脂肪酶、淀粉酶测定方法
脂肪酶测定标准操作程序
脂肪酶测定标准操作程序1. 摘要脂肪酶检测用于定量测定人血清或血浆中脂肪酶的活力，用于临床相关疾病的辅助诊断。
2. 适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中LPS 的浓度。
3. 职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定LPS 浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行,室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4. 检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的二脂肪酶监测试剂盒采用的是酶法。
5. 原理1，2-领-二月桂基-消旋-甘油-3戊二酸（6-甲基试卤素灵）酯−−→−脂肪酶1，2-领-二月桂基-消旋-甘油+戊二酸+6-甲基试卤素灵 1，2-领-二月桂基-消旋-甘油-3戊二酸（6-甲基试卤素灵）酯在样本中的脂肪酶的作用下水解生成1，2-领-二月桂基-消旋-甘油、戊二酸以及红色的6-甲基试卤素灵。
由于甲基试卤素灵在波长570nm 附近处有吸收峰所以在一定脂肪酶活力范围内，570nm 处吸光度的变化值与样本中脂肪酶活力成正比。
6. 仪器日立7600自动生化分析仪7. 试剂7.1 试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2 试剂瓶内主要成分：R1：Good ’s 缓冲液、共脂肪酶、脱氧胆酸钠、乙酸钙R2：酒石酸缓冲液、1，2-领-二月桂基-消旋-甘油-3戊二酸（6-甲基试卤素灵）酯、牛脱氧胆酸钠。
7.3 试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为12个月。
试剂不可冰冻。
试剂开瓶后冷藏于分析仪中可以保存14天。
7.4 试剂准备：试剂为即用式。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用某某公司提供的标准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品某某公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。
淀粉酶活力的测定方法
淀粉酶活力的测定方法淀粉酶是一种能够降解淀粉的酶类。
测定淀粉酶活力的方法主要有光密度法、滴定法、浊度法、电极法等。
下面将详细介绍这几种方法。
一、光密度法光密度法是利用淀粉酶在一定温度和pH值条件下降解淀粉产生的葡萄糖，与p-二硫化苯胺生成的被称为多脱氧萘酚蓝的有色物质在特定波长下的吸光度变化来测定淀粉酶活力。
测定步骤：1. 准备试剂：液体缓冲液、淀粉溶液、pH 7.0缓冲液、2%～4%淀粉溶液、0.1% p-二硫化苯胺、1%酶液。
2. 在试管中加入2 mL pH 7.0缓冲液、2 mL 2%～4%淀粉溶液和1 mL 酶液，置于37恒温槽中培养10分钟。
3. 取出试管后，立即加入5 mL p-二硫化苯胺试剂和1 mL液体缓冲液，混匀后，放置15分钟使产生的多脱氧萘酚蓝发色充分。
4. 测定吸光度：使用特定波长的光源（通常为540 nm）对反应液进行吸光度测定。
5. 用纯水代替酶液重复上述步骤，结果作为对照组。
6. 计算淀粉酶活力：对照组的吸光度减去实验组的吸光度，乘以吸光度系数K （由标准淀粉酶活力校准得出），即可得出淀粉酶的活力。
二、滴定法滴定法是通过滴定试剂滴定淀粉酶产生的葡萄糖来测定淀粉酶活力的方法。
测定步骤：1. 准备试剂：碘滴定剂（0.02 mol/L碘酸钾，0.2 mol/L硫酸），0.1 mol/L氢氧化钠溶液，0.1%淀粉溶液。
2. 取一定量的淀粉酶加入试管中。
3. 预热培养：将试管放置于37水浴中预热，约5分钟。
4. 添加滴定剂：将试管中的淀粉加入10 mL淀粉溶液中，迅速搅拌。
5. 滴定：在反应时加入少量滴定剂，然后滴定到反应性红色消失的那一点为止。
6. 计算淀粉酶活力：滴定所使用的硫酸溶液的体积与滴定所使用的碘滴定剂的体积之间的比值即为滴定效价，根据滴定效价计算淀粉酶的活力。
三、浊度法浊度法是通过测定淀粉酶降解淀粉导致溶液浑浊度变化来测定淀粉酶活力的方法。
测定步骤：1. 准备试剂：0.1 mol/L淀粉溶液，0.1 mol/L缓冲液，1%淀粉酶溶液。
淀粉酶和脂肪酶联合测定对诊断胰腺炎的作用
东南大学 出版社 ，２００６，４２５，４ ３３．
炎 的可能性就越大 。血清脂肪 酶常在起 病后 ４—８ｈ内活性增高 。２４ｈ达峰值 ， 【３】杨贵英 ．王 继贵，杨泽 民．血清脂肪 酶和淀粉酶对急性胰腺炎的 比价研究
持续 １０—１５天 ，在急性胰腺炎时 ，脂肪酶 多和淀粉酶平行升高 ．且升高 的程度 较大 。可达参考值 的 ２—４０倍 。脂肪 酶持续 时间较长 。对于就诊较晚 的急性胰 腺 炎患者有诊断价值 ，而且从上 两表可以看出 ．脂肪酶的特异性是优于淀粉 酶 的 ，因为淀粉 酶的升高也可常见于一些非胰腺疾 病 ：例如流行性腮腺炎 、巨淀
【关键 词】逆行交锁髓 内钉 ；股骨远端 骨折 ；临床 疗效
股 骨远 端骨折则是指人体股骨下端处 １５ｅｒ ａ 内的部位 出现了骨折 ，因为该 缝合。术后还要对患者 的患肢进行石 膏固定 …。
部分 的骨骼结 构 比较复杂 ，同时骨骼外皮 比较薄弱 ，周 厨保护组织较 少 ，因此
２、 结果
即胰腺各种消化酶被异常激活 而产生胰酶 自身消化 、胰管阻塞 ，阻碍了酶进入 肪酶和淀粉酶 以提高胰腺 炎诊 断效 率是非常有实用价值的 。
十二指肠 ，从 而反流入血 ，使其 各 自在血 中的浓度骤然上升 【４】。因此 ，检测
血 中相关酶的浓度变化 即可诊 断出胰腺 炎。 ３．２ 现在 淀粉 酶 的测 定是诊 断 胰腺 炎最 常 用的 ，血 清淀 粉酶 在起 病后
脂肪酶测定标准操作规程
血清脂肪酶测定标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：血清脂肪酶(缩写LPS)测定；组合项目申请：胰腺炎检测。
临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2 ml，不抗凝，置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。
2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定1天，普通冰箱中（2～8℃）稳定7天。
-20℃可保存数月；-70℃至少可保存半年；应避免标本反复冻溶。
为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。
2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。
抽血前3天内避免高脂饮食，24小时内不饮酒。
2.3.2如果使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。
EDTA、草酸盐、氟化钠、枸橼酸对酶有抑制作用。
2.1.5 抽血前最好停用影响血脂的药物（如调脂药、避孕药、某些降压药、激素等）数天或数周，否则应记录用药情况。
3 方法原理采用1,2-邻-二月桂宗甘油－3-戌二酸－(6'-甲基试卤灵）-酯作为底物，OH－脂肪酶1,2-邻-二月桂宗甘油－3-戌二酸－(6'-甲基试卤灵)-酯 ----------1,2-邻-二月桂宗甘油 + 戌二酸 + 甲基试卤灵在570nm波长下，根据产物红色的甲基试卤灵生成速率测定脂肪酶的活性。
脂肪酶活测定
一．脂肪酶活测定原理：脂肪酶在一定条件下，将甘油三酯水解。
在不同水解阶段可分别产生脂肪酸、甘油二酯、甘油一酯及甘油。
水解所产生的脂肪酸可以用标准的氢氧化钠滴定，用滴定值表示酶活力。
酸碱滴定法 :酶活力以国际单位表示，即在一定条件下，脂肪酶水解脂肪每分钟产生1微克分子脂肪酸的酶量定为一个国际单位。
脂肪酶活力单位＝(A-B)*nf/t*v式中：A为样品耗碱液ml数，B为对照组耗碱液ml数，n为每毫升碱液微克分子数(n=cM=0.05x23x1000)，f为稀释倍数，t为作用时间(分),v:反应的酶液的体积二．挥发性脂肪酸（VFA）的测定滴定法分析1原理：将废水以磷酸酸化后，从中蒸发出挥发性脂肪酸，再以酚酞为指示剂用NaOH 溶液滴定馏出液。
废水中的氨态氮可能对测定形成干扰，因此应当首先在碱性条件下蒸发出氨态氮。
4．计算挥发性脂肪酸含量计算如下：VFA=V (NaOH)*C*1000/Vs (mmol/L)式中：V(NaOH)-----滴定消耗的NaOH标准溶液的体积，ml;c ------ 滴定消耗的NaOH标准溶液的准确浓度，mol/L;Vs--------被测废水水样的体积，ml.酶活力定义：40℃,ph为5.6的条件下，每分钟酶解淀粉释放出lmg的还原糖(葡萄糖)所需酶量为一个酶活力单位。
1U=1mg还原糖\min.ml酶三．淀粉水解酶活性原理：淀粉的水解产物麦芽糖及其他还原性糖能与3，5-二硝基水杨酸试剂反应，使其还原生成红色3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，其颜色深浅与淀粉酶水解产物的浓度成正比，可用麦芽糖(或葡萄糖)浓度表示，用比色法测定淀粉生成的还原糖的量，以单位体积样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。
四.纤维素酶酶活力测定：原理：纤维素酶水解纤维素，产生的纤维二糖、葡萄糖等还原糖，能将3,5-二硝基水杨酸中硝基还原成橙黄色的氨基化合物，在550nm波长处有最大光吸收，在一定的范围内，还原糖的量与反应液的颜色强度成比例关系，利用比色法测定其还原糖的量就可测定纤维素酶的活力。
血清淀粉酶和脂肪酶联合检测在急性胰腺炎诊断中的效果及检出率评价
血清淀粉酶和脂肪酶联合检测在急性胰腺炎诊断中的效果及检出率评价摘要：目的：研究血清淀粉酶和脂肪酶联合检测在急性胰腺炎诊断中的效果及检出率评价。
方法：试验时间段为2019年4月～2021年4月，选取来我院消化内科94例胰腺炎患者，分别采用血清淀粉酶方法和脂肪酶联合血清淀粉酶方法，统计所有患者检出率。
结果：联合检测方法检出率高于单一检测方法，两者差异具有统计学方面意义（P＜0.05）。
结论：在临床上对于急性胰腺炎患者采用脂肪酶联合血清淀粉酶方法可以有效提升检出率，为今后的治疗提供了有力依据，在诊断方面具有良好的应用前景。
关键词：脂肪酶；血清淀粉酶；急性胰腺炎；检出率急性胰腺炎作为一种常见的消化内科疾病，在发作时会导致患者产生各种躯体不适，其中包括上腹部剧烈疼痛感、恶心、呕吐等，严重甚至还会引发胰腺炎、肾功能衰竭等并发症，对患者生命健康产生了严重威胁。
临床对于该疾病通常选择对症治疗、药物治疗，虽然可以缓解症状，但是却无法达到改善营养状态的目的，在治疗期间容易引发各种并发症，增加了治疗难度。
基于此，应当及时对患者进行诊断，第一时间发现患者病情进展，为后续的治疗奠定基础，保证患者的生命长度。
有研究表示脂肪酶联合血清淀粉酶可以提升诊断结果的准确率，减少了漏诊的概率，使得医生能够据此及时制定出正确的临床治疗方案，但是关于这方面的研究较少，还需要进一步探索。
接下来，本文将就血清淀粉酶与脂肪酶联合血清淀粉酶两种方法应用于急性胰腺炎患者诊断中的效果做出对比研究：1资料与方法1.1一般资料选取2019年4月～2021年4月来我院胰腺炎患者94例，对照组男女（46/48）例，年龄40~70岁，平均年龄（55.00±5.00）岁，病程为4~7年，平均病程为（5.50±0.50）年。
纳入标准：①患者及其家属对于试验知情并同意。
②患者无合并重度基础病。
③患者可以顺利配合实验，配合度符合试验标准。
排除标准：①患者具有全身感染性疾病。
血清脂肪酶操作程序
血清脂肪酶操作程序1.目的规范血清脂肪酶(LPS)检测试验，确保检测结果准确性和重复性。
2．范围本操作规程适用于生化室工作人员、实习人员、进修人员的操作前培训。
3.术语4．测定原理比浊法LPS甘油三酯 + 2 H 2O单酸甘油酯+2脂肪酸 在上述反应中，通过在340nm 波长处测定吸光度的下降速率，即可测得样本中LPS 的活力。
5. 标本采集与处理5.1标本类型：标本最好不要溶血。
留取标本后请尽快分离血清/血浆。
5.2标本稳定性：血清标本在室温下保存可稳定5天，在20-25℃稳定24h 。
6. 试剂6.1试剂：本科使用朗道试剂盒，干粉试剂。
试剂内主要成分如下：规格: 20×2.5ml6．2试剂准备试剂为液体单试剂，缓冲液溶解后即用。
6．3试剂稳定性 原装试剂在2～8℃避光保存，稳定至有效期。
试剂开瓶溶解后2～8℃稳定7天。
7.仪器参数设定AU2700参数设定：朗道试剂仪器参数具体参加试剂厂家提供的相应仪器的参数说明书.8．校准：具体参见临床生化校准程序8.1 校准条件：8.1.1仪器光路系统经过光路保养或更换光源等重要部件后。
8.1.2仪器经过大保养后。
8.1.3挪动仪器的安装地点。
8.1.4更换试剂批号。
8.1.5室内质控失控。
8．2 AU2700朗道试剂系统的校准：8.2.1 准备：朗道配套校准物,3ml蒸馏水溶解.8.2.2 保存和稳定性：原校准品在2～8℃保存至有效期,溶解后2～8℃稳定5天.8.2.3保存位置：2号冰箱。
8.2.4操作步骤：蓝色样本架的1号位置放蒸馏水；黄色样本架的相应位置放定标液→仪器主画面[USER] →[Calibration] →[选择校准项目]→[START]→[YES]。
9．室内质控及失控纠正：见临床生化室内质控程序9．1质控物来源：柏乐液体质控品(批号:45612/45613)。
9．2质控物储存条件及准备：-15～-20℃保存至有效期，从低温冰箱取出后室温平衡30分钟。
脂肪酶的测定及临床意义
脂肪酶的测定及临床意义
[大] [中] [小]
脂肪酶的测定及临床意义
脂肪酶是一种水解长链脂肪酸甘油酯的酶，血清中的脂肪酶主要来自于胰腺，也有一些来自于其他组织，如胃，小肠黏膜，肺等处者；此外，在白细胞，脂肪细胞，乳汁中也可测到脂肪酶活性。
脂肪酶可由肾小球滤过，并被肾小管全部回吸收，所以尿中测不到脂肪酶活性。
参考值：BMD浊度法（30℃）：成人：30～109U/I．
＞60岁：18～180U/L．
滴定法：0～0.7U/ml 1．5U以上有意义。
血清脂肪酶活性测定可用于胰腺疾病诊断，特别是在急性胰腺炎时，发病后4～8h内血清脂肪酶活性升高，24h达峰值，一般持续8～14天。
脂肪酶活性升高多与淀粉酶并行，但可能开始升高地时间更早、持续时间更长、升高的程度更大。
有报告患急性胰腺炎时脂肪酶比淀粉酶更敏感和特异，因而认为脂肪酶活性升高更有诊断意义，最好是同时检测淀粉酶和脂肪酶。
因脂肪酶活性升高持续的时间较长，所以在疾病的后期测定可能更有意义。
此外血清脂肪酶升高也可见于急腹症、慢性肾病等，但患腮腺炎和巨淀粉酶血症时不升高，此点与淀粉酶不同，可用于鉴别。
测定脂肪酶可用橄榄油或三油酸甘油酯做底物，脂肪酶只作用在脂-水界面，因此，所用之底物必须呈乳胶状态，其反应速度将随乳状液之分散度（表面积）而增加。
由胰腺分泌的共酯酶连于胆酸盐表面，形成共酯酶-胆酸盐复合物，再附着于底物表面，这种形式的底物和脂肪酶有很高的亲和力。
虽然脂肪酶对急性胰腺炎诊断比较特异和灵敏，但以前由于方法学问题，未得到临床普遍应用。
现已有试剂盒供应，有利于临床推广应用。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
脂肪酶测定——采用p-NPP法
取0.5g样品，加去离子水10mL，40℃水浴浸泡2h，过滤。
取滤液1mL于试管中，加入pH8.0缓冲液3mL和1mmol/L p-NPP溶液0.1mL 于40℃下精确反应3min，迅速置于冰上终止反应。
在波长405nm处测定吸光度值。
对照管酶液用等体积去离子水代替，其余试剂相同。
Npp标准曲线Y=0.287x+0.0861
（y：吸光度x：NPP浓度（umol/L））
试剂配制：
1mmol/L p-NPP溶液：称取0.0378g pNPP，加入1mL曲拉通-100与5mL异丙醇，用Tris-HCL（pH8.0）定容至100mL。
pH8.0 Tris-HCl：50mL 0.1M tris碱溶液与29.2mL 0.1M HCl溶液混合，加蒸馏水定容至100mL。
淀粉酶测定
称取六神曲0.5g，研细，用20mL去离子水40℃浸泡1h，过滤。
取2只250mL的碘瓶，各加入5%的淀粉液25mL，10mL醋酸钠缓冲液（pH4.5），10mL蒸馏水，摇匀，40℃水浴预热5min。
A管中加入滤液5mL，准确反应1h，立即加2mol/L HCl 1mL终止反应，B管中先加入HCl，再加滤液5mL。
2只碘瓶分别加入0.05mol/L碘液10mL，0.1mol/L氢氧化钠45mL，边滴边振摇，暗处放置20min，加入1mol/L 硫酸2mL，用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定至无色。
每份样品测定3次。
记录消耗硫代硫酸钠的体积，计算得淀粉酶活力。
淀粉酶活力是指1g六神曲粉末在一定条件下(T=40℃，pH=5.0)，1h 内催化可溶性淀粉水解生成葡萄糖的毫克数。
计算公式:
淀粉酶活力=［c×(vB－vA)·M·N］/2×m·t
式中:c为硫代硫酸钠的浓度(mol/L)，M为葡萄糖的摩尔质量(g/mol)，N为酶液稀释倍数，V A为样品滴定值(mL)，VB为空白滴定液(mL)，m为六神曲的取样量(g)，t为反应时间(h)，淀粉酶活力单位为mg/(g·h) 。
试剂配制
pH4.5醋酸钠缓冲液：18g醋酸钠加9.8mL冰醋酸，定容至1000mL。
1mol/L硫酸溶液：量取6mL浓硫酸，倒入适量水中，用水稀释至100mL。
0.1mol/L碘液：取碘13.0g，加碘化钾36g与水50ml溶解后，加盐酸3滴与水适量使成1000ml，摇匀，用垂熔玻璃滤器滤过。
蛋白酶活力测定
称取六神曲1g，研细，加蒸馏水20ml，于40℃水浴放置1h，间断搅拌，过滤，滤液以磷酸钠缓冲液稀释1倍。
取1mL稀释液置离心管中，于40℃水浴预热5min，加入预热的酪蛋白1mL，保温10min，立即加入0.4 mol / L 三氯醋酸2 ml，终止反应，继续置水浴中保温20 min，使残余蛋白质沉淀后离心滤过。
取1 mL滤液，加入0.4 mol/L 碳酸钠溶液5 mL，福林试液1 mL，蒸馏水2 mL，摇匀，置水浴锅中，40 ℃保温显色20 min。
以试剂溶液为空白，于763 nm 波长处测定吸光度。
在40℃时每1min水解酪蛋白产生1g酪氨酸的酶量，定义为1个蛋白酶活力单位。
酪氨酸标准曲线：y=8.0061x+0.0006
式中Y为吸光度，x为酪氨酸浓度（g/mL）
计算公式:蛋白酶活力=(y-0.0006) ·N·V/(8.0061 ×m·t)
式中: t 反应时间( h) ，m 酶粉的质量( g) ，N 酶液稀释倍数，V 溶液体积( ml) ，8.0061为回归方程的斜率，0.0006为回归方程的截距，蛋白酶活力单位为mg / ( g·h) 。