细胞电转染系统技术参数
ECM830多功能型细胞电穿孔 细胞转基因活体导入系统 简介 ...
ECM830多功能型细胞电穿孔细胞转基因活体导入系统简介：ECM830可以满足所有体外和体内电穿孔研究的需要，并可对预处理的动、植物细胞进行融合。
该型号具有精细的电压调节，可监控所有参数，可调整脉冲间隙，这些细节是其优异品质的内在保证。
特别需要指出的是，配合BTX 提供的专用附件，可以轻松进行诸如活体转基因和导入蛋白，多肽及其他药物的研究和治疗。
应用：♦哺乳动物细胞转染♦体外／体内／离体／卵内实验♦核移植♦植物组织和原生质体的转染♦细菌和酵母的转化可靠性：方形波技术保证了更高的效率和哺乳动物细胞存活率。
通用性：利用BTX多种专业电极和新型的BTX MOS多孔板电穿孔仪，可以将仪器运用到各种电穿孔领域。
监控仪选配新的VIP 3000可以允许用户监控和记录下电穿孔过程中的主要电参数。
利用选配的通讯模块，就可以把数据下载到电脑上或在打印机上打印出来。
多孔板电穿孔仪新的MOS-多孔优化系统利用BTX-ECM电源发生器可为研究人员提供先进的多孔技术。
ECM830是为体外和体内电穿孔设计的方形波电穿系统。
BTX方形波技术为研究者提供了更高的细胞转染率和存活率。
ECM830应用范围广泛，包括了哺乳动物细胞和植物细胞转染，胚胎操作，核转移以及细菌和酵母转化。
ECM830的主要特点包括了：5至3000伏的电压范围；精确的电压调进，10微秒至10秒的脉冲范围，可控制的脉冲间隔，电弧淬灭功能（arc Quenching）可显示真实电压及脉冲波长数字显示屏。
更为客户提供了两年的质量保证。
ECM830主机可和BTX的各种专业及配件结合使用，使分子或药物的体外／体内导入实验更加得心应手。
技术规格操作状态：启动后内部自检界面：数字用户界面输入：110V／220V通用充电时间：最大5sec(没有延迟)电压范围：5－500V电压模式／1V分辨率505－3000V高电压模式／5V分辨率波长范围：10μsec─999μsec低电压模式／1μsec分辨率1msec─999msec低电压模式／1msec分辨率1sec─10sec低电压模式／0.1sec分辨率10μsec─600μsec高电压模式／1μsec分辨率多脉冲：1─99脉冲间隔：100msec─10sec电弧控制：电弧淬灭功能安全：脉冲发生器短路保护特点精密度及性能♦高级方波脉冲外形♦低电压模式1V分辨率及0.5％的精确率♦可监视电压、脉冲持续时间、脉冲间隔及脉冲数目安全性能♦电弧淬灭功能♦脉冲发生器短路保护♦外部安全机架可操作性能♦数字用户界面♦单一旋转数字盘控制♦在线帮助系统♦电压范围5V─3000V♦脉冲持续时间范围10msec─10sec优点♦高级的方形波技术产生更高的存活率及效率。
参考技术参数
3.核转染平台简单易用，预置的针对不同细胞类型优化好的转染程序超过180种，无需自行设置和摸索电转条件，一次转染只需10秒；
4.全球共享的细胞转染数据库，可检索超过700种针对不同细胞类型优化好的Protocol，全球所有客户都可登陆官网进行转染效率、所用程序以及优化Protocol的查询，节省时间和精力；
4.成像装置
4.1与显微镜同品牌高灵敏数字彩色CCD显微镜摄像头
4.2分辨率：280万像素（1920x1440 )
4.3传输速度1920×1440 40fps，1280× 1024 50fps
4.4像素大小4.54um x 4.54um
4.5传感器尺寸：2/3英寸
4.6满Байду номын сангаас电子：> 15.000 e-
5.12荧光定量测量(光密度/长度/面积/周长)需要手动圈定ROI。能测量选定对象的长度、面积、平均光强度、总光强度、中心点。能统计最大值、最小值、平均差、标准差、总值、平均值等。
5.13荧光强度定量测量：能进行单线、区域、序列以及整个图象堆叠区域光强度测量；在实时图上在线测量比率测量。
5.14自动校准系统，测量单位（um）直接显示无需校准。
6.3厂家售后服务通过ISO认证，并可提供证书编号和复印件。
7.显微镜，成像装置，软件均同一品牌，同一厂家，一体化设计，无缝连接，统一售后。
细胞高效核转染系统
1台
原装进口
1.转染效率高，在经典的电穿孔技术上，配合细胞类型特异性的电转液，可实现无语伦比的细胞转染效率，尤其是针对一些原代细胞、干细胞和难转染的细胞系；
Entranster-E：电转染过程中的影响因素
一电转的简介电穿孔转染，作为物理方法的一种，不仅能将DNA、RNA，还能将抗体、酶及其他生物活性分子转入细菌、酵母、动物细胞和植物细胞。
它是一种高效。
简便的基因转移系统，具有其他转移方法无法比拟的优越性，如操作简便、快捷，可重复性强，转染率高，适用广谱等，尤其对目前一般认为难转的悬浮培养细胞也能获得较高的转染。
二电转原理电穿孔法是通过电场作用于细胞几微秒到几毫秒之后，在细胞膜上暂时形成小孔或开口，把大分子如DNA等导入细胞并最终进入细胞核的技术。
其过程简述如下：首先在电击过程中，细胞膜上出现穿孔，质粒在电泳力的作用下与细胞膜接触，并在细胞膜上电穿孔的区域形成一种可转移的复合物。
再次电击后，质粒脱离复合物并扩散至细胞质内，开始瞬转；同时小部分质粒进入核内与染色体整合，开始稳转。
一旦DNA扩散至细胞，膜上小孔会关闭。
三电穿孔转染条件的选择1 电场参数电场是电转染的重要因素，细胞在电场的作用下，膜通透性增加或是形成小孔，以完成转染过程。
因此电场强度是应该被优化的主要参数。
电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。
因此，一个适宜的电场强度至关重要。
不同细胞系具有不同的最佳场强值，其确定方法除了实验直接测定比较不同场强下转染率的高低外，还可以采取较为简便的间接法。
文献显示存活率在50%左右的电场参数为理想参数，故可间接测定存活率来确定最佳场强值。
2脉冲过程1）脉冲波形脉冲波形主要分为两种：1、方波脉冲；2、指数递减波脉冲。
方波脉冲是指：电压瞬间升至预设电压，保持电压放电，然后瞬间终止放电。
一般哺乳动物细胞电转染时选择方波脉冲，有较高的转染效率和细胞存活率。
指数递减波脉冲是指：先对电容充电，然后让电容完全放电，其电压变化呈指数递减。
一般这种波形的脉冲电转染适用于细菌、酵母菌、昆虫细胞。
2）脉冲时间脉冲时间的选定主要取决与脉冲波形。
在方波脉冲中，脉冲时间可直接设定。
电穿孔技术
电穿孔技术电穿孔缓冲液：配方1：200mM/L葡萄糖,5mM硫酸镁2mM/L疏基乙醇20mM/LTris-HCI ,pH值7.6Universal Electroporation Solution通用电转染缓冲液性能特点：1. 显著提高转染效率和细胞存活率2. 适用于难转染细胞等几乎所有细胞类型3. 与所有电融合/电穿孔仪兼容产品货号：UES0001产品规格：1ml保存：Universal Electroporation Solution保存于4度建议-20度长期保存保质期：正确的使用和保存条件下，保质期为6个月电转染次数：1ml Universal Electroporation Solution用0.4cm电极杯可进行5组实验用0.2cm电极杯可进行10组实验电转染条件：电压260V电容950μF操作步骤：1．收集细胞：用胰酶消化细胞，将细胞培养液吸入到15ml离心管中，1000rpm,5min，弃其上清。
2．用不含血清的培养液洗涤一次，弃其上清。
3．取2～10ug质粒加入到100ul电转缓冲液中，充分混匀。
4．用100ul混有质粒的电转缓冲液充分溶解细胞，转入0.2cm电转导入杯中。
5．将电转导入杯放入样品槽中，释放电脉冲，电击参数按电容1000 mF，电压150-500 V，间隔20V取值，取得最佳效果。
6．立即取出电击杯，分别用一次性吸管将混和液转移至加有完全培养基的一次性细胞培养瓶中，放入细胞培养箱中培养。
电穿孔法转染哺乳动物细胞来源： 发布时间：2009-08-31 查看次数：1935站长注：下文是发表于Nature Methods中的一篇关于电穿孔转染方法的文章，站长对其作了注释，方便大家理解。
电穿孔转染理论上可转染所有的组织细胞，因此对其他如脂质体、磷酸钙沉淀等方法转染效果不明显的细胞可选用此方法。
电转过程中，最重要的就是电穿孔仪的电压、电容以及与电泳缓冲液的选择。
提到电转仪，最出名的恐怕就属BIO-RAD了，他在1986年推出了世界上第一台电穿孔仪，并发布了多种细胞仪电转过程中的电压，电容，电转缓冲液等可省却大家很多的摸索过程，具体资料可到其主页上查找相关Nature Methods 3, 67 - 68 (2006)Transfection of mammalian cells by electroporationPulsed electrical fields can be used to introduce DNA into a wide variety of animal cells1, 2. Electroporation works well with cell lines that are refractive to other techniques, such as calcium phosphate–DNA coprecipitation. But as with other transfection methods, the optimal conditions for electroporation of untested cell lines must be determined experimentally.电穿孔转染可用于磷酸钙转染效率低下的细胞，具有操作简便，转染效率高等优点，但对于不同的细胞，其转染条件有很大的不同，需要进行摸索。
细胞转染实验报告结论(3篇)
一、实验背景细胞转染技术是现代分子生物学研究中的一种重要技术手段，它可以将外源DNA、RNA或其他生物大分子导入细胞内，从而实现对细胞功能的研究和调控。
本实验旨在通过细胞转染技术将目的基因导入细胞内，研究该基因在细胞中的表达情况和生物学功能。
二、实验目的1. 确保目的基因成功导入细胞内；2. 观察目的基因在细胞中的表达情况；3. 分析目的基因在细胞中的生物学功能。
三、实验方法1. 细胞培养：将HEK293细胞在含有10%胎牛血清的DMEM培养基中培养至对数生长期；2. 基因构建：通过PCR扩增目的基因，克隆至载体pEGFP-C1中；3. 转染：采用脂质体转染试剂将目的基因导入细胞内；4. 重组蛋白表达检测：通过Western blot检测目的蛋白的表达情况；5. 细胞功能分析：通过细胞实验（如细胞增殖、细胞凋亡等）分析目的基因在细胞中的生物学功能。
四、实验结果1. 成功构建目的基因表达载体：PCR扩增目的基因片段长度符合预期，测序结果与预期序列一致；2. 成功导入目的基因：转染后，细胞中绿色荧光蛋白（GFP）表达阳性；3. 目的蛋白表达：Western blot检测结果显示，转染细胞中目的蛋白表达水平显著高于未转染细胞；4. 细胞功能分析：通过细胞实验发现，目的基因的过表达对细胞增殖、细胞凋亡等生物学功能有显著影响。
1. 本实验成功构建了目的基因表达载体，并通过脂质体转染技术将目的基因导入细胞内；2. 目的基因在细胞内得到了有效表达，且表达水平显著高于未转染细胞；3. 目的基因的过表达对细胞增殖、细胞凋亡等生物学功能有显著影响，表明该基因在细胞中具有一定的生物学功能。
本实验结果表明，细胞转染技术是研究目的基因在细胞中表达和生物学功能的有效手段。
在今后的研究中，我们将进一步探讨目的基因在细胞中的具体作用机制，为相关疾病的诊断和治疗提供理论依据。
以下是对实验结果的详细分析：1. 成功构建目的基因表达载体：在实验过程中，我们通过PCR扩增目的基因，并克隆至载体pEGFP-C1中。
细胞的脂质体转染法和电穿孔法
细胞的脂质体转染法和电穿孔转染法（一）脂质体转染一、实验试剂及器材Lipofectamine® 3000 Transfection Reagent，质粒DNA(0.5-5 μg/μL储液)，Opti-MEM®减血清培养基，培养板，酒精灯，离心机，微量移液器，离心管等。
二、实验步骤1. 接种细胞至70－90%汇合度时转染；2. 使用Opti-MEM®减血清培养基稀释Lipofectamine® 3000试剂（2管），充分混匀（6孔板Opti-MEM®培养基为125 μL× 2，Lipofectamine® 3000为3.75和7.5 μL）；3. 在每管已稀释的Lipofectamine® 3000试剂中加入稀释的DNA（用P3000TM试剂稀释）（1:1比例）；4. 室温孵育5分钟；5. 加入DNA－脂质体复合物至细胞中；6. 37°C(PK-15在39°C下培养)孵育细胞2–4天，然后分析转染细胞。
三、注意事项1. 在无血清培养基（如Opti-MEM®减血清培养基）中制备DNA－Lipofectamine® 3000脂质体复合物，直接将其加入含细胞培养基的细胞中（在血清／抗生素存在或不存在时均可）；2. 转染后无需去除转染复合物或者更换／添加培养基；3. Lipofectamine® 3000试剂用量各有不同，测试推荐的两种浓度的Lipofectamine® 3000试剂，以确定最佳用量，开始新的转染；4. Lipofectamine® 3000试剂应放在4℃储存（切勿冷冻）。
附上Lipofectamine 3000 REagent Protocol：（二）电穿孔转染法一、实验试剂及器材BTX ECM2001®2001细胞电融合仪，细胞，胰蛋白酶，电转液，DMEM，培养板，离心机等。
Lonza 4D参数
1、原理：综合应用电穿孔技术和细胞特异性细胞核转染液，可直接将外源基因导入细胞核及胞浆中。
2、转染程序2．1针对不同的细胞类型，内存有优化好的转染程序2．2 特异转染程序≥160种2．3 转染程序可持续升级3、转染液3．1针对不同的细胞类型，可提供不同的配套试剂盒3．2含有细胞特异性细胞核转染液，辅助细胞核转染仪，已达到高效的转染效率和高的细胞存活率3．3 含有阳性对照质粒PmaxGFP4、细胞转染数据库含针对多种细胞的转染完整操作数据库，包括细胞处理、转染效率、细胞转染后存活率等各方面验证方案。
5、灵活的规格：微量和超大量共存的细胞转染。
根据实验设置灵活选择不同的转染规格，标准配置即可使用100ul电转杯，也可选择20ul电转板条。
5.1 100ul转染体积适用于大细胞数转染（高达2*107/反应），用于转染后的生化应用、WB检测等；5.2 20ul转染体积适用于小细胞数转染（低至2*104/反应），用于报告基因分析、RNA干扰等。
5.3 *不同的转染体积，转染条件可平移，使用同一Protocol。
6、灵活的通量：低—中等通量（1-16样本数）应实验要求灵活选择。
7、电极材料：导电性聚合物，完全杜绝传统金属电极阳离子的释放，提高（或）维持转染效率的同时，保证细胞的生理特性。
8、模块化设计，即插即用，便于功能升级与扩展，核心主机最多可接驳5个功能性组件，如96孔转染设备等。
9、选配件贴壁转染模块可实现神经元等细胞的贴壁原位转染。
10、系统配置包含：核心主机，细胞悬液转染模块。
11、主机、附件配置：配置高性能名牌原装机，CPU及内存均达到最大配置[Inter Core i5或以上CPU，内存≥4GB]。
显卡带双显示功能，1024M独立显卡，液晶真彩显示屏≥19寸，硬盘≥500G，DVD+CD-RW 40×R。
Win7专业版系统。
细胞电转染
细胞电转染电转的简介 (1)电穿孔转染的基本原理及过程 (1)电穿孔转染条件的选择 (1)1 电参数 (1)2脉冲时程 (2)3 脉冲次数 (2)4 细胞因素 (3)5 质粒因素 (3)6 温度 (4)7．缓冲液以及培养液的成 (4)仪器常用键区介绍 (5)Neon TM电转染一般流程 (7)电转的简介电穿孔转染，作为物理方法的一种，出现于20世纪80年代中。
这种方法不仅能够将DNA、RNA，还能将抗体、酶及其他生物活性分子转入细菌、酵母、动物细胞和植物细胞。
它是一种高效、简便的基因转移系统，具有其它转移方法无可比拟的优越性，如操作简便、快捷，可重复性强，臻染率高，适用谱广等。
尤其对目前一般认为难转染的悬浮培养细胞也能获得较高的转染。
电穿孔转染的基本原理及过程电穿孔法是通过电场作用于细胞几微秒到几毫秒之后，在细胞膜上暂时形成小孔或开口，把大分子如DNA等导入细胞并最终进入胞核的技术。
其过程简述如下：首先在电击过程中，细胞膜上出现穿孔，质粒在电泳力的作用下与细胞膜接触，并与细胞膜上电穿孔的区域形成一种可转移的复合物。
再次电击后，质粒脱离复合物并扩散至胞质内，开始瞬转；同时小部分质粒进入核内与染色体整合，开始稳转。
一旦DNA扩散进入细胞，细胞膜上的小孔可自动重新闭合。
电穿孔转染条件的选择1 电参数电场强度E与电压V有以下关系：V=E×d，在电穿孔实验中，d为两电极之间的距离，是一个定值，故本文所指的电场强度的选择即电压的选择。
对于动物细胞来说，电场强度通常选择1～1000V／cm，并遵循低电场长时程的原则。
电场强度的大小对DNA摄入量的影响主要有：在阈电场强度Ec (Ec=Uc／1．5R)以下无R)以下无DNA摄入；适中的场强下DNA的摄入呈电场依赖型，随场强的升高而增大；高场强下，DNA的摄入进入平台期，与电场的大小无关。
电场强度的大小对细胞存活率的影响主要有：在阈电场强度以下存活率无变化；在适中的场强下，存活率呈电场依赖型，随场强的升高而下降；存活率在高场强下降为0。
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细胞电转染系统招标参数
1．工作条件
1.1.环境温度：10-35℃
1.2.相对湿度：20-80%
1.3.工作电压：220V 50Hz
2.技术指标
*2. 1 用途：用于基因转染实验，适用于各种贴壁细胞和悬浮细胞、包括难转染的血液系统细胞和干细胞等
2. 2 系统原理：综合应用电穿孔方法及细胞特异性的电极液，通过调整优化电转参数，可直接将多种转染物导入细胞中，可实现瞬转和稳转两种技术方式。
*2.3转染物：质粒DNA、RNA等；
2.4 实验操作：针对各种细胞有优化好的实验条件数据库，无需优化；
*2.5 能提供配套的转染试剂耗材；
2.6 耗材一次性无菌设计，细胞不与仪器接触，无需清洗仪器；
2.7 电极材料：使用高分子聚合物电极材料，非金属电极；
2.8 转染体系：可进行100ul体系、20ul体系2种规格转染；
2.9 仪器内置2个100ul电极杯孔位，16个板条孔位；
2.10 操作界面：触摸屏操作；
2.11 仪器升级：可通过USB接口与电脑连接进行软件的升级和数据的传送，软件可免费从网站下载更新；
2.12 有实验数据支持：外源基因可直接入核。
转染速度快，最快转染GFP 2小时后即可观察到蛋白的表达情况；
2.13 仪器未来可添加模块以实现贴壁细胞直接转染（如神经元、血管内皮细胞等）；
2.14仪器未来可添加模块以实现高通量转染（96孔转染）；
2.15仪器未来可添加模块以实现大体积转染（1mL和20mL）；
2.16该仪器具有专用配套试剂、耗材；
*3. 仪器配置要求
3.1细胞电转染主机：一台（含转染系统核心模块和系统配套X模块）
3.2微生物电转化仪：一台（可用于细菌和酵母菌的电转化）
3.3配套凝胶成像：一台（用于ECL、ECL Plus、Western、Northern、Southern等样品的发光成像和分析，用于电化学发光、生物芯片发光检测、植物活体成像、菌落活体成像等检测，CCD相机冷却温度：≤-65℃提供FLI厂家证明文件，标配F0.80镜头，无需改装校正光圈即可达到F0.8，上下双层样品台设计，可兼容拍摄样品厚度0.01mm - 10cm，可自由选择曝光识别区域，实现精确自动曝光）
3.4 配套试剂：试剂包95个（100µl 体系可做24反应，首批提供60个其他按用户需求
提供），试剂包96个（20µl 体系可做32反应，首批提供60个其他按用户需求提供）4技术服务和培训
卖方须到买方提供的现场免费安装、调试仪器，进行操作实验，直至运行正常，为操作人员提供免费的操作及维护培训。
质保1年，在2年内提供免费的技术支持，要有专业的技术人员随时待命。
供货方承诺将来以该仪器配套试剂市场价5.5折供货。
5保修期：
12个月
6安装地点：哈尔滨（用户指定位置）
7货期：合同签订后60天内
注：提供厂家或正规供货渠道授权，否则投标无效。