二硝基苯肼试验
实验九： 食品中维生素C的含量测定
实验九：食品中维生素C的含量测定方法一2,4–二硝基苯肼比色法测定抗坏血酸总量一、目的要求理解2,4–二硝基苯肼比色法测定抗坏血酸总量的基本原理。
学习其操作方法和了解影响测定准确性的因素。
二、实验原理总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸，样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，再与2,4–二硝基苯肼作用生成红色脎，其呈色强度与总抗坏血酸含量呈正比，可进行比色定量。
三、仪器与试剂（一）试剂1、4.5mol/L硫酸：量取250mL浓硫酸小心加入700mL水中，冷却后用水稀释至1000mL。
2、85%硫酸：小心加900mL浓硫酸于100mL水中。
3、2% 2,4–二硝基苯肼：溶解2,4–二硝基苯肼2g于100mL 4.5mol/L硫酸中，过滤。
不用时存于冰箱内，每次使用前必须过滤。
4、2%草酸溶液。
5、1%草酸溶液。
6、1%硫脲溶液：溶解1g硫脲于100mL1%草酸溶液中。
7、2%硫脲溶液：溶解2g硫脲于100mL1%草酸溶液中。
8、1mol/L盐酸：取100mL盐酸，加入水中，并稀释至1200mL。
9、抗坏血酸标准溶液：称取100mg纯抗坏血酸溶解于100mL 2%草酸溶液中，此溶液每毫升相当于1mg抗坏血酸。
10、活性炭：将100g活性炭加到750mL 1mol/L盐酸中，回流1h~2h，过滤，用水洗数次，至滤液中无铁离子（Fe3+）为止，然后置于110℃烘箱中烘干。
（二）仪器1、恒温箱或电热恒温水浴锅。
2、可见光分光光度计。
3、捣碎机。
四、实验步骤1、样品处理（全部实验过程应避光）。
（1）鲜样的制备：称取100g鲜样即加入100mL 2%草酸溶液，倒入捣碎机中打成匀浆，称取10.0g~40.0g匀浆（含1mg~2mg抗坏血酸）倒入100mL容量瓶，用1%草酸溶液稀释至刻度，混匀。
过滤，滤液备用。
（2）干样制备：称取1g ~ 4g干样（含1mg~2mg抗坏血酸）放入乳钵内，加入等量的1%草酸溶液磨成匀浆，连固形物一起倒入100mL容量瓶内，用1%草酸溶液稀释至刻度，混匀。
实验五 醛和酮的性质
实验五醛和酮的性质一.实验目的1.加深对醛酮性质的认识2.掌握醛酮的鉴别方法二.实验原理二.实验仪器与药品试管，胶头滴管，烧杯（洗胶头滴管用），洗耳球三.实验步骤1.2,4-二硝基苯肼试验(1)取2 mL2,4-二硝基苯肼试剂于试管中，分别加2-3滴样品（乙醛，丙酮，苯甲醛，苯乙酮）；(2)振荡、观察现象；(3)若无现象，静置几分钟后再观察。
2.亚硫酸氢钠的加成(1)在2支试管中各加2 mL饱和亚硫酸氢钠溶液；(2)再分别加入1 mL纯丙酮和5%的丙酮溶液，振荡，把试管放在冰水中冷却，观察现象。
3.碘仿反应(1)将5滴样品（乙醛，丙酮，95%的乙醇，异丙醇，苯乙酮）加入试管中，加1 mL I2－KI溶液，再滴加5%的氢氧化钠溶液至红色消失为止，观察现象；(2)如出现白色乳浊液，把试管放到水浴中温热至50-60 ℃，再观察。
3.斐林试剂试验(1)把1 mL斐林试剂Ⅰ和平共处1 mL斐林试剂Ⅱ在试管里混合均匀，分装到3支试管中，分别加入3-5滴样品（乙醛，丙酮，苯甲醛）；(2)振荡后，把试管放在沸水中加热，观察现象。
4.银镜反应(1)在洁净的试管中放入2 mL 2%的硝酸银溶液，加1小滴5%的氢氧化钠溶液，一边振荡试管一边滴加2%的氨水，直到产生的沉淀恰好溶解为止；(2)滴加2滴样品（乙醛，丙酮，苯甲醛），静置几分钟后观察现象；(3)若无变化。
在水浴中温热至50-60℃，再观察。
四.实验结果及分析表1 实验结果及分析表项目序号实验内容结果原因分析醛和酮的性质12,4-二硝基苯肼试验乙醛黄色沉淀2,4-二硝基苯肼与醛和酮的羰基发生加成，再脱去一分子水，生成缩合产物，得到具有不同的熔点的黄色晶体。
丙酮无明显变化，溶液呈透明棕黄色苯甲醛立即生成橘黄色沉淀，且可倒置试管不流出，振荡一会儿后变成浊液，静置后分层，上层为透明黄色液体，下层沉淀为橘黄色苯乙酮立即生成橘红色沉淀，且可倒置试管不流出，振荡一会儿后变成浊液，静置后分层，上层为黄色透明液体，下层沉淀为橘红色2亚硫酸氢钠的加成纯丙酮溶液立即出现乳白色沉淀，静置后分层，上层白色，下层无色丙酮与亚硫酸氢钠发生亲核加成，生成α-羟基磺酸钠，该产物为白色晶体，可溶于水，不溶于饱和的亚硫酸氢钠,易于析出。
二硝基苯肼衍生-高效液相色谱法测定水产品中甲醛含量的研究
第7=卷第0期海!洋!水!产!研!究!6O S c7=!%O c0 7@@<年7月["/#%>+#’!>/#>’/>’>"/)!+E A c!7@@<二硝基苯肼衍生2高效液相色谱法测定水产品中甲醛含量的研究马敬军0!7!周德庆0"!柳淑芳0!马洪明7"0中国水产科学研究院黄海水产研究所!青岛7==@40#"7中国海洋大学食品科学与工程系!青岛7==@@3#摘!要!!通过水蒸汽蒸馏法分离提取水产品中的甲醛!采用二硝基苯肼衍生2高效液相法测定甲醛含量!确定了有关测定的方法参数"该方法样品蒸馏液检出限为4H7@$M#?!样品中的检出限为@H7@ R M#a M!回收率为;@H@@d!0@:H:8d"方法灵敏度高!专一性强!重复性好!可为水产品甲醛含量监测提供灵敏$准确的分析方法"关键词!!高效液相色谱法!!二硝基苯肼!!甲醛!!水产品中图分类号!X’7<:c4文献识别码!"文章编号!0@@@24@4<!7@@<"@02@@782@:G’/’*851)/5.1.77.*8)92’,:2’51)W0)/5+-*.20+/(<:L R X=P5/,2515/*.-,’1:9,:2*)V51’2’*54)/5V)/5.1["*L1M2\Z10!7!.!-(,E2]L1M0"!?#(’C Z2P N1M0!["!O1M2R L1M7 "0$E S S O_’E N+L J C E U L E J/E J E N U Y C#1J K L K Z K E!)C L1E J E"Y N Q E R T O P+L J C E U T’Y L E1Y E J!V L1M Q N O7==@40#"7,E F N U K R E1K O P+O O Q’Y L E1Y E N1Q>1M L1E E U L1M!-Y E N1(1L I E U J L K T O P)C L1N!V L1M Q N O7==@@3#>?@A&=A@!!"C L M C F E U P O U R N1Y E S L]Z L QY C U O R N K O M U N F C L Y"!9?)#R E K C O Q P O U Q E K E U R L1N K L O1 O P P O U R N S Q E C T Q E L1N]Z N K L Y F U O Q Z Y K J A T J K E N RQ L J K L S S N K L O1N1Q F U E2Y O S Z R1Q E U L I N K L B N K L O1_N JQ E2 I E S O F E Q c X C EQ E K E Y K L O1S L R L K_N J4H7@$M$?L1Q L J K L S S N K L O1S L]Z L QN1Q@H7@R M$a M L1J N R F S E J! 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1左右!如图0所示"经进一步实验!甲醛可使7!:2二硝基苯肼全部衍生化生成7!:2二硝基苯腙!此时做高效液相出现的吸收峰相对应的物质为7!:2二硝基苯腙!保留时间为<H 0R L 1左右"因此可知<H 0R L 1左右时出现的吸收峰为衍生物测定特征峰"图0!甲醛高效液相法吸收峰图谱+L M c 0!)C U O R N K O M U N F CO P P O U R N S Q E C T Q EA T !9?)!c H !衍生化条件7c 3c 0!7!:"二硝基苯肼的用量衍生剂用量过大#<H @M %?$时!7!:2二硝基苯肼峰过大!而7!:2二硝基苯腙峰太小"当衍生剂量过小#@H 0M %?$时!衍生化不彻底"采用0H @M %?浓度时!能使衍生化完全而且7!:2二硝基苯腙峰为7!:2二硝基苯肼峰的两倍左右!分离效果较好!可满足测定要求"7c 3c 7!衍生化时间#萃取次数为弄清衍生过程水浴时间并使其衍生化彻底!固定其他条件#=@f 水浴!衍生剂用量为0H @M %?$!进行了0<’7@’7<’3@’3<’:@R L 1的反应时间的实验"结果表明!在0<R L 1后峰面积趋于稳定!说明已衍生化完全!因此把衍生化时间定在0<R L 1"萃取实验!先用7R S 二氯甲烷萃取0次!再用0R S 二氯甲烷萃取0次!可将萃取层萃取至无色!为萃取完全可再增加0次萃取"!c I !标准曲线及相关系数通过配制的甲醛标准溶液按实验步骤进行!在最佳实验条件下!做峰面积#E $与甲醛含量#F $的关系曲线!得到其线性方程为F G @H @@:3E H 07@348#1G @7;;;:$"!c %!精密度按照实验方法精密度实验采用3个浓度的标准溶液<’0@’7@$M %R S !每个浓度测定=次!计算其精密度!得到不同浓度甲醛溶液相对标准偏差!结果见表0!分别为7H <=d ’3H =0d 和0H 8@d !都小于:H @d "表#!精密度实验#4j =$X N A S E 0!>‘F E U L R E 1K J O P F U E Y L J L O 1A T !9?)#4j =$编号%Z R A E U 浓度#$M %R S $)O 1Y E 1K U N K L O 1#$M %R S $测定峰面积#["Z h’$"U E N ##["Z h’$平均值#["Z h’$"I E 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!结论利用水蒸汽蒸馏法分离出甲醛后"通过柱前衍生2高效液相色谱法测定水产品中甲醛含量"具有很好的线性关系"重复性好"专一性强"是水产品包括鲜活水产品&水发水产品&干制水产品中甲醛痕量&灵敏&准确的分析方法#参!考!文!献王移兰c 7@@@c 甲醛对人体健康的危害c 职业卫生":@!:0李文明c 7@@@c 30<种水发食品中甲醛定性监测结果分析c 河南预防医学杂志"00$<%!78=胡文兰c 7@@7c 乙酰丙酮法测定水发产品中的甲醛c 浙江预防医学"0:$<%!8@周光宇"胡敏予"黄忆明c 7@@3c 乙酰丙酮法检测米粉中甲醛含量的应用及分析c 实用预防医学"0@$7%!7<=!7<4黄雪娟"张大年c 7@@@c 用高效液相色谱测定雨水中的甲醛c 环境化学"0;$=%!<==!<40隋雪燕"李雪梅"张宗雁"宋!元"陈!磊"张宏志c 7@@7c 纺织品中游离甲醛的气相色谱分析c 分析化学"3@$00%!0333!033="1Q U N _E J "+c +c 0;8:c ,E K E Y K L O 1O P K U N Y E J O P P O U R N S Q E C T Q E L 1F Z U E N L U A T M N J Y C U O R N K O M U N F C T N 1Q C E S L Z R L O 1L B N K L O 1Q E K E Y K L O 1c *c )C U O R N K O M U ’Y L c 77$00%!<@=!<@8&O S Q "Xc W c "W Z L Y E "/c &c *U c "?O Q Q E U "/c "c "N 1Q,L M E 1L J "&c "c 0;;4c ,E K E U R L 1N K L O 1O P E ‘K E 1K O P P O U R N S Q E C T Q E 2L 1Q Z Y E Q Y U O J J S L 1a L 1M L 1C N U Q M E S N K L 1Y N F J Z S E J A T 1E N U 2L 1P U N U E Q J F E Y K U O F C O K O R E K U Tc 9C N U Rc /E J c 0:$8%!0@:=!0@<@#A E 1">c W c 0;;<c ,E K 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实验八食品中总抗坏血酸的测定(2,4-二硝基苯肼比色法)
实验八食品中总抗坏血酸的测定（2，4-二硝基苯肼比色法）Method for determination of ascorbic acid in foods（by colorimetry with 2,4-dinitrophenylhydrazine）(一)目的掌握2，4-二硝基苯肼比色法测定食品中总抗坏血酸含量。
(二)原理总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸，样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，再与2，4-二硝基苯肼作用生成红色脎，根据脎在硫酸溶液中的含量与总抗坏血酸含量成正比，进行比色定量。
(三)仪器与试剂1.仪器和设备1.1 恒温箱(37±0.5)℃。
1.2 可见—紫外分光光度计1.3 捣碎机2.试剂本实验用水均为蒸馏水。
试剂纯度均为分析纯。
2.1 4.5 mol／L硫酸谨慎地加250mL硫酸(相对密度 1.84)于700 mL水中，冷却后用水稀释至1000 mL。
2.2 85％硫酸谨慎地加900 mL硫酸(相对密度 1.84)于100 mL水中。
2.3 2％2，4—二硝基苯肼溶液溶解2g 2，4—二硝基苯肼于100 mL 4.5 mol／L 硫酸内，过滤。
不用时存于冰箱内，每次用前必须过滤。
2.4 2％草酸溶液溶解20g草酸(H2C2O4)于700 mL水中，稀释至1000mL。
2.5 1％草酸溶液稀释500mL 2％草酸溶液到1000mL。
2.6 1％硫脲溶液溶解5g硫脲于500 mL 1％草酸溶液中。
2.7 2%硫脲溶液溶解10g硫脲于500mL 1％皋酸溶液中。
2.8 l mol／L盐酸取100mL盐酸，加入水中，并稀释至1200 mL。
2.9 抗坏血酸标准溶液溶解100mg纯抗坏血酸于100 mL l％草酸中，配成每毫升相当于l mg抗坏血酸。
2.10 活性炭将100g活性炭加到750mL l mol／L盐酸中，回流1—2h，过滤，用水洗数次，至滤液中无铁离子(Fe3+)为止，然后置于110℃烘箱中烘干。
二硝基苯肼衍生-高效液相色谱法测定水产品中甲醛含量的研究
醛 ） ５ｍｌ 塞 比色管 中 ， 蒸 馏 水 至 １０ｍｌ 于 具 加 ． 。经 衍 生化 处 理 后取 ２ １ 样 。根据 保 留时 间定 性 （． ｎ ０ 进 ５ １ｍｉ 为 目的峰 ）峰 面 积定 量 ， 个浓 度 重复 做 两次 ， 平均 值 ， ， 每 取 以峰 面积 与 甲醛 浓度 ， 制 标准 曲线 。取样 品处理 液 绘 ２ ｌ Ｏ 注入 ＨＰ Ｃ测 得积 分 面积 后 从 标准 曲线 查 出相 应 的浓 度 ， Ｌ 计算 甲醛 含量 。
ｃａｉｙ，ａ ｄ ｇ ｏ ｅ ｅｉｉｎ ｉｌ ｔ ｎ ｏ ｄ ｒ ｐ ｔｔ ．Ｔｈ ｓｍｅ ｈ ｄ ｉ ｖ ｉ ｂ ｅ ｔ ｅｅ ｍｉ ｅｔ ｅ ｆ ｒ ｌ ｅ ｙ ｅ ｉ ｑ ａ ｉ ｏ ｉ ｔ ｏ ｓａ ａｌ ｌ ｏ ｄ ｔ ｒ ｎ ｈ ｏ ｍａｄ ｈ ｄ ｎ ａ ｕ ｔｃ ａ
甲醛又称蚁醛 ， 具有 强烈 刺激性 气味 。对人 的神 经系统 、 、 脏均 可产 生损 害， 至致 癌 （ 移兰 肺 肝 甚 王
２０） ０ ０ 。因此 ， 国家早 已明令 禁 止在 食 品 中添 加 甲醛 。为 了加 强对 水 发水 产 品 的质 量 监 管 ， 切 需 要 建 立 甲醛 迫 的检 测方 法 。文 献报 道 的 甲醛 测 定 方 法 ， 乙 酰 丙 酮 比色 法 （ ｌ ｔ １ １９ ； 文 兰 ２０ ； 光 宇 等 如 Ｇｏｄｅ ａ ． ９７ 胡 ０２周
１ ２ 仪 器和 试 剂 ．
１ ２ １ 仪 器 ． ．
高效 液相 色 谱 （ １０ ） 紫 外 检测 器 （ ＨＰ １０ 带 ＤＡＤ）色 谱 柱 ： ｐｒｉＯＤＳＣ ４６ ５ ｌ ５ ３； 具 塞 ； Ｈｙ ｅｓ ｌ — ． ×２ ０ｉｍ， １ ５ｍｌ ｌ ３ ． 比色管 ； 温 水 浴 锅 ； 涡 混 合 器 ； 恒 旋 高速 离 心机 ； 蒸 汽 蒸 馏 装 置 包 括 １０ ０ｍｌ 底 烧 瓶 ，５ 圆底 烧 瓶 ， 水 ０ 圆 ２ ０ｍｌ ＫＤ 型 调温 电热 套 ；０ 容 量 瓶 ；０ｍｌ 氏 比色 管等 。 Ｍ ２ ０ｍｌ １ 纳
鉴别醛酮的5种方法
鉴别醛酮的5种方法醛酮是一类常见的有机化合物，其分子内含有醛基和酮基。
为了鉴别和确认醛酮化合物，在化学实验室中，可以采用多种方法进行测试。
下面将介绍五种常见的鉴别醛酮的方法。
1. 用2,4-二硝基苯肼（古登试剂）进行巴豆酮试验这种试剂可以检测醛酮的存在。
当巴豆酮与2,4-二硝基苯肼反应时，会形成红色或橙色的沉淀物。
这种反应只对醛酮具有选择性，因此可以用于鉴别醛酮化合物。
2. 进行加碱试剂测试对于醛酮化合物，当其与加碱试剂反应时，酮基会被氧化，生成酸根离子和酮醇。
这个反应产生的羧酸盐离子可以通过酸碱指示剂的颜色变化来检测。
醛基不参与这个反应，所以可以通过观察是否有颜色变化来判断化合物中是否存在醛酮。
3. 使用费林试剂进行羧肟试验费林试剂可以与醛酮中的酮基反应，生成羧肟化合物。
这种反应会导致溶液颜色的变化，由无色变为紫色或蓝色，可以用肉眼或分光光度计进行检测。
通过观察颜色变化，可以判断化合物中是否存在醛酮。
4. 应用苯肼试剂进行醛试验苯肼试剂可以与醛反应生成沉淀，从而鉴别醛酮化合物。
生成的沉淀物具有特定的颜色，可以通过观察溶液的颜色变化来判断化合物中是否存在醛酮。
5. 利用唐斯试剂进行酮试验唐斯试剂是用于鉴别醛酮化合物的一种常见试剂。
它可以与酮基反应，生成醇类产物。
这个反应产生的醇类具有特定的气味，可以通过嗅觉来判断化合物中是否存在醛酮。
综上所述，以上五种方法都是常用的鉴别醛酮的方法。
化学实验室中可以根据需要和实验条件选择适当的方法来进行鉴别。
在实际操作时，需要注意反应条件和试剂的选择，以确保获得准确可靠的结果。
这些方法为醛酮的鉴别分析提供了有效的指导，也为进一步的化学研究和工业应用提供了重要的基础。
有机化学实验十二-醛和酮的鉴定
实验十二醛和酮的鉴定一．实验目的：1.通过实验进一步加深对醛、酮的化学性质的认识;2.通过醛、酮的特征反应，掌握鉴别醛、酮的化学方法;二．实验重点和难点：1.醛、酮的化学性质的认识;2.鉴别醛、酮的化学方法;实验类型：基础性实验学时：4学时三．实验装置和药品：主要实验仪器: 试管滴管酒精灯试管夹烧杯锥形瓶布氏漏斗抽滤瓶pH试纸水浴装置主要化学试剂: 2,4—二硝基苯肼试剂乙醛水溶液丙酮苯乙酮稀硫酸浓硫酸95%乙醇5%硝酸银浓氨水甲醛苯甲醛铬酸试剂NaHSO3溶液10%氢氧化钠溶液碘—碘化钾溶液正丁醛Schiff试剂托伦试剂费林试剂（I 和II）淀粉溶液脱脂棉浓H2SO3四．实验原理：（1）醛和酮都含有羰基,可与苯肼、2,4—二硝基苯肼、亚硫酸氢钠、羟胺、氨基脲等羰基试剂发生亲核加成反应。
所得产物经适当处理可得到原来的醛酮，这些反应可用来分离提纯和鉴别醛，酮。
醛和酮在酸性条件下能与2，4—二硝基苯肼作用，生成黄色、橙色和橙红色的2，4—二硝基苯腙沉2，4—二硝基苯腙是有固定熔点的结晶，易从溶液中析出，即可作为检验醛，酮的定性试验，又可作为制备醛，酮衍生物的一种方法。
（2）鉴于醛比酮易被氧化的性质，选用适当的氧化试剂可以区别，区别醛，酮的一种灵敏的试剂是Tollens试剂，它是银氨络离子的碱性水溶液，反应时醛被氧化成酸，银离子被还原成银附着在试管壁上，故Tollens试验又称银镜反应。
RCHO+2Ag(NH3)2+OH- ——→2Ag↓+RCO2NH4+ H2O + 3NH3铬酸试验也可用来区别醛，酮，由于铬酸在室温下很容易将醛氧化为相应的羧酸，溶液由橘黄色变成绿色，酮在类似条件下不发生反应。
3RCHO+H2Cr2O7+3H2SO4——→3RCO2H+Cr2(SO4)3+4H2O橘黄绿色由于伯醇和仲醇也咳被铬酸氧化，因此铬酸试验不是鉴别醛的特征反应，只有通过用2，4-二硝基苯肼鉴别出羧基后，才能用此法进一步区别醛和酮。
二硝基苯肼法测定柑橘和苹果中维生素C的含量
2，4-二硝基苯肼法测定柑橘和苹果中维生素C的含量摘要：利用2，4-二硝基苯肼法测定苹果和柑橘中维生素C含量，在待测样品中加草酸处理过滤后于490nm处作紫外分光光度测定。
结果得出了柑橘和苹果种维生素C 的含量。
表明了结果的可靠性。
关键词：2，4-二硝基苯肼；柑橘；苹果；维生素CAbstrat:Use 2, 4-2 determination of nitrobenzene hydrazine in apples and oranges in vitamin C content, for the samples 490nm after adding oxalic acid treatment filter where ultraviolet spectrophotometric. The results concluded that citrus and apple kind of vitamin C content .Theresults showed the reliability.Key words:2, 4-2 nitrobenzene hydrazine; Citrus;Apple ; Vitamin C引言维生素C又称为抗坏血酸，是所有抗坏血生物活性的化合物的统称。
它在人体内不能直接合成，必须依靠膳食供给[1]500。
维生素C不仅具有广泛的生理功能，能防止坏血病，关键肿，促进外伤愈合，使机体增强抵抗能力[2]489。
而且在食品工业上常用作抗氧化剂，酸味剂及强化剂[3]673-676。
因此，测量食品中维生素C的含量以评价食品品质及食品加工过程中维生素C的变化情况具有重要的意义。
抗坏血酸在机体同具有广泛的生理功能，已知体内许多重要物质的代谢反应都需要抗坏血酸的参与。
它是脯氨酸羟基化酶的辅酶，故有增进胶原蛋白合成的作用。
机体中许多含疏基的酶，需要依赖于作为还原剂的抗坏血酸的保护，使酶分子的疏基处于还原状态，从而维持其催化活性。
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二硝基苯肼试验
一概述
尿二硝基苯肼（dinitro-phenylhydrazine）试验是检测尿中苯丙酮酸的化学呈色法，用于可疑的较大婴儿和儿童的苯丙酮尿症筛查。
苯丙酮尿症（phenylketonurics，PKU）是一种常见的氨基酸代谢病，是由于苯丙氨酸代谢途径中的酶缺陷，使得苯丙氨酸不能转变成为酪氨酸，导致苯丙氨酸及其酮酸蓄积并从尿中大量排出。
临床主要表现为智能低下，惊厥发作和色素减少。
由于其血液中苯丙氨酸浓度上升是在哺乳后才出现，故出生时无临床表现。
如果对新生儿未作苯丙酮尿症筛查，随着喂食时间延长，血中苯丙氨酸及其代谢产物逐渐升高，临床症状才渐渐表现出来，在PKU的典型症状出现后，临床诊断并不困难，但已失去最好的治疗时机，故强调症状前诊断，即新生儿期的早期诊断。
新生儿筛查用Guthrie细菌生长抑制试验。
年纪大些的非新生儿用尿三氯化铁试验和尿二硝基苯肼试验。
二临床意义
代谢性疾病的诊断指标尿二硝基苯肼试验通常与尿三氯化铁试验共同用于可疑的较大儿童的初筛，但特异性较差，并有假阴性的可能。
尿中含有苯丙酮酸时，尿液呈黄色荧光反应。
需注意的是使用这种检查方法在枫糖尿症等代谢性疾病也呈阳性反应，且因血清苯丙氨酸浓度低于900mol/L，尿
中可无苯丙酮酸排泄，故新生儿期患者尿三氯化铁及试纸试验可呈阴性。
疑为苯丙酮尿症患者时，必须作血清苯丙氨酸及酪氨酸测定确诊。
三正常值参考范围
正常为阴性（-），阳性（+）有诊断价值。