ATP荧光法微生物(细菌总数)快速检测系统方案

合集下载

ATP检测详解

ATP检测详解

562 312 256
鲍曼不动杆菌、表皮 葡萄球菌 表皮葡萄球菌
表皮葡萄球菌
数值
56
<0.4cfu/cm2 <0.4cfu/cm2
48 6
这是某医院ICU6号床物表检测的数值,培养出鲍曼,葡萄球菌的部位,ATP的 检测数值非常的高,细菌培养物表合格的,ATP的数值很低。
物表使用中检测标准≤100为合格 100-300为警告 300以上不合格
ATP生物荧光检测技术
——评价医疗器械清洗效果
北京创新世纪生化科技发展有限公司
器械清洗的目的:
– 降低器械上微生物负荷; – 去除器械上的有机物和无机物;
– 控制包装区的污染,达到环境标准要求;
– 确保灭菌达到无菌保障水平(SAV)10-6
ATP检测示意图
细菌细胞中 含有ATP
O2
残留污染物

有机污染物 中含有ATP
2500 2000 1500 1000 500 0
冰 箱 使 把 用 手 中 的 尺 子 使 床 用 把 中 手 的 听 暖 诊 箱 器 窗 口 三 把 通 手 管 路 接 护 头 士 站 使 鼠 用 标 中 的 电 监 话 护 仪 按 床 钮 尾 遥 控 呼 器 吸 机 面 板 病 历 夹 操 作 台
技术原理
• 沾染在物体表面、医疗器械上的血液、组织液等体液中含有大量的体 细胞和细菌等污染物,这些生物污染可以通过ATP生物荧光法测出。 • 萤光素酶在Mg2+、ATP、O2的参与下进行酶促反应放出光子
• 仪器定量测定加入ATP标准品前后的相对发光值RLU,从而获知污染物 中的ATP含量,来判断医疗器械的污染程度和清洗效果。 • 通过使用体细胞ATP消除技术,也可对残留细菌进行检测。

快速检测细菌的方法

快速检测细菌的方法

快速检测细菌的方法
快速检测细菌的方法包括:
1. 培养法:将样本在培养基上培养,观察细菌的生长情况来确定是否存在细菌,通常需要24小时以上。

2. 荧光显微镜法:使用荧光染色剂标记细菌,利用荧光显微镜观察样本,可以在短时间内检测到细菌。

3. 快速酶学方法:利用细菌特有的酶对样本进行检测,可以在数小时内得出结果。

4. 免疫学方法:利用特定的抗体与细菌进行反应,通过观察抗体与细菌结合的情况来检测细菌。

5. PCR法:通过扩增细菌的DNA片段来进行检测,具有高灵敏度和特异性,可以在几小时内完成检测。

6. 快速质谱技术:利用质谱仪分析细菌样本中的化学成分,可以快速鉴定细菌的种类。

以上方法可以根据实际需求和条件选择使用,其中PCR法和快速质谱技术是较为快速和准确的方法。

微生物快速检测方法3篇

微生物快速检测方法3篇

微生物快速检测方法第一篇:微生物快速检测方法是一种用于检测微生物数量和类型的技术,它排除了传统方法中需要多日甚至数周才能得到结果的限制。

目前,有多种不同的微生物快速检测方法可供选择,以下是其中几种。

1. PCR检测法聚合酶链式反应(PCR)是一种广泛使用的微生物检测方法。

该技术依赖于单个微生物细胞中的DNA模板,通过重复循环DNA引物扩增模板DNA,从而在富集的样品中检测出微生物DNA。

相比于传统方法,PCR不需要等待微生物生长,因此它可以极大地减少样品准备和数据分析的时间。

2. 荧光定量PCR检测法荧光定量PCR(qPCR)是PCR技术的一种变体,它使用荧光探针来实现DNA扩增的实时监测。

具体地,qPCR将荧光探针引入PCR反应体系中,当扩增过程中的DNA与荧光探针结合时,就会放出荧光信号。

这种方法在微生物检测中广泛应用,因为它可以定量检测微生物数量,同时还可以消除污染的干扰。

3. 基因测序技术基因测序技术是一种高通量的检测方法,它可以快速测定微生物所携带的基因序列。

基于DNA序列的比对和解码,可以对微生物进行鉴定和分类。

整个测序过程可以在几个小时内完成,可以检测出样品中的潜在病原微生物,并发现抗药性和毒力相关基因。

基因测序技术可以通过揭示微生物的全基因组,来理解微生物的生长和感染机制。

上述方法都可以提供快速并准确的微生物检测结果,可以用于食品、环境、医疗设备等领域。

但是,所有这些方法都需要具备高质量的DNA和RNA作为输入,否则检测结果可能会出现假阳性或假阴性。

第二篇:微生物快速检测方法在农业和食品安全领域中非常重要。

传统的分离和培养方法需要数天才能得到微生物检测结果,且很难检测到低浓度菌群。

为了更快速、准确地检测微生物,出现了一些新的技术,以下是几种常用的方法。

1. 生物传感器生物传感器技术利用大肠杆菌与质粒间的交互作用来检测特定代谢产物。

这种方法可以用于检测细菌、真菌和病毒等微生物。

生物传感器不仅可以检测单一代谢产物,还可以监测多种种类,可以在几分钟内获得结果。

atp荧光检测仪用于消毒效果评价的原理

atp荧光检测仪用于消毒效果评价的原理

在论述ATP荧光检测仪用于消毒效果评价的原理之前,我们首先要了解ATP荧光检测仪的基本原理和原理。

ATP荧光检测仪是一种快速、准确检测生物污染的仪器,它利用了生物学中著名的“三磷酸腺苷”(ATP)分子的荧光特性,从而实现了对生物活性的直接测定。

在消毒效果评价方面,ATP荧光检测仪通过检测样品表面上的微生物生物质,从而可以快速判断消毒的效果。

简单来说,ATP荧光检测仪通过检测样品表面上的ATP含量,从而评价消毒效果的好坏。

当我们使用ATP荧光检测仪进行消毒效果评价时,首先需要采集样品表面的微生物生物质。

这一步通常会通过样品表面的拭子采样来完成。

之后,将采集得到的样品放入ATP荧光检测仪中,仪器会自动进行ATP的提取和检测。

ATP荧光检测仪会将ATP分子与荧光素结合,产生荧光信号,并通过光电探测器进行检测和记录。

ATP含量的高低将直接反映出样品表面上的生物活性,从而评价消毒效果。

当然,ATP荧光检测仪用于消毒效果评价还需要考虑其他因素。

在进行检测时需要注意消毒剂的残留情况,因为残留消毒剂可能会对ATP的检测结果产生干扰。

温度和湿度等环境因素也会对ATP的稳定性产生影响,因此在使用ATP荧光检测仪进行消毒效果评价时,需要对这些因素进行控制和调整,以确保测试结果的准确性和可靠性。

从个人观点上来看,ATP荧光检测仪作为一种快速、准确的生物污染检测手段,在消毒效果评价领域具有重要的应用价值。

它不仅可以帮助我们实时监测和评价消毒效果,还可以为我们提供科学依据,指导我们对消毒工作的进行和改进。

当然,需要注意的是,在使用ATP荧光检测仪进行消毒效果评价时,需要严格按照操作规程进行操作,以确保测试结果的准确性和可靠性。

ATP荧光检测仪用于消毒效果评价的原理是基于其对ATP含量的检测和评价。

它的快速、准确的特点使其在消毒效果评价中具有重要应用价值,为我们提供了一种科学、高效的生物污染检测手段。

希望在未来的工作中,我们能够进一步挖掘ATP荧光检测仪的潜力,为消毒效果评价提供更多更好的技术支持。

生物学发光检测法(ATP)

生物学发光检测法(ATP)
生物学发光检测法(ATP)

CONTENCT

• 引言 • ATP发光检测法的基本原理 • ATP发光检测法在生物学研究中的
应用 • ATP发光检测法的实验方法与技术 • ATP发光检测法的数据分析与解读 • ATP发光检测法的发展趋势与挑战
01
引言
目的和背景
研究目的
通过生物学发光检测法(ATP)快速、准确地检测和评估生物样本中 的活性细胞数量及其代谢状态。
ATP纯化
通过离心、过滤或层析等方法 去除提取液中的杂质和干扰物 质,以获得纯净的ATP溶液。
ATP定量
利用标准曲线法或比色法等方 法对提取的ATP进行定量,以 确定其浓度。
发光反应条件优化与信号检测
发光反应条件
优化反应体系中各组分的浓度和比例, 如荧光素、荧光素酶和ATP等,以获 得最佳的发光效果。
• 高通量筛选
适用于高通量药物筛选和细胞毒性评价,提高研究效率。
• 临床应用
可用于评估肿瘤细胞对药物的敏感性、预测疾病预后等, 为个性化医疗提供依据。
• 环境监测
可用于检测水体、土壤等环境中的微生物活性,评估环境 质量及生态毒性。
02
ATP发光检测法的基本原理
ATP与生物发光的关系
ATP(腺苷三磷酸)是生物体内能量传递的重要分子, 广泛存在于所有活细胞中。
生物发光现象与ATP水平密切相关,ATP浓度越高, 发光强度越大。
通过测量生物体内的发光强度,可以间接反映ATP含 量,从而评估细胞的活性、微生物污染程度等。
ATP发光检测法的反应机制
ATP与荧光素酶(Luciferase) 反应,生成氧化荧光素 (Oxyluciferin)并释放能量。
释放的能量激发荧光素 (Luciferin),使其从基态跃 迁到激发态。

食品微生物检验中ATP发光法应用

食品微生物检验中ATP发光法应用

浅析食品微生物检验中ATP发光法的应用摘要:本文就atp生物发光法的检测原理、检测步骤、特点、检测的影响因素及在食品工业中的应用进行了综述,并提出了目前atp生物发光法检测中存在的问题。

关键词:atp 生物发光法;荧光素;提取剂;温度;检验1 atp 的理化性质1.1 atp广泛存在于各种活的生物体中,活的菌体中也含有atp。

细菌死亡后,在细胞内酶的作用下,atp将很快被分解掉。

atp是高能磷酸化合物的典型代表。

atp 是由一分子腺嘌呤、一分子核糖和三个相连的磷酸基团构成的核苷酸,其分子结构式如图1所示。

图1 atp分子结构式1.2 atp有两个高能磷酸键,一个低能磷酸键。

每个高能磷酸键水解时,可产生30.54kj/mol的能量。

atp是细胞内特殊的自由能载体,广泛地存在于细胞内,如细胞核、细胞溶胶、线粒体等。

易水解,且水解时可释放出大量的能量,但水解易受细胞内环境的ph、mg2+浓度等的影响。

2 atp生物发光法检测的原理及一般步骤2.1 atp普遍存在于所有活的生物体中,被用来贮存和传递化学能,称作为“能量货币”。

当生物体死亡后,在细胞内酶的作用下,atp很快被分解掉。

因此,测定样品中的atp浓度,即可推算出活菌数。

atp生物发光技术产生于20世纪70 年代中期。

1983年,moyer 等最早提出细胞内源性atp的含量可以反映细胞的活性和活细胞的数量。

同年gronroos等也证实该技术是一种可靠、灵敏度高的确定细胞活性度的检测方法。

mcelroy[最先引入荧光素酶.atp检测法,其反应机理为:在mg2+存在下,萤火虫荧光素酶以d-荧光素酶、atp、o2为底物,将化学能转化为光d-荧光素+atp+o2 oxy-荧光素+amp+ppi+h2o能,发出光量子,其发光强度(i)与atp浓度(catp)符合下列函数关系。

式中,imax为最大发光强度;km为1×1o-4。

由上式可知,当catp远小于km时,i正比于样品中的catp。

ATP检测

ATP检测
2.76×106 2.81×105 2.75×104
7.44
6.44 5.45 4.44
2321700
699931 81096 8160
6.37
5.85
colony forming unit(Log10)
9.00 8.00 7.00 6.00 5.00 4.00 3.00 2.00 1.00 y = 1.3199x - 0.8317 R = 0.9778
参考标准值为RLU≤2000
如何使用ATP 技术(1)
低灵敏度仪器可用于重点科室的物表和手卫生 监测
– 临床医务人员手卫生:
– 手频繁接触物表:
各种设备操作表面、治疗车、床栏、床头柜、 门把手、灯开关、水龙头等 – 低风险器械表面:
如血压计袖带、听诊器等
– 使用科室: ICU、NICU、烧伤病房、感染病房、手术室、 新生儿病房、移植病房、透析室、血液科食堂 等
手卫生(物表)洁净后标准≤ 30为合格 30-100为警告 100以上为不合格
54
48
35 29 25 21 11
140 120 100 80 60 40 20 0
冰 箱 使 把 用 手 中 的 尺 子 使 床 用 把 中 手 的 听 暖 诊 箱 器 窗 口 三 把 通 手 管 路 接 护 头 士 站 使 鼠 用 标 中 的 电 监 话 护 仪 按 床 钮 尾 遥 控 呼 器 吸 机 面 板 病 历 夹 操 作 台
<0.4cfu/cm2 手卫生(物表)洁净后标准≤ 30为合格
<0.4cfu/cm2
11
30-100为警告 100以上为不合格
数值 600 500 400 300 200 100 0
固定护理6床 病人护士洗过 的手 6床病人使用 心电监护仪按 钮 6床病室内治 疗台面 6床床头桌台 面 6床病人手指 接触的电线 6床病人胸前 擦拭的皮肤 6床病人床尾 6床病人被服

ATP荧光法快检系统实现细菌总数的快速检测

ATP荧光法快检系统实现细菌总数的快速检测

在空气 中暴 露时问不可过长 ; 取样时必 须使 用无菌 工具 ( 如镊子、 勺子等 ) 手
臂 不 可 置 于样 品及 无菌 物 上 方 : 无菌 从 容 器中 或样 品中取 出 之物 虽 未被 污 染 也 不 可放 回原 处 。
意 无菌 室的日常清 洁 用2 %
5 %的来
检验无菌操作是否 规范的 直接方法一 一 空白对照
边 沿 , 口由上 至 下擦 拭 ) 袋 。 5 无菌 物品应分 类 放置 于 固定 地 点
总数测定》(B T 48 2 0 ) G / 7 92 0 3 将营 养琼脂培养基倾入加有1 灭菌生理盐 mL
水 灭 菌 培 养 皿 内 作 空 白对 照 。 过 空 白 通
对 照 可直 接 检验 实验 器皿 、 验 条 件 以 实
当 ( 表1 见 )
表1试剂组性能比较 实验结果
仪作参照 . 对不同浓 度的A P T 溶液和 相
应 荧光 值 进 行 了三 次 以 上 的检 测 . 次 每
检 测 的 A P 度 点设 置三 个平 行 样 本 。 T浓
人淋 一 0 1 1 16 69 70 1 一 口 _ o 口 人淋 - 1 I 54 6 0 7 3
次 )不 可与未 灭菌 的物 品混 放在 一 起 。 , 6 禁 止在 无菌 室 内谈 笑 , 量减 少 尽
走 动
及实验人员是否符合无菌操作的规定。
如果从 空 白对 照中发现 无菌操 作不规
范, 则应 该 通 过 实 验 进 一 步 找 出原 因所
定距离 ; 未经消毒 的物品及手绝对不可
法由于检测时间较长 , 已经不能满足食
品企 业 实 施H C P 系 时实 时监 控 的要 A C体 求 。 此 , 阳 中科 靓 马 生 物 工 程 有 限 为 沈 公 司从 中 科 院 遗 传 与发 育 所 引进 了 含 虫 光 素 基 因 的新 型 菌 株 及 虫 光 素 酶 的 生 产 方 法 ” 明 专 利 , 功 研 发 了具 有 发 成 我 国 自主 知 识 产 权 的 T 荧 光 法 细 菌 AP
  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

ATP荧光法微生物(细菌总数)快速检测系统使用说明书第一部分ATP荧光法微生物(细菌总数)快速检测系统简介1、系统原理 (3)2、组成部件及相关功能 (4)3、应用领域、特点、效益 (4)4、检测注意事项及操作步骤 (4)5、ATP快检系统使用注意事项及故障排除 (9)6、对应关系曲线 (10)7、有关食品安全和卫生检测的问答 (11)8、具体样品检测的操作方法及方案 (14)第二部分ATP荧光法微生物(细菌总数)快速检测系统使用说明1、技术参数及性能 (23)2、仪器操作说明 (24)2.1开机、初始化 (24)2.2参数设置 (24)2.2.1选择RLU方式 (25)2.2.2选择其它样品名方式 (25)2.2.3设置文件类型............................... . (26)2.2.4设置日期时间......................... (27)2.2.5设置检测时间 (27)2.2.6 U盘格式化 (27)2.3测试 (27)2.4查询 (28)2.4.1查询测试结果 (28)2.4.1.1删除测试结果 (29)2.4.1.2删除文件 (29)2.4.2查询文件信息 (30)2.4.3查询仪器信息 (30)2.4.4查询电池电量 (30)2.4.5快速查询 (30)2.5通讯 (32)3、上位机软件 (33)3.1软件安装 (33)3.2驱动程序的安装 (36)3.3软件启动 (38)3.4软件运行 (39)3.5样品及回归方程设定 (40)3.6 “文件名”说明 (41)3.7文件、记录操作和数据库 (42)4、电池充电 (43)5、保修 (43)第一部分 ATP荧光法微生物(细菌总数)快速检测系统简介1、系统原理萤火虫会发光是由于它能合成将化学物质的化学能转变为光能的生物催化剂—萤火虫荧光素酶(简称虫光素酶,luciferase)、虫荧光素(D-luciferin)以及所有细胞生物都产生的生物能量物质—三磷酸腺苷(ATP)。

在有氧的条件下,虫光素酶催化虫荧光素和ATP之间发生氧化反应,形成氧化荧光素并发出荧光,其生化反应式如下:ATP+D-Luciferin+O2 Mg++ AMP+Oxyluciferin+PPi+CO2+LightLuciferase上式表明,只要具备适当条件,不仅萤火虫,即使在试管中也能发出荧光。

当反应系统中,虫光素酶和虫荧光素处于过量的情况下,荧光的强弱取决于ATP的数量。

以检测含细菌的样品为例,细菌细胞越多,ATP量越高,发出的荧光也就越强。

由于虫光素酶对ATP的反应非常灵敏,荧光强弱可通过荧光仪10~15秒内计量。

所以,在排除样品中非细菌ATP干扰的情况下,通过荧光值就能确定样品中细菌ATP 的含量,从而确定细胞数量,因此,此系统为半定量快速检测系统。

维持胞内ATP浓度的相对恒定,是ATP在细胞代谢中发挥中心作用的关键。

每个细胞的ATP量与胞内容积成正比,但ATP量与菌落形成单位(colony-forming units=cfu)之间却常常偏离这种关系,主要原因是样品中细菌细胞与细胞碎片彼此聚集成团,这种效应曾在大肠杆菌培养物这种单一菌群模式系统中有过描述,一个菌落有可能由单个或几个细胞扩增形成;另一种原因是检测者没有对样品作适当的预处理,比如没有去除胞外游离ATP。

根据相关文献记载,不同种类细菌中的ATP 含量不同,由于细菌ATP含量都处于10-18mol数量级,细微差别忽略不计,均值约为2.5×10-18mol。

对于同种细菌,影响细胞内ATP含量的因素也很多,生长阶段、培养基种类、有氧无氧以及代谢抑制物的存在,都会影响细胞数和荧光值的对应关系。

实测表明处于同一生长状态和批次样品中的ATP是相对恒定的,即在同一环境中微生物种类及生长情况固定,其ATP含量也相对恒定。

2、组成部件及相关功能2.1 试剂组,按检测操作顺序分为:(1)体细胞裂解试剂(TRA),能专一而有效地裂解样品中的非细菌细胞(主要为体细胞)并释出ATP,然后通过过滤比色杯底部的滤膜将其排除。

(2)细菌细胞裂解试剂(XRA),能专一而有效地裂解样品中细菌细胞并释出ATP。

(3)荧光反应试剂组(LLR),能与细菌ATP相互作用并有效地发出荧光。

(4)物表清洁度检测试剂组(SCR),能与物体表面ATP相互作用并有效地发出荧光。

2.2 微量荧光检测仪(也称微量光度计),准确计量检样的荧光值。

2.3 可供100次测定的样品预处理耗材。

(1)过滤比色杯的杯架一个,用于固定过滤比色杯。

(2)加压器一个,用于加压、排出体细胞ATP和试剂组。

(3)带滤膜荧光反应比色杯100个,为荧光反应容器。

(4)专用无菌吸水纸,置于过滤比色杯架,吸收加压后流出的液体。

(5)带密封圈专用无菌浓缩器,用于浓缩样品。

(6)自备微生物学无菌操作所需常规用具、器皿,样品采集无菌、无ATP的容器、塑料袋、手套、镊子等。

3、应用领域、特点、效益使用ATP荧光法细菌快检仪实施食品、饮料、乳品加工等全程卫生学监测4、检测注意事项及操作步骤4.1 试剂的准备和注意事项:4.1.1 本公司提供的“ATP荧光法细菌总数快检系统”所含试剂组与微量荧光检测仪需匹配使用,不可用其它试剂替代。

4.1.2 LLR试剂(含萤火虫荧光素酶和D-荧光素)应在冰箱冷冻室-20℃中贮存,有效期6个月。

LLR试剂组易变质,室温下不高于25℃时不得超过24小时,在0-4℃有效期为5天。

4.1.3试剂(LLR)在用于检测前按规定低温存放,检测前20分钟取出平衡到室温方可应用。

如果超过有效期,应弃用,重新购置。

体细胞裂解试剂(TRA)及细菌细胞裂解试剂(XRA)可处于室温下保存, 2-8℃下保存效果最佳。

4.1.4,萤火虫荧光素酶对ATP极其敏感,生物材料容易引起ATP交叉污染,所以检测应尽量满足微生物学常规无菌操作,才能取得准确、真实的检测数据。

4.2样品采集和预处理简介非生理条件下,细菌细胞的ATP浓度将急速下降,但也同样拥有快速补偿机制以维持胞内ATP浓度相对稳定,保障生命活动正常进行。

因此,在采集细菌样品或进行预处理时要注意下列事项。

4.2.1.为避免离心浓缩一类非生理状况的步骤出现,可使用注射器将样品转移到一次性滤膜上。

如需洗涤细胞,应用无菌、无ATP的PBS缓冲液淋洗,以免影响胞内ATP浓度。

4.2.2.卫生监测时,常用涂抹法或用棉拭子擦拭采集样品,但此法对于有生物膜结构的细菌并非最佳方式,其一,细胞收集率不高;其二,棉花纤维干扰光检测。

可改进为用滴瓶将ATP提取液滴加到待检表面,用海绵签收集ATP后进行光检。

4.2.3.细胞的ATP含量与细胞大小成正比,体细胞和酵母细胞的ATP含量大约分别是细菌细胞的1000倍和100倍,但ATP量和菌落形成单位(cfu)之间常常偏离这种关系,理论上每个活细胞都形成一个菌落,而实际上细胞彼此聚集常常出现二个或几个活细胞形成一个菌落的情况。

4.2.4.样品预处理。

可用ATP降解酶如三磷酸酶(apyrase)去除非细菌ATP,用温和的去污剂如TritonX-100去除样品中体细胞ATP,也可使用上述两种制剂同时处理。

不同试剂的处理效果因样品而异,试剂的选择和搭配需经实验确定。

4.3 检测样品的预处理:(操作过程中需配戴一次性无菌手套)必须用无菌、无ATP的PBS溶液:磷酸二氢钾34g;1mol/L氢氧化钠溶液175mL;蒸馏水825mL;pH7.2;使用时将上述溶液吸取1.25ml,定容至1000ml,灭菌后备用。

实验室标准菌:在室温条件下用不含钙离子和镁离子的磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤样品细胞3次,最后用1ml同种PBS缓冲液悬浮样品细胞。

物表清洁程度:将无菌棉签头部用TRA试剂润湿,在10cm×10cm范围内进行涂抹,涂抹时需不断旋转棉签头部,用1ml PBS缓冲液(不含钙、镁离子)浸泡棉签头部,从PBS缓冲液中吸出50μl待测。

液体样品:纯净水、自来水等细菌含量较低的样品需按比例浓缩;牛乳、果汁等浓度较大无法通过滤膜洗涤的样品需按比例稀释,稀释液应使用PBS(如使用国标生理盐水,检测数值会偏低)。

液体被检样品含细菌细胞数若高于1000cfu/ml,可直接抽取50µl被检样品进行测试;液体被检样品含细菌细胞数若低于1000cfu/ml,应进行浓缩处理。

浓缩方法如下:打开专用浓缩器,用无菌镊子取无菌过滤比色杯放入专用浓缩器内,注意上下胶圈放好,以免浓缩样品时发生泄露,拧紧浓缩器。

用一次性无菌医用针管抽取10ml 或其整倍数的被检样品,接到专用浓缩器上进行浓缩,用适当的压力缓缓地往下推注射器的柱塞(此时被检液体样品中的细菌被过滤比色杯的微孔滤膜截留,液体部分通过滤膜被排出)直到注射器与浓缩器中的液体部分完全被推出;拧开浓缩器,用消毒过的镊子从浓缩器中取出过滤比色杯备用。

固体样品处理:无菌操作称取25g被检固体样品溶于225mlPBS溶液中,然后把处理好的悬浊液用灭菌后的滤纸进行粗滤,抽取过滤后基本澄清无肉眼可见悬浊物液体进行测试。

(注:溶于PBS后所测结果为每克样品稀释10倍后所得光值)。

特殊样品处理:如需检测高盐、高糖、深加工产品,含抑菌剂、色素类样品需增加TRA洗涤次数,洗涤5次为佳。

冷藏或冷冻样品中微生物所含ATP会降低,如需检测冷冻的肉类、面食等,需使样品完全解冻至室温后再进行检测。

4.4 ATP标准曲线制定步骤4.4.1用双蒸水将浓度为1mM的ATP溶液,按1:10梯度比例制备成100µmol、10µmol、1µmol、100nmol、10nmol及1nmol系列溶液。

4.4.2用微量移液器吸取50µl荧光反应试剂组(LLR),加入荧光反应比色杯中,然后分别加入5µl稀释后的各梯度ATP溶液,用微量荧光检测仪检测RLU值,重复上述步骤,得到系列ATP溶液数据。

4.4.3以RLU值为纵座标,对应ATP浓度系列为横座标作图。

在1nmol-1µmolATP 浓度范围内,ATP浓度与相应RLU之间存在线性关系。

标准ATP溶液可以作为鉴定LLR试剂组是否失效及失效程度的阳性对照。

如按4.4.2步骤加入1nmolATP溶液时RLU值低于200,表示开始失效,应弃用。

4.5 样品检测步骤:4.5.1开机4.5.1.1打开仪器电源前,拉开仪器抽屉,确保抽屉小槽内清洁无异物,关闭抽屉。

4.5.1.2打开电源,进行初始化及参数设置。

(详见操作说明)4.5.1.3准备测试时,返回到主菜单界面(如下图),光标移动到“测试”选项。

4.5.2试剂组本底的测定4.5.2.1取出比色杯架,中间垫放5张专用吸水纸,将未放置样品的过滤比色杯放入架孔内。

相关文档
最新文档