实验总维生素C的测定—二硝基苯肼比色法
食品研究实验报告范文
一、实验名称食品中维生素C的测定二、实验目的1. 掌握食品中维生素C的测定方法；2. 了解维生素C在食品中的分布情况；3. 提高实验操作技能，培养严谨的科学态度。
三、实验原理维生素C（抗坏血酸）是一种水溶性维生素，具有抗氧化、促进生长发育、增强免疫力等作用。
食品中维生素C的含量是评价食品营养价值的重要指标之一。
本实验采用2,4-二硝基苯肼比色法测定食品中维生素C的含量。
四、实验材料1. 样品：苹果、橙子、西红柿等；2. 试剂：2,4-二硝基苯肼、硫酸铁铵、硫酸、无水乙醇、氢氧化钠等；3. 仪器：紫外可见分光光度计、电子天平、移液管、容量瓶、试管等。
五、实验方法1. 样品处理将苹果、橙子、西红柿等样品洗净，去皮去核，切成小块，称取适量（约0.5g）放入研钵中，加入少量无水乙醇，研磨成匀浆。
2. 标准曲线绘制准确移取一定量的维生素C标准溶液，分别加入2,4-二硝基苯肼溶液和硫酸铁铵溶液，混匀，室温下放置15分钟。
以无水乙醇为空白，在540nm波长下测定吸光度。
以维生素C浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 样品测定将处理好的样品匀浆转移至容量瓶中，加入一定量的硫酸，混匀，室温下放置30分钟。
然后按照标准曲线绘制步骤进行测定。
4. 计算结果根据样品测定所得吸光度，从标准曲线上查得维生素C的浓度，计算样品中维生素C的含量。
六、实验结果与分析1. 标准曲线以维生素C浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得到线性方程为：A = 0.063C + 0.0063，相关系数R² = 0.9987。
2. 样品测定结果苹果中维生素C含量为25.2mg/100g，橙子中维生素C含量为53.1mg/100g，西红柿中维生素C含量为30.8mg/100g。
3. 分析与讨论本实验结果表明，苹果、橙子、西红柿等食品中均含有丰富的维生素C。
其中，橙子的维生素C含量最高，其次是西红柿，苹果的维生素C含量最低。
食品中维生素C的测定-实验讲义
食品中维生素C的测定背景：食物中的总抗坏血酸（维生素C）包括还原型和脱氢型（氧化型）两种形式。
食物陈旧、储存时间长久或经过烹调处理后，大部分维生素C被氧化成脱氢型。
后者仍有82%左右的维生素C活性，因此此类食物经常测定其总维生素C 含量。
测定时首先将还原型脱氢氧化为氧化型。
2,4-二硝基苯肼法原理：将样品的还原型抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸，然后与2,4-二硝基苯肼作用，生成红色的脎。
脎的量与总抗坏血酸含量成正比，将红色脎溶于硫酸后进行比色，由标准曲线计算样品中总维生素C含量。
实验仪器及试剂：仪器：匀浆机、恒温水浴箱、721型分光光度计、容量瓶、刻度吸管、三角烧瓶试剂：4.5 mol/L硫酸、2% 2,4-二硝基苯肼、85%硫酸、2%草酸、1%草酸、10%硫脲、活性炭、维生素C储备液、维生素C标准液操作步骤：1.样品提取：匀浆取样50 g，剪碎置均浆机中，按1:1（w/v）加入2%草酸，制成匀浆，取匀浆10 g加1%草酸稀释后倒入100 ml容量瓶中，并以1%草酸定容至刻度，过滤。
2.氧化：取上述滤液25 ml置100 ml三角烧瓶中，加活性炭0.5 g，振摇1 min；过滤，即氧化液。
取氧化液10 ml置三角烧瓶中，加入1%草酸10 ml。
3.脎的形成：取试管3支，按下表操作，A为空白管，B和C为样品管。
管号 A B C样品氧化液（ml） 2.0 2.0 2.010%硫脲（滴） 1 1 12,4-二硝基苯肼（ml）0 0.5 0.537°C恒温水浴箱中保温2.5小时，取出置室温下2,4-二硝基苯肼（ml）0.5 0 04.脎的溶解：各管置冰浴中，缓慢加入85%硫酸2.5 ml，边加边振摇。
取出试管，室温下放置30 min，于490 nm波长下比色，以A管为空白调零，测样品管的吸光度。
5.制作标准曲线：取维生素C标准液25 ml于三角烧瓶中，加活性炭0.5 g，振摇1 min；过滤，即氧化液。
ch04-6维生素的测定-VC的测定
荧光法
结果计算
cV 100 X F m 1000
式中 X-----试样中抗坏血酸及脱氢抗坏血酸总含量， mg/100g； c------由标准曲线查得或由回归方程算得试样溶 液浓度， μ g/mL m------试样的质量，g； V-------荧光反应所用试样体积，mL； F-------试样溶液的稀释倍数。
荧光法
仪器
荧光分光光度计或具有350nm及430nm 波长的荧光计；捣碎机。
试样的制备
称取100 g鲜样,加100mL偏磷酸-乙酸溶液， 倒入捣碎机内打成匀浆，先取少量样品加入1滴 百里酚蓝，若显红色(pH=1.2)，即用偏磷酸-冰醋 酸溶液定容至100 mL；若显黄色(pH=2.8)，即用 偏磷酸-冰醋酸-硫酸溶液定容至100 mL，定容后 过滤备用。
2,6-二氯靛酚滴定法
方法说明
① 所有试剂最好用重蒸馏水配制。在处理各种样品时，如遇有泡 沫产生，可加入数滴辛醇消除。 ② 样品采取后，应浸泡在已知量的2%草酸溶液中，以防止维生素 C氧化损失。测定时整个操作过程要迅速，防止抗坏血酸被氧化。 ③ 若测动物性样品，须用10%三氯乙酸代替2%草酸溶液提取。 ④ 若样品滤液颜色较深，影响滴定终点观察，可加入白陶土再过 滤。白陶土使用前应测定回收率。 ⑤ 若样品中含有Fe2+、Cu2+、Sn2+、亚硫酸盐、硫代硫酸盐等还原 性杂质时，会使结果偏高，使用醋酸可以避免这种情况的发生 ⑥测定样液时，需做空白对照，样液滴定体积扣除空白体积。滴 定时，可同时吸二个样品。一个滴定，另一个作为观察颜色变化 的参考；
VC测定方法综述
维生素C在体内能进行可逆氧化。维生素C 的氧化还原特性决定 了它是一种电子供体。维生素C的所有生理功能几乎都与还原作用 有关 1.作为酶的辅因子或辅底物参与多种重要的生物合成 包括胶原蛋白、肉碱、某些神经介质和肽激素的合成及酪氨酸代 谢等。 2.抗氧化作用 参与O2-· 、OCl3· 、OH·、NO· 、NO2· 等自由基的清除，保护DNA、 Pro和膜结构免受损伤 3.对Fe吸收、转运和储存、叶酸转变为四氢叶酸、胆固醇转变为胆 酸从而降低血胆固醇均有作用 4.其他 对其它维生素，包括B族维生素、维生素A、维生素E有节省作用， 还可抑制N-亚硝基化合物的合成而预防癌症。 维生素C能保持巯基酶的活性和谷胱甘肽的还原状态，起解毒作用 等。
食品中维生素c含量的测定ppt课件
3.主要仪器与药品试剂 试剂：活性炭 硫脲 2,4-二硝基苯肼 85%硫酸 橙汁 草酸 橘子 梨 仪器：恒温箱或恒温水浴锅 可见－紫外分光光度计 吸量管、容量瓶、比色管多支
4.操作步骤 ⑴样品中Vc的提取和处理 ①提取： • 干样：橘子（100g）+ 等量2%草酸，磨成匀 浆，用1%草酸定容至100mL容量瓶。过滤， 得提取液。 • 鲜样：橙汁 +用1%草酸定容至100mL容量 瓶。过滤，得提取液。取滤液10mL+1%草酸 10mL，得原液。 注意：不易过滤的样品，可离心沉淀后取上清 液再过滤。
5、计算：
①从标准曲线Leabharlann 出氧化稀释液的维生素C的浓度。 ρ ug/mL ②结果分析。
食品中维生素c 含量的测定
2，4二硝基苯肼比色法测定维生素C的含量 （GB/T5009.86-2003）
1.原理 先将样品中的还原型抗坏血酸用活性炭氧化为脱氢抗 坏血酸，加2，4－二硝基苯肼生成红色脎，根据脎在硫 酸溶液中的含量与总抗坏血酸含量成正比进行比色测定。 2.试剂 • 提取Vc用：20g/L草酸，10 g/L草酸 • 氧化处理用：活性炭（经HCl处理无铁离子） • 控制氧化用：20g/L硫脲、10g/L硫脲 • 显色用：20g/L 2，4－二硝基苯肼溶液，硫酸 • 1mg/mL抗坏血酸标准溶液
⑶制标准曲线 ①取50mL 1mg/mL抗坏血酸标准溶液,加2g 活性炭， 振摇1min,过滤。要弃去初滤液。取10mL滤液， 加5.0g硫脲，用10 g/L草酸稀释至500mL容量瓶 中，得20ug/mL的抗坏血酸使用液。 ②分别取5、10、20、25、40、50、60mL 20ug/mL的抗坏血酸使用液,分别放入7个容量瓶 中，用10 g/L硫脲稀释定容，得标准比色系列为： 1、2、4、5、8、10、12ug/mL. ③按⑵步骤呈色，并测定吸光度。 ④以吸光度为纵坐标，以抗坏血酸标准比色系列为 横坐标，绘标准曲线。
果蔬中vc含量的测定
果汁中Vc含量的测定引言：随着科学技术的开展，食品中维生素C的测定方法很多，如高效液相色谱法、荧光分光光度法、原子吸收光谱法、紫外分光光度法、滴定分析法、钼蓝比色法、碘量法等，其中高效液相色谱法、荧光分光光度法和原子吸收光谱法要求样品的纯度较高，还需要有昂贵的仪器；紫外分光光度法中2，4-二硝基苯肼比色法操作麻烦，耗时较长；2，6-二氯靛酚法操作简便且应用最普遍，但是药品价格昂贵，而且多数果汁样品溶液都有颜色，使滴定终点不易判定，使用脱色剂也很难脱色完全，且造成VC的损失。
相比之下，碘量法只需标定碘液，其后续操作方便简单，易操作，故本次试验采用碘量法测定果汁中维生素C的含量。
关键字：维生素C 碘量法碘溶液可溶性淀粉滴定一、实验局部(一)、实验原理维生素C属水溶性维生素，分子式C6H8O6。
分子中的烯二醇基具有复原性，能被I2定量地氧化成二酮基，因而可用I2标准溶液直接测定。
C6H8O6＋I2= C6H6O6＋2HI使用淀粉作为指示剂，用直接碘量法可测定药片、注射液、饮料、汁菜、水果中维生素C的含量。
由于Vc的复原性很强，较容易被溶液和空气中的氧氧化，在碱性介质中这种氧化作用更强，因此滴定宜在酸性介质中进展，以减少副反响的发生。
考虑到I -在强酸性中也易被氧化，故一般选在pH为3~4的弱酸性溶液中进展滴定。
(二)、实验仪器及药品材料：果汁。
仪器：烧杯多个、量筒、玻璃棒、滴管、容量瓶多个〔250mL〕、酸式滴定管、滤纸、锥形瓶等。
药品：0.02mol /L碘溶液、2% 可溶性淀粉溶液、2% HC l溶液。
(三)、试验步骤1、购置市场上现成的果汁；2、滴定果汁中vc的含量；〔1〕、移取50ml果汁注入250 ml锥形瓶中，三份，分别向三个锥形瓶中加人3m l淀粉溶液，再滴加10ml醋酸，将PH 值调至3左右；〔2〕、用0.02mol /L碘溶液滴定果汁，在滴定过程中，边滴边晃动锥形瓶，直到提取液呈现蓝色，且在30 秒内不褪色；〔3〕、重复滴定三次，记录每次滴定所用去的碘溶液量，并算出平均值。
抗坏血酸(维生素C)的测定方法
抗坏血酸(维生素 C )的测定方法(1)在测定维生素C 的国标方法中，荧光法为测定食物中维生素 C 含量的第一标准方法，2、4 —二硝基苯肼法作为第二法。
一、荧光法 1 •原理样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后， 与邻苯二胺(OPDA 反应生 成具有荧光的喹喔啉(quinoxaline ),其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正 比，以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。
脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与 OPDA 反应，以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰。
本方法的最小检出限为 0.022 g/ml 。
2. 适用范围 GB12392-90 本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定3•仪器3. 1 •实验室常用设备。
3. 2.荧光分光光度计或具有 350nm 及430nm 波长的荧光计。
3. 3.打碎机。
4. 试剂本实验用水均为蒸馏水，试剂不加说明均为分析纯试剂。
(1 )偏磷酸—乙酸液：称取 15g 偏磷酸，加入40ml 冰乙酸及250ml 水，搅拌，放置过夜使 之逐渐溶解，加水至 500ml 。
4C 冰箱可保存 7〜10天。
(2)0.15 mol/L 硫酸：取10ml 硫酸，小心加入水中，再加水稀释至 1200ml 。
(3)偏磷酸—乙酸—硫酸液：以 0.15mol/L 硫酸液为稀释液，其余同 4.1.配制。
(4) 50% 乙酸钠溶液：称取 500g 乙酸钠(CH3COONa3H2O ，加水至1000ml 。
(5) 硼酸-乙酸钠溶液：称取 3g 硼酸，溶于100ml 乙酸钠溶液(4.4 )中。
临用前配制。
(6)邻苯二胺溶液：称取 20mg 邻苯二胺，于临用前用水稀释至 100ml 。
(7)0.04%百里酚蓝指示剂溶液：称取 0.1g 百里酚蓝，加0.02mol/L 氢氧化钠溶液，在玻璃研钵中研磨至溶解，氢氧化钠的用量约为 10.75ml ，磨溶后用水稀释至 250ml 。
维生素C含量测定
维生素C含量测定1、2,6-二氯酚靛酚滴定法2、碘量法3、2,4-二硝基苯肼比色法碘量法VC在水果中主要以还原型存在(还有氧化型及少量结合态)，因此通常测定的是还原型VC J。
VC属于不稳定维生素，尤其是在液态时，易被热、碱、氧和光破坏，氧化型VC更不稳定，在测定中易受杂质的干扰。
采用二氯酶法测定VC极不稳定，易受到还原性杂质的干扰，所以测定VC的准确性很大程度上取决于分析技术。
选择合适的提取剂可以延长VC的稳定时间，提高VC的提取效率。
VC在酸性溶液中相对稳定，因此试验中采用2％的偏磷酸、2％草酸、10％三氯乙酸、2％草酸+10％盐酸溶液作为提取剂，分别对5种水果中的VC进行提取，并采用碘量法测定其含量。
1 试验原料与试剂1．1 原料草莓、鲜枣、香蕉、西瓜、桃：市售，长春本地产。
1．2 试剂1％淀粉指示剂，0．01 mol／L的碘溶液，2％偏磷酸，2％草酸，10％三氯乙酸，2％草酸+10％盐酸。
2 工作原理碘可将VC氧化，且2分子碘可氧化1分子VC，碘遇淀粉变蓝，C2H8O6+2I2!=C2H4O6+4HI。
在提取的水果样液中加人淀粉指示剂，用0.01mol／L碘标准溶液进行滴定。
当样液变蓝且保持15 S不褪色时，记录所用碘液的体积，计算得VC的含量【。
3 步骤与方法3．1 样品的制备取各水果样品400 g清洗、沥干，将每份样品平均分成4份，即每份100 g，用破碎机破碎。
在破碎的同时加人提取剂，以减少VC损失。
之后，用榨汁机榨汁，然后每份样品分别用2％偏磷酸、2％草酸、10％三氯乙酸和2％草酸+10％盐酸提取。
3．2 VC含量的测定在各份提取液中加人淀粉指示剂，用酸式滴定管装人碘标准溶液进行滴定，当溶液变蓝15 S不褪色时即为终点，记录碘液的体积.4 计算结果VC含量的计算公式为(176／2)×0．01×V ，将消耗I2标准溶液的体积代人上式，得VC含量。
5 结论2,4-二硝基苯肼比色法方法原理：维生素C总量包括还原型Vc、脱氢型Vc和二酮古乐糖酸，将样品中的还原型抗坏血酸氧化为脱氢抗坏血酸，进一步水解为二酮古乐糖酸。
维生素的测定2-5
6
• VE
具有抗氧化的功能，与机体的抗衰老有关。
人体所需大多来自谷类于植物油。 • VK 作用主要是促进肝脏生产凝血酶原，从而具
有促进凝血作用。绿叶蔬菜含量最为丰富，蛋黄、
大豆油和猪肝也是良好来源。
7
维生素的分析是一项比较复杂的工作。其样品分析
的一般程序是：①用酸、碱或酶分解样品，使其中
的维生素游离出来；②用溶剂进行提取；③分离干
无Fe2+，烘干。
38
(5) 2,4-二硝基苯肼和氧化型Vc藕联形成脎在脱水氧化环境 下才稳定。
(6)溶液中其他的酮和酮衍生物和2,4-二硝基苯肼也形成脎，
故须作空白试验（指没有Vc参与下形成脎的量）。
(7)硫脲可防止抗坏血酸继续氧化，同时促进脎的形成。最后
溶液中硫脲的浓度要一致，否则影响测定结果。
35
保温箱3小时→ 取出后样品管放入冰水中 → 样品空 白管取出后冷至室温 → 在样品空白管加入2，4-二
硝基苯肼 → 0.5ml → 样品管和空白管都于冰浴中
→ 滴加9︰1H2SO4 2ml于各管中 → 边滴边摇 → 防
止温度升高炭化后呈黑色 → 冰浴中取出 → 室温下
放臵30分钟后，在540nm测消光值，从标准曲线上查
13
2.6-二靛酚滴定法测定的是还原型抗坏血酸，该
法简便，也较灵敏，但特异性差，样品中的其他
还原性物质(如Fe2+、Sn2+、Cu2+等)会干扰测定，
使测定值偏高。对深色样液滴定终点不易辨别，
如山楂，树莓，草莓等 。
14
2,4-二硝基苯肼比色法和荧光法测得的是抗坏
血酸和脱氢抗坏血酸的总量，操作麻烦，耗时
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验：总维生素C 的测定—2，4-二硝基苯肼比色法
一、实验目的
1.了解天然维生素C 的结构功能以及天然存在形式。
2.掌握测定总维生素C 的原理与方法。
二、实验原理
总抗坏血酸包括还原型Vc 、脱氢型Vc 和二酮古龙糖酸。
样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，再与2，4 -二硝基苯肼作用生成红色脎。
脎在硫酸溶液中的含量与总抗坏血酸含量成正比，由此通过比色可对样品中总坏血酸进行定量。
三、仪器和试剂
仪器：恒温水浴锅（37±0.5℃）、紫外-可见分光光度计、组织捣碎机。
试剂：本实验用水均为蒸馏水，试剂纯度均为分析纯。
1、4.5mol/L 硫酸：小心将250mL 硫酸(比重1.84)加入到700mL 水中，冷却后用水稀释至1000mL 。
2、(9+1)硫酸：小心将900mL 硫酸(比重1.84)加入到100mL 水中，搅拌均匀。
3、2% 2，4-二硝基苯肼溶液(20g/L2，4 -二硝基苯肼溶液)：溶解2g 2，4 - 二硝基苯肼于100mL 4.5mol/L 硫酸内，过滤使用（不用时存于冰箱内，每次用前过滤）。
4、2%草酸溶液(20g/L 草酸溶液)：溶解20g 草酸(422O C H )于700mL 水中，再加水
稀释至1000mL。
5、1%草酸溶液(10g/L草酸溶液)：稀释500mL 2%草酸溶液到1000mL。
6、1%硫脲溶液(10g/L硫脲溶液)：溶解5g 硫脲于500mL 1%草酸溶液中。
7、2%硫脲溶液(20g/L硫脲溶液)：溶解10g 硫脲于500mL 1%草酸溶液中。
8、1mol/L 盐酸：取100mL 盐酸，加入水中，并稀释至1200mL。
9、抗坏血酸标准溶液(1mg/mL)：溶解100mg 纯抗坏血酸于100mL 1%草酸中。
10、活性炭：将100g 活性炭加到750mL 1mol/L 盐酸中，水浴回流1-2h，过滤，用水洗数次，至滤液中无铁离子（ 3e F）为止，然后置于110℃烘箱中烘干。
检验铁离子方法：利用普鲁士蓝反应。
将2%亚铁氰化钾（20g/L亚铁氰化钾）与1%盐酸等量混合，将上述洗出滤液滴入，如有铁离子则产生蓝色沉淀。
四、操作步骤
（全部实验过程应避光）
(一)样品的测定
1.浸提：
鲜样的制备：称100g 鲜样和100g 2%草酸溶液(20g/L草酸溶液)，倒入捣碎机中打成匀浆，取10-40g 匀浆(含1-2mg 抗坏血酸)倒入100mL 容量瓶中，用1%草酸溶液(10g/L草酸溶液)稀释至刻度，混匀。
将浸提液过滤，滤液备用。
不易过滤的样品可用离心机沉淀后，倾出上清液，过滤，备用。
干样制备：称1-4g 干样(含1-2mg 抗坏血酸)放入乳钵内，加入1%草酸溶液(10g/L 草酸溶液)磨成匀浆，倒入100mL容量瓶内，用1%草酸溶液(10g/L草酸溶液)稀释至刻度，混匀。
将浸提液过滤，滤液备用。
不易过滤的样品可用离心机沉淀后，倾出上清液，过滤，备用。
2.氧化处理：
取25mL 上述滤液，加入2g 活性炭，振摇1min，过滤，弃去最初数毫升滤液。
取10mL 此氧化提取液，加入10mL 2%硫脲溶液(20g/L硫脲溶液)，混匀（得到‘样品氧化液’）。
3.呈色反应：
4.比色
用1cm 比色杯，以空白液调零点，于500nm 波长测吸光值。
(二)标准曲线绘制
1、加2g 活性炭于50mL 标准溶液中，摇动1 min，过滤。
2、取10mL 滤液放入500mL 容量瓶中，加5.0g硫脲，用1%草酸溶液(10g/L草酸溶液)稀释至刻度（抗坏血酸浓度20μg/mL）。
3、取5，10，20，25，40，50，60稀释液，分别放入7个100mL 容量瓶中，用1%硫脲溶液(10g/L硫脲溶液)稀释至刻度，（最后稀释液中抗坏血酸的浓度分别为1，
2，4，5，8，10，12 μg/mL ）按样品测定步骤形成脎并比色。
4、以吸光值为纵坐标，以抗坏血酸浓度(μg/mL)为横坐标绘制标准曲线。
五、计算
式中：
X —样品中总抗坏血酸含量，mg/100g ；
c —由标准曲线查得或回归方程算得‘样品氧化液’中总抗坏血酸的浓度，μg/mL ； V —试样用1%草酸溶液(10g/L 草酸溶液)定容的体积，mL ；
F —样品氧化处理过程中的稀释倍数；
m —试样质量，g 。
（同一实验室平行或重复测定，相对偏差绝对值≤10%。
） )
1000100(⨯⨯=F m cV
X。