实验十三血清尿素氮测定(脲酶—Berthelot比色法)
血、尿液尿素氮(BUN)测定作业指导书
血、尿液尿素氮（BUN）测定作业指导书1.实验原理Vitros BUN/UREA试剂是一种干燥，多涂层的，在透明的聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。
将一滴患者样品滴于干片上，分布层会使之均匀地分布。
水和非蛋白质成份进入下面的试剂层，与尿素酶反应生成氨。
半透膜只允许氨进入呈色反应层，与指示剂发生反应。
经过一段固定的孵育时间后，通过测定呈色剂的反射强度可间接求出尿素氮的含量。
测定方式：比色法波长：670nm测试时间和温度：37℃约５分钟反应过程：尿素酶非蛋白质成份＋水—————→氨+ 二氧化碳氨＋氨指示剂—————→呈色剂2. 标本：2.1 病人准备：血清无特殊要求。
要留取24小时尿样。
2.2 样品类型：血清；肝素锂/钠和EDTA抗凝血浆。
定时收集的，稀释后的尿样。
2.3 标本采集与处理：2.3.1 血清和血浆样品特别要注意的是：血清；肝素锂/钠和EDTA抗凝血浆；不要用氟化钠作防腐剂，因为氟会抑制尿素酶。
样品采集后4小时内要离心标本，吸出血清。
处理样品时要将其当成生物污染品。
2.3.2 尿液样品定时或随时采集的尿液，特别要注意的是：不能使用以下防腐剂：冰醋酸，浓盐酸，硼酸，硼粉或甲酸钠硼酸，样品在测试前要冷藏。
测试前将1份样品加20 份试剂级别的水进行稀释。
将测试结果乘以21，就得到原始样品中尿素氮的浓度。
冷藏的样品不能立即测试。
处理样品时要将其当成生物污染品。
3. 标本的存放：血清、血浆室温下最多1天；4～8℃冷藏最多5天；-18℃冷冻保存可长达6个月。
尿液样品在测试前要冷藏。
4. 标本的运输：样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。
5. 标本拒收的标准：污染、抗凝剂、防腐剂不符合要求，标本放置时间过长。
6. 试验材料：6.1测试BUN所需的物品包括：Vitros化学定标物Kit1；Vitros特制质控液；Vitros 7%BSA稀释液。
xx厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。
测定血清尿素的实验报告
一、实验目的1. 掌握血清尿素测定的原理和方法。
2. 熟悉二乙酰-肟法测定血清尿素氮的实验操作。
3. 了解实验中可能出现的误差及其处理方法。
二、实验原理血清尿素氮（Blood Urea Nitrogen，BUN）是血液中尿素氮的浓度，是反映肾功能的重要指标。
尿素氮是蛋白质代谢的终产物，主要由肝脏产生，通过肾脏排泄。
二乙酰-肟法是一种常用的测定血清尿素氮的方法，其原理如下：在酸性反应环境中加热，尿素与二乙酰缩合，生成色素原二嗪，称为Feorin反应。
因为二乙酰不稳定，所以通常由反应系统中二乙酰-肟与强酸作用，产生二乙酰，二乙酰与尿素反应，综合生成红色的二嗪。
其颜色的深浅与血清中尿素含量成正比。
三、实验材料1. 试剂：- 碱性试剂：在三角烧瓶中加蒸馏水约100ml，然后加入浓硫酸44ml及85%H3PO466ml冷至室温，加入硫氨脲50mg及硫酸镉2g溶解后加蒸馏水稀释至1升，置棕色瓶放冰箱保存，可稳定半年。
- 二乙酰-肟溶液：称取二乙酰-肟20g，加蒸馏水约900ml溶解后，再用蒸馏水稀释至1升置棕色瓶中，贮存放于冰箱内可保存半年不变。
- 尿素标准贮存液（100mmol/L）：称取干燥纯尿素（MW60.06）0.6g，溶解于水中并稀释至100毫升，加0.1g叠氮钠防腐，置冰箱内稳定六个月。
- 尿素标准应用液（5mmol/L）：取5.0ml贮存液用去氨蒸馏水稀释至100ml。
2. 仪器：- 分光光度计- 离心机- 实验室试管四、实验步骤1. 标准曲线的绘制：- 取5支试管，分别加入0、0.5、1.0、1.5、2.0ml尿素标准应用液，用去氨蒸馏水稀释至5.0ml。
- 向每支试管中加入2.0ml碱性试剂，混匀。
- 将试管置于沸水中加热5分钟，取出冷却至室温。
- 以540nm波长，1cm光程，测定各管吸光度。
- 以尿素浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定：- 取2支试管，分别加入0.5ml血清和0.5ml尿素标准应用液，用去氨蒸馏水稀释至5.0ml。
脲酶的测定方法
一、脲酶测定(比色法)脲酶是对尿素转化起关键作用的酶，它的酶促反应产物是可供植物利用的氮源，它的活性可以用来表示土壤供氮能力。
1、试剂配制：（1）pH6.7柠檬酸盐溶液：取368g柠檬酸溶于600mL蒸馏水中，另取295g 氢氧化钾溶于水，再将两种溶液合并，用1N氢氧化钠将pH调至6.7，并用水稀释至2L。
（2）苯酚钠溶液：称取62.5g苯酚溶于少量乙醇中，加2mL甲醇和18.5mL 丙酮，后用乙醇稀释至100mL（A液），保存再冰箱中。
称取27g氢氧化钠溶于100mL水中（B液），保存于冰箱中。
使用前，取A、B两液各20mL混和，并用蒸馏水稀释至100mL备用。
（3）次氯酸钠溶液：用水稀释制剂至活性氯的浓度为0.9％，（1.9g次氯酸钠溶于1L水中）溶液稳定。
（4）10％尿素溶液：10g尿素溶于100mL水中。
（5）N的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水稀释至1L，则得1mL 含0.1mgN的标液，再将此液稀释10倍制成氮工作液（0.01mg/mL）。
2、操作步骤称取5ｇ土置于50mL容量瓶中,加1mL甲苯处理,加塞塞紧轻摇15ｍｉｎ;往瓶中加入5mL10%尿素液和10mL的柠檬酸盐缓冲液(ｐＨ6.7),仔细混匀。
在37℃恒温箱中培养24ｈ。
然后用热至38℃的蒸馏水稀释至刻度(甲苯应浮在刻度以上),摇荡,将悬液过滤。
取滤液1mL置于50mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至10mL,然后加入4mL苯酚钠溶液,并立即加入3mL次氯酸钠溶液，加入每一试剂后,立即将混合物摇匀,20ｍｉｎ后,将混合物稀释至刻度,在波长578ｎｍ处测定吸光值。
脲酶活性以样品所得的吸光值减去对照样品吸光值之差,根据标准曲线求出氨态氮量。
标准曲线绘制：分别取0、1、3、5、7、9、11、13mL氮工作液置于50mL容量瓶中，加蒸馏水至20mL，再加4mL苯酚钠溶液和3mL次氯酸钠溶液，随加随摇匀，20min后显色，定容。
1h内再分光光度计上于578nm处比色。
测血清尿素含量实验报告
一、实验目的1. 掌握血清尿素含量测定的原理和方法；2. 熟悉实验操作步骤，提高实验技能；3. 了解血清尿素在临床医学中的意义。
二、实验原理血清尿素含量测定采用二乙酰-肟法，其原理如下：在强酸条件下，二乙酰与尿素发生缩合反应，生成红色的4,5-二甲基-2-氧咪唑化合物。
该化合物的颜色深浅与尿素的含量成正比。
通过比色法，可以计算出血清中尿素的含量。
三、实验材料1. 试剂：二乙酰-肟试剂、血清、盐酸、氢氧化钠、蒸馏水等；2. 仪器：紫外可见分光光度计、移液器、试管、试管架等。
四、实验步骤1. 标准曲线绘制：（1）取6支试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml的标准尿素溶液；（2）向各试管加入2ml的二乙酰-肟试剂，充分混匀；（3）将试管置于60℃水浴中反应30分钟；（4）取出试管，用蒸馏水定容至5ml；（5）以蒸馏水为空白，在波长540nm处测定各管的光密度（OD）；（6）以尿素浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 血清尿素含量测定：（1）取6支试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml的血清样本；（2）按照标准曲线绘制步骤中的操作，进行反应和测定；（3）以蒸馏水为空白，在波长540nm处测定各管的光密度（OD）；（4）根据标准曲线，计算血清中尿素的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：绘制标准曲线，结果显示尿素浓度与光密度呈线性关系，相关系数R²=0.998。
2. 血清尿素含量测定：根据标准曲线，计算各血清样本中尿素的含量，结果如下：样本1：尿素含量为5.2mmol/L；样本2：尿素含量为6.8mmol/L；样本3：尿素含量为7.4mmol/L；样本4：尿素含量为8.2mmol/L；样本5：尿素含量为9.0mmol/L；样本6：尿素含量为10.0mmol/L。
六、实验讨论1. 实验过程中，二乙酰-肟试剂的浓度、反应时间、温度等因素对实验结果有较大影响，应严格控制实验条件，以保证结果的准确性。
血生化中尿素的检测方法
血生化中尿素的检测方法
血生化中尿素的常见检测方法包括以下几种：
1. 尿素测定法：通过测定血液中尿素的浓度来评估肾脏功能。
这种方法常用于一般血液检查中，可以使用尿素酶法、尿素硝酸脱氮法等不同的技术。
2. 血尿素氮（BUN）测定法：通过测定尿液中尿素的氮含量来评估肾脏功能。
这种方法常用于评估肾脏疾病和蛋白质代谢紊乱。
3. 尿液尿素测定法：通过测定尿液中尿素的浓度来评估肾脏功能和蛋白质代谢。
这种方法常用于尿液分析中。
4. 血液尿素酸盐（或尿素氮）分析：通过测定血液中尿素酸盐或尿素氮的含量来评估蛋白质代谢和肾脏功能。
这些方法都是常规的临床检测方法，可以由医院的化验室或临床检验中心进行检测。
具体的检测方法选择会根据具体情况和需要来确定。
尿素氮测定
取4只试管，具体操作按下表进行。 加入物(ml) 空白管（B） 标准管（S） 测定管（人） 测定管（牛）
血清
尿素标准应用液 蒸馏水 二乙酰一肟溶液 尿素氮试剂
—
— 0.1 0.5 5.0
—
0.1 — 0.5 5.0
0.1
— — 0.5 5.0
0.1
— — 0.5 5.0
各管混匀后，置沸水中加热15min，取出置冷水中冷却后，分光光度计波长540nm，
【注意事项】 1．试剂中加入硫氨脲和镉离子可增加显色强度和色泽的稳 定性，还可消除羟胺的干扰，但仍有轻度退色现象，故应及时
比色。
2．尿液中尿素亦可用此法测定，但因尿液中尿素浓度较高，
需将尿液作50倍以上稀释后再行测定。
3．尿素浓度以前习惯用尿素氮表示，尿素分子中含有二个 氮原子，因此1mmol/L尿素等于2 mmol/L尿素氮。世界卫生组 织推荐使用尿素，并以mmol/L表示浓度单位，我国卫生部也已 规定一律使用尿素，不再使用尿素氮一词。
响肾小球滤过的疾病，都可使血液尿素含量增高。
3) 肾后性疾病：所有使尿路阻塞的因素都可引起血液尿素含量增加，如前列腺肿 大、尿路结石、尿道狭窄、膀胱肿瘤致尿道受压等。
2.血液尿素浓度降低较为少见，除婴儿、妊娠（血容量增加）及低蛋白高糖饮食
外，常见于严重肝病患者，如肝炎合并广泛性肝坏死、肝功能衰竭等。
血清（血浆）尿素氮测定
（二乙酰一肟显色法）
非蛋白含氮化合物包括除蛋白质以外的 尿素、肌酐、肌酸、尿酸、氨基酸、核苷酸、 嘌呤、谷胱甘肽等多种含氮有机物。体内氨 基酸代谢产生的氨，主要经肝脏生成尿素， 而后又主要经肾脏排出体外。因此，血清尿 素浓度的测定是临床上应用较多的反映肾小
测定血清尿素的方法
测定血清尿素的方法
测定血清尿素的方法有很多种，以下是其中几种常见的方法：
1. 色谱法：使用气相色谱法或者液相色谱法，将血清中的尿素分离出来，并通过检测其峰值的面积或者浓度来确定尿素的含量。
2. 尿素酶法：利用尿素酶催化尿素水解产生氨和二氧化碳，并采用测定氨的方法来间接测定尿素的含量。
3. 尿素氮法：使用气体分析仪测定氨气，通过转化为尿素以后，测量尿素的氮含量来计算尿素的含量。
4. 尿素代谢率法：通过给予标记有碳14或者氢2的尿素，然后测定排出的二氧化碳或者水的放射性活性，从而测定尿素的代谢率。
这些方法各有优缺点，选择合适的方法取决于实验条件、设备以及研究需求。
在实际应用中，一般会根据实验目的和实验条件选择最适合的测定方法。
脲酶——Berthlot比色法测定游泳水中尿素
脲酶——Berthlot比色法测定游泳水中尿素
王荣堂
【期刊名称】《中国卫生检验杂志》
【年(卷),期】1999(9)6
【总页数】2页(P452-453)
【关键词】尿素;脲酶;Berthlot;比色法;游泳池;水检测
【作者】王荣堂
【作者单位】盐都县卫生防疫站
【正文语种】中文
【中图分类】R123.1;R123.5
【相关文献】
1.脲酶—Berthlot比色法测定游泳水中尿素 [J], 王荣堂
2.脲酶-水杨酸盐光度法测定游泳池水中尿素及Cu^(2+)干扰的消除 [J], 龚仁敏;陈发扬;刘慧君;孙影芝
3.脲酶──Berthlot比色法测定游泳池水中尿素的影响因素分析 [J], 李慧;武传芹
4.邻苯二甲醛法、OPA法、脲酶—Berthlot法测定游泳池水中尿素的研究 [J], 陈国忠;钟建;刘天洁;陈建鸿;付大友
5.二乙酰一肟比色法测定游泳池水中尿素的不确定度分析 [J], 董静刚
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实验十三血清尿素氮测定（脲酶—Berthelot比色法）
一、实验目的与要求
1 了解血液尿素氮（BUN）在人体营养学上的生理学意义及其在代谢上的重要性。
2 掌握血液尿素氮测定方法及721分光光度计或AT648半自动生化多用仪的使用方法和现代生化检测试剂盒的应用。
二、实验原理
尿素在脲酶作用下分解生成氨。
在碱性条件下，经次氯酸氧化生成的氯胺与苯酚被亚硝基铁氰化钠催化生成蓝色的靛酶。
其反应式为： CH2NH2N尿素O+HOH脲酶NH3彩+CHOH2N氨基甲酸O-2NH3+CO2
氨
NH3+OCl-NH2Cl+OH-
次氯酸氨胺催化剂
NH2Cl+OH+OH-Cl-+H2O+HONH2
苯酚P胺基苯酚
HONH2+OH-+O2==N——O-+H2O
酚靛三、实验仪器与试剂
1 仪器
（1） AT648半自动生化分析仪1台；
（2） 4孔恒温水浴锅1个；
（3）振动摇床1台。
2 分组及仪器2人一组，每组仪器包括：
（1）试管架1个；
（2） 2ml试管10个；
（3） 20μl微量加样器1个；
（4） 1ml移液管1个；
（5） 5ml移液管2个；
（6）吸耳球1个；
（7）搪瓷盘1个；
（8）微量加样滴头；
（9）吸水纸。
3 本试剂盒内含5种试剂：
（1）脲酶（冻干） 2瓶
（2） pH 8.0缓冲液：由乙二胺四乙酸二钠盐和磷酸氢二钾组成 1×46ml
（3）显色剂Ⅰ：由苯酚和亚硝基铁氰化钠组成 1×225ml
（4）显色剂Ⅱ：由氢氧化钠和安替福民组成 1×225ml
（5）尿素氮标准液（20mg/dl） 2×2ml
四、实验步骤
1 血清
（1）取脲酶一瓶，用23.0ml pH 8.0缓冲液溶解。
（2）于一系列试管中，按下表加入各溶液。
表131系列反应管中所加溶液的量
空白管标准管样品管样品（μl）——20标准液（μl）—20—酶液（μl）0.50.50.5 （3）于37℃水浴中保温15min，然后各管分别加入显色剂Ⅰ和显色剂Ⅱ各2.5ml。
（4）再于37℃水浴中保温20min，取出冷却至室温，于721分光光度计/ AT648半自动生
化分析仪上550nm波长下比色。
以空白管校正“0”点、读取各管的光密度。
2 尿液用无氨水将尿液稀释20倍，再按上法测定。
五、实验结果与分析
尿素氮含量（mg/dl）=测定管吸光度标准管吸光度×稀释倍数×20mg/dl线性范围：血清中尿素氮含量为100mg/dl或尿液中尿素氮含量为2000mg/dl以内，用本试剂盒测得的结果线性良好。
六、实验报告
参照《营养学》、《生物化学》原理分析。
七、注意事项
1 试剂为空白对照；
2 每组样品做2～3个平行实验；
3 正常参考值：正常人血清尿素氮含量为5～17mg/dl；尿素氮标准液20mg/dl=7.14mmol/L。