02薄层扫描法检验操作规程
薄层扫描法
薄层扫描法一、定义ﻭ薄层扫描法(TLCＳ)又称原位定量薄层色谱扫描法（QTLC)系指用一定得波长得光照射在薄层板上,对薄层色谱中有紫外或可见吸收得斑点或经照射能激发产生荧光斑点进行扫描,将扫描得到得图谱及积分值用于药品定性定量得分析方法。
ﻭ回顾薄层色谱法（TLC）1、薄层板得制备(硅胶板,Aｌ２O3板,聚酰胺薄膜等)ﻭ2、点样(选择合适得展开剂，在薄板底1cm处画基线,点样)3、展开(浸入展开剂，展开到距薄板顶端１～2cm)4、检视（在紫外光灯下观察斑点）了解一下薄层扫描仪薄层扫描仪得组成及主要功能薄层色谱扫描仪有多个厂家生产,型号不同,仪器外形、光路系统及某些功能也有差异，但其基本结构及主要功能就是基本相同得。
每台仪器都包括主机、数据处理及信号输出等部分。
ﻫ(１)分光器及测量范围大多数薄层扫描仪得分光器为光栅，少数为棱镜,极个别得用滤光片,其测量范围光栅为200－800nm,棱镜为２0０－２500nm。
ﻫ(２)光源及检测器ﻫ光源室具有可见光源钨灯,波长范围为４０0-800,紫外光源氘灯波长范围为２00-4０0nm，荧光光源为氙灯或汞灯。
操作时可通过光源选择杆来变换光源选择镜得位置;检测器一般为光电倍增管。
表７-5-2 国外几种主要专用薄层色谱扫描仪二、ＴLCS基本原理与方法薄层扫描法可分为薄层吸收扫描及薄层荧光扫描两类方法。
ﻭ１、薄层吸收扫描法得基本原理ﻭ薄层吸收扫描法就是用可见光或紫外线得单色光照射展开后得薄层色谱板,测定薄层色谱斑点(简称斑点)得吸光度(A）随展开压离(L)得变化,而获得A—Ｌ成A—Ｒf曲线,即薄层色谱扫描图(简称扫描图）。
ﻭ曲线上得色谱峰峰面积可用于定量分析。
由于薄层板存在着明显得散射现象,而使斑点中物质得浓度与吸光度得关系不服从Ｂｅｅｒ定律,所以需田Kubelｋa—Ｍunk(古柏尔卡—曼克)理论来描述。
该方程式就是薄层扫描法得定量分析基础。
定量校正方法可分为曲线校直法及非线性回归法等。
薄层色谱层析操作规程
薄层色谱层析操作规程1. 引言薄层色谱（TLC）是一种常用的分离和分析技术，适用于有机物和天然产物的检测、纯化和鉴定。
本操作规程旨在提供一种标准化的TLC操作步骤，以确保结果的准确性和可重复性。
2. 实验材料和仪器设备•薄层色谱板：选择合适的固定相和基底材料的薄层色谱板。
•检测溶剂：根据需要选择合适的溶剂，常用的有乙醚、醋酸乙酯、甲醇、正己烷等。
•样品：准备待测物的溶液或提取液。
•试剂：例如显色剂、定位剂等。
•色谱槽：用于放置色谱板的槽状容器。
•喷雾开发箱：用于显色和可视化样品。
3. 操作步骤3.1 准备工作1.检查薄层色谱板是否完整，如有损坏需更换。
2.在色谱板上使用铅笔标记出样品和参比物的位置。
3.2 样品处理1.准备待测物的溶液或提取液，并将其过滤以去除杂质。
2.如需测定混合物中的成分，可先进行分离提取。
3.3 上样1.使用微量锥或玻璃管在标记位置上均匀地涂抹样品。
2.上样后务必避免接触色谱板其他区域。
3.4 开发1.将色谱板放置在色谱槽中，加入适当的检测溶剂。
注意溶剂的选择应根据待测物的性质和溶解性来确定。
2.等待溶剂上升至足够高度，将色谱板取出并迅速标记并扫描涂点位置。
3.5 显色和观察1.将色谱板放入喷雾开发箱中，并加入适当的显色剂。
2.等待显色剂完全插入后，将色谱板取出并进行观察。
3.6 数据处理1.使用适当的测量工具，如图像分析软件，测量色谱带的迁移距离和Rf值。
2.进行定性和定量分析，根据需要绘制色谱图。
4. 安全注意事项1.使用化学品和有机溶剂时必须戴上防护手套和防护眼镜，以防止溅入眼睛或与皮肤接触。
2.所有操作需在通风良好的实验室中进行，避免吸入有害气体。
3.注意操作时避免产生火源，如禁止吸烟和使用明火。
4.做好废弃物的处理工作，避免对环境造成污染。
5. 结论本操作规程提供了一套标准化的薄层色谱层析操作步骤，涵盖了样品准备、上样、开发、显色和观察、数据处理等关键步骤。
通过遵守操作规程和安全注意事项，可以准确、高效地进行薄层色谱层析实验，并获得可靠的结果。
薄层扫描操作规程
薄层扫描操作规程一、Linomat 5半自动点样1.打开电源、气泵电源；开启气阀，调节输出压力5bar或0.5大气压。
仪器显示“LINOMA T 5 SYSTEM READY”。
2.运行WinCA TS工作站，仪器面板上“ONLINE”红色灯亮，表示联机成功。
3.装载薄层板。
搬动右边手柄，打开下方卡槽，薄层板靠左上放置好，和上卡槽，搬回手柄。
（10×10cm薄层板及铝箔板需在右方放上压条）4.在WinCA TS工作站中，File菜单项下选择New即可建立方法并保存。
5.打开新建立的文件，设置分页中选择“Sample application”项下“Linomat 5”并打钩。
6.点击“Staionary phase”并设置。
7.点击“Sample application Linomat 5”并在右下边“Linomat 5 General”、“Sequence”、设置，点击“Layout”预览设置。
8.在工具栏点击“Create new analysis”，输入名字后保存。
9.在工具栏点击“Execute next step”按提示点样。
点样时先用乙醇清洗点样针3次，再用样品润洗3次，再吸取样品。
10.装好点样针，在面板上按“ENTER”点样开始。
（一种样品点完后，按提示更换点样针，重复清洗、润洗。
并吸取新样品）11.保存文件，关闭仪器电源和气路。
二、TLC Sanner 31.启动仪器电源，仪器初始化。
2.运行WinCA TS工作站，仪器面板上“ONLINE”红色灯亮，表示联机成功。
3.从仪器内取出托盘，（注意方向，原点在右上角，展开方向上→下），放置薄层板，放好磁条固定，放回仪器，听到“咔”声音表示固定好，合上仪器门。
4.在WinCA TS工作站中，File菜单项下选择New即可建立方法并保存。
5.打开新建立的文件，设置分页中选择定性/定量扫描并在“Definations”上打钩；在“Detection”选择“Sanner 3”并打钩。
薄层色谱扫描法
薄层色谱扫描法标准操作规程1 简述薄层色谱扫描法是指用一束一定波长、一定强度的紫外或可见光对薄层板进行扫描，测定薄层板上的样品斑点对光的吸收强度或斑点经激发后所产生的荧光强度。
所得到的图谱及积分数据用于药品的鉴别、检查和含量测定的方法。
薄层色谱扫描法可分为吸收法和荧光法。
扫描时测定薄层板上的方法称为荧光法。
吸收法测定可采用反射法或透射法两种方式进行扫描。
反射法是指测定样品斑点对照射光的反射情况进行测定的方法；透射法则是测定照射光穿透样品斑点后光的吸收情况。
荧光法测定均采用反射法。
透射法大多用于凝胶色谱的扫描，非透明介质薄层板的扫描主要为反射式吸收法或荧光扫描法。
薄层色谱扫描可使用单波长和双波长进行测定。
单波长薄层扫描适合于分离度好，背景干扰小的薄层色谱。
双波长薄层扫描时用测定波长和参比波长分别扫描层板，测定样品斑点在两波长下的吸收度之差，可减少分离度欠佳的组分间的相互干扰，并减少薄层板的背景干扰，操作时应选择待测斑点无吸收或最小吸收的波长作为参比波长。
根据扫描时光束的轨迹不同，波长色谱扫描又可分为线性扫描和锯齿扫描。
线性扫描时一般采用一束比待测斑点略宽的狭窄光带沿展开方向作单向等速扫描，它适合于形状较规则斑点的扫描。
锯齿扫描是用使用微小正方形光束沿展开方向扫描的同时，在垂直于展开方向进行反复式扫描，扫描过程中光束的运动轨迹呈锯齿形或矩形，它对于形状不规则或分布不均匀的斑点扫描重复性较好，但扫描速度较慢。
在采用反射式吸收法测定时，入射光照射到薄层板上，一部分照射过薄层板，一部分光发生反射，此外还产生大量的散射光。
因此，波长扫描定量一般不符合Lambert-Beer定律，其样品量与反射光强度符合Kubelka-Munk方程：（1-R）2/R=2.303εC/S其中R为反射光强，ε为样品吸收系数，C为样品浓度，S为薄层板散射系数。
由此方程可知，样品吸收系数和薄层板散射系数均可影响波长扫描反射法定量的工作曲线方程。
薄层色谱扫描法范文
薄层色谱扫描法范文
一、薄层色谱扫描法
薄层色谱扫描（TLC）是一种常用的分析技术，它利用各种有机溶剂在特定表面上，对物质产生的色彩分布，以及气相中分子的不同分子间作用力，来确定和分离物质的组成。
它最早是用于无机或有机物质的分析，但现在它也被广泛用于生物分析。
1.原理
薄层色谱扫描的原理是用溶剂去溶解和挥发溶质，以及使溶质在色谱板上分层定位静电膜的动力学过程。
在色谱板上，每一列都有一个相同的溶剂组成，每一排都有不同的溶剂组成，这样，溶剂中的溶质就可以在色谱板上分布开来，形成一个拓扑结构，并且可以清楚的看到每一种溶质在色谱板上移动的路径。
2.操作原理
TLC操作原理比较简单，主要包括几个步骤：装载样品，用溶剂溶解样品，用色谱板浸渍溶剂，用极性梯度溶剂测定溶质移动路径，以及用高温条件烘烤色谱板，使溶质分离。
装载样品是在涂层技术的基础上，将样品溶质涂布于色谱板上，这些涂层应当是薄而稳定的，使得色谱板能够被有效的渗透。
薄层色谱法检验操作规程
1、目的为规定薄层色谱法的检测方法和操作要求，特制定本操作规程。
2、依据《中华人民共和国兽药典》（2000年版）。
3、适用范围适用于本公司检品薄层色谱法的质量检测。
4、职责分工质保部对本规程的实施负责。
5、正文5.1简述：薄层色谱法，是将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。
待点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。
5.2仪器与用具：5.2.1薄层板（购买成品薄层板）5.2.2点样器：常用具支架的微量注射器或定量毛细管，应能使点样位置正确集中。
5.2.3展开室：应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密的盖子，除另有规定外，底部应平整光滑，以便于观察。
5.3操作方法：5.3.1薄层板制备（购买成品薄层板）：将薄层板在110℃烘30分钟，立即置于有干燥剂的干燥箱中备用。
使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。
5.3.2点样：除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边 2.0cm，点样直径为2～4mm，点间距离约为 1.5～2.0cm，点间距可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。
点样时必须注意勿损伤薄层表面。
5.3.3展开：展开室如需预先用展开剂饱和，可在室中加入足够量的展开剂，并在壁上贴两条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖，待展开至规定的距离（一般为10～15cm），取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测。
各种供试品，只有得到分离度和重现性好的薄层色谱，才能获得满意的结果。
5.4注意事项：5.4.1所用玻璃板应洗净不挂水珠，光滑平整。
5.4.2薄层板应在110℃活化30分钟，至于有干燥剂的干燥箱或干燥器中备用。
5.4.3点样一般为圆点，不能太大。
薄层色谱检查法标准操作规程
依据：《GMP》与药品生产质量检验的要求目的：建立一个薄层色谱鉴别的标准操作规程范围：各种检验中薄层鉴别的操作1．定义：薄层色谱法，系将细粉状的吸附剂或载体涂布于玻璃板、塑料板或铝基片上，成一均匀薄层，经点样、展开与显示以后，再与适宜的对照物质按同法所得的色谱图作对比,用于进行药品的鉴别，杂质检查或含量测定的方法。
2．仪器与材料2.1 展开室：可选用适合薄层板大小的玻璃缸,并有严密的盖子、底部平整。
必要时在展开槽盖处可涂抹少量凡士林增加密闭性，但需注意勿沾污薄层板或溶入展开剂。
2.2 玻璃板：除另有规定外,用5cm×20cm、10cm×20cm或20cm×20cm的规格。
也可用载玻片进行预试验。
各种薄层板要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。
玻璃板的质量有一定要求，厚度为2mm或3~4mm，预制板一般使用1mm的玻璃板。
应有良好的平面性，可用镜面玻璃或浮法玻璃，还应有一定的耐热性，以使在烘烤时不致破裂。
2.3 涂布器：有手工涂布器和自动涂布器(用于定量分析),均应能使吸附剂或载体在玻璃板上涂开层符合厚度要求的均匀薄层.2.4 点样器：玻璃毛细管2.5 吸附剂或载体首选为硅胶G、硅胶GF254.硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。
其颗粒大小，一般要求为直径10~40μm。
其比表面积可达约600m2/g。
由于硅胶的质量、颗粒大小、分布均匀程度直接影响分离度及检出限度。
而且不同厂家生产的硅胶，其质量也有差别，甚至同一厂家生产的不同批号也会有分离效果不同的差别。
因此要使薄层分离的结果比较稳定，应严格控制硅胶质量。
3．薄层板的制备薄层板分为无粘合剂(软板)和有粘合剂(硬板)两种.前者系将吸附剂直接放在洗净干燥的玻璃板一端,置涂布器上并调节好一定的涂布厚度,一般为0.25～0.5mm(供分析用).由于使用中易被分散,现多采用含有粘合剂的薄层板。
薄层色谱的操作方法 薄层色谱操作规程
薄层色谱的操作方法薄层色谱操作规程薄层色谱是一种较新的色谱法，兼具柱色谱和纸色谱的优点，能快速分别和定性分析少量物质。
薄层色谱性能优异，操作也较简单。
1.选择吸附剂吸附剂一般要求直径为10～40m，需要依据被分别物质的性质选择，常用的吸附剂有以下几种。
硅胶：微酸性极性固定相，适用于酸性、中性物质分别氧化铝：碱性极性固定相，适用于碱性、中性物质分别纤维素：含有羟基的极性固定相，适用于分类亲水性物质。
聚酰胺：含有酰胺基极性固定相，适用于酚类、醇类化合物的分别。
2.制备薄层板薄层板的质量将决议分别的效果，应当尽量均匀且厚薄一致。
薄层板的制备紧要有两种方法：①将干净干燥的玻璃板置于铺板器中心，在铺板槽中倒入糊状物，自左向右推，将糊状物均匀地涂在玻璃板上。
②将调成糊状物倒在玻璃板上，或用角匙舀到玻璃板上，再用玻璃棒或角匙铺平并用手捏住玻璃板一角，轻轻碰敲桌面，使薄层表面均匀并除去糊状物中的气泡。
制备完成后还需要将涂好的薄层板水平放置于室温下晾干，然后放在烘箱内加热活化。
（硅胶板需在烘箱内渐渐升温至105—110度后保温30分钟；氧化铝板需在200—220度烘4小时）3.点样将待测样品溶在极性尽可能低的溶剂中配成1%的溶液。
用一支平口的细毛细管蘸取少量样品溶液点在薄板上。
4.打开薄层层析有多种打开方式，可分为上行、下行、双向打开等，这里介绍一下上行法和下行法。
上行法：在缸中加入充重量的打开剂，将点好样品的薄层板放入打开缸的打开剂中，密封缸盖，待展开前沿离薄板上端1cm时，取出薄层板，并用铅笔轻轻画下溶剂前沿，晾干。
下行法：在打开缸的盖子上装一个小钩，将打开的纸片钩住，并通过一滤纸条将展开剂和纸片连起来。
待打开剂前沿离纸片下端1cm时，取出纸片，并用铅笔轻轻画下溶剂前沿，晾干。
5.显色晾干薄板溶剂后对板上的组分进行定位。
将显色剂以喷雾方式直接喷到薄层板上可显示不同颜色的斑点。
此外对于无色样品，可接受带荧光剂的吸附剂做薄板，打开后在紫外光下显暗色斑点；对于在光学条件下不显色的物质，可将薄板置于含有少量碘晶体的密闭容器中，与碘作用呈棕色斑点。
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目的：建立薄层扫描法的标准操作规程
范围：本规程适用于薄层扫描法。
职责：检验员、QC主任。
依据：《中国药典》2010年版。
内容：
1 简述
薄层色谱扫描法是指用一束一定波长、一定强度的紫外或可见光对薄层板进行扫描，测定薄层板上的样品斑点对光的吸收强度或斑点经激发后所产生的荧光强度。
所得到的图谱及积分数据可用于药品的鉴别、检查及含量测定。
薄层色谱扫描法可分为吸收法与荧光法。
扫描时测定薄层板上的样品斑点对光的吸收强度的方法称为吸收法；测定样品斑点经激发后所产生的荧光强度的方法称为荧光法。
吸收法测定可采用反射法或透射法两种方式进行扫描。
反射法是指测定样品斑点对照射光的反射情况进行测定的方法；透射法则是测定照射光穿透样品斑点后光的吸收情况。
荧光法测定均采用反射法。
透射法大多用于凝胶色谱的扫描，非透明介质薄层板的扫描主要为反射式吸收法或荧光扫描法。
薄层色谱扫描可使用单波长和双波长进行测定。
单波长薄层扫描适合于分离度好，背景干扰小的薄层色谱。
双波长薄层扫描时用测定波长和参比波长分别扫描薄层板，测定样品斑点在两波长下的吸收度之差，可减少分离度欠佳的组分间的相互干扰，并减少薄层板的背景干扰，操作时应选择待测斑点无吸收或最小吸收的波长作为参比波长。
根据扫描时光束的轨迹不同，薄层色谱扫描又可分为线性扫描和锯齿扫描。
线性扫描时一般采用一束比待测斑点略宽的狭窄光带沿展开方向做单向等速扫描，它适于形状较规则斑点的扫描。
锯齿扫描是使用微小正方形光束沿展开方向扫描的同时，在垂直于展开方向进行往复式扫描，扫描过程中光束的运动轨迹呈锯齿形或矩形，它对于形状不规则或分
布不均匀的斑点扫描重复性较好，但扫描速度较慢。
在采用反射式吸收法测定时，入射光照射到薄层板上，一部分光透射过薄层板，一部分光发生反射，此外还产生大量的散射光。
因此，薄层扫描定量一般不符合Lambert-Beer 定律，其样品量与反射光强度符合Kubelka-Munk方程：
(1-R)2/R=2.303εC/S
其中R为反射光强，ε为样品吸收系数，C为样品浓度，S为薄层板散射系数。
由此方程可知，样品吸收系数和薄层板散射系数均可影响薄层扫描反射法定量的工作曲线方程。
2 仪器
2.1 仪器组成
薄层扫描仪主要由光源、单色器、薄层板台、检测器以及工作站组成。
2.1.1 光源在可见光区域主要使用钨灯（370～700nm），紫外区多使用氘灯（200～370nm）。
此外还有汞灯，氙灯等。
其中汞灯为线光源，可发射特征辐射光谱。
2.1.2 单色器用来提供一定波长的单色光。
其结构与一般的紫外分光光度计类似，通常由入射狭缝、出射狭缝、平行光装置、色散元件等组成。
薄层扫描仪多采用光栅为其色散元件。
2.1.3 薄层板台扫描时薄层板固定于薄层板台上，薄层板台可横向及纵向移动，以完成对整块薄层板的扫描。
2.1.4 检测器多采用光电倍增管。
此外还有监测入射光能量的参比光电倍增管，以减少入射光强度变化对扫描结果的影响。
2.1.5 工作站可设定仪器参数，接收并存储扫描结果，进行积分和其他计算。
2.2 仪器性能检定
2.2.1 波长准确度的检查可利用汞灯的特征谱线光谱对仪器的波长准确度进行检查。
选取汞灯，在200～700nm波长范围内以荧光方式对空白硅胶. 薄层板扫描吸收图谱，图谱中的峰位波长与汞灯的谱线中相应波长的差即为仪器波长准确度。
汞灯谱线的已知波长为25
3.6,313.0,33
4.2,36
5.0,404.7,435.8,54
6.1,578.0nm。
在CAMAG等仪器的工作站中有专用的仪器检定软件，按要求操作即可自动进行仪器波长准确度等检查。
其结果应符合仪器
相应的有关规定。
日常工作中波长准确度的初步核对可采用以下方法：于硅胶G薄层板上点样10μl浓度约为10mg/ml的磷酸氯喹水溶液，用氘灯以反射方式对样品斑点作光谱扫描（200～360nm），扫描所得的谱图应在 (257±10)nm 和(343±10)nm处有最大吸收峰。
2.2.2 重复性测定
对薄层板上同一斑点重复多次扫描，计算结果的标准偏差。
取脱水穿心莲内酯对照品适量，加无水乙醇制成每ml含1mg的溶液。
取1μl点于硅胶GF
254
薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇（4: 3:0.4）为展开剂，展开，取出，晾干。
按双波长薄层色谱扫描法，连
续扫描10次，扫描波长：λ
S =263nm,λ
R
=370nm，以峰面积积分值计算相对标准偏差，锯齿
扫描应≦1.5%，线性扫描应≦2.0%。
3 操作方法
3.1 样品前处理应按各品种项下规定，制备供试品和对照品溶液。
如进行薄层色谱扫描定量，则取样不少于2份，平行操作。
3.2 薄层色谱操作应照薄层色谱法标准操作规范操作，保证薄层色谱质量。
3.3 样品测定
测定时应按各品种项下的具体规定，依据不同仪器的结构特点及使用说明，正确选择仪器参数进行扫描。
3.4 系统适用性试验
按各品种项下要求进行，包括检测灵敏度（用于限量检查）、分离度和重复性，应符合规定。
3.4.1 检测灵敏度系指用于限量检查时，被测成分能被检出的最低量。
一般采用对照品溶液与稀释若干倍的对照品溶液在规定的色谱条件下，于同一薄层板上点样、展开、检视，后者显清晰的斑点的点样量为检测灵敏度。
3.4.2 分离度用于鉴别时，对照品溶液与供试品溶液色谱中相应的主斑点，均应显示两个清晰分离的斑点。
用于限量检查或含量测定时，要求定量峰与相邻峰之间有较好的
分离度，分离度（R）的计算公式为：R=2(d
2-d
1
)/(W
1
+W
2
)
式中 d
2
为相邻两峰中后一峰与原点的距离；
d
1
为相邻两峰中前一峰与原点的距离；
W 1及W
2
为相邻两峰各自的峰宽。
除另有规定外，分离度应大于1.0。
3.4.3 重复性系指同一薄层板上同一供试品溶液相同浓度的数个斑点，扫描结果的偏差。
如薄层板展开后直接扫描，同一薄层板上平行点样的待测成分斑点（不少于4个点）的峰面积测量值的相对标准偏差应不大于3.0%；如需显色后扫描，其相对标准偏差应不大于5.0%。
3.5 薄层色谱扫描含量测定
反射式吸收法测定时，样品量与反射光强度不呈直线的线性关系。
但是在一个较窄的范围内，曲线可近似为一条直线，从而采用外标一点法或两点法定量测定。
如在测定范围内工作曲线直线回归线性关系较差，可根据不同仪器采用不同方法进行校正。
在岛津CS系列薄层扫描仪上，有线性补偿器（Linarizer），它可依据Kubelka-Munk方程用电路系统将弯曲的曲线校正为直线后用于定量。
在实验时应根据薄层板及样品性质正确选择SX值，防止校正不足或校正太过，影响薄层扫描定量结果。
CAMAG等薄层扫描仪则可使用二次方程曲线表达样品量与反射光强度之间的关系，在分析时采用多个浓度对照品测定值回归计算出二次方程工作曲线，再根据此工作曲线计算样品含量。
含量测定时供试品溶液和对照品溶液应交叉点于同一薄层板上，每份供试品溶液点样不得少于2个，对照品每一浓度不得少于2个。
其计算结果的相对平均标准偏差应不大于5%。
4 注意事项
4.1 除另有规定外，薄层色谱扫描法含量测定应使用市售薄层板。
4.2 薄层色谱分析的各个步骤如点样、展开等，均会影响薄层扫描结果的准确性与重现性，因此在实验的各个步骤均应规范操作。
4.3 扫描时应沿展开方向自下而上进行扫描，不可横向扫描。
4.4 测定记录中应包括薄层色谱扫描图，峰面积积分值，工作曲线、回归方程和相关系数，以及测定结果计算等。
4.5 根据实际情况，可调整供试品溶液及对照品溶液的点样量，以便测定。
4.6 为保证测定结果的准确性，采用外标一点法测定时，供试品斑点应与对照品斑点
的峰面积的值相近；采用外标两点法测定时，供试品斑点的峰面积应在两对照品斑点的峰面积值之间。