大豆蛋白的提取与含量测定
黄豆中蛋白质含量测定
黄豆中蛋白质含量测定——凯氏定氮法一、仪器和试剂主要仪器:定氮仪。
试剂（除注明外均为分析纯）：1. 浓硫酸。
2. 30%氢氧化钠溶液。
3. 2～4%硼酸溶液。
4. 0.1mol/L 盐酸溶液。
5. 催化剂：硫酸钾——硫酸铜的混合物（K 2SO 4:CuSO4·5H 2O=3.5g:0.1g ）。
二、操作步骤1. 消化准确称取粉碎均匀的黄豆粉0.5g 左右，小心移入干燥的消化瓶中（注意用称量纸将样品加入到消化管底部，勿粘附在瓶壁上），加入适量催化剂及10mL 浓硫酸，按要求安装好消化装置后,设置好消化程序,打开冷凝水, 开始消化程序。
(160℃, 40min; 250℃, 20min; 350℃, 60min; 420℃, 30min)消化程序结束后，消化至溶液透明呈蓝绿色，冷却至室温。
同时做空白对照。
2． 蒸馏、吸收及滴定按要求安装好UDK142蒸馏仪，并将蒸馏仪与自动电位滴定仪连接好。
将所需试剂装到相应的试剂瓶中。
设置好蒸馏程序及滴定程序后，将冷却好的消化管装到蒸馏仪上，打开冷凝水，然后开始程序。
三、结果计算X ——试样中蛋白质的含量，单位为克每百克（g/100g ）C —— HCl 标准溶液的浓度mol/LV 1 —— 滴定样品吸收液消耗的HCl 标准溶液的体积mLV 2 —— 滴定样品空白液消耗的HCl 标准溶液的体积mL0.0140——1.0mL 盐酸（C(HCl)＝1.000mol/L ）标准滴定溶液相当的氮的质量，单位为克（g ）m ——试样的质量或体积，单位为克或mL1000140.0)(21⨯⨯⨯⨯-=F mc V V XF ——氮换算为蛋白质的系数。
一般食物为6.25，乳制品为6.38，面粉为5.70，玉米、高粱为6.24，花生为5.46，米为5.95，大豆及其制品为5.71，肉与肉制品为6.25，大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83，芝麻、向日葵5.30。
计算结果保留三位有效数字。
大豆蛋白的功能性测定
大豆蛋白的功能性测定专业：生物工程班级：08一班学号：060508131 姓名：戴璐成绩：摘要：利用考马斯亮蓝G250测定样品中蛋白含量为百分之十左右远不及样品包装上所说的82%的含量；紫外分光光度计测定大豆蛋白紫外吸收特征，其紫外光谱显示含较多无法除尽的杂质，荧光光度计观察其荧光效应，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其相对分子质量关键词：大豆蛋白蛋白含量测定紫外吸收电泳功能性1.概述蛋白质是组成人体的重要物质。
是人体生命活动的物质基础，是食品的第一大营养素。
大豆是重要的粮油兼用作物，它富含蛋白质、脂肪，是一种营养平衡的食物。
其籽粒含蛋白质一般为40%左右，比一般谷物高2-4被，也比牛奶、鸡蛋和瘦猪肉的蛋白质含量高。
大豆是豆科植物中最有营养而又易于消化的食物，是蛋白质最丰富最廉价的来源。
另外，大豆蛋白不含淀粉，氨基酸也组成比较平衡。
所以，目前许多蛋白质营养品都是用的大豆蛋白。
2.材料与方法1.考马斯亮蓝G250测定蛋白含量【材料】标准蛋白液，样品蛋白，722型分光光度计【方法】1>.标准曲线的制作取7支干净试管，按表一进行编号并加入试管混匀，室温静置3分钟，以第1管委空白，于波长595nm处比色，读取吸光度，以吸光度为纵坐标，各标准浓度作为横坐标作图的标准曲线2>.样液的测定另一支干净试管，加入样液1.0ml及考马斯亮蓝染液4.0ml，混匀，室温静置3min，于波长595nm处比色，读取吸光度，由样液的吸光度查标准曲线即可求出蛋白含量2.大豆蛋白质的紫外吸收特征【材料】标准蛋白液，样品蛋白，UV-9100型紫外分光光度计【方法】将大豆蛋白溶于1mol/L PH值为8.0的Tris-HCl溶液中，配制成2.0mg/mL的蛋白质溶液，以对应的Tris-HCl作参比，做紫外-可见扫描，速度10nm/s，范围200-400nm 之间3.大豆蛋白质的疏水性及荧光光谱【材料】标准蛋白液，样品蛋白，日本岛津RF-5310PC型荧光光度计，离心机，100mL 烧杯2个，玻璃棒1个【方法】将大豆蛋白溶于1mol/L PH值为8.0的Tris-HCl溶液中，配制成0.5，1.0，2.0mg/mL的蛋白质溶液，3000r/min离心10min，以以相对应的Tris-HCl作参比，采用日本岛津RF-5310PC型荧光光度计进行荧光测定，激发波长280nm,发射波长300-800nm之间4.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳【材料】直流稳压电泳仪，垂直平板电泳槽⑴分离胶缓冲液 1.5mol/L Tris-HCl (pH8.8)取18.15g Tris, 加80ml重蒸水，用1mol/L的HCL调pH至8.8，用重蒸水稀释至最终体积为100ml，4℃冰箱保存。
植物蛋白质的提取和含量测定
五、实验步骤
（二）蛋白含量测定
1. 制作标准曲线 按照下表操作，以A500nm为纵坐标，以蛋白含量为横坐标建立标曲。 2. 测定提取第2步稀释后样品的蛋白浓度 按上表中样品列操作，根据A500nm查找含量，并计算原始浓度。
试管 试剂 ml 标准 BSA 蒸馏水 Folin—酚试剂甲 Folin—酚试剂乙 A500nm 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0.0 各 4ml 混匀后静置 10min 各 0.5ml 混匀后静置 30min 0.000 0.5ml 0.1(稀释 50 倍后) 0.4 4ml 1 2 3 4 5 6 样 品
五、实验步骤
（一）蛋白提取
1.称取3克大豆干粉，加入0.2%NaOH 30毫升。（先加入调成糊状，再用 少量多次地慢慢地加入（边加边搅拌），室温下搅拌抽提10min，于 4000r/min离心7min ,小心留取上清液，弃脂层和沉淀，如上清液有漂浮物， 再经过滤； 2. 留出上清液2毫升稀释50倍做含量测定（第二步） 3.制干粉：
每次使用前，将50ml（1）olin—酚试剂乙 （用前稀释一倍）
在2升磨口回流瓶中，加入100克钨酸钠（Na2WO4•2H2O）,25克钼 酸钠（Na2MoO4•2H2O）及700毫升蒸馏水，再加50毫升85%磷酸， 100毫升浓盐酸，充分混合，接上回流管，以小火回流10小时，回流结
植物蛋白质的提取和含量测定
一、实验目的
掌握大豆蛋白的提取及制备大豆蛋白
丙酮干粉的方法。
二、实验原理
1. 大豆蛋白主要是酸性蛋白，pI 4.5-5.0，能溶于碱溶液
本实验先利用稀碱提取大豆蛋白，再利用丙酮结合等电点溶解度最低 原理沉淀蛋白。 2. Folin-酚法测定蛋白质含量 酚试剂由两部分组成，试剂A为双缩脲试剂，可与肽链发生显色反应， 试剂B中的磷钼酸和磷钨酸在OH-条件下不稳定，易被酚类化合物还 原显蓝色，因蛋白质中含Tyr被还原成蓝色，颜色深浅与浓度成正比，
大豆蛋白的提取与含量测定
法和Folin酚法是一般实验室中常用的方法，它们操作简便
，迅速，不需要复杂而昂贵的仪器。Folin酚法灵敏度高，
比双缩脲法灵敏100倍。
5.
Folin酚法所用试剂是由两部分组成，试剂甲相当于双
缩脲试剂，可与蛋白质中的肽链起显色反应。试剂乙中的
磷钼酸和磷钨酸在碱性条件下不稳定，易被酚类还原而呈
兰色（钼兰和钨兰混合物）。
3、器材：
1. 试管10支 2. 试管架一个 3. 移液管：（5ml、1ml） 4. 移液管架 5. 洗瓶 6. 恒温水浴 7. 723型分光光度计
Folin-酚法测定蛋白质含量工作曲线的制作：
取6支试管（干燥的）按下表顺序分别加入各种试剂并进行反应和测定 K=0.308 B=--0.009 R*R=0.9909
试管号 0 1 2 3 4 5 S
蛋白质标准液（ml） 0 （mg) 0
提取的样品液（ml）
0.2 0.04
0.4 0.08
0.6 0.12
0.8
1.0
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
0.16 0.2
0.8
PH7.8的buffer（ml）
1 0.8 0.6 0.4 0.2
0
0.2
） Folin-甲试剂 （ml
1
1
1
1
1
1
1
于室温下不停地振荡10min
实验原理
大豆中含有丰富的蛋白质、根据提取方法及其其性质的不
同，可以分为水溶蛋白、盐溶蛋白、醇溶蛋白、碱溶蛋白。 将豆粉依次用上述溶剂提取，并用有机溶剂沉淀，可制得各 部分蛋白质的干粉。本实验主要是水溶提取大豆蛋白。
•
称出提出蛋白质的重量，已知原料重量，可以求出蛋白质
大豆蛋白的提取、干燥、性质测定实验
大豆蛋白的提取、干燥、性质测定实验摘要：以大豆为原料，采用碱提酸沉法提取大豆蛋白，以蛋白质提取率为指标，通过查阅文献确定了提取大豆蛋白的最佳工艺：35摄氏度下，pH 10 ，浸提时间40 min, 液料比20：1( mL/g）。
将提取出来的大豆蛋白用真空冷冻干燥装置进行干燥，通过前后称重，计算大豆蛋白的提取率。
利用提取出来的大豆分离蛋白进行大豆蛋白的性质测定实验。
食品体系中的大豆蛋白所具有的功能性如下：功能性质作用方式食品体系溶解度蛋白质溶解性能，与pH等相关饮料类乳化性脂肪乳状液的形成以及稳定肉类、酱类、汤类持水性游离脂肪的吸附肉类、酱类起泡性形成稳定膜、固定气体搅打奶油、甜食粘度增稠作用汤类、肉汁凝胶蛋白质基质的形成凝乳、乳酪凝聚-粘附性蛋白质作为粘附剂香肠、焙烤制品粘弹性面筋中的疏水键，凝胶中的二硫键肉类、焙烤本组决定利用提取的大豆分离蛋白测定大豆蛋白的持水性。
关键词：大豆蛋白、碱提酸沉、真空冷冻干燥、持水性正文：实验材料仪器：天平、烧杯、量筒、玻璃棒、pH试纸、Sigma离心机、4℃冰箱、1号离心管、20ml离心管、50ml离心管、真空冷冻干燥箱材料：大豆粉、蒸馏水、氢氧化钠溶液、盐酸溶液实验步骤一、大豆蛋白的提取原理：大豆分离蛋白的生产方法常见的有: 超滤膜法、离子交换法、碱溶酸沉法, 其中碱溶酸沉法是我国普遍采用的生产工艺。
此法能够有效地提高产品得率,能充分利用蛋白资源。
生产的分离蛋白不仅除去了可溶性糖类, 还除去了不溶性聚糖, 因而蛋白质含量高。
该种工艺主要是基于调解溶液的p H 值, 从而调解蛋白质的溶解度, 在pH 值调至4. 5 左右时, 由于蛋白质处于等电点状态而凝集沉淀下来, 经分离后得到蛋白沉淀物, 再经洗涤、中和、灭菌、干燥即得分离蛋白产品。
1、用电子天平称取大豆粉末10.01g，加入200ml蒸馏水，即液料比为20:1，搅匀.2、取40％的氢氧化钠10ml，加入100ml蒸馏水进行稀释，配制成稀碱溶液待用。
大豆中蛋白质含量的测定实验报告
大豆中蛋白质含量的测定实验报告大豆是一种富含蛋白质的植物，因此对大豆中蛋白质含量的测定非常重要。
本实验旨在通过化学方法测定大豆中蛋白质的含量，并对结果进行分析和讨论。
实验材料和仪器：1. 大豆样品2. 硫酸钠溶液3. 氢氧化钠溶液4. 酸性消化液5. NaOH溶液6. 氮气吹扫装置7. 精密天平8. 恒温水浴9. 离心机10. 紫外分光光度计实验步骤：1. 准备大豆样品：将大豆磨成粉末，并将其过筛以获得均匀的颗粒大小。
2. 水解反应：取一定量的大豆样品加入酸性消化液中，放入恒温水浴中进行水解反应，使蛋白质完全水解为氨基酸。
3. 碱解反应：将水解后的溶液中加入适量的NaOH溶液，使溶液呈碱性，以便将其他干扰物质转化为不溶性沉淀。
4. 沉淀处理：将碱解后的溶液进行离心处理，将沉淀分离出来。
5. 沉淀洗涤：用硫酸钠溶液对沉淀进行洗涤，去除杂质。
6. 干燥：将洗涤后的沉淀放入烘箱中干燥，直至恒定质量。
7. 称重：使用精密天平称取干燥后的沉淀质量。
8. 光度计测定：将一定量的沉淀溶解于适量的NaOH溶液中，使用紫外分光光度计测定溶液的吸光度。
9. 蛋白质含量计算：根据标准曲线，计算出大豆中蛋白质的含量。
实验结果与分析：根据实验测定，我们得到了大豆样品中蛋白质的含量。
通过对标准曲线的分析，我们可以得知大豆样品中蛋白质的浓度。
从实验结果中可以看出，大豆中蛋白质的含量较高，这也符合我们对大豆富含蛋白质的认识。
在实验中，我们采用了水解和碱解的方法，这是常用的蛋白质测定方法之一。
水解反应将蛋白质水解为氨基酸，使其更容易测定；碱解反应则将其他干扰物质转化为不溶性沉淀，方便后续步骤的进行。
为了准确测定大豆中蛋白质的含量，我们进行了沉淀处理和洗涤步骤，以去除杂质。
这些步骤的目的是提高测定的准确性和精确度。
同时，干燥步骤的进行可以保证质量的恒定，进一步提高测定结果的可靠性。
通过紫外分光光度计的测定，我们可以得到溶液的吸光度，进而计算出蛋白质的浓度。
凯氏定氮法大豆实验报告
一、实验目的1. 掌握凯氏定氮法的原理和操作步骤。
2. 学会使用凯氏定氮仪进行蛋白质含量的测定。
3. 了解大豆蛋白质含量的测定方法及其在食品分析中的应用。
二、实验原理凯氏定氮法是一种经典的蛋白质含量测定方法，其原理是将样品中的蛋白质与浓硫酸共热，使蛋白质中的氮元素转化为无机氮，即硫酸铵。
通过测定硫酸铵中的氮含量，即可计算出样品中蛋白质的含量。
实验过程中，样品的消化、蒸馏、吸收和滴定是关键步骤。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：大豆样品、浓硫酸、30%氢氧化钠溶液、克氏催化剂、2%硼酸、指示剂、0.1M HCl、蒸馏水等。
2. 实验仪器：凯氏定氮仪、凯氏烧瓶、电炉、锥形瓶、100mL容量瓶、酸式滴定管、电子天平、移液管等。
四、实验步骤1. 样品消化：准确称取0.5g大豆样品（精确至0.0001g），置于凯氏烧瓶中，加入5mL浓硫酸，再加入2g硫酸钾、0.1g硫酸铜和0.5mL过氧化氢，充分混合后，置于电炉上加热消化，直至样品完全消化。
2. 蒸馏：将消化后的溶液转入凯氏定氮仪反应室，加入过量的浓氢氧化钠，加热蒸馏，使氨气释放。
3. 吸收与滴定：将蒸馏出的氨气导入装有2%硼酸溶液的锥形瓶中，待吸收完全后，用0.1M HCl标准溶液滴定，直至溶液由蓝紫色变为红紫色为止。
4. 计算蛋白质含量：根据滴定消耗的HCl标准溶液的体积，计算出样品中氮含量，再根据氮含量计算出蛋白质含量。
五、实验结果与分析1. 实验结果：本次实验测得大豆样品中的蛋白质含量为37.2%。
2. 结果分析：凯氏定氮法是一种准确、可靠的蛋白质含量测定方法。
实验过程中，样品的消化、蒸馏、吸收和滴定等步骤严格按照操作规程进行，确保了实验结果的准确性。
本次实验测得的大豆蛋白质含量与文献报道基本一致，表明实验方法可靠。
六、实验总结1. 凯氏定氮法是一种经典的蛋白质含量测定方法，具有操作简便、结果准确等优点。
2. 实验过程中，严格遵循操作规程，注意样品的消化、蒸馏、吸收和滴定等步骤，确保实验结果的准确性。
大豆分离蛋白 标准
大豆分离蛋白标准大豆分离蛋白是一种优质的植物蛋白，其蛋白含量高，氨基酸组成均衡，且易于消化吸收。
在食品加工行业中，大豆分离蛋白被广泛应用于肉制品、调味品、乳制品等产品中，以提高其蛋白质含量，改善口感和营养价值。
本文将对大豆分离蛋白的标准进行介绍，以便生产加工企业和相关研究人员了解其质量要求和技术规范。
一、外观特征。
大豆分离蛋白的外观呈淡黄色至浅棕色粉末状，无异物和明显气味。
其颜色应均匀，无结块和异物，符合食品卫生标准要求。
二、蛋白含量。
大豆分离蛋白的蛋白含量应不低于90%，通过蛋白质测定方法进行检测，确保产品的蛋白质含量符合标准要求。
三、氨基酸组成。
大豆分离蛋白的氨基酸组成应符合国家食品安全标准，特别是必需氨基酸的含量要达到一定比例，保证产品的营养价值和生理功能。
四、水分含量。
大豆分离蛋白的水分含量应控制在一定范围内，一般不超过8%，以确保产品的稳定性和保存期限。
五、微生物指标。
大豆分离蛋白产品应符合国家相关的微生物指标标准，包括总菌落数、大肠菌群和霉菌、酵母菌等指标，保证产品的卫生安全。
六、重金属和有害物质。
大豆分离蛋白产品中的重金属和有害物质含量应符合国家相关标准，特别是铅、镉、汞等重金属的含量要符合食品安全标准，保证产品的安全性和可持续发展。
七、储存和包装。
大豆分离蛋白产品在储存和包装过程中，应采取适当的措施，防止产品受潮、变质和污染，保证产品质量的稳定性和持久性。
综上所述，大豆分离蛋白作为一种重要的植物蛋白资源，在食品加工行业中具有广阔的应用前景。
生产加工企业在生产过程中，应严格按照相关标准和技术规范进行生产，确保产品质量符合国家食品安全标准，为消费者提供安全、营养、健康的食品产品。
同时，相关研究人员也应加强对大豆分离蛋白的质量研究和控制技术，推动行业的可持续发展和创新。
希望本文所述的大豆分离蛋白标准能够为相关行业提供参考，促进行业的健康发展和科技进步。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
4、Folin试剂乙：在2升磨口回流装置的烧瓶内，加钨酸钠 （NaWO4·2H2O）100g，钼酸钠（NaMoO·2M2O）25g， 蒸馏水700ml，85%的磷酸50ml，浓盐酸100ml，充分 混合后，小火回流10小时，再加硫酸锂（Li2SO4）150g， 蒸馏水50ml及数滴溴。然后开口沸腾15min，以驱除过量 的溴，冷却后定容到1000ml，过滤后呈金黄色，于棕色瓶 中保存，可使用多年。
Folin酚法所用试剂是由两部分组成，试剂甲相当于双缩 脲试剂，可与蛋白质中的肽链起显色反应。试剂乙中的磷钼酸 和磷钨酸在碱性条件下不稳定，易被酚类还原而呈兰色（钼兰 和钨兰混合物）。
由于蛋白质中含有带酚基的酪氨酸还原呈兰色，溶液 兰色的深浅与蛋白浓度成正比。因此用Folin酚法测定 蛋白质含量，灵敏度较高。
4
4
4
4
4
立即摇匀，在55℃恒温水浴中保温5min，用流水冷却1min后，测A650
A650值
？ 0 0.184 0.317 0.425 0.536 0.668
2、样品测定：取三支试管（平行）各加入待测的蛋白质样品液1ml和空
白 ，如下操作：
试管号
空白
1
2
蛋白质稀释液（ml） （mg)
0
PH7.8的buffer（ml）
试剂和器材
1、材料： 本实验所提取大豆蛋白水提取液，经合适稀释至可测 定范围。
2、试剂： （1）0.03mol/L PH7.8的磷酸缓冲液。 （2）200μg/ml的标准酪（牛血清）蛋白溶液。 （3）Folin试剂甲：（俗称碱性铜试剂）：10g NaoH溶于400ml水中，再加50gNa2CO3； 称0保.2存取5可g0C用.u5一SgO个酒4月；石。以酸上钾两溶钠液溶混于合8定0容m到lH520O0中m，l，再冰箱加
称出提出蛋白质的重量，已知原料重量，可以求出蛋白质的收 率。
试剂和器材
1、试剂 （1）10%Nacl （2）0.2%NaoH （3）75%乙醇 （4）6mol/L HCL （5） 1mol/L HCL （6）1 mol/L NaoH
2、器材 （1）离心机 （2）烧杯 （3）滴管 （4）PH试纸等
操作方法
上述制备的Folin试剂乙的贮备液浓度一般在2mol/L左右， 几种操作方案都是把Folin试剂乙稀释至1mol/L的浓度作为 应用液，我们是把贮备液于作用前稀释18倍，使之浓度为 0.1mol/L略高。这种稀释18倍后的Folin试剂乙就是下文称 之为应用液，Folin试剂乙贮备液浓度的标定，一般是以酚 酞 为 指 示 剂 ， 用 Folin 试 剂 乙 去 滴 定 1 mol/L 左 右 的 标 准 NaOH溶液，当溶液颜色由红变为紫灰色，再突然变成黑绿 既为终点。如果用NaOH去滴定Folin乙，终点不太好掌握， 溶液的颜色是由浅黄色变为浅绿色，再变为灰紫色为终点。
3、器材：
试管10支 试管架一个 移液管：（5ml、1ml） 移液管架 洗瓶 恒温水浴 723型分光光度计
Folin-酚法测定蛋白质含量工作曲线的制作：
取6支试管（干燥的）按下表顺序分别加入各种试剂并进行反应和测定 K=0.308 B=--0.009 R*R=0.9909
试管号 0 1 2 3 4 5 S
样品中含酚类化合物及柠檬酸均有干扰作用，如果样 品酸度较高则显色较浅，要提高碳酸钠一氢氧化钠的 浓度。此法也可测定溶液中酪氨酸和色氨酸的浓度。
Folin酚法有不少个别改进的操作方法，但基本原理都 是一个，只是在各溶液的浓度及填加量上、保温的温 度及保温时间上有所不同而已，本实验所介绍的是本 室常用的，灵敏度较高的操作方法。
1
1
1
0
0
） 1 Folin-甲试剂 （ml
1
1
于室温下不停地振荡10min
4 Folin-乙应用液（ml）
4
4
立即摇匀，在55℃恒温水浴中保温5min，用流水冷却1min后， 测A650
A650值
3.蛋白质浓度的计算：
大豆蛋白的提取与含量测定
蛋白质性质与应用技术关系图
肽
氨基酸
疏 水 性
纸 层 析
亲 水 性
酸 碱
酶
极性
蛋白质
电荷
分 形子 状量
离子交换层析 电泳
离 心
凝 胶 层
析
一、大豆蛋白的提取
目的要求
1、掌握大豆蛋白的提取原理和方法 2 、计算粗提产率 2、学习计算蛋白质收率
实验原理
大豆中含有丰富的蛋白质、根据提取方法及其其性质的不同， 可以分为水溶蛋白、盐溶蛋白、醇溶蛋白、碱溶蛋白。将豆粉依 次用上述溶剂提取，并用有机溶剂沉淀，可制得各部分蛋白质的 干粉。本实验主要是水溶提取大豆蛋白。
1、水抽提
将豆粉5g用约50毫升左右的蒸馏水少量多次的添加 搅 拌 ， 常 温 下 搅 拌 抽 提 1 5 min， 3800r/min 离 心 15min，取上清液，如上清液不清澈再经过滤。取上 清液1毫升稀释100倍留做蛋白测定。
其余上清液加入等体积在冰箱中预冷的丙酮，用滴 管少量多次慢慢滴加（搅拌），用6mol/L和1 mol/L HCL， 调 PH4.5~5.0，3800r/min， 离 心 1 5 min， 收集沉淀物，反复用丙酮搅拌洗涤离心2次，放入表面 皿上，60度烘干，得到粉末状蛋白质干粉，称重，计 算粗产率。
蛋白质产物重量
蛋白质产率=
×100%
原料总重量
Folin酚法测定蛋白质浓度见第二实验部分
二、Folin酚法测定蛋白质含量
目的要求
掌握Folin酚法测定蛋白浓度的原理和方法
实验原理
蛋白质浓度可以从它们的物理化学性质，如比重、紫外 吸收，折射率等测定而得知；或用化学方法，如定氮、双缩脲 反应，Folin酚试剂反应等方法来计算。其中双缩脲法和Folin 酚法是一般实验室中常用的方法，它们操作简便，迅速，不需 要复杂而昂贵的仪器。Folin酚法灵敏度高，比双缩脲法灵敏 100倍。
蛋白质标准液（ml） 0 （mg) 0
提取的样品液（ml）
0.2 0.04
0.4 0.08
0.6 0.12
0.8
1.0
0.16 0.
1 0.8 0.6 0.4 0.2
0
0.2
） Folin-甲试剂 （ml
1
1
1
1
1
1
1
于室温下不停地振荡10min
Folin-乙应用液（ml） 4