血清尿素氮的测定
血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法作业指导书
血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法作业指导书1.实验原理脲酶-谷氨酸脱氢酶（Urease-GLDH）连续监测法。
尿素被脲酶水解产氨。
在NADH的存在下，氨和α-酮戊二酸反应生成谷氨酸，NADH同时被氧化成NAD＋。
NADH的减少和样品中尿素浓度成正比。
本法是连续监测法。
脲酶尿素+ 2H2O 2 NH4＋+ 2 HCO3－谷氨酸脱氢酶NH4＋+α-酮戊二酸+NADH L-谷氨酸+NAD＋+H2O2 标本：2.1 病人准备：血清无特殊要求。
要留取24小时尿样。
2.2 类型：血清、血浆（不可使用肝素铵）、新鲜尿液。
无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用无铵离子的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。
用新鲜尿液作样品时，用蒸馏水作1:100稀释。
3. 标本存放：血清或血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1年。
尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1个月。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂：申能尿素测定试剂盒（142 3107170 1 试剂1：6×64ml＋试剂2：6×16ml）6.1.1 试剂组成试剂1：Tris缓冲液pH7.8 120mmol/Lα-酮戊二酸7mmol/LADP 0.6mmol/L谷氨酸脱氢酶≥1000U/L脲酶≥6000U/L试剂2：NADH 0.25mmol/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存试剂保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：此试剂为体外诊断用。
不要入口，吞下有害。
保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。
实验十三血清尿素氮测定(脲酶—Berthelot比色法)
实验十三血清尿素氮测定（脲酶—Berthelot比色法）一、实验目的与要求1 了解血液尿素氮（BUN）在人体营养学上的生理学意义及其在代谢上的重要性。
2 掌握血液尿素氮测定方法及721分光光度计或AT648半自动生化多用仪的使用方法和现代生化检测试剂盒的应用。
二、实验原理尿素在脲酶作用下分解生成氨。
在碱性条件下，经次氯酸氧化生成的氯胺与苯酚被亚硝基铁氰化钠催化生成蓝色的靛酶。
其反应式为： CH2NH2N尿素O+HOH脲酶NH3彩+CHOH2N氨基甲酸O-2NH3+CO2氨NH3+OCl-NH2Cl+OH-次氯酸氨胺催化剂NH2Cl+OH+OH-Cl-+H2O+HONH2苯酚P胺基苯酚HONH2+OH-+O2==N——O-+H2O酚靛三、实验仪器与试剂1 仪器（1） AT648半自动生化分析仪1台；（2） 4孔恒温水浴锅1个；（3）振动摇床1台。
2 分组及仪器2人一组，每组仪器包括：（1）试管架1个；（2） 2ml试管10个；（3） 20μl微量加样器1个；（4） 1ml移液管1个；（5） 5ml移液管2个；（6）吸耳球1个；（7）搪瓷盘1个；（8）微量加样滴头；（9）吸水纸。
3 本试剂盒内含5种试剂：（1）脲酶（冻干） 2瓶（2） pH 8.0缓冲液：由乙二胺四乙酸二钠盐和磷酸氢二钾组成 1×46ml（3）显色剂Ⅰ：由苯酚和亚硝基铁氰化钠组成 1×225ml（4）显色剂Ⅱ：由氢氧化钠和安替福民组成 1×225ml（5）尿素氮标准液（20mg/dl） 2×2ml四、实验步骤1 血清（1）取脲酶一瓶，用23.0ml pH 8.0缓冲液溶解。
（2）于一系列试管中，按下表加入各溶液。
表131系列反应管中所加溶液的量空白管标准管样品管样品（μl）——20标准液（μl）—20—酶液（μl）0.50.50.5 （3）于37℃水浴中保温15min，然后各管分别加入显色剂Ⅰ和显色剂Ⅱ各2.5ml。
血清尿素氮的测定[方案]
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血清尿素氮的测定【目的要求】1.了解血清尿素氮测定的方法及临床意义。
2.复习尿素的生成机理及其意义。
【实验原理】血清（或血浆）中的尿素，在尿素氮试剂的酸性环境中与二乙酰-肟（DAM）共沸后，可缩合成一红色化合物，称为fearon反应。
其颜色的深浅与血清（或血浆）中尿素的含量成正比，与同样处理的尿素氮标准液比色，即可测算出血清（或血浆）中尿素氮的含量。
【实验材料】1.器材刻度吸管（0.1ml、2ml、10ml）恒温水浴箱分光光度计2.试剂（1）待测血浆（2）尿素氮试剂（3）二乙酰-肟试剂（4）尿素氮标准液【操作步骤】取试管三支按下表操作1：4稀释血清（或0.1血浆）尿素氮标准液0.1（0.02mg/ml）蒸馏水0.1二乙酰-肟0.5 0.5 0.5尿素氮试剂 5.0 5.0 5.0 混匀，置沸水浴中加热15min，立即用自来水冷却5分钟。
分光光度计选用540nm波长，以空白管调零点，读取各管吸光度。
计算及结果分析尿素（mg%）×尿素氮标准液浓度*5(mg/ml；mg/100ml)【注意事项】1. 此法灵敏度高，用量极微（一般只需0.02ml血清即可）。
本实验是先将血清用生理水以1：4加以稀释再取0.1ml，故最后计算时，应乘以稀释倍数“5”2. 试剂中加入硫胺脲和镉离子，可增进显色强度和色泽稳定性，但仍有轻度褪色现象（小于5%/h）。
3. 此法操作简单，特异性强，不受其他非蛋白质含氮化合物如尿酸、肌酸等影响，但应控制好实验条件。
4. 吸管必须校正，使用时务必注意清洁干净，加量务必准确。
5.尿液中的尿素氮也可用此法进行测定。
由于尿液中尿素氮含量高，标本需用蒸馏水以1:50稀释。
如果呈色后吸光度仍超过本法的线性范围，还需将尿液再稀释，重新测定。
【思考题】。
测定血清尿素的实验报告
一、实验目的1. 掌握血清尿素测定的原理和方法。
2. 熟悉二乙酰-肟法测定血清尿素氮的实验操作。
3. 了解实验中可能出现的误差及其处理方法。
二、实验原理血清尿素氮（Blood Urea Nitrogen，BUN）是血液中尿素氮的浓度，是反映肾功能的重要指标。
尿素氮是蛋白质代谢的终产物，主要由肝脏产生，通过肾脏排泄。
二乙酰-肟法是一种常用的测定血清尿素氮的方法，其原理如下：在酸性反应环境中加热，尿素与二乙酰缩合，生成色素原二嗪，称为Feorin反应。
因为二乙酰不稳定，所以通常由反应系统中二乙酰-肟与强酸作用，产生二乙酰，二乙酰与尿素反应，综合生成红色的二嗪。
其颜色的深浅与血清中尿素含量成正比。
三、实验材料1. 试剂：- 碱性试剂：在三角烧瓶中加蒸馏水约100ml，然后加入浓硫酸44ml及85%H3PO466ml冷至室温，加入硫氨脲50mg及硫酸镉2g溶解后加蒸馏水稀释至1升，置棕色瓶放冰箱保存，可稳定半年。
- 二乙酰-肟溶液：称取二乙酰-肟20g，加蒸馏水约900ml溶解后，再用蒸馏水稀释至1升置棕色瓶中，贮存放于冰箱内可保存半年不变。
- 尿素标准贮存液（100mmol/L）：称取干燥纯尿素（MW60.06）0.6g，溶解于水中并稀释至100毫升，加0.1g叠氮钠防腐，置冰箱内稳定六个月。
- 尿素标准应用液（5mmol/L）：取5.0ml贮存液用去氨蒸馏水稀释至100ml。
2. 仪器：- 分光光度计- 离心机- 实验室试管四、实验步骤1. 标准曲线的绘制：- 取5支试管，分别加入0、0.5、1.0、1.5、2.0ml尿素标准应用液，用去氨蒸馏水稀释至5.0ml。
- 向每支试管中加入2.0ml碱性试剂，混匀。
- 将试管置于沸水中加热5分钟，取出冷却至室温。
- 以540nm波长，1cm光程，测定各管吸光度。
- 以尿素浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定：- 取2支试管，分别加入0.5ml血清和0.5ml尿素标准应用液，用去氨蒸馏水稀释至5.0ml。
血清尿素氮测定的原理方法及临床意义
血清尿素氮测定的原理方法及临床意义
血清尿素氮（BUN）是反映肾脏排泄功能的一个重要指标，也是评价肾脏疾病和代谢紊乱的标准检查之一。
BUN的原理方法：
BUN是指血液中尿素的浓度，它的检测是通过测定血液中尿素的含量来完成的。
尿素
是蛋白质代谢的末端产物，经由肝脏转化生成后再经过肾脏排泄。
正常情况下，尿素在肾
小球滤过后主要在肾小管内被再吸收，防止其大量丢失。
血中尿素的浓度，受到肝脏合成、尿素的经肾脏的再吸收、肾脏排泄和肾脏灌注量的影响。
BUN的测定方法包括酶法、光度法、电化学法、液体色谱法等，其中光度法是目前应用最广泛的方法之一。
临床意义：
BUN的高低可以反映肾脏功能是否受到影响。
一般来说，BUN增高是肾功能受损的重要指标，包括急性肾损伤、肾衰竭、肾小球肾炎、肾盂肾炎、泌尿系梗阻等病态情况。
此外，由于肝脏是尿素生成最重要的器官，肝脏疾病如肝炎、肝硬化等也会影响BUN的测定结果。
对于临床医生而言，BUN的测定结果可以作为诊断和治疗的重要线索，也可以用来监测肾
脏疾病和代谢紊乱的治疗效果。
需要注意的是，BUN的测定结果还应考虑个体差异、摄入蛋白质的数量和质量等因素
的影响。
在诊断或监测疾病的过程中，应结合临床病史、身体检查和其他相关检查结果，
综合分析判断。
血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法
血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法1.实验原理脲酶-谷氨酸脱氢酶（Urease-GLDH）连续监测法。
尿素被脲酶水解产氨。
在NADH的存在下，氨和α-酮戊二酸反应生成谷氨酸，NADH同时被氧化成NAD＋。
NADH 的减少和样品中尿素浓度成正比。
本法是连续监测法。
脲酶尿素+ 2H2O 2 NH4＋+ 2 HCO3－谷氨酸脱氢酶NH4＋+α-酮戊二酸+NADH L-谷氨酸+NAD＋+H2O2 标本：2.1 病人准备：血清无特殊要求。
要留取24小时尿样。
2.2 类型：血清、血浆（不可使用肝素铵）、新鲜尿液。
无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用无铵离子的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。
用新鲜尿液作样品时，用蒸馏水作1:100稀释。
3. 标本存放：血清或血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1年。
尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1个月。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂：奥林巴斯尿素测定试剂盒试剂1：＋试剂2：6.1.1 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.2 试剂稳定性与贮存试剂保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.4 注意事项：此试剂为体外诊断用。
不要入口，吞下有害。
保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。
应采取必要的预防措施使用试剂。
6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
血清尿素氮测定的原理
血清尿素氮测定的原理嘿，朋友们！今天咱们来聊一聊血清尿素氮测定这个事儿。
你可能会想，这血清尿素氮测定是啥玩意儿啊？为啥要测定它呢？先别急，听我慢慢给你说。
你看啊，咱们人体就像一个超级复杂又神奇的小宇宙。
身体里的各种物质就像小宇宙里的各个星球，都有着自己独特的作用和运行轨迹。
血清尿素氮呢，它就是这个小宇宙里比较重要的一个“小星球”。
那血清尿素氮是怎么来的呢？这就和咱们吃的东西有关啦。
咱们吃进去蛋白质，就像给身体这个大工厂送进去了原材料。
这些蛋白质经过身体里各种“小工人”（酶啊之类的物质）的加工，在肝脏这个大车间里就会产生尿素。
这尿素啊，就像是加工后的产品，会随着血液循环这个“运输大道”跑到肾脏那里去。
肾脏呢，就像一个超级精密的过滤器，它会把尿素过滤出来，然后排出体外。
这血清尿素氮其实就是血液里尿素所含的氮元素的量。
现在咱们就来说说这血清尿素氮测定的原理。
这就好比你要数清楚一个仓库里某种货物的数量一样。
不过，这个仓库就是咱们的血液，货物就是尿素氮。
目前啊，测定血清尿素氮有好几种方法呢。
有一种方法叫二乙酰一肟法。
这个方法可有趣了。
你可以把它想象成一场化学反应的小聚会。
在这个聚会里，二乙酰一肟就像一个超级活跃的小嘉宾，它会和尿素氮来一场特殊的“互动”。
在酸性的环境下，就像给这个聚会提供了一个特定的氛围一样，二乙酰一肟和尿素氮会发生反应，生成一种红色的化合物。
这红色的化合物就像聚会后出现的一个新标志一样。
然后呢，我们就可以通过比色的方法，就像比较颜色的深浅来判断这个红色化合物的多少，从而得出血清尿素氮的含量。
我给你打个比方啊，就像你看颜料混合后的颜色深浅来判断颜料量的多少一样。
这时候你可能会问，那这个方法准不准呢？其实啊，只要按照正确的操作流程来，这个方法还是挺靠谱的呢。
还有一种方法叫脲酶法。
这个脲酶啊，它可是尿素的“克星”。
脲酶就像一把专门开尿素这个锁的钥匙。
当脲酶遇到尿素的时候，就会把尿素分解掉。
这个过程就像拆积木一样，脲酶把尿素这个“大积木”拆成了氨和二氧化碳。
尿素氮测定的标准操作规程
尿素氮测定（速率法）1：概述尿素是人体内蛋白氮代谢的终产物，它构成了血液中绝大部分的非蛋白氮.尿素产生于肝脏，经过肾脏排泄至尿中，因此尿素的含量取决于蛋白质的摄入量，蛋白质分解代谢和肾功能。
2：标本的手收集新鲜无溶血标本，血清或血浆样本均不溶血.血浆样本只能采用肝素或EDTA抗凝。
样本在4摄氏度可稳定7天.采血前病人应禁食12小时,采集静脉3ml,待凝固后(最好放在37摄氏度水浴箱内45分钟）通常为加抗凝剂的血液在30—60分钟凝血析出血清.3000r/min离心5-10分钟,分离出血清备用.不建议采用血浆标本。
3方法原理样品中的尿素在试剂中脲酶的催化下与水反应生成氨和二氧化碳，生成的氨与试剂中的酮戊二酸在谷氨酸脱氢酶的催化下产生谷氨酸，同时NADH被氧化为NAD+，从而使340nm处的光吸收值下降.通过监测340nm处光吸收值下降的速率，可计算出样品中尿素的浓度。
4剂来源，配置及储存试剂来源：试剂配置：试剂一和试剂二均为液体试剂,可直接使用。
启用后在2—8度可稳定30天.若试剂混浊,或以蒸馏水为空白在340nm处的光吸收值低于1.0A,应予丢弃。
试剂储存：试剂避光储存2-8摄氏度可稳定至标签所示失效期。
5分析仪器CS—600B全自动生化分析仪6计算方法ALT（U/L)=（A/min*Tv*1000）(6.3*Sv＊P）式中Tv=总反应体积Sv=样本体积6.3=NADH在340nm处的毫摩尔消光系数P=比色杯光径(cm）7 线性范围：本实验的线性范围：0—---35mmol/L8 参考范围:2。
82—-—8。
2 mmol/L9 失控控理1：立即重测同一质控品,如重测后结果仍不再允许范围,请进行下一步。
2：新开一瓶质控品，重测失控项目，如新开的质控血清结果正常,那么原来质控血清可能过期或在室温防止时间过长而变质，如结果仍不再允许范围，则进行下一步。
3：进行仪器维护，重测失控项目。
检查仪器状态,查明光源是否更换，比色杯是否需要清洗或更换？对仪器进行清洗等维护.另外还要检查试剂，此时可更换试剂已查明原因。