａｔｅｄｆｒｏｍ．ＴｅｎｅｂｒｉｏＭｏｌｉｔｏｏｆｅａｃｈｓｔａｇｅ．
按邹毅｛”的方法进行电泳试验。
பைடு நூலகம்

黄粉虫体内脂类抗菌活性物质及凝集素的研究的开题报告

黄粉虫体内脂类抗菌活性物质及凝集素的研究的开题报告摘要：黄粉虫是草原蝗虫的一种，具有很高的经济价值和生物学研究价值。

本文旨在研究黄粉虫体内脂类抗菌活性物质及凝集素的特性及其应用，探究其在农业生产中的潜在价值，为草原蝗虫的综合防治提供理论基础和实验数据支持。

关键词：黄粉虫、脂类抗菌活性物质、凝集素一、研究背景和意义草原蝗虫是我国重要的农业害虫之一，对农作物、草原生态系统和人类的生产生活造成了巨大的威胁。

传统的防治方法主要依赖化学农药，但其使用不仅存在环境污染和生态破坏的风险，而且对其防治效果的持续性和复杂性也存在很大的挑战。

因此，开发新型的治理措施和技术具有重要的意义。

黄粉虫是草原蝗虫的一种，其体内含有丰富的生物活性物质，包括多种蛋白质和脂类成分等。

研究表明，黄粉虫体内脂类物质具有一定的抗菌活性，且具有较广泛的抗菌谱和较强的抗菌能力。

此外，黄粉虫还含有一种特殊的凝集素，具有较强的凝集作用和良好的生物学特性，具有广泛的应用前景。

因此，本文旨在对黄粉虫体内脂类抗菌活性物质及凝集素的特性及其应用进行深入研究，探究其在农业生产中的潜在价值，为草原蝗虫的综合防治提供理论基础和实验数据支持。

二、研究内容和方法1. 研究黄粉虫体内脂类抗菌活性物质的分离和纯化，分析其组成和结构，并测试其抗菌活性和抗菌谱。

2. 研究黄粉虫体内凝集素的分离和纯化，分析其生物学特性和分子结构，并测试其凝集能力和应用前景。

3. 对黄粉虫体内脂类抗菌活性物质和凝集素的应用进行初步探究，比较其与传统治理措施的差异和效果，为农业生产提供参考。

本研究将采用分离纯化、电泳、蛋白质浓缩、液相色谱等生物实验技术，获取黄粉虫体内脂类抗菌活性物质和凝集素，并采用扫描电镜、透射电镜和紫外-可见吸收光谱等手段进行形态和结构表征。

进一步，应用抗菌实验法和凝集实验法对其生物学特性和应用前景进行定性和定量分析。

三、预期结果和意义通过对黄粉虫体内脂类抗菌活性物质和凝集素的研究，可获得以下预期结果：1. 获得黄粉虫体内脂类抗菌活性物质和凝集素的分离和纯化方法，以及其组成、结构和生物学特性。

大肠杆菌诱导黄粉虫产生抗菌肽的提取及抑菌活性的测定

（ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＳｈｉｈｅｚｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｉｈｅｚｉ８３２００３，Ｃｈｉｎａ）
ｆｒｏｍＴｅｎｅｂｒｉｏｍｏｌｉｔｏｒａｔ１２ｈ，２４ｈ，３６ｈ，４８ｈ，６０ｈ，７２ｈ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ａｎｄｔｈｅｉｒｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎａｎｄａｎｔｉｂａｃｔｅｉｒａｌａｃｔｉｖｉｔｙｗｅｒｅ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＩｎｏｒｄｅｒｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｉｎｄｕｃｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｐｅｐｔｉｄｅｓｆＡＭＰｓ１ｐｒｏｄｕｃｅｄｉｎＴｅｎｅｂｒｉｏｍｏｌｉｔｏｒｉｎｄｕｃｅｄｂｙＥ
著大于未诱导组，且对大肠杆菌抑菌力高于金黄色葡萄球菌和沙门氏菌（Ｐ＜０．０５），大肠杆菌诱导４８ｈ后的黄粉虫中细
菌含量为９．５ｘ１０ＣＦＵ／ｇ，低于国家规定标准饲料中细菌总数最低值２ｘ１０ＣＦＵ／ｇ。提示，用大肠杆菌诱导黄粉虫能刺激黄粉虫产生高表达量的抗菌肽，并对大肠杆菌具有较强的抗菌性能且具有一定的安全性。关键词：黄粉虫：抗菌肽；诱导；抑菌活性

黄粉虫抗菌肽的诱导、生物学活性测定及初步分离纯化的开题报告

黄粉虫抗菌肽的诱导、生物学活性测定及初步分离
纯化的开题报告
一、研究背景与意义
黄粉虫（Tenebrio molitor L.）是一种常见的昆虫，它具有高蛋白、低脂肪、低胆固醇等优点，被广泛应用于食品、畜牧、药物等领域。

近年来，黄粉虫体内发现多种生物活性物质，其中抗菌肽具有特殊的生物功能，被广泛研究和应用。

黄粉虫抗菌肽分子量小、结构简单、具有广谱的抗菌作用，对于抗菌药物产生的耐药性问题具有一定的研究价值与应用前景。

本研究旨在通过诱导黄粉虫抗菌肽表达，测定其生物学活性，并进行初步分离纯化，为深入研究其结构、功能和开发应用提供重要的实验基础与理论支持。

二、研究内容和方案
1. 抗菌肽的诱导表达
采用基因工程技术，构建高效的诱导表达系统，将黄粉虫抗菌肽基因插入表达载体pET-32a，转化至大肠杆菌BL21（DE3）表达菌株中，使用IPTG（异丙基β-硫代半乳糖苷）等方法进行高效表达。

2. 抗菌肽的生物学活性测定
通过纸片扩散法、液体培养法等方法，测定黄粉虫抗菌肽对不同菌株的抑菌效果，确定其最小抑菌浓度。

3. 抗菌肽的初步分离纯化
采用薄层色谱、透析、离子交换等方法进行初步纯化，确定黄粉虫抗菌肽的分子量、理化性质。

三、研究预期结果
本研究将成功构建高效的黄粉虫抗菌肽诱导表达系统，获得高纯度的抗菌肽产物，并测定其对不同菌株的抑菌效果，为进一步深入研究其生物活性和开发应用奠定重要基础。

同时，本研究的实验方法和技术路线也为类似生物活性物质的研究提供了参考与借鉴。

一种黄粉虫提取物及其分离方法和应用[发明专利]

专利名称：一种黄粉虫提取物及其分离方法和应用专利类型：发明专利
发明人：陈凯,李秀颖,周繁,李旭,崔顺艳,李丹
申请号：CN201410675729.9
申请日：20141121
公开号：CN104472552A
公开日：
20150401
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一种黄粉虫提取物及其分离方法和应用，该分离方法步骤包括：S1，黄粉虫乙醇索氏提取：将黄粉虫粉与乙醇在索氏提取器中回流提取3-7小时；S2，将步骤S1所得乙醇索氏提取液浓缩、干燥得黄粉虫提取物，不仅能够防治多种植物病害，而且能够促进植物生长，对提高作物产量和提升品质均具有积极作用且黄粉虫资源丰富，价格低廉，同时本发明的分离方法简单易实现，因此，本发明的黄粉虫提取物是一种具有较大应用前景的生物防治新品种。

申请人：沈阳化工研究院有限公司
地址：110021 辽宁省沈阳市铁西区沈辽东路8号
国籍：CN
代理机构：深圳市科进知识产权代理事务所(普通合伙)
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黄粉虫有效物质的综合提取及提取方法的比较

黄粉虫有效物质的综合提取及提取方法的比较摘要比较了用石油醚和用环己烷抽提黄粉虫Tenebrio molitor L．虫粉中脂肪的提取率，以及用碱法和用酶法提取去脂虫渣中蛋白质的提取率。

并从2种去脂、去蛋白质虫渣中和虫蜕中提取壳聚糖。

用环己烷和酶法提取为最佳组合，可综合提取出占幼虫干重5O．5％的有效物质。

同时，讨论了碱法和酶法提取率出现差异的原因。

关键词黄粉虫，有效物质，综合提取，提取方法黄粉虫Tenebrio molitor L．用做鱼、蛙、鸡、鸭、蜈蚣和蝎子等食虫动物的活饵料，其干粉替代鱼粉用作家禽、家畜的蛋白质添加剂已有多年的历史。

作者过去的研究揭示，黄粉虫的营养价值高，对实验动物无急性毒性作用，具有抗疲劳、抗衰老、抗突变、调节血脂和调节免疫功能等保健作用，可用作人类的保健食品⋯。

考虑到成品的耐储藏性、易吸收性和综合利用性，作者认为，采用将黄粉虫体内的脂肪酸、氨基酸和壳聚糖等有效物质逐级提取的方法，既可充分利用虫体资源，又可提高有效物质的提取率。

本研究用不同的方法对黄粉虫体内的有效物质进行综合提取，以期找出最佳组合方法，为工业化生产提供依据。

1 材料和方法1．1 材料黄粉虫幼虫购于山东花鸟市场，以麦麸为饲料饲养。

药品：环己烷(沸点80．8℃ )，石油醚(沸点60—90℃)，红色石蕊试纸，蒸馏水，胰蛋白酶(进口分装，比活1：250)，浓硫酸，0．25 mol／LNaOH ， 10mol／L NaOH ， 0．33 mol／L HCI， 1．67mol／L HC1， 0．1 mol ／L NaOH ， 0．1 mol／L HCL，K2S04，0．4 mol／L CuSO~。

仪器：烘箱、天平、水浴锅、冰箱、量筒、凯氏烧瓶、三角瓶、消化炉、布袋、碱式滴定管、酒精灯、漏斗、真空泵、冷凝装置，岛津GC．16A 气相色谱仪、日立853．50型氨基酸自动分析仪。

1．2 方法1．2．1 制备虫粉。

称取活幼虫1 100 g，80℃下烘干至恒重后研成粉。

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ａｄｈｄｓｒｎｎｉｃｉｆｅｏＥｃｌｃＨｎａｃｒｉｏｃｎｒｔｎｎａｔｏｇａｔｍｉｍｂａｅｆｔ．ｏｉｅｓｉｅｔｎｃｎｅｔｉ．ｌｅｔａａｏ
Ｋｅｗｏｄ：Ｔｎｂ／ｌｒｗｔｒｓｌｂｌｙｃｉｏｉｏａｃａｉｅ；ｔｃｉｎＡｎｉａｔｒｙｒｓｅｅｒｍｏｉ；ａｅ－ｏｕｉｔｈｔｌｓｃｈｒｓｏｏｉｏｇｄＥｘｒｔ；ｔｃｅａｏｂ
摘
要：为开发昆虫几丁质资源，大其应用范围，扩本试验采用酸碱法从烘干的黄粉虫幼虫体内提取几丁质粗品，再经碱处理得
到壳聚糖，聚糖经过适宜的温度和过氧化氢浓度处理后得到水溶性的低聚糖。壳黄粉虫水溶性低聚糖的浓度为００－．ｍ．－．０３ｇ６ｍＬ对大肠杆菌均有很强的抑制效果。浓度为Ｏ１、．８０２、．ｍｇＬ．０１、．０３．抑制作用均达到极显著水平，浓度为０６ｍｇＬ２４ｍ．．达到０ｍ
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０１．－ａｄ０４ｍ．～ａｄ０３．－ａｔｃｉｇｎａｃｉｅｘｅｌｒｍｒａｌｅｅ，ｈｎｄｎｉ．６ｍｍ～．ｍｇｎ．ｇ８ｍＬ２ｍｎ．ｍｇｎ‘ ｎｉｍｂａａｅｌａｈｅｓｔｍｅａｋｂｌｖｌｅｅｓｙｓ０ＣＬ，Ｉ，ｍｉｌｌｖｅｒｙｅｅｗｔｉ０
第２２卷第１期
２１００年２月
黑龙江八一农垦学学报ｅＪｕｎｌｏｅｌｇａｇＢｙｇｉｌｒｎｖｒｉｙｏｒａｆＨｉｎｊｎａｉｒｕｔａＵｉｓｔｏｉＡｃｕｌ
— — —
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ｆｍｄｙｇＴｎｂ／ｍｌｒ（．ｃｕｅｅｔｃｃｉｎｎ。ｎｅｙａｋｉｅｔｎｂｈｔｓｎＣｉｓｎｐｏｅｓｇｗｔＨ０ｒｒｉｅｅｒｏｉｏｎｏｏＬ）ｒｄｘａｔｈｔａｄａｄｔｎｂｌａｎｔａｒｉｈｌｅｒｍｅｔｅｃｉａ，ｈｔａｒｃｓｉｉ２２ｏｏｎｈ
ＡｂｔａｔＦｒｔｅｄｖｌｐｎｆｉｓｃｈｔｅｏｒｅ，ｘａｄｉｃｐｆａｐｉａｉｎ，ｉｅｐｒｎｉｈａｉ— ａｅｍｅｈｄｓｒｃ：ｏｈｅｅｏｍｅｔｏｎｅｔｃｉｎｒｓｕｃｓｔｅｐｎｔｓｏｅｏｐｌｔｉｏｓｃｏｔｓｘｅｍｅｔｗｔｃｄｂｓｔｏｈｉ
０３ｍｇｍＬｃｎｓｐｒｓｉｎＥｃｅｉｈａｃｌｖｒｔｏｇＴａｉｎｅａａｙｉｏｕｐｅｓｏａｅｗｈｎｄｎｉｓ０１．一ｎ．．～ａｕｐｅｓｓｈｒｉｏｉｅｓｎ．ｏｖｒａｃｎｌｓｆｓｐｒｓｉｎｒｔ．ｅｅｓｔｉ．２ｍｇｍＬａｄｏｃｙｒｓｙ
Ｆｂ２０ｅ．０１
文章编号：０２２９（０００ — ０５０１０ — ００２１）１００ — ４
黄粉虫水溶性低聚糖的提取及其对大肠杆菌抑菌作用研究
范文艳，丽艳王
（黑龙江八一农垦大学农学院，大庆１３１）６３９
显著水平。利用黄粉虫提取的水溶性低聚糖，具有较好的溶解性能，在一定浓度下对大肠杆菌有较强的抑菌作用。
关键词：黄粉虫；水溶性低聚糖；提取；抑菌
中图分类号：９６Ｑ６文献标识码：Ａ
ＥｘｒｃｏｎｄＡｎｔｂｃｅｆｅｔｏｎｅｒｏｍｏｒｗａｅ－ｏｕｂｌｙｔａｔｎａｉｉａｔｒＥｆｃｆＴｅｂｉｔｏｔｒｓｌｉｉｔ
ｄｇｎｒｔｎｏｔｉｓｃｉｏｉｏａｃａｉｅ．ｈｅｓｙｏａｅ－ｏｕｉｔｈｔｏｉｏａｅａｉｅｒｍｅｅｒｌｒ（）ｉ０～ｅｅｅａｉｂａｎｈｔｌｓｃｈｒｄｓＴｅｄｎｉｆｗｔｒｓｌｂｌｙｃｉｌｓｃｈｒｓｆｏｏｇｔｉｏｇｄｏＴｎｂｉｍｏｉＬ．ｓ０．６ｏｏ
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