大蒜素对胃癌细胞株及裸鼠移植瘤的抑制作用

大蒜素对胃癌细胞株及裸鼠移植瘤的抑制作用王海燕,许才绂,王庆莉摘　要:目的　观察大蒜素对胃癌细胞株及移植瘤的作用,初步探讨抗癌机制。

方法　采用M T T 法观察不同质量浓度及作用不同时间大蒜素对胃癌SGC 27901及M GC 2803细胞的影响;流式细胞术分析100m g ・L -1大蒜素分别作用4h 和8h 后两种肿瘤细胞增殖周期的变化;荷胃癌SGC 27901裸鼠模型随机分成4组,每组4只,分别于荷瘤7d 和14d 用20g L 的大蒜素0.1mL 和PB S 0.1mL 对瘤体进行局部注射治疗,每隔2d 一次,共3次,观察瘤体增殖及裸鼠生存状况的变化。

结果　不同质量浓度梯度大蒜素对两种肿瘤细胞皆有一定的杀伤,大蒜素质量浓度为800m g ・L -1及1000m g ・L -1时,对SGC 27901细胞的抑制率分别为65.5%,68.6%(P <0.01,vs 52FU )。

大蒜素对M GC 2803细胞的抑制作用较明显,质量浓度为400m g ・L -1,800m g ・L -1及1000m g ・L -1时,抑制率分别为67.5%,75.3%和79.5%(P <0.01,vs 52FU )。

100m g ・L -1大蒜素连续作用3d ,对SGC 27901及M GC 2803的抑制率分别可达85.2%,96.7%(P <0.01,vs 52FU )。

大蒜素作用后SGC 27901及M GC 2803细胞S 期比例有增高趋势。

荷瘤7d 局部注射治疗组有3只裸鼠瘤体消失,余下1只瘤体组织切片可见大量淋巴细胞聚集,肿瘤血管较少。

荷瘤14d 局部注射治疗组4只荷瘤裸鼠的瘤体生长延缓,生存状态较好,瘤体组织切片中可见大片肿瘤组织坏死。

结论　大蒜素可能通过直接杀伤胃癌细胞,提高机体免疫等方面的综合作用抑制胃癌细胞生长。

关键词:大蒜;胃肿瘤中图分类号:R 735.2 文献标识码:A 文章编号:100028578(2001)022******* 收稿日期:2000202220;修回日期:2000203205作者单位:710038西安第四军医大学唐都医院消化科I nh ib itory Effect of Garl ic i n on Ga str ic Cancer Cellsand Nude M ice Tu m or Xenograf tW AN G H ai 2yan ,XU Cai 2fu ,W AN G Q ing 2liD ep a rt m en t of D ig estive D isease ,T ang d u H osp ita l ,X i ’an 710038,Ch inaAbstract :Objective To study the an ticarcinogen m echan is m of garlicin after ob servati on of the effect of garlicin on gastric cancer cells .M ethods Cu ltu ral cell lines of gastric cancer SGC 27901and M GC 2803w ere u sed as the target cells to ob serve the effect of garlicin of differen t concertriti on s w ith differen t cu ltu re ti m e on these cell lines by M T T assay .Tw o k inds of gastrical cancer cells w ith 10%bovine serumand 100m g ・L -1garlicin w ere cu ltu red ,and their changs of cell cycles after 4and 8hou rs w ere m easu red invitro .In vivo study ,garlicin w ere in jected locally in to the inp lan ted neop las m of B alb c nu nu m ice to ob serve the changs of the neop las m s and the living state after 7and 14days resp ectively w hen the nude m ice tum o r xenograft m odel w ere m ade .Results Garlicin had cyto tox ic effect on these tw o k inds ofgastrical cancer cells .W hen the m ass concen triti on s of garlicin w ere 800m g ・L -1and 1000m g ・L -1,the inh ib iting rates of on SGC 27901cells w ere 65.5%and 68.6%resp ectively (P <0.01,vs 52FU ).W hen the m ass concen triti on s of garlicin w ere 400m g ・L -1,800m g ・L -1and 1000m g ・L -1,the inh ib iting rates onM GC 2803cells w ere 67.5%,75.3%and 79.5resp ectively (P <0.01,vs 52FU ).Cu ltu ring tw o k inds of gastrical cancer cells w ith bovine serum and 100m g ・L -1garlicin fo r 3days ,the inh ib iting rates cou ld com eup to 85.2%and 96.7%resp ectively .Cu ltu ring tw o k inds of gastrical cancer cells w ith bovine serum and 100m g ・L -1garlicin fo r 4and 8hou rs ,the S p hase of the cell cycles ro se ,and that of the M GC 2803cells ro se m o re obvi ou sly .In jecting garlicin locally in to the neop las m s in the seven th day w hen the nude m icetuo r xenograft m odels w ere m ade ,the neop las msub sided in th ree nude m ice ,the neop las m of onelym p hocytes in the neop las m s,and the vasalium in neop las m w as scarce.Garlicin dep ressed the p rogress of the neop las m s w hen the nude m ice tum o r xenograft m odels w ere m ade by in jecting locally in the fou rteen th days,w ho se living state w ere better than that of con tro ls.T here w ere larges of areas of necro sis in the neop las m s.Conclusion Garlicin has dep ressive effecti on po ssib lely by k illing cancer cells directly and i m p roving the functi on of i m m un ity.Key words:Garlicin;Gastrical cancer 大蒜是一种常见的调味品,世界各地流行病学研究表明,喜吃大蒜的人群胃癌发病率比对照人群显著低下,大蒜的年摄入量与胃癌的发生率成负相关关系[1]。

大蒜的有效成分通过抑制硝酸盐还原菌的生长,减少亚硝胺的形成等环节防止胃癌的发生,大蒜提取液抑制和逆转甲基硝基亚硝基胍(M NN G)诱发的实验性胃癌及癌前病变,实验证明大蒜制剂可明显抑制苯丙芘、二甲基苯蒽、1.22二甲基阱等化学致癌剂诱发的皮肤癌、结肠癌的发生率[226]。

大蒜素是大蒜的一种有效成分,临床可用于霉菌感染的治疗。

我们通过体内外实验观察大蒜素对胃癌SGC27901及M GC2803细胞的作用,初步探讨其抑制胃癌细胞的作用机制。

1　材料和方法1.1　材料　大蒜素(每支10mL含大蒜素10g):西安医科大学药厂生产,用PB S稀释致使用质量浓度。

人胃癌细胞SGC27901及M GC2803:第四军医大学西京医院全军消化疾病研究所提供。

R PM I2 1640细胞培养液:美国G I BCO公司。

小牛血清:杭州四季青公司。

ED TA:Sigm a公司。

胰酶:Sigm a公司。

DM SO:Sigm a公司M T T试剂:美国Sigm a公司。

倒置显微镜:重庆光学仪器厂XSP-D型。

二氧化碳孵箱:美国SH EL2LAB1815TC。

酶联免疫仪:华东电子管TD G:3022型。

碘化丙啶:Sigm a公司。

流式细胞仪:美国Cou lter公司。

B alb c nu nu裸鼠,6～8周龄,体重18±2g,雄性,第四军医大学实验动物中心提供。

光学显微照相系统:O lym p u s op tical Co L td.Jap an.透射电子显微镜:JE M2 2000EX Jap an。

1.2　方法1.2.1　细胞培养及M T T实验　人胃癌SGC27901及M GC2803细胞用100mL L小牛血清的R PM I2 1640培养液在37℃,含50mL L CO2的孵箱内培养。

对数生长期的人胃癌细胞SGC27901及M GC2 803用ED TA2胰酶混合液消化,调整细胞密度至1×108 L,以100ΛL接种于96孔培养板,孵育12h 后按一定质量浓度梯度分别加入大蒜素、52FU,每一浓度重复3孔,每孔100ΛL,对照组加等量PB S,孵育48h,每孔加入20ΛL M T T(5g L),继续孵育4h,倾去所有上清,每孔加DM SO150ΛL,以酶联免疫仪测定各孔A490nm值(OD490nm)。