缺血性脑卒中患者同型半胱氨酸代谢相关酶基因突变的研究 Genetic Mutations of Homocysteine Meta

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慢性脑供血不足患者认知功能与同型半胱氨酸水平的相关性

慢性脑供血不足患者认知功能与同型半胱氨酸水平的相关性苏增锋;张颖;余其贵;王萍;杨琳琳;苏世红【期刊名称】《中国老年学杂志》【年(卷),期】2017(037)001【摘要】目的：探讨慢性脑供血不足（CCCI）患者认知功能与血浆同型半胱氨酸（Hcy）的相关性。

方法对47例 CCCI 患者采用蒙特利尔认知评估（MoCA）量表进行评分，并采用化学发光法检测血浆 Hcy。

以同期14例无相关疾患的老年人作为对照。

结果CCCI 患者 MoCA 评分低于对照组（P＜0．01），血浆 Hcy 水平明显高于对照组（P＜0．01，P＜0．05）。

MoCA 评分与血清 Hcy 水平之间呈负相关（r ＝－0．278，P＜0．05）。

结论CCCI患者可以出现轻度认知功能的下降，其认知功能的下降与血清 Hcy 水平呈负相关。

对高同型半胱氨酸血症（ Hhcy）患者应积极采取有效的干预措施，对预防和治疗 CCCI 患者出现的轻度认知障碍可能有积极作用。

【总页数】3页(P87-89)【作者】苏增锋;张颖;余其贵;王萍;杨琳琳;苏世红【作者单位】安徽医科大学第三附属医院合肥市滨湖医院干部病房，安徽合肥230061;安徽医科大学第三附属医院合肥市滨湖医院干部病房，安徽合肥230061;安徽医科大学第三附属医院合肥市滨湖医院干部病房，安徽合肥230061;安徽医科大学第三附属医院合肥市滨湖医院干部病房，安徽合肥230061;安徽医科大学第三附属医院合肥市滨湖医院干部病房，安徽合肥230061;安徽医科大学第三附属医院合肥市滨湖医院干部病房，安徽合肥230061【正文语种】中文【中图分类】R741【相关文献】1.慢性脑供血不足患者认知功能与S100β蛋白、同型半胱氨酸水平的相关性 [J], 刘丹;董艳娟;周冬翠;邢建丽;何跃;张法军2.慢性脑供血不足患者S100β蛋白同型半胱氨酸水平与脑血流量的相关性分析[J], 刘丹;周冬翠;梁桂萍;邢建丽;何跃;张法军3.慢性脑供血不足患者S100β蛋白同型半胱氨酸水平与脑血流量的相关性分析 [J], 吴钢4.探讨慢性脑供血不足患者的血清同型半胱氨酸水平同其颈动脉硬化之间的相关性[J], 白彦君;温暖;刘静霞5.慢性脑供血不足患者认知功能与同型半胱氨酸水平的相关性 [J], 郝服因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

同型半胱氨酸与缺血性脑血管病关系的研究进展

同型半胱氨酸与缺血性脑血管病关系的研究进展脑血管疾病是神经系统的常见病及多发病，其中缺血性脑血管病又占较高比例，约80%以上，是危害人类健康的主要疾病之一，国内外许多研究结果表明，高同型半胱氨酸血症（Hyperhomocys-teinaemia，HHcy）是缺血性脑卒中的一个新的独立危险因素。

1969年Mcully提出同型半胱氨酸(Hcy)可能与动脉粥样硬化有关，到目前已有相当多的资料表明HHcy不仅与冠状动脉粥样硬化性心脏病有关，也是缺血性脑血管病的一个独立危险因素。

Hcy的致病机制越来越受到重视，现将近年来有关研究综述如下。

１Hcy的代谢Hcy是一种含硫氨基酸，在体内由甲硫氨酸脱甲基代谢后生成。

Hcy代谢主要有3条途径：(1)由甲硫氨酸合成酶催化、以维生素Ｂ１２作为辅酶、N5-甲基四氢叶酸为甲基供体，重新甲基化生成甲硫氨酸。

这一反应中的甲基供体是由N5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）作用于N5，10-亚甲基四氢叶酸形成的；(2)甲基化的替代途径，局限于肝细胞内，由甜菜碱提供甲基给Hcy，生成甲硫氨酸及二甲甘氨酸。

(3)在维生素Ｂ６、丝氨酸参与下由胱硫醚－β－合成酶（ＣβＳ）催化合成胱硫醚，后者再在γ－胱硫醚酶作用下生成半胱氨酸和α－丁酮酸。

另外，Hcy还可以直接释放到细胞外，反映甲硫氨酸浓度较低时Hcy生成与代谢之间的不平衡，主要受甲硫氨酸合成酶和胱硫醚－β－合成酶活性影响。

在血浆中，Hcy有3种形式Hcy、双硫Hcy和Hcy半胱氨酸，在正常人体内游离型Hcy很少，约有70%与蛋白结合形式存在。

2 血浆Hcy的测定方法及正常值测定Hcy 的方法较多，有放射酶分析法、气相色谱-质谱分析法、荧光偏振免疫分析法、酶联免疫吸附法和高压液相色谱法等。

目前应用较多且比较成熟的方法是高效液相色谱法。

正常人血浆Hcy呈正偏态分布，目前比较公认的参考范围是正常空腹Hcy水平为5～15 μmol/L。

缺血性脑血管病患者同型半胱氨酸代谢酶MTRR基因A66G及cystatin C基因G73A多态性检测

缺血性脑血管病患者同型半胱氨酸代谢酶MTRR基因A66G 及cystatin C基因G73A多态性检测张爱玲;滕军放;赵莘瑜【摘要】目的:探讨同型半胱氨酸代谢酶蛋氨酸合成酶还原酶基因(MTRR)A66G及半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatin C)基因G73A多态性与缺血性脑血管病(ICVD)的关系.方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCB-RFLP)分析技术检测187例ICVD患者和122例正常对照者MTRR A66G和cystatin C G73A基因多态性.结果:MTRR A66G 3种基因型及等位基因频率在病例组和对照组中的分布差异均有统计学意义(χ2=7.008,P=0.030;χ2=6.045,P=0.014),其中GG型在病例组的分布频率35.3%高于对照组的23.0%(χ2=5.314,P=0.021);cystatin C 3种基因型及等位基因频率在病例组和对照组中的分布差异均无统计学意义(χ2=2.859,P=0.239;χ2=2.886,P=0.089).结论:MTRR A66G基因多态性可能与ICVD相关;GG基因型可能是ICVD的易感基因型;cystatin C G73A基因多态性与ICVD发病无关.【期刊名称】《郑州大学学报（医学版）》【年(卷),期】2010(045)003【总页数】4页(P425-428)【关键词】缺血性脑血管病;蛋氨酸合成酶还原酶;半胱氨酸蛋白酶抑制剂C;基因多态性【作者】张爱玲;滕军放;赵莘瑜【作者单位】郑州大学第一附属医院神经内科,郑州,450052;郑州大学第一附属医院神经内科,郑州,450052;郑州大学第一附属医院神经内科,郑州,450052【正文语种】中文【中图分类】R743.3动脉粥样硬化是缺血性脑血管病(ischemic cerebrovascular disease,ICVD)发生的重要病理生理基础,研究[1-2]表明半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatin C)作为最主要的内源性组织蛋白酶抑制剂,与同型半胱氨酸(Hcy)、半胱氨酸蛋白酶等相互作用,参与动脉粥样硬化及心脑血管疾病的病理生理过程, cystatin C编码基因CST3及Hcy代谢酶蛋氨酸合成酶还原酶(methionine synthase reductase,MTRR)基因发生变异可能导致表型变化而影响体内cystatin C及Hcy水平[3-5],从而可能改变ICVD的易感性,目前国内外报道较少且不一。

同型半胱氨酸联合血脂检测用于缺血性脑卒中的早期诊断

１．２方法
肌细胞增殖相关。临床流行病学的国内外研究结果表明大
２结
量的Ｈｃｙ，Ｈｃｙ氧化和血管平滑肌细胞受体结合减少，平缺血性脑卒中组Ｈｃｙ浓度（２２．６８￣１１．４２）×１０６ｍｏｌ／Ｌ，正滑肌细胞周围组织的氧化还原状态，刺激血管平滑肌细胞常组（１２．３６± ７．１５）×１０ｍｏｌ／Ｌ，经Ｘ分析显示两组增殖。Ｈ… 一增强细胞因子诱导型一氧化氮合酶介导的合之间的差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。缺血性脑卒中成，促进血管平滑肌细胞一氧化氮合成。肌源性一氧化氮组的血清ＴＣ升高，ＨＤＬ．Ｃ降低，比较差异有统计学意可能促进从收缩型血管平滑肌细胞合成反分化，在病理条义（Ｐ＜０．０５），ＴＧ、ＬＤＬ．Ｃ升高差异有统计学意义件下，过量的无细胞毒性和细胞溶解，导致细胞死亡和坏（Ｐ＜０．０５）。见表１。死，促进动脉粥样硬化的形成。从许多方面Ｈｃｙ对血管平滑肌细胞和胶原合成代谢的影响。引起内皮功能障碍和损伤。Ｈｃｙ诱导的ｍＲＮＡ新形成的血管平滑肌细胞中，在壁动组别ｎＴＣＨＤＬ — ＣＬＤＬ — ＣＴＧ脉平滑肌细胞的增殖，并导致动脉内皮细胞脱落，加速动缺血性脑卒中组１５０７．１３ ±１．２００．７５ ±０．２６４．５９￣１．１２３．７５ ±０．８４脉粥样硬化的进程。庙的研究发现，３０％￣４０％脑血管病患对照组８Ｏ４．５５ ±１．１７１．２２ ±０．２９２．４２ ±１．２６１．５６ ±Ｏ．７７者血浆同型半胱氨酸水平升高。Ｈｃｙ与颈动脉内膜中层厚度Ｐ０．００８０．００５０．０４７０．０３２是积极的，也可能是由于Ｈｃｙ对血管内皮细胞及平滑肌细胞

缺血性脑卒中相关基因检测的临床意义

miRNA deregulation in childhood acute lyn孚hoblastic leukemia:a systematic review[J].Epigenomics,2020,12(1):69-80.[4]Wang J,Zhang KX Liu SM,et al.Tumorassociated circulatingmicroRNAs as biomaifcers of cancer[J].Molecules,2014,19⑵：1912-1938.⑸Du X,Zhang J,Wang J,etaL Role of m iRNA in Lung Cancer-Potential Biomaricers and Therapies[J].Curr Pharm Des,20]&23(39):5997-6010,⑹Cutrona G,Matis S,Colombo M,et al.Effects of m iRNA-15andmiRNA-16egression replacement in chronic lyn^hocytic leukemia:implication for therapy[J].Leukemia,2017,31(9):1894-1904.[7]Shafik RE,Abd El Wahab N,Senoun SA,et al.Expression ofMicro-RNA128and Let-7b in Pediatric Acute Lymphoblastic Leukemia Cases[J].Asian Pac J Cancer Pre%201&19(8):2263-2267.[8]Zhang%LiH,Cao R,etaL Suppression of m iR-708inhibits theWnt/beta-catenin signaling pathway by activating DKK3in adult B-all[J],Oncotaiget,2017,8(38):64114-64128.[9]Bhqjwani D,Yang JJ,Pui CH.Biology of childhood acute lynphoblastic leukemia[J].Pediatr Clin North Am,2015,62(1):47-60.[10]Sun C,Chang L,Zhu X.Pathogenesis of E TV6/RUNX1-positivechildhood acute lynq)hoblastic leukemia and mechanisms undep lying its rel卯se[J].Oncotarget,2017,8(21):35445-35459. [11]Pui CH,Mullighan CG,Evans WE,et al.Pediatric acute lyn針hoblastic leukemia:where are we going and how do we get the-re?[J].Blood,2012,120(6):1165-1174.[12]Kizilocak H,Okcu te Effects ofTher^jy in Childhood AcuteLymphoblastic Leukemia Survivors[J].Turic J Haematol,2019,36(1):1-11.[13]Piatopoulou D,A ygeris M,Drakaki I,et aL Clinical utility of m iR-143AniR-182levels in prognosis and risk stratification specificity of BFM-treated childhood acute lyn^hoblastic leukemia[J].Ann Hematol,2018,97(7):1169-1182.[14]Ghodousi ES,Rahgozar S.MicroRNA-326and microRNA-200c:Two novel biomarkers for diagnosis and prognosis of pediatric acute lyn甲hoblastic leukemia[J].J Cell Biochem,2018,119(7): 6024-6032.[15]Saini S,Majid S,Shahryari乂et al.miRNA-708control ofCD44{+)prostate cancer-initiating cells[J].Cancer Res,2012,72(14):3618-3630.[16]Yang H,Su H,Hu N,et al.Integrated analysis of genome-widemiRNAs and tai^eted gene expression in esophageal squamous cell carcinoma(ESCQ and relation to prognosis[J].BMC Cancer, 2020,20(1):38&[17]Duyu M,Durmaz B,Gunduz C,et al.Prospective evaluation of制lole genome microRNA两ression profiling in childhood acute lynq)hoblastic leukemiafJ].Biomed Res Int,2014,2014:967585.[18]Candia J,Cherukuri S,Guo Yet al Uncovering low-dimensional,miR-based signatures of acute myeloid and lyri^hoblastic leukemias with a machine-leaming-driven network q>proach[J].Con-verg Sci Phys Oncol,2015,1(2):025002.[19]de Oliveira JC,Scrideli CA,Brassesco MS,et aL MiR-708-5p isdifferentially pressed in childhood acute lyn④hoblastic leukemia but not strongly associated to clinical featuresfJ].Pediatr Blood Cancer;2015,62(1):177-178.(收稿日期：202M7・27)缺血性脑卒中相关基因检测的临床意义刘梦杰(山东省新泰市人民医院药学部，山东新泰271200)摘要：目的通过分析缺血性脑卒中患者风险基因型，为临床预防缺血性脑卒中的发生提供依据。

同型半胱氨酸、叶酸代谢与冠心病的研究进展

同型半胱氨酸、叶酸代谢与冠心病的研究进展陈斌【摘要】心血管疾病是全世界死亡的主要原因,已成为严重的公共卫生问题.冠心病的传统危险因素已逐渐被认识和干预,而同型半胱氨酸作为冠心病的新型独立危险因素,能较强地预测心血管事件的风险;但补充叶酸等B族维生素的主动干预治疗效果尚存在争议,为此,现对同型半胱氨酸以及叶酸代谢等新近研究成果做一综述.%Cardiovascular disease is the leading cause of death across the world and has become a major public health problem.The traditional risk factors of coronary artery disease has gradually been recognized andtreated.Homocysteine,a novel independent risk factor for coronary artery disease,i a powerful predictor of cardiovascular risk.But the effect of active intervention of folic acid and other vitamin B is controversial.Therefore,this article reviews the relationship between coronary artery disease and the metabolism of homocysteine and folic acid.【期刊名称】《心血管病学进展》【年(卷),期】2018(039)002【总页数】4页(P291-294)【关键词】同型半胱氨酸;叶酸;冠心病【作者】陈斌【作者单位】蚌埠医学院第一附属医院心血管内科,安徽蚌埠233000【正文语种】中文【中图分类】R541.4;R363.2心血管疾病是全世界人口死亡的主要原因，也是2015年中国城乡居民首要死亡原因，心血管疾病的负担日渐加重，已成为重大的社会卫生问题。

同型半胱氨酸与代谢综合征各因素的相关性研究

申秀敏李亚峰范雪梅郭佳李盼王玉清蔡立军
【摘
要】目的
探讨血浆同型半胱氨酸（Ｈｃｙ）与代谢综合征（Ｍｓ）是否存在相关，能否准确预测Ｍｓ，为
收集太原市坝陵桥社区参加体检的５０９２名常住居民
ＭＳ风险的预见和有效防治提供参考及理论依据。方法
ＣｅｎｔｅｒｏｆｔｈｅＳｅｃｏｎｄＣｏｌｌｅｇｅｏｆＭｅｄｉｃａｌｏｆＳｈａｎｘｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｆｖａｌｉｄａｔｉｏｎｇｒｏｕｐ）．Ｔｈｉｓａｌｌｏｗｅｄｆｏｒｍｅａｓｕｒｅ —
ＦｉｒｓｔＨｏｓｐｉｔｌａｏｆＳｈａｎｘｉＭｅｄｉｃｌａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉｙｕａｎ０３０００１．Ｃｈｉｎａ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎａｎｄｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅｃａｐａｃｉｔｙｏｆｐｌａｓｍａｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ（Ｈｃｙ）ａｎｄｍｅｔａｂｏｌｉｃｓｙｎｄｒｏｍｅｆＭＳ）。ｔｈｕｓｐｒｏｖｉｄｉｎｇｔｈｅｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｂａｓｉｓｏｆｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎａｎｄｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎｏｆＭＳ．ＭｅｔｈｏｄｓＢｅ —

脑卒中高危人群高同型半胱氨酸血症影响因素及中医证候研究

脑卒中高危人群高同型半胱氨酸血症影响因素及中医证候研究史亚楠;张志辰;金香兰;张志军;贾鸿雁;吴浩;盛雪;杨秀泉;李爱辉【期刊名称】《世界中医药》【年(卷),期】2016(011)001【摘要】目的:研究脑卒中高危人群高同型半胱氨酸血症(Hyperhomocysteinemia,HHcy)的患病情况,并分析其危险因素,及与其颈动脉超声结果的相关性.方法:采用横断面流行病学调查的方法,将纳入的5 999例脑卒中高危人群分为HHcy组与无HHcy组,比较2组患者人口学资料、危险因素、生化化验结果、颈动脉超声检查结果的差异.结果:HHcy组患者脑卒中、高血压的患病率高于无HHcy组,TIA、血脂异常、糖尿病的患病率低于无HHcy组(P＜0.01).多因素Logistic回归显示年龄、BMI、HDL、吸烟、饮酒是HHcy的危险因素.HHcy 组颈动脉斑块形成的比例高于无HHcy组,多发斑块的比例高于无HHcy组,单发斑块或无斑块的比例低于无HHcy组.HHcy组的内火、痰湿证候要素所占的比例较高,无HHcy组的患者内风、气虚、阴虚所占的比例较高.结论:HHcy与脑卒中、高血压痛有关,与颈动脉斑块形成有关,年龄、BMI、吸烟、饮酒是HHcy的危险因素.【总页数】6页(P16-21)【作者】史亚楠;张志辰;金香兰;张志军;贾鸿雁;吴浩;盛雪;杨秀泉;李爱辉【作者单位】北京中医药大学,北京,100029;北京中医药大学东方医院,北京,100079;北京中医药大学东方医院,北京,100079;北京蒲黄榆社区卫生服务中心,北京,100075;北京方庄社区卫生服务中心,北京,100079;北京方庄社区卫生服务中心,北京,100079;北京王佐镇社区卫生服务中心,北京,100074;北京王佐镇社区卫生服务中心,北京,100074;北京花乡卫生服务中心,北京,100160【正文语种】中文【中图分类】R255.2【相关文献】1.非瓣膜性心房颤动与脑卒中高危人群颈动脉硬化的相关性分析及中医证候要素分布研究 [J], 张丽;张志辰;郝颖;梁晓;金香兰;张志军;贾鸿雁;吴浩;盛雪2.脑卒中高危人群高血压患者中医证候要素特点探究 [J], 郝颖;张允岭;张志辰;李涛;吴业清;吴海涛;王建伟;陈宝鑫3.北京市丰台区部分社区脑卒中高危人群血脂控制现状调查及中医症状证候分析[J], 赵珈艺;张志辰;金香兰;张志军;贾鸿雁;吴浩;盛雪;杨秀泉;李爱辉4.脑卒中高危人群高同型半胱氨酸血症临床分析 [J], 魏艳丽;王凤玲;隋小芳;费秀斌;李欣5.脑卒中高危人群高同型半胱氨酸血症的影响因素 [J], 何素稳; 刘茜; 曹海溶; 张璇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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!!!文章编号!&!9#($**!!!&&’"&#(&!$%(&9!"#"$%&’($)$%*#+*,-*.*&/+$"%#"’"$)0*1%+.2"1)$"34#5/."+%#6)$%"#$+7%$89+&8".%&:$;*<"P Q R >.3,I .3)$SH P Q A 835,Q 2)$G NT >2,O /3!$C M P Q U >2,S 23)$G H M S 235,N )$T V P W 835,E >8!$X W M P QX <23,T >!$X W M V A /.3,W 835!!)?$*34567*-689:*;58<8.=$0+5>6!8>3+64<’99+<46*?@+6A/*?+B 4<18<<*.*89C +-4-D -+E *5>+6=$F ;4-.G A 8;9)&"#&$1A +-4&!?18<<*.*89H +9*(B +*-B *4-?&*B A -8<8.=$C +-4-D -+E *5>+6=$F ;4-.G A 8;9)&"#!$1A +-4"=0+$;)&$#A 84:>1Y5232:/6->:.:/8348Z-2:<Y 0232:2:L .<Y 1L 8Z 80.:2L 21>6:.42!/&!0#"@"**A.316Y 4:.:</83/32,#,4Y 3:<.42!@B C "A %##@L 20.:21:8<8-86Y 4:2/32-2:.[80/4-/3K .:/23:4\/:</46<2-/64:L 8]2$:<2/&!0#5232@"**A 5232->:.:/83.31:<2@B CA %##@5232->:.:/83\2L 212:26:21[Y D @E ,E F G D8LH E I C-2:<81/3*’K .,:/23:4\/:</46<2-/64:L 8]2.31%#38L -.0K 28K 02Z 8L 683:L 807E 24>0:44<8\21:<.::<2Z L 2^>236/248Z /&!0#5232A <8-85232:/6:Y K 2!!?*J "$<2:2L 85232:/6:Y K 2!9)?’J ".31A.00202!!%?’J "/3/46<2-/65L 8>K \2L 2</5<2L :<.3:<842/3683:L 805L 8>K !)?!J 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C(基因错义突变是引起其酶缺乏或活性降低的主要机制##%&本研究旨在探讨中国人/&!0#基因@"**A和1)(基因A%##@位点突变与缺血性脑卒中的关系&)!材料和方法?@?!研究对象选取)$$$年)!月至!&&&年)!月我院神经内科住院的缺血性脑卒中患者*’例$其中男’$例$女!9例$年龄#9!%!岁$平均’"9?9‘$?!(岁$均为南方汉族人$均经临床检查和@A或IE N检查确诊$诊断符合中华神经科学会第四届全国脑血管病学术会议修订的)各类脑血管疾病诊断要点’)$$9(*标准$有肝+肾+甲状腺疾病+心脏瓣膜病和糖尿病$以及由感染性疾病+血液病+外伤性及其他物理因素+药物等所致的缺血性脑卒中病例均除外&对照为同一时期我院门诊健康体检的成人%#例$为南方汉族人$无脑血管病病史和存在神经系统缺损表现$无肝+肾+甲状腺疾病+心脏瓣膜病和糖尿病$其中男’%例$女#9例$年龄#!!%*岁$平均’")?"‘)&?9(岁&?@A!研究方法抽外周静脉血#-G$!J依地酸钠’+a A H(抗凝$利用常规酚,氯仿抽提法提取基因组a P H&采用聚合酶链反应(限制性片段长度多态性’D@E,E F G D(技术分析/&!0#基因型$根据文献设计引物#’%$由上海生物工程公司合成$其序列为!9b(A Q H H Q Q H Q H H Q Q A Q A@A Q@Q Q Q H( #b$9b(H Q Q H@Q Q A Q@Q Q A Q H Q H Q A Q(#b& D@E的反应条件!反应总体积9&$G$含有)&c D@E缓冲液9$G$)&--80,G1P A D)$G’终浓度!&&$-80,G($两种引物各)9K-8G,G$基因组a P H&?!9$5&反应程序为经$’d预变性#-/3后$加入&4I a P H聚合酶!V$进行#!个循环的$’d 变性’&4$"!d退火9&4$*!d延伸)-/3$最后*!d延伸*-/3结束&%J聚丙烯酰胺凝胶电泳’D H Q+(检查D@E扩增产物$其D@E产物为)$%[K的a P H片段&取)&$G D@E产物$加入)&V!+-ZN酶’P2\+350.31B/80.[4@87(及)&U缓冲液$#*d消化’<$%&d灭活!&-/3终止反应&酶切产物进行%J聚丙烯酰胺凝胶电泳’D H Q+()小时后摄像鉴定&采用扩增阻滞突变体系法’H E I C(检测1)(基因A%##@位点突变$根据文献设计引物#9%$由上海生物工程公司合成$上游引物.!9b,Q Q H Q H H Q A Q A@@A Q Q H A Q@H, #b$下游引物[’野生型(!9b,@@@A A@Q Q Q H A@, @H@@@@H H,#b$下游引物6’突变型(!9b, @@@A A@Q Q Q H A@@H@@@@H Q,#b&D@E反应分!管进行$每管反应总体积!&$G$含有&4I D@EI.4:2L I/e’O N H Q+P+公司()&$G$基因组a P H&?)!9$5$实验H中含有引物.和引物[各)&K-8G,G$而实验B中含有引物.和引物6各)& K-8G,G&反应程序为经$#d预变性#-/3后$进行#9个循环的$#d变性)-/3$9$d退火)-/3 #&4$*!d延伸)-/3#&4$最后*!d延伸*-/3结束&D@E产物为%"*[K片段$进行%J聚丙烯酰胺凝胶电泳’D H Q+()<后摄像鉴定&另外$1)(基因D@E产物经纯化后进行单链a P H测序’上海生工公司($测序结果与文献序列一致$证实本实验所扩增的a P H片段为目的片段&?@B!基因分型经!+-Z N酶消化后/&!0#基因型有#种$即1纯合基因型’(,(($图谱显示为)$%[K片段$杂合基因型’f,((有)$%[K片段+)*9[K片段和!#[K片段’!#[K片段太小$电泳图不显示($&纯合基因型’f,f(有)*9[K片段和!#[K片段’!#[K片段太小$电泳图不显示(’图)(&经H E I C,D@E扩增1)(基因$有#种1)(基因型$即&纯合基因型’(,((在实验H中可扩增出%"*[K片段$杂合基因型’f,((在实验H和B中均扩增出%"*[K片段$1纯合基因型’f,f(为仅第!管扩增出%"*[K 片段’图!(&$$!!#期!!!!!!!!!吴军民等!缺血性脑卒中患者同型半胱氨酸代谢相关酶基因突变的研究图?!!"#$%基因6C 2产物#&’,9酶切结果I !K B E #!!"/>3N 标准#)!基因型$f "(%#!&#&9&"!基因型$("(%#’!基因型$f "f %’D %E F ?!’)G *,"1"&$;*G8*;"+%+*,6C 2H 2D I 6*,!"#$%E "#"’!’);<";G J 2B A A "!()9#?!!"#*$/G"$K "L %#A &B &M &N !!"#*$/G "$L "L %#O !!"#*$/G"$K "K %F 图A !=2’:H 6C 2扩增*+,基因电泳图I !)&&[K a P H 梯度标准#)&!!基因型$("(%##&’!基因型$f "(型%#9&"!基因型$f "f %’D %E F A !’)G *,"1"&$;*G8*;"+%+*,6C 2H =2’:*,*+,E "#"’!’);<";G J 2B A A "!()9#?!!"#*$/G "$K "L %#A &B &M &N !!"#*$/G "$L "L %#O !!"#*$/G"$K "K %F ?@O !统计方法利用C D C C$?&统计软件包进行分析’计数资料比较采用"!检验(应用多元G 85/4:/6回归$I >0,:/K 02G 85/4:/6E 25L 244/83%分析/&!0#和1)(基因位点突变及其他风险因素与缺血性脑卒中的关系(结果以比值比$M 114E .:/8(M E %及$9J @N $683Z /12362/3:2L _.0%来表示’!!实验结果A @?!患者组与对照组’P -D 2基因型和等位基因的频率分布比较患者组/&!0#基因&纯合基因型$!?*J %和杂合基因型$9)?’J %频率是高于对照组$分别为)?!J 和#$?%J %(但两组/&!0#基因型频率分布无显著性差异$"!g!?%$&(2g&?!#"%’患者组/&!0#基因&等位基因频率$!%?’J %是高于对照组$!)?)J %(但两组/&!0#等位基因频率分布无显著性差异$"!g !?!’$(2g &?)#’%$表)%’A @A !患者组与对照组*+,基因型和等位基因的频率分布比较患者组1)(基因1纯合基因型频率$)#?9J %是高于对照组$"?&J %(但两组间1)(基因型频率分布无显著性差异$"!g!?"#)(2g&?!"%%’患者组1)(基因1等位基因频率$’#?$J %是高于对照组$#%?&J %(但两组1)(等位基因频率分布无显著性差异$"!g )?)9’(2g &?!%#%$表!%’表?!两组!"#$%基因型和等位基因频率分布P )01"?!P 8"E "#*$/G ")#3)11"1",;"Q("#&%"+*,’P -D 2%#%+&8".%&+$;*<")#3#*;.)1&*#$;*1组别Q L 8>K 4例数@.42/&!0#基因型频率%A <25238:Y K 2Z L 2^>236Y等位基因频率&H 00202Z L 2^>236Y("(f "(f "f @A 对照组@83:L 80%#’$$9$?&J %##$#$?%J %)$)?!J %)#)$*%?$J %#9$!)?)J %患者组N 46<2-/64:L 8]2*’#’$’9?$J %#%$9)?’J %!$!?*J %)&"$*)?"J %’!$!%?’J %!!P 8:2!%"!g !?%$&(2g &?!#"!&"!g !?!’$(2g &?)#’表A !两组*+,基因型和等位基因频率分布P )01"A !P 8"E "#*$/G ")#3)11"1",;"Q("#&%"+*,’P -D 2%#%+&8".%&+$;*<")#3#*;.)1&*#$;*1组别Q L 8>K 4例数@.421)(基因型频率%A <25238:Y K 2Z L 2^>236Y等位基因频率&H 00202Z L 2^>236Y("(f "(f "f A @对照组@83:L 80%#!9$#&?)J %9#$"#?$J %9$"?&J %)&#$"!?&J %"#$#%?&J %患者组N 46<2-/64:L 8]2*’)$$!9?*J %’9$"&?%J %)&$)#?9J %%#$9"?)J %"9$’#?$J %!!P 8:2!%"!g !?"#)(2g &?!"%!&"!g )?)9’(2g &?!%#&&#遗!传!"#"$%&’($)*+,+-.%!&&’!!!!!!!!!!!!!!!!!"卷!A@B!!"#$%基因C N R R P和*+,基因P S B B C位点突变及其他风险因素与缺血性脑卒中的关系/&!0#基因@"**A和1)(基因A%##@基因型频率与缺血性脑卒中的关系经卡方检测无显著性差异!但将@"**A位点&等位基因!A%##@位点@等位基因以及年龄"H52#作协变量!缺血性脑卒中的发生与否作应变量!进行多元G85/4:/6回归"I>0:/K02G85/4:/6E25L244/83#分析!评价各协变量与缺血性脑卒中的关系$多元G85/4:/6回归分析结果"表##显示@"**A位点&等位基因!A%##@位点1等位基因以及年龄均与缺血性脑卒中有关"2" &?&9#!@"**A位点&等位基因的比值比"M E#为)?*’##"$9J@N)?&")"!!?%"!$#和A%##@位点1等位基因的比值比"M E#为)?*##$"$9J@N)?&*&) !!?%&$"#$同时分析该两个位点突变的相互作用时显示两者无协同作用$表B!多元I*E%+$%&回归分析结果P)01"B!P8")#)1/+%+;"+(1$*,’(1$%G1"I*E%+$%&2"E;"++%*#变量h.L/.[02系数@82Z Z/6/23:"##标准误C eS.01"!2比值比M E$9J可信区间$9J@N@"**A&7999%&7!9#)’7%!!%&7&!%))7*’##)7&")",!7%"!$ A%##@&799&’&7!’"#’7$$9&&7&!9’)7*##$)7&*&),!7%&$"年龄H52&7&%"$&7&)’)#*7$*)#&7&&&))7&$&%)7&")),)7)!)’A@O!吻合度检验为了检验观察样本的/&!0#基因型频率和1)(基因型频率是否达到W.L1Y,S2/3[2L5平衡!我们对健康对照组的基因型频率进行了吻合度检验$在健康对照组中/&!0#基因1纯合基因型占9$?&J!杂合基因型占#$?%J!&纯合基因型占)?!J!其分布在人群中已达到W.L1Y,S2/3[2L5平衡$另外!在健康对照组中1)(基因&纯合基因型占#&?)J!杂合基因型占"#?$J!1纯合基因型占"?&J!其分布在人群中同样已达到W.L1Y, S2/3[2L5平衡$#!讨!!论尽管众多资料已显示同型半胱氨酸"<8-86Y4, :2/32!W6Y#血浓度升高是脑血管疾病的一个独立风险因素!但高同型半胱氨酸血症致卒中的机制尚不完全清楚$近年来发现高W6Y水平可能与血管内皮损伤和功能失调!刺激血管平滑肌细胞增殖!促进血小板聚集及破坏体内凝血%纤溶平衡等方面有关$通过上述环节!W6Y促进了脑血管病发病的进程$血中W6Y水平取决于遗传和环境营养两方面因素!包括IA W F E%@B C%甲硫氨酸合成酶缺乏或活性降低!以及某些辅助因子如叶酸%维生素B"% B)!缺乏!引致W6Y代谢障碍!最终使血中W6Y水平升高"高同型半胱氨酸血症#$)$$’年!Q8Y2::2等采用荧光原位杂交!把人/&!0#基因定位于染色体)K#"?#上!6a P H全长!?!][$F L844:等&’’应用聚合酶链反应(单链构象多态性"D@E,C C@D#分析证明IA W F E基因在"**位发生突变与冠心病及脑卒中密切相关!由碱基A置换了碱基@!其编码氨基酸也由缬氨酸代替了丙氨酸$这样IA W F E的耐热性和活性都大大降低!从而影响W6Y再甲基化!导致血浆W6Y水平升高$/&!0#基因中以@"**A位碱基突变最常见&’’!而且不同的人种中/&!0#@"**A突变频率分布是不同的&"’$在我们的研究中!发现@"**A突变纯合子")?!J#及A等位基因"!)?)J#在中国南方汉族人群中的频率比中国北方汉族人群&*’%日本&%’%爱尔兰&$’%意大利%高加索&’’%犹太人群&)&’都要低$由此表明!@"**A基因突变存在着人种地域的差异$/&!0#基因@"**A基因突变与脑卒中的关系目前国外研究结果尚不一致!国内对/&!J 0#@"**A基因突变与脑卒中关系的研究尚少$我们的研究显示@"**A位点突变与缺血性脑卒中发病有关"2g&?&!%!M E)?*’!$9J@N)?&"!!?%"#!因此@"**A位点突变可能是导致缺血性脑卒中发病的遗传因素之一$本研究的这一结果与W.L-83等在爱尔兰人群&$’!I8L/:.等在日本人群&%’!周宪梁等在中国北方人群的研究结果基本一致&))’!而与G.08>46<2]等在澳大利亚人群&)!’!D L244等在波特兰人群的研究结果不一致&)#’$I>3]2等")$$%年#将人1)(基因定位于染色)&#!#期!!!!!!!!!吴军民等(缺血性脑卒中患者同型半胱氨酸代谢相关酶基因突变的研究体!)K!!?#!全序列全长!%&’"[K"1)(基因中以A%##@位和Q$)$H位碱基突变较常见##$"A4./等报道1)(基因A%##@及Q$)$H位点突变可使酶的活性降低!引起高W6Y血症#9$"目前!国外对1)(基因的临床研究报道较少!主要在冠心病%神经管畸形方面的研究"国内!许海燕等#*$曾报道1)(基因A%##@点突变与冠心病发病有关!但国内尚未见报道1)(基因A%##@位点突变与脑卒中的关系的研究"我们的研究显示A%##@位点突变与缺血性脑卒中发病有关&2g&?&!9!M E)?*#! $9J@N)?&*!!?%)’!因此A%##@位点突变可能是导致缺血性脑卒中发病的遗传因素之一"我们的研究发现!虽然/&!0#@"**A和1)(A%##@基因突变均与缺血性脑卒中发病有关!但根据I>0:/K02G85/4:/6E25L244/83分析得出IA W F E@"**A和@B CA%##@两个基因位点突变对缺血性脑卒中的作用并无协同作用!可以认为该两个基因位点突变的作用是相互独立的"由此看来!/&!0#@"**A和1)(A%##@位点突变所起的效应等同于微效基因所起的效应"脑血管病是多基因疾病!它们的发生受多种因素的影响!即使该基因确实与疾病相关也可能会得出相反的结论"因此!在研究此类疾病时!我们认为不仅应考虑到病人整体情况及伴随疾病的影响!还应注意到人种%人群%统计方法的差别"并进一步增加候选基因!以利对疾病的全面认识"参考文献!2",";"#&"+"##)$!@8>00B I!I.0/38\I E!B2.-2LP!C2e:83Q!P8L1:F!12 Q.L-8D7+02_.:21K0.4-.<8-86Y4:2/32683623:L.:/83.4.K844/[02/312K23123:L/4]Z.6:8L Z8L4:L8]27(658K*!)$$&!!)( 9*!7#!$!W8>4:83D+!E.3.C!C2]<4.L/.C!D2L0/3+!R/-C!@.4:L80 M G7W8-86Y4:2/32/34/6]0262001/42.42(E20.:/834</K:8 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