血清尿素UREA测定
血清尿素的测定标准操作规程
血清尿素的测定标准操作规程【目的】学习血清尿素(Urea)测定方法，了解其意义。
【原理】血清尿素（Urea）是蛋白质的正常代谢产物。
它的测定是常用的衡量肾小球功能的指标之一。
肾性血清尿素含量增加，提示肾小球损伤。
是研究药物肾毒性的重要指标之一。
【器材】兔固定架、注射器、烧杯、可见分光光度计、试管、水浴【药品】0.5%氯化高汞溶液、生理盐水【动物】家兔2只【方法】取家兔2只，1只注射氯化高汞5ml/kg（0.5%氯化高汞溶液1.0ml/kg)，另1只注射等量的生理盐水。
48小时后，从家兔耳静脉取血1ml，制取血清，按血清尿素测定方法测定血清尿素含量。
【结果】记录2只家兔血清尿素含量，比较并分析其差别。
附血清尿素(Urea)测定方法【原理】尿素与二乙酰在酸性反应环境中加热，缩合生成色素原二嗪化合物。
因二乙酰不稳定，不宜直接加入，可由化学反应生成。
通常由反应系统中二乙酰一肟与强酸作用，产生乙二酰。
二乙酰和尿素反应，缩合生成红色的二嗪。
根据颜色深浅确定尿素含量的多少。
【试剂】(1)酸性试剂：在三角烧瓶中加蒸馏水约100ml，然后加入浓硫酸44ml及85%磷酸66ml。
冷至室温，加入硫氨脲50mg及硫酸镉(CdSO4·8H2O)2g。
溶解后用蒸馏水稀释至1L，置棕色瓶中冰箱保存，可稳定6个月。
(2)二乙酰-肟溶液：称取二乙酰-肟20g，加蒸馏水约900ml，溶解后，再用蒸馏水稀释至1L，置棕色瓶中，贮放冰箱内可保存半年。
(3)尿素标准贮存液（100mmol/L）:称取干燥纯尿素(MW=60.06)0.6g，溶解于蒸馏水中，并稀释至100ml，加0.1g叠氮钠防腐，置冰箱内可稳定半年。
(4)尿素标准液应用液(5mmol/L)：取5.0ml贮存液用无氨蒸馏水稀释至100ml.【操作】按表T4-1进行混匀后，置沸水中加热12分钟，置冷水中冷却5分钟后，用分光光度计在波长540nm，以空白管调至零点。
比色读取标准管及测定管的吸光度。
UREA 项目操作手册
SOP标准操作程序UREA 尿素（货号：OSR6134，OSR6234）一、 目的：规范尿素测定的操作程序，确保尿素测定的结果准确二、 适用范围：在Beckman Coulter AU 分析仪上定量测定人血清中的尿素（UREA ） 三、 临床意义尿素在肝脏中合成，它是蛋白质和氨基酸代谢的最终产物。
因此，尿素合成取决于每日的蛋白质摄入量和内源性蛋白质代谢。
在这些代谢过程中产生的绝大多数尿素通过肾小球过滤消除，40 – 60% 扩散返回血液中（与近端小管中的流速无关）。
远侧小管内的重新扩散取决于尿流，受抗利尿激素调节。
在利尿期间，最少量的尿素重新扩散进入血液，大量尿素被排泄到尿液中，血浆尿素浓度很低。
在抗利尿（在少尿性心力衰竭，缺水状态或口渴中，可能出现这种状况）期间，尿素重新扩散到小管内的速度增加，血浆尿素增加。
在肾前性和肾后性肾衰竭中，小管尿流减少，导致远侧小管中的尿素重新扩散增加，肌酐分泌增加。
在心脏代偿失调、蛋白质分解代谢增加和缺水时，尿素会发生肾前性增加。
尿素水平可能因肾脏因素而升高，例如急性肾小球肾炎，慢性肾炎，多囊肾，肾小管坏死和肾硬化。
尿素的肾后性升高可能由泌尿道梗阻引起。
血浆尿素浓度取决于肾灌注、尿素合成速度和肾小球滤过率 (GFR)，在急性肾功能衰竭，慢性肾衰竭和肾前性氮质血症中，可能会升高。
在透析患者中，尿素浓度代表蛋白质的降解，也是代谢状态的指标。
在肾衰竭终末期，尿毒素病征（特别是与胃肠系统有关的尿毒素病征）与尿素浓度有密切的相关性。
在肾功能的鉴别诊断中，血清尿素和血清肌酐通常会一起测定。
四、 方法原理在水和尿素酶存在的情况下，尿素被水解，产生氨和二氧化碳。
在谷氨酸脱氢酶 (GLDH) 存在的情况下，上一反应中产生的氨与 2-酮戊二酸和NADH 结合，产生谷氨酸盐和 NAD+。
单位时间 NADH 吸光度的降低与尿素浓度成正比。
反应原理五、 标本的采集与处理5.1. 受检者的准备：空腹，采集前静坐5min ，如有输液，应在停止输液3min 后在另一侧肢体静脉采集。
尿素(Urea)测定试剂盒(尿素酶-谷氨酸脱氢酶法)产品技术要求lideman
尿素(Urea)测定试剂盒(尿素酶-谷氨酸脱氢酶法)适用范围：本产品用于体外定量测定人血清、血浆或尿液中尿素的含量。
1.1规格试剂1(R1)：4×80mL；试剂2(R2): 4×16mL；试剂1(R1)：2×80mL；试剂2(R2): 2×16mL；试剂1(R1)：5×60mL；试剂2(R2): 5×12mL；试剂1(R1)：2×400mL；试剂2(R2): 2×80mL；试剂1(R1)：3×40mL；试剂2(R2): 3×8mL；试剂1(R1)：1×20mL；试剂2(R2): 1×6mL。
校准品（选配）：1×3mL。
1.2 组成1.2.1试剂组成试剂1（R1）（以下简称R1），试剂2(R2)（以下简称R2）组成见表1。
表1 试剂组成1.2.2校准品的组成：单个水平的液体校准品，在50mmol/L PH=7.6 的Tris 缓冲液中添加尿素纯品，稳定剂<0.1%；定值范围：(5-9)mmol/L。
2.1 外观液体双试剂：R1: 无色澄清液体；R2:无色澄清液体。
校准品：无色至浅黄色。
2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。
2.3 试剂空白2.3.1 空白吸光度在37℃、340 nm波长、1cm光径条件下，用去离子水或（生理盐水）作为样品加入试剂测试时，试剂空白吸光度应≥1.5ABS。
2.3.2 空白吸光度变化率在37℃、340 nm波长、1cm光径条件下，用去离子水或（生理盐水）作为样品加入试剂测试时，试剂空白吸光度变化率应＜0.04ABS/min。
2.4 分析灵敏度浓度为7.14mmol/L时，吸光度变化范围在（0.01- 0.11）之间。
2.5 线性范围在[0.5–33.70]mmol/L线性范围内，线性相关系数r2≥0.995。
在（7–33.70]mmol/L范围内的相对偏差≤±10%,测定结果[0.5–7]mmol/L时绝对偏差≤±0.7mmol/L。
测定血清尿素的实验报告
一、实验目的1. 掌握血清尿素测定的原理和方法。
2. 熟悉二乙酰-肟法测定血清尿素氮的实验操作。
3. 了解实验中可能出现的误差及其处理方法。
二、实验原理血清尿素氮（Blood Urea Nitrogen，BUN）是血液中尿素氮的浓度，是反映肾功能的重要指标。
尿素氮是蛋白质代谢的终产物，主要由肝脏产生，通过肾脏排泄。
二乙酰-肟法是一种常用的测定血清尿素氮的方法，其原理如下：在酸性反应环境中加热，尿素与二乙酰缩合，生成色素原二嗪，称为Feorin反应。
因为二乙酰不稳定，所以通常由反应系统中二乙酰-肟与强酸作用，产生二乙酰，二乙酰与尿素反应，综合生成红色的二嗪。
其颜色的深浅与血清中尿素含量成正比。
三、实验材料1. 试剂：- 碱性试剂：在三角烧瓶中加蒸馏水约100ml，然后加入浓硫酸44ml及85%H3PO466ml冷至室温，加入硫氨脲50mg及硫酸镉2g溶解后加蒸馏水稀释至1升，置棕色瓶放冰箱保存，可稳定半年。
- 二乙酰-肟溶液：称取二乙酰-肟20g，加蒸馏水约900ml溶解后，再用蒸馏水稀释至1升置棕色瓶中，贮存放于冰箱内可保存半年不变。
- 尿素标准贮存液（100mmol/L）：称取干燥纯尿素（MW60.06）0.6g，溶解于水中并稀释至100毫升，加0.1g叠氮钠防腐，置冰箱内稳定六个月。
- 尿素标准应用液（5mmol/L）：取5.0ml贮存液用去氨蒸馏水稀释至100ml。
2. 仪器：- 分光光度计- 离心机- 实验室试管四、实验步骤1. 标准曲线的绘制：- 取5支试管，分别加入0、0.5、1.0、1.5、2.0ml尿素标准应用液，用去氨蒸馏水稀释至5.0ml。
- 向每支试管中加入2.0ml碱性试剂，混匀。
- 将试管置于沸水中加热5分钟，取出冷却至室温。
- 以540nm波长，1cm光程，测定各管吸光度。
- 以尿素浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定：- 取2支试管，分别加入0.5ml血清和0.5ml尿素标准应用液，用去氨蒸馏水稀释至5.0ml。
血清尿素UREA测定
血清尿素UREA测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理在下述反应中，NAD+生成速率与样本中尿素（尿素氮）的浓度成正比。
通过在340 nm处测定固定时间间隔内吸光度的下降速率，即可测得样本中尿素（尿素氮）的浓度。
尿素酶尿素 + 2H2O 2 NH4＋ + 2 HCO3－谷氨酸脱氢酶NH4＋+α-酮戊二酸+NADH+H+ L-谷氨酸+NAD＋+H2O3 标本：3.1 病人准备：血清无特殊要求。
要留取24小时尿样。
3.2 类型：血清、血浆（不可使用肝素铵）、新鲜尿液。
无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用无铵离子的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。
用新鲜尿液作样品时，用蒸馏水作1:100稀释。
3.3标本存放：血清或血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1年。
尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1个月。
3.4 标本运输：常温条件下保存运输。
3.5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。
4 实验材料4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司UREA试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成试剂1（R1）：α-酮戊二酸7.5mmol/L谷氨酸脱氢酶＞800U/LNADH 0.35mmol/L二磷酸腺苷 1.5mmol/L Tris缓冲液115mmol/L试剂2（R2）：Tris缓冲液115mmol/L尿素酶＞40000 U/L α-酮戊二酸7mmol/L4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起有效期为12个月。
4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
4.1.5 注意事项：试剂中含有防腐剂叠氮化钠，可能存在一定的刺激作用，请勿直接接触皮肤、眼睛。
人(Human)尿素( urea)ELISA试剂盒说明书
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human）尿素（Urea）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被尿素（Urea）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的尿素（Urea）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
上海笃玛生物科技有限公司试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、1、2、4、8、16mmol/L试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
尿素检测标准操作规程SOP
还原型辅酶I（NADH)
0.3mol/l
α-酮戊二酸
13.0mol/l
不同批次的试剂不推荐混合使用
7.4储存条件有效期
试剂在2-8℃保存可稳定1年，试剂开瓶后于2-8℃可稳定1个月。
7.5参数设置
主波长
340nm
辅助波长
405nm
反应方法
速率法
反应温度
37℃
反应方向
向下
试剂1
200ulቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
样本
2.5ul
4.1生理性：高蛋白饮食可引起血尿素浓度和尿液排出量显著增高。成人血清尿素浓度男性比女性平均高出0.3-0.8mmol/l，并随着年龄增加有增高倾向。妊娠妇女由于血容量增加，尿素浓度比非孕妇低。
4.2病理性：分为肾前性、肾性、肾后性。①肾前性:主要是严重失水引起的血液浓缩，肾血流量減少及肾小球滤过率降低，从而使尿素潴留，可见于剧烈呕吐、肠梗阻和长期腹泻;②肾性:为最常见的因素，可见于急性肾小球肾炎、肾功能衰竭、慢性肾盂肾炎及中毒性肾炎等，在肾功能不全的代偿期可见尿素轻度升高(＞8.0mmol/L)，肾功能衰竭失代偿期，尿素可中度升高(17.9～21.4mmol/L)，肌酐也中度升高(442.0umol/L);尿毒症时尿素＞21.4mmol/L，肌酐也可达1800umol/L，为尿毒症的诊断标准之一;③肾后性:如前列腺肥大、尿路结石、尿道狭窄、膀胱肿瘤等都可能使尿路阻塞引起血尿素升高。血液尿素减少较为少见，除了妊娠、蛋白质营养不良等情況外。常表示有严重的肝病、肝坏死。
12.2尿素氮测定只是临床医师对患者进行诊断的指标之一，临床医师还要根据患者的体征、病史及其他的诊断项目、诊断手段进行综合判断。
13.性能指标
13.1线性范围：在（0.3-35.7）mmol/L范围内：a)线性相关系数（r）应>0.995;b)（0.3-10.0）mmol/L范围内，线性偏差应≦2.0mmol/L;（10.0-35.7）mmol/L范围内，线性偏差应该≦10.0%。
血清尿素尿素氮(UreaBUN)测定标准操作程序SOP文件
CALIBRATION METHOD [ LINEAR ]
POINT(3) [ 0 ]
CALIBRATION POINT [ 2 ]
POINT(4) [ 0 ]
SPAN POINT [ 2 ]
WAVELENGTH(PRIMARY) [ 340 ]
DUPLICATE LIMIT(%) [ 6 ]
SENSITIVITY LIMIT(HIGH) [ -22 ]
R.VOLUME(R1) [ 180 ]
SE(R2) [ 0 ]
S1 ABS(HIGH) [ 20000 ]
R.VOLUME(R3) [ 110 ]
来源：Precinorm (罗氏正常值质控)
Precipath (罗氏病理值质控)
ABCD医院
生化实验室
文件编号：
ABCD-SOP-04-19
血清尿素/尿素氮（Urea/BUN）测定
版序：ABCD
页码：第2页，共4页
其它适合的质控品
贮存条件：置2-8℃冰箱至有效期。
准备：直接使用。
质控间隔时间及限制：应视不同地区及各自实验室情况而定。质控结果应在限定的范围之内，如果超出范围，实验室应根据情况采取措施。
9.2在测定过程中，各种器材和蒸馏水应无氨离子污染，否则结果偏高。GLDH的测定会在反应杯中残留氨，会干扰到UREA/BUN的检测。因此不能将此两个项目安装在一起。
9.3血氨升高可使尿素结果升高。尿液中，内生得氨也会干扰UREA/BUN的检测。在酸性条件下，检测结果也会偏高。
9.4仅应用于体外诊断。
ABCD医院
生化实验室
文件编号：
ABCD-SOP-04-19
血清尿素/尿素氮（Urea/BUN）测定
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血清尿素UREA测定
1 检验目的
指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理
在下述反应中，NAD+生成速率与样本中尿素（尿素氮）的浓度成正比。
通过在340 nm处测定固定时间间隔内吸光度的下降速率，即可测得样本中尿素（尿素氮）的浓度。
尿素酶
尿素 + 2H2O 2 NH4＋ + 2 HCO3－
谷氨酸脱氢酶
NH4＋+α-酮戊二酸+NADH+H+ L-谷氨酸+NAD＋+H2O
3 标本：
3.1 病人准备：血清无特殊要求。
要留取24小时尿样。
3.2 类型：血清、血浆（不可使用肝素铵）、新鲜尿液。
无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用无铵离子
的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。
用新鲜尿液作样品时，用蒸馏水作1:100稀释。
3.3标本存放：血清或血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1年。
尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1个月。
3.4 标本运输：常温条件下保存运输。
3.5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。
4 实验材料
4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司UREA试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成
试剂1（R1）：α-酮戊二
酸
7.5mmol/
L
谷氨酸脱氢
酶
＞800U/L
NADH 0.35mmol
/L
二磷酸腺苷 1.5mmol/L Tris缓冲液
115mmol/L
试剂2（R2）：
Tris缓冲液115mmol/
L
尿素酶＞40000 U/L α-酮戊二酸7mmol/L
4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起有效期为12个月。
4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
4.1.5 注意事项：试剂中含有防腐剂叠氮化钠，可能存在一定的刺激作用，请勿直接接触皮肤、眼睛。
一旦接触，即用大量清水冲洗。
请勿吞服。
4.2 校准品：使用上海复星长征医学科学有限公司提供的UREA校准品对自动分析仪进行校准。
4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。
5 仪器
AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪
6 操作步骤
6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。
6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。
6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。
6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程。
7 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
8 计算方法：以UREA复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mmol/L 报告。
9 参考值范围
成人2.5-6.4 mmol/L（注：各实验室应有自己的参考范围。
）
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。
根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。
我室参考值2.5-6.6 mmol/L
10 临床意义
尿素是蛋白质分解代谢的含氮终产物。
高尿素血症或氮血症表现为血液中尿素水平升高。
鉴别肾前和肾后氮血症时可以同时检测尿素和肌酐。
因脱水、蛋白质代谢增加、皮质醇治疗或肾脏灌注减少等引起的肾前氮血症，表现为尿素水平升高而肌酐水平正常。
由泌尿管道阻塞引起的肾后氮血症，表现为尿素和肌酐水平都升高，但肌酐升高程度较小。
发生肾病时，肾小球滤过作用明显下降或蛋白质摄入量大于200 g/天都会导致尿素浓度升高。
尿素氮的检测用于诊断和治疗某些肾脏疾病和代谢紊乱。
尿素氮大约占血液中非蛋白氮的75%。
它通过肝脏中的氨进行合成，是蛋白质脱氨作用的产物。
通过肾小球从血液中过滤尿素到尿中，是消除体内多余氮的主要方法。
血液尿素氮（BUN）水平是肾功能以及肾前状态和肾后状态的度量标准，肾前因素引起的BUN的升高包括心脏代偿失调，缺水或增加的蛋白质分解代谢。
水平增加的肾脏因素有急性肾小球肾炎，慢性肾炎，多囊肾，肾纤维化和肾小管坏死。
任何类型的泌尿道的梗塞受阻是BUN水平升高的肾后因素1。
肾小球清除尿素和肌酸酐，但是，尿素随后部分地被肾小管重吸收，然而肌酸酐却不会。
因此，血清尿素氮和血清肌酸酐测定经常同时用于肾功能的不同诊断中。
11 操作性能
11.1试剂空白：。