高效液相色谱法测定腺苷中的有关物质
二丁酰环磷腺苷钠的制备及其含量和相关物质的测定
二丁酰环磷腺苷钠的制备及其含量和相关物质的测定霍婷;孙凯;汪磊;李子健;郭盛强【摘要】目的制备二丁酰环磷腺苷钠并测定其含量及有关物质.方法自制二丁酰环磷腺苷钠后,采用高效液相色谱法测定其含量和有关物质,色谱条件为:ODS C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.05 mol/mL磷酸二氢钾溶液(25∶75)为流动相,流速1 mL/min,273 nm为检测波长.结果二丁酰环磷腺苷钠为白色粉末状固体(收率＞70％,HPLC＞ 99％);含量测定线性范围为20～30μg/mL,r=0.9997;重复性良好(RSD=0.4％,n=6);回收率为101.2％(RSD =0.3％);有关物质定量限为50.08 ng/mL,该浓度下检测结果稳定;线性范围为0.05 ～3.75 μg/mL,r=0.9999;重复性良好(RSD=4.53％,n=6);回收率为93.5％(RSD =1.8％).结论该合成路线简单,制备得到二丁酰环磷腺苷钠纯度高,建立的HPLC法测定其含量及有关物质简便,结果可靠.【期刊名称】《中国生化药物杂志》【年(卷),期】2015(000)002【总页数】3页(P171-173)【关键词】二丁酰环磷腺苷钠;制备;含量;高效液相色谱法;有关物质【作者】霍婷;孙凯;汪磊;李子健;郭盛强【作者单位】西安力邦医药科技有限责任公司,陕西西安710075;西安力邦医药科技有限责任公司,陕西西安710075;西安力邦医药科技有限责任公司,陕西西安710075;西安力邦医药科技有限责任公司,陕西西安710075;西安力邦医药科技有限责任公司,陕西西安710075【正文语种】中文【中图分类】R927环腺苷酸(aden osine 3′,5′-cyclic monophosphate，cAMP)是生长激素、肾上腺素等多种激素作用的第二信使，是动物机体代谢的重要调节因子。
有资料显示它对心绞痛、急性心肌梗塞、牛皮癣有特效[1]。
高效液相色谱法测定蒲地蓝消炎片中腺苷的含量
高效液相色谱法测定蒲地蓝消炎片中腺苷的含量胡冰【期刊名称】《海峡药学》【年(卷),期】2014(000)006【摘要】目的：用高效液相色谱法测定蒲地蓝消炎片中腺苷的含量。
方法采用高效液相色谱法，色谱柱为 C18柱（250mm ×4.6mm，5μm），以甲醇∶水（10∶90）为流动相，检测波长为260nm，体积流量为1.0mL· min -1，注温为30℃。
结果腺苷对照品在浓度为0.0128～0.128mg· mL -1范围内线性关系良好，平均回收率为99.45％，RSD＝0.92％。
结论方法简单准确，重现性好，专属性强，阴性对照无干扰，适用于蒲地蓝消炎片的质量控制。
%OBJECTIVE To establish a method for determination of adenosine in Pudilan Xiaoyan Tablets by HPLC.METHODS The HPLC with a C18 column (250mm ×4.6mm,5μm) was used.Methanol-water(10∶90)was used as the mobile phase.The detection wavelength was 260nm,flow velocity was 1.0mL· min -1.The temperature of column was 30℃.RESULTS The linear range of adenosine was0.0128~0.128 mg· mL-1 ,the average recovery was 99.45%with RSD of0.92%.CONCLUSION The method is simple,accurate,and reproducible with exclu-sive property.It can be used for quality control of Pudilanxiaoyan tablets.【总页数】3页(P71-73)【作者】胡冰【作者单位】福建省莆田市药品检验所莆田351100【正文语种】中文【中图分类】R927.2;R282.71【相关文献】1.反相高效液相色谱法测定蒲地蓝消炎片中黄芩苷的含量 [J], 席文胜;关小彬;张艳玲2.高效液相色谱法测定蒲地蓝消炎片中R,S-告依春含量 [J], 姜雪敏;杨立志3.高效液相色谱法测定蒲地蓝消炎片中黄芩苷与黄芩素含量 [J], 邵礼梅;王云龙;李延雪4.高效液相色谱法测定蒲地蓝消炎片中黄芩苷的含量 [J], 黄睿;张双5.高效液相色谱法测定蒲地蓝消炎片中咖啡酸、绿原酸的含量 [J], 邵礼梅;李延雪;王云龙因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱紫外检测法同时测定小鼠红细胞中S-腺苷甲硫氨酸和S-腺苷同型半胱氨酸
高效液相色谱紫外检测法同时测定小鼠红细胞中S-腺苷甲硫氨酸和S-腺苷同型半胱氨酸唐秀芳;王箭;张晓清;高茹菲;丁敏【摘要】建立了高效液相色谱紫外检测同时测定红细胞中.S-腺苷甲硫氨酸(SAM)和S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)的方法.采用ZORBA×Eclipse×DB-C8色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),以含3 mmol/L庚烷磺酸钠的40 mmol/L磷酸钠缓冲溶液(pH 3.72)-甲醇(95∶5,V/V)为流动相,流速0.9 mL/min,柱温35℃,紫外检测波长设置:0 ～8.00 min,450 nm; 8.01～16.00 min,260 nm.SAH与SAM的线性范围分别为0.25～ 3.0 mg/L和0.50 ～ 10 mg/L,检出限分别为0.15和0.07 mg/L.方法日内和日间相对标准偏差(RSD)分别小于6.5％和7.4％,平均回收率为80.9％～116.2％.利用本方法对19例叶酸缺乏孕小鼠和11例健康对照孕小鼠红细胞进行测定.结果表明:叶酸缺乏组SAH明显高于健康对照组,而SAM两组间无显著差异.【期刊名称】《分析化学》【年(卷),期】2013(041)004【总页数】5页(P570-574)【关键词】高效液相色谱;S-腺苷甲硫氨酸;S-腺苷同型半胱氨酸;红细胞【作者】唐秀芳;王箭;张晓清;高茹菲;丁敏【作者单位】重庆医科大学检验医学院,临床检验诊断学教育部重点实验室,重庆400016;重庆医科大学检验医学院,临床检验诊断学教育部重点实验室,重庆400016;重庆医科大学检验医学院,临床检验诊断学教育部重点实验室,重庆400016;重庆医科大学生殖生物学研究室,重庆400016;重庆医科大学检验医学院,临床检验诊断学教育部重点实验室,重庆400016【正文语种】中文甲硫氨酸(Methionine,Met)在腺苷转移酶催化下与ATP反应生成S-腺苷甲硫氨酸(S-Adenosylmethionine,SAM),SAM是体内最主要的甲基供体,在甲基转移酶的催化下,参与乙酰胆碱、磷脂类、生物信息大分子DNA和RNA[1]的甲基代谢。
高效液相色谱法测定化妆品中腺苷的含量
高效液相色谱法测定化妆品中腺苷的含量
于海英;黄萍;李启艳;董蓬;李俊婕
【期刊名称】《日用化学工业》
【年(卷),期】2014(044)004
【摘要】建立了一种高效液相色谱法测定化妆品中腺苷的方法.采用饱和氯化钠溶液作为提取溶剂,超声提取,以高效液相色谱-二极管阵列检测器检测化妆品中的腺苷.结果显示,腺苷溶液在0.3883～64.72 mg·L-1范围内线性关系良好,相关系数r
=1.000 0,检出限为0.000 1％;腺苷在霜类和乳液2种基质中回收率分别为
92.3％～94.6％和95.4％～98.8％,日内和日间精密度(RSD)分别为0.9％和2.4％.【总页数】3页(P234-236)
【作者】于海英;黄萍;李启艳;董蓬;李俊婕
【作者单位】山东省食品药品检验所,山东济南 250101;山东省食品药品检验所,山东济南 250101;山东省食品药品检验所,山东济南 250101;山东省食品药品检验所,山东济南 250101;山东省食品药品检验所,山东济南 250101
【正文语种】中文
【中图分类】TQ658
【相关文献】
1.基于高效液相色谱法测定长白猪肌肉组织和肠道内容物中腺苷酸含量 [J], 孔谦;晏石娟;吕琪;黄建峰;陈庄
2.高效液相色谱法测定灵芝提取物中尿苷和腺苷含量 [J], 席桂同
3.高效液相色谱法测定大鼠心肌中腺苷的含量 [J], 王锋;庄波阳;柯丹;陈小英
4.高效液相色谱法测定牛樟芝中腺苷的含量 [J], 程利娟;郭琪;雷虹;杨莹;申睿;慕磊;王彦宗;
5.高效液相色谱法测定板蓝根颗粒中腺苷的含量 [J], 王亚芳;钟昆芮;李应超;周艳飞;张小飞;高婷;秦俊杰;王海军;战皓
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱法测定人血浆中腺苷钴胺质量浓度
苷钴 胺 ， 重现 性 好 ， 结果 准 确 。 关键 词 ： 苷 钴 胺 ； 腺 高效 液 相 色谱 法 ； 浆 ； 量 浓度 血 质
２ 方 法与 结 果
２ １ 色 谱 条 件
Ａ
Ｂ
Ｃ
色 谱 柱 ： ｙ ｅ ｉＯ Ｓ Ｈ ｐｒ ｌ Ｄ ２分 析 柱 （０ ｉ ×４ ６ｍ ５ ｍ） 流 ｓ ２ ０Ｂ ｎ ． ｍ， ；
动 相 ： 腈 一０ ０ ｏ／ 乙 ．５ｍ ｌ Ｌ磷 酸 二 氢 钾 溶 液 （５： ５ 用 磷 酸 调 节 １ ８， ｐ Ｈ＝３ ２ ： 速 ： ． Ｌ ｍｎ 紫 外 检 测 波 长 ：６ ｍ ． ）流 １０ｍ ／ ｉ； ２０ｎ 。 ２ ２ 样 品处 理 与 测 定 方法 ．
［ ］Ｙ ｎ ｉ Ｃ ｏ ｈ ｎ，Ｗ ｈｎ ｔａ．Ｐ ｂ（ ４ ａｘａ ａ ，Ｃ Ｚ ａ ｇ Ｓ ｅ，ｅ １ ｏ Ｎ—ｉ ｐｏｙ ｃｙ ｍｄ ） 一 ｓ ｒｐｌ ｒｌ ｉｅ ｏ ａ ａ
ｃ ｉ ｓ ｎ ａ ｅ ｍ０ ｅ ｓｔ ｅ ｉ ｉ ｅ —ｆ ｒ ｎ ｙ ｔ ｍ ｒｏ ｕ ａ ｕ ｅ ｉ－ ｈ ｔ ａ ｓｔ ｒ ｓ ｎ ｉｉ ｎｓ ｔ ｇ ｌ ｏ ｍｉ ｇ ｓ ｓｅ ｆ ｃ ｌ ｒ ｏ ｈ ｖ ｕ ｏ ｄｒ ｇｄ ｌｖ
Ｌ Ｃ一１Ａ 型 高 效 液 相色 谱 仪 （ ０ 日本 岛 津 公 司 ）腺 苷钴 胺 （ 号 。 批 为 ０ ０ ０ ， 北 华 荣 制 药 有 限 公 司 ） 乙 腈 （ 国 Ｔ ＤＡ 公 司 ）磷 ４９ １河 ； 美 ＥＩ ； 酸 二 氢 钾 （ 号 为 ０ ０ １２ ， 京化 学 试 剂 一 厂 ）三 氯 乙酸 （ 析 批 ２４ ３ ６ 南 ； 分 纯 ， 皋 市 化学 试 剂 厂 ）空 白 人 血浆 （ 京 红 十字 协 会 血 液 中 心 ） 如 ； 南 。
高效液相色谱法测定人工虫草中腺苷和腺嘌呤的含量
高效液相色谱法测定人工虫草中腺苷和腺嘌呤的含量摘要：目的：建立HPLC法测定虫草中的腺苷和腺嘌呤的方法。
方法:采用高效液相法，Kromasil C18色谱柱(4.6 x 150mm,5µm)，流动相为1%乙酸甲醇-乙腈(V/V)，流速0.9ml.min-1,检测波长为2600nm。
结果:腺嘌呤在0.59-1.18 mg/mL（r=0.9998）范围内峰面积与浓度呈良好线性关系，平均加样回收率为97.5%，RSD=2.32%（n=6），腺苷在1.47-2.94mg/mL（r=0.9998）范围内峰面积与浓度呈良好线性关系, 平均加样回收率为96.5%，RSD=1.37%（n=6）,结论:该方法操作简便、灵敏度高、重现性好、专属性强，适用于人工虫草腺苷及腺嘌呤含量的测定。
为人工虫草在临床医学应用及新药开发提供了基础研究数据。
关键词: 高效液相色谱法；虫草；腺苷；腺嘌呤；含量[中图分类号] R-33 [文献标识码] A 文章编号：冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草菌 Cordyceps sinensis (Berk) Sacc.寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座和幼虫尸体的干燥复合体[1],为我国传统名贵中药材,主产于西藏、青海的高寒草甸。
近年来,由于对野生冬虫夏草的过度采挖,导致虫草资源逐渐枯竭,人工虫草的培育研究应运而生。
人工北虫草又称北冬虫夏草、蛹虫草(Cordyceps militaris),是从天然北虫草分离得到的菌种拟青霉(Paecilomyces militaris)经人工培养所获得的子实体,与冬虫夏草同属异种。
据报道人工发酵的菌丝体产物，其化学成分与天然虫草基本相似[2]。
中国药典2005年版把腺苷作为冬虫夏草的定量指标[3].已有一些文献报道使用HPLC方法测定虫草中核苷类成分[4-6]。
为了考察人工虫草菌粉的质量，本实验应用HPLC，在相同色谱条件下测定人工虫草菌粉中腺苷和腺嘌呤的含量。
甲硫腺苷的测定方法
甲硫腺苷的测定方法
甲硫腺苷（Methylthioadenosine，MTA）的测定方法可以采用多种技术，其中包括高效液相色谱法（HPLC）、质谱法（MS）、酶联免疫吸附测定法（ELISA）等。
这些方法各有特点，可以根据实验目的和实验条件选择适合的方法进行测定。
一、高效液相色谱法（HPLC）：HPLC是一种常用的色谱分析技术，可以对甲硫腺苷进行分离和定量。
该方法基于甲硫腺苷在色谱柱中的保留时间和色谱峰面积来定量，通常需要配合标准品进行定量分析。
二、质谱法（MS）：质谱法是一种高灵敏度的分析技术，可以对甲硫腺苷进行准确的定量分析。
该方法利用质谱仪对样品中的离子进行分析，根据离子的质量比来确定甲硫腺苷的含量。
三、酶联免疫吸附测定法（ELISA）：ELISA是一种常用的免疫分析技术，可以对甲硫腺苷进行定量分析。
该方法利用特异性抗体与甲硫腺苷结合，形成免疫复合物，再通过酶底物的显色反应进行定量分析。
以上所列的方法都可以用于甲硫腺苷的测定，选择合适的方法取决于实验室设备、实验技术和实验目的等因素。
高效液相色谱法测定5′-三磷酸腺苷含量
高效液相色谱法测定5′-三磷酸腺苷含量张爱雷;王岚【摘要】采用高效液相色谱法测定5′-三磷酸腺苷含量.色谱条件为:XTerraTMRP18(3.9 mm×150 mm,5 μm) 色谱柱,流动相为0.05 mol·L-1 pH 值7.0 的NH4H2PO4缓冲溶液,检测波长259 nm,流速1.0 mL·min-1,柱温(25±2)℃,进样量20 μL.在10～80 mg·L-1范围内,ATP浓度与其259 nm处吸光度值呈良好线性关系,R＝0.9994;检测重复性较好,平均回收率为98.87%,整个色谱过程可在7 min内完成.该方法也可用于ADP和AMP的分离检测.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2010(027)010【总页数】3页(P89-91)【关键词】三磷酸腺苷;一磷酸腺苷;二磷酸腺苷;含量;检测;高效液相色谱【作者】张爱雷;王岚【作者单位】江苏省产品质量监督检验研究院,江苏,南京,210007;常州大学化学化工学院,江苏,常州,213164【正文语种】中文【中图分类】O657.75′-三磷酸腺苷 (Adenosine triphosphate,ATP)又名腺三磷、腺嘌呤配糖三磷酸，临床应用广泛，是用于治疗进行性肌萎缩、脑溢血后遗症、心机能不全、心肌疾患及肝炎等疾病的辅酶类药物，被称为人体内的“能量货币”[1]。
在ATP的制备、存储过程中，易混入或产生一磷酸腺苷(AMP)、二磷酸腺苷(ADP)等杂质。
ATP、ADP及AMP的结构相似、理化性质相近，因此检测较为困难[2]。
我国部标和地方标准均采用纸电泳法[3]或纸层析法[4]测定ATP含量，存在操作时间长、误差较大、操作繁琐的缺点。
也有报道采用生物发光法测定ATP含量，但该方法不能对杂质进行分析[5]。
作者采用高效液相色谱法测定ATP含量，结果令人满意。
1 实验1.1 试剂和仪器对照品：ATP二钠(Sigma)，ADP (中国医药上海化学试剂公司)，AMP(中科院上海生化所东风生化技术公司)；样品：ATP二钠(批号：200209070,上海太平洋制药厂)；NH3·H2O、磷酸二氢铵，分析纯。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
高效液相色谱法测定腺苷中的有关物质
【摘要】目的建立腺苷原料药中有关物质的高效液相色谱测试方法。
方法采用十八烷基硅烷键合硅胶柱;流动相为硫酸盐缓冲液-叠氮化钠液（1：10000）=60：40；流速为1.5ml/min；紫外检测波长为254nm。
结果腺苷和肌苷峰的分离度R≥9.0，RSD≤2.0%(n=5)；鸟苷、肌苷、尿苷、腺嘌呤杂质的线性关系良好，线性回归系数为0.998~1.000之间，回收率结果为鸟苷99.2%, 尿苷101.4%, 肌苷100.4%。
结论该检测方法操作简便，结果灵敏、准确，可用于腺苷中有关物质的限度测试。
【关键词】腺苷；高效液相色谱法；有关物质
目前市场上销售的腺苷原料药主要是以发酵工艺制备得到，原料中存在着肌苷、鸟苷等核苷类杂质。
经查文献未见有腺苷原料的有关物质检测方法报道。
笔者通过实验研究，确定了用HPLC方法检测腺苷有关物质的新方法，能更有效地保证产品质量。
1仪器与试药
1.1仪器USA Waters高效液相色谱仪（Waters 2695型泵，Waters 2487型检测器，SM7型自动进样仪器，Empower pro软件数据处理系统）；AE240型分析天平(瑞士梅特勒公司)
1.2试药腺苷（浙江诚意药业有限公司，批号：20081001、20081002、20081003）；腺苷BP参照品（Batch/lot n01）；鸟苷参照品（lot A011405101）；肌苷参照品（J0310035）；尿苷参照品（lot A014531601）；腺嘌呤BP参照品（Batch/lot n01）。
2 方法与结果
2.1色谱条件C18柱ODS (4. 6mm×250mm ,5μm)；流动相为硫酸盐缓冲液-0.01%叠氮化钠液（60：40，硫酸盐缓冲液配制方法为：精密称取硫酸氢钾约6.8g和硫酸氢四丁基铵约
3.4g，同置1000ml容量瓶中，加900ml水溶解，用2M 氢氧化钾溶液调节pH至6.5，再加水至刻度，混匀。
）；检测波长为254nm；流速为1.5ml/min-1；柱温为30℃；进样量为20μl；运行时间为色谱图记录至腺苷保留时间2倍处。
2.2溶液的配制
2.2.1供试液取腺苷适量，用流动相制备成每1ml中含腺苷约1.0mg的溶液(25mg/25ml)。
2.2.2鸟苷储备液取鸟苷对照品，用流动相制备成每1ml中含鸟苷约10μg的
溶液。
2.2.3尿苷储备液取尿苷对照品，用流动相制备成每1ml中含尿苷约10μg的溶液。
2.2.4肌苷储备液取肌苷对照品，用流动相制备成每1ml中含肌苷约10μg的溶液。
2.2.5腺嘌呤储备液取腺嘌呤对照品，用流动相制备成每1ml中含腺嘌呤约20μg的溶液。
2.2.6有关物质混合溶液取腺苷、鸟苷、尿苷、肌苷、腺嘌呤对照品，用流动相制备成每1ml中约含0.2mg腺苷、0.05mg鸟苷、0.05mg尿苷、0.2mg肌苷、0.05mg腺嘌呤的混合溶液。
2.3方法专属性试验取2.2.6项下有关物质混合溶液，重复进样（n=5），记录各色谱峰保留时间和峰面积，考察各色谱峰的分离度。
理论板数按腺苷峰计算，N≥2000，腺苷峰和肌苷的分离度R≥9.0，重复进样（n=5）RSD≤2.0%，均符合要求。
2.4线性试验
2.4.1取鸟苷、肌苷和尿苷的储备液作线性试验，检测结果表明鸟苷、肌苷和尿苷的浓度与峰面积均呈良好的线性关系，线性回归系数均为1.000。
2.4.2取腺嘌呤储备液作线性试验，检测结果表明腺嘌呤浓度与峰面积呈良好线性关系，线性回归系数为0.998。
2.5精密度试验
2.5.1系统精密度取2.2.6项下有关物质混合溶液，重复进样n=5，记录各色谱峰面积，考察系统重复性。
计算主峰峰面积的RSD≤0.2%，符合规定的RSD≤1.0%的标准要求。
2.5.2方法精密度取三批腺苷样品（2008-1001、2008-1002、2008-1003），由二名分析员进行有关物质日间，日内分析精密度试验，其结果均为一致，偏差为0.0%。
2.6回收率试验取一批已知色谱纯度的腺苷样品，作回收率试验。
测得尿苷、鸟苷和肌苷总平均回收率分别为101.4%、99.2%和100.4%，符合规定的95.0%~105.0%标准要求。
2.7流动相中硫酸盐缓冲液比例取有关物质混合溶液考察流动相中含硫酸盐缓冲液不同比例（65%、60%、55%）时色谱体系的适用性，检测结果显示不同
比例的缓冲液流动相均能满足测试要求。
3讨论
在中国药典和部颁标准等药品标准中均未见收载腺苷的有关物质检测方法。
本实验通过多次摸索研究和试验条件优化，确终筛选确定了以硫酸盐缓冲液-0.01%叠氮化钠液（60：40）作为最佳的流动相，在254nm检测波长处能有效地分离鸟苷、肌苷和尿苷等有关物质，该HPLC方法简便易行，方法精密度高，线性关系良好，回收率满意，重复性好，可作为腺苷有关物质的检测方法和质量控制。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[Z].北京：化学工业出版社，2005:289,608
作者简介：
吕志东，男，（1974-），浙江洞头人，毕业于中国药科大学药学系，执业药师，学士，研究方向：制药。