方法验证和杂质研究讲解
方法验证和杂质研究讲解
1. 方法验证的主要内容
➢ 专属性——方法不受杂质、降解物、辅料的影响，可正确鉴定被分析物
▪ 鉴别反应：仅被分析物呈正反应，阴性对照呈负反应，结构相似及组分中 的有关化合物也呈负反应。
▪ 杂质检查：加入的杂质可与共存物质分离并被检出 与原理不同的可信方法比较；强制降解
▪ 含量测定：比较加入杂质或辅料前后的测定结果 与可信方法比较测定结果（强制降解样品）
空白对照应无干扰，主成分与各杂质峰 （该杂质峰与其他峰）R≥2
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Venturepharm PDS
1. 方法验证的主要内容
➢ 专属性试验中需要注意的问题
▪ 波长的选择； ▪ 每次试验时必须运行空白样品； ▪ 试剂、玻璃容器、流动相和过滤介质可能会影响方法的
专属性。
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Venturepharm PDS
1. 方法验证的主要内容
Difference% =100-100×Rm/Rs Rm为改变条件后的含量结果；Rs为标准条件获得的含量结果
▪ 可接受标准：原料药与制剂：主成分含量差异≤1.5%
杂质：
杂质水平 ≤0.2% 0.2%-1.0% > 1.0%
接受标准 绝对值±0.05% 相对值±20% 相对值±10%
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Venturepharm PDS
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1. 方法验证的主要内容
➢ 精密度——多次取样测定同一均质供试品所得结果间的接近程度
▪ 使用偏差d、标准偏差SD和相对标准偏差RSD表示
▪ 偏差 ▪ 标准偏差
d=xi-x 测量值与平均值之差
SD
n
(xi x)2
i 1
n 1
▪ 相对标准偏差
RSD SD 100% x来自Venturepharm PDS
药物中杂质分析的方法研究
药物中杂质分析的方法研究在制药和医学领域，药物质量是至关重要的。
药物中杂质的存在可能会影响药物的疗效和安全性，因此对药物中的杂质进行准确分析十分必要。
本文将探讨药物中杂质分析的方法研究，以帮助提升药物的质量控制。
一、药物中杂质的分类药物中的杂质可以分为有机和无机杂质两大类。
有机杂质包括有机溶剂残留、杂质化合物等；无机杂质通常为金属离子、重金属离子等。
准确分析药物中的杂质有助于评估药物的纯度和质量。
二、样品前处理方法药物样品通常需要经过前处理才能进行杂质分析。
前处理方法的选择取决于药物的性质和杂质的类型。
常用的前处理方法包括固相萃取、液液萃取、超临界流体萃取等。
这些方法能够将药物中的目标化合物和杂质分离，提高分析的准确性和精确度。
三、色谱分析方法色谱分析是药物中杂质分析的常用方法之一。
其中，高效液相色谱（HPLC）和气相色谱（GC）是最常见的技术。
HPLC可以用于分析药物中的有机溶剂残留、杂质化合物等，而GC则适用于分析无机杂质和揭示药物中的杂质来源。
色谱分析方法具有分离效果好、准确性高等优点，因此被广泛应用于药物质量控制。
四、质谱分析方法质谱分析是一种基于质量-电荷比的分析技术，可以提供化合物的分子结构信息。
质谱分析方法主要包括质谱联用技术，如气相色谱-质谱联用（GC-MS）和液相色谱-质谱联用（LC-MS）。
这些方法能够准确确定药物中的杂质结构，帮助评估其对药物质量的影响。
五、光谱分析方法光谱分析方法是一种基于物质对辐射的吸收、散射、发射等性质进行分析的技术。
常见的光谱分析方法包括紫外可见光谱（UV-Vis）、红外光谱（IR）等。
这些方法可以用于检测药物中的有机杂质和无机杂质，提供药物质量控制的依据。
六、电化学分析方法电化学分析方法利用物质在电场或电位变化下的反应特征进行分析。
电化学方法包括电化学滴定、电化学色谱、循环伏安法等。
这些方法可以用于定量和表征药物中的杂质，具有快速、灵敏和易操作的优点。
药物杂质研究方法详解
药物杂质研究方法详解近年来，随着药物研究的不断深入以及杂质研究要求不断提高，杂质的分析技术以及研究方法正发生着重要的改变。
在对杂质建立分析方法时，清晰的杂质研究过程是方法建立的基础，而且选择合适的分析技术也至关重要。
杂质的来源分析药物中的杂质可能来源于药物生产以及销售等各个环节(图1)。
根据ICH 指导原则可将药物杂质分为有机杂质、无机杂质、残留溶剂以及其他杂质。
本文主要针对有机杂质进行探讨。
对药物杂质研究时引入“质量源于设计( Quality byDesign，QbD)”的理念，可在药物生产之前根据具体工艺的合成机制、起始物料及各中间体的基本结构，初步勾画出产品的杂质谱。
杂质来源分析是制定药物杂质控制策略的基础，尤其是在对毒性杂质来源分析时，应分析所有合成和生产工艺中的试剂、中间体、副产物，推测可能产生的潜在杂质以及分析实际存在的杂质。
在原料药合成结束后，药物的活性化合物虽然经过毒性分析已不含有“警示结构”(alerting structure)，但是在生产过程中使用到含有警示结构的化合物则还需考虑其遗传毒性。
杂质的研究方法在药物研发过程中，药物杂质的分析是关键。
因此，在杂质研究中清晰的杂质结构研思路(如图2)以及合适的杂质分析技术可极大地缩短杂质研究时间，推动着药物研究的快速发展。
1、杂质前处理技术杂质的前处理是伴随着药物活性成分前处理而存在的，然而药物中杂质的含量低且其结构与主成分差异较大，因此常规药物活性成分的前处理和检测方法(如初始流动相溶解后直接进行HPLC-UV 分析)并不一定适用于药物杂质，应针对不同的样品选择不同的前处理技术。
（1）检测灵敏度低的样品对检测灵敏度低的样品通常使用衍生化的前处理方式，比如引入生色团产生紫外响应，或增加易离子化基团增加离子化效率等。
虽然常规衍生化方式能够满足日常检测的需求，但是为了实现对低浓度的基因杂质进行快速筛选和定量，可对传统的衍生化试剂进行改变以增加其专属性和灵敏度，也可使用气-固衍生化来弥补液-固衍生化的不足。
研究药品杂质分析的方法验证
研究药品杂质分析的方法验证【摘要】在临床上药品是对病患进行治疗的常用手段，根据病患不同的病情情况采用适当的药物进行针对性的处理。
药品的质量和治疗效果有着密切的联系，在药品生产的过程中药品中的杂质会对药品的质量产生影响，从而会对病患的治疗效果产生不良影响。
随着人们安全意识的提高以及对药品质量的重视，目前对药品杂质的分析方法种类较多，不同的方法所达到的分析效果也有差异，本文对此进行了相关的研究。
关键词：药品杂质；分析；方法验证药品在临床的使用过程中能够对病患的病情起到良好的治疗效果，但是在长期用药的过程中由于受到用药剂量以及药物质量的影响，容易出现不良反应[1]。
而药品中存在的杂质会对药品的质量产生不良影响，因此药品中杂质能否得到合理和有效的控制会直接关系到对药品质量的控制。
为了能够对药品的杂质得到准确可靠的测试，需要采用科学准确的方法来进行可行性的验证，从而才能够提高药品的检查效果和保证药品的质量。
本文对目前常用的药品杂质分析方法进行研究，具体内容如下。
1药品杂质的分析方法目前在药品生产的过程中主要采用的分析方法包括有机杂质分析方法和无机杂质分析方法，两种方法都能够对药品中的杂质进行检验，而具体的操作过程如下。
首先是有机杂质的分析方法在一般的情况下，在药品生产过程中对药品的检验主要是采用化学法、色谱法以及光谱法来对其中的有机杂质进行检验，而在检验方法的选择方面需要考虑的是药品的结构和产物之间的差异性，因此为了更好的对药品中的杂质进行控制，需要采用针对性的分析技术来对不同结构的杂质进行检测以及分离处理[2]。
随着科学技术的不断进步，目前更具准确性、稳定性以及灵敏性的检测方法需要和分离技术进行快速高效的结合。
而在目前大部分药品生产厂商主要是使用气相色谱法、高效液相色谱法以及薄层色谱法来对药品中的杂质进行检测，而在方法的具体选择方面需要对药品和杂质的控制要求、理化性质以及化学结构等进行充分的考虑。
但是需要注意的是每一种方法都会存在着一定的局限性，因此在进行实际的分析和检验过程中，需要重点对不同远离的分析以及对方法进行补充和验证。
化学药物杂质研究
化学药物杂质研究首先，了解药物杂质的发生机理是研究杂质的重要前提。
药物杂质的产生途径主要有化学反应、微生物污染、储存条件不当等。
化学反应是最常见的杂质产生途径，包括氧化、加热、光降解等反应。
微生物污染是指在药物生产、储存和输送过程中，微生物带来的污染物。
储存条件不当则是储存环境温度、湿度、光照等因素不符合规范要求，导致药物的品质下降。
其次，药物杂质的分析方法也是研究的关键。
常用的分析方法包括质谱法、核磁共振法、高效液相色谱法和气相色谱法等。
质谱法是一种非常敏感的分析方法，可以用来鉴定和定量药物中的杂质。
核磁共振法则可以通过核磁共振信号来得到药物分子的结构信息。
高效液相色谱法和气相色谱法则是用来分离和定量药物中的杂质，在药物质量控制和稳定性评价中得到广泛应用。
最后，对药物杂质的控制方法也是研究的重点。
在药物研发的过程中，应该优先从合理的原料选择、合适的反应条件和严格的工艺控制等方面着手，减少杂质的产生。
此外，合理的药物贮存和运输条件也是保证药物品质的重要环节。
针对已经产生的杂质，可以通过工艺改进、纯化阶段的优化或选择合适的分离技术进行控制。
同时，制定严格的规范和标准，加强杂质的监控和检测，确保药物质量和安全性。
总之，药物杂质的研究对于药物研发和生产具有重要意义。
通过深入了解杂质的发生机理、应用适当的分析方法和控制方法，可以提高药物品质和安全性，保障患者的用药效果和安全性。
因此，在药物研发和生产过程中应该重视对药物杂质的深入研究。
杂质检查方法的方法学验证各项指标分析
杂质检查方法的方法学验证各项指标分析姓名：王芳药物分析中药品检验基本程序包括：鉴别、检查、含量测定、写实验报告等步骤检查项下包括反映药品安全性有效性的试验方法和限度、均一性、纯度等制备工艺要 求等内容。
药物的杂质是指药物中存在的无治疗作用或者影响药物的稳定性、 疗效,甚至对 人体的健康有害的物质。
杂质的来源可由生产和贮藏过程中引入：①生产过程中主要是由 于所用原料不纯或者原料反应过程中反应未完全 ，以及反应的中间产物、 反应的副产物等 造成药品原料中杂质的存在；或者是由原料生产过程中反应的溶媒、催化剂等溶剂的残留 所造成的药物的杂质。
②贮藏过程引入主要是受温度、 湿度、日光、空气等外界条件的影响或者受微生物的作用产生的杂质。
在药物的研究、 生产、贮存和临床应用等方面，必 须保持药物的纯度，降低药物的杂质，这样才能保证药物的有效性和安全性。
原料药和制剂主要是对药物中的微量杂质进行纯度检查，以判断药物纯度是否符合杂 质限量的规定要求，而生物制品的杂质检查除包括一般杂质检查，特殊杂质检查外还应对 其进行安全性检查。
杂质定量、定性检查方法主要是根据药物和特殊杂质在理化性质上的 差异来进行的，可以采用容量分析法，光谱法分析法，色谱分析法等，各种检测方法所需 的方法学验证的指标包括准确度，精密度，专属性，线性，范围，检测线、定量线，耐用 性八项指标，但采用不同方法所需的指标不尽相同，杂质限量检查一般需要验证专属性， 检测线，耐用性。
而杂质定量分析方法除检测限外其它指标一般都需验证 ⑷。
不同实验应该根据不同实验目的对对各项指标进行验证，下面就杂质种类及近年来检 测杂质最常用的检测方法进行分析：1、 特殊杂质特殊杂质是指在药物制备和贮存过程中 ， 或合成过程中产生的副产物等，多指有机杂质, 性的对映体。
HPLC 法测定萘普生缓释片有关物质的含量： 该缓释片主药是萘普生，特殊杂质为(6—甲氧基—2—萘乙酮)，方法采用高效液相色谱法(HPLC)法；色谱柱：以十八烷基硅烷键 合硅胶为学号: 由于药物性质不稳定而产生的降解产物 也包括残留溶剂和手性化合物中无特殊毒相；检测波长为240nm;流速：/min; 进样量：10卩I .填充剂；以/L的磷酸二氢钾一甲醇-乙腈(40: 25: 35) 磷酸调节PH至为流动1.1.1 系统适应性：首先针对高效液相色谱法应进行系统适应性指标（理论塔板数、分离度、重复性、拖尾因子）验证，该实验得出萘普生主峰与已知杂质峰（6-甲氧基-2-萘乙酮）分离良好，萘普生主峰理论半数大于5000,符合规定。
方法验证的具体内容概述
方法验证的具体内容概述验证内容：准确度、精密度（包括重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。
一、准确度：是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般以百分回收率表示。
至少用9次测定结果进行评价。
二、精密度：是指在规定的条件下，同一个均匀样品，经过多次取样测定所得结果之间的接近程度。
用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。
1、重复性：相同条件下，一个分析人员测定所得结果的精密度称为重复性。
至少9次。
2、中间精密度：一个实验室，不同时间不同分析人员用不同设备测定结果的精密度。
3、重现性：不同实验室，不同分析人员测定结果的精密度。
分析方法被法定标准采用应进行重现性试验。
三、专属性：指在其他成分可能存在的情况下，采用的方法能准确测定出被测物的特性，用于复杂样品分析时相互干扰的程度。
鉴别反应、杂质检查、含量测定方法，圴应考察专属性。
四、检测限：指试样中被测物能被检测出的最低量，无须定量。
用百分数、ppm或ppb 表示。
五、定量限：指样品中被测物能被定量测定的最低量，测定结果应具一定的精密度和准确度。
六、线性：系指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。
七、范围：能达到一定的精密度、准确度和线性的条件下，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。
八、耐用性：指在一定的测定条件稍有变动时，测定结果不受影响的承受程度。
方法验证内容如下。
一、准确度准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率（%）表示。
准确度应在规定的范围内测试。
1．含量测定方法的准确度原料药可用已知纯度的对照品或样品进行测定，或用本法所得结果与已知准确度的另一个方法测定的结果进行比较。
制剂可用含已知量被测物的各组分混合物进行测定。
如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，或用本法所得结果与已知准确度的另一个方法测定结果进行比较。
如该分析方法已经测试并求出了精密度、线性和专属性，在准确度也可推算出来的情况下，这一项可不必再做。
化学试剂的纯度和杂质检测方法
化学试剂的纯度和杂质检测方法化学试剂的纯度是指其中所含的目标物质的含量，而杂质则是指与目标物质不相关的其他物质。
高纯度的化学试剂对于各种实验研究至关重要，因为杂质的存在可能会干扰实验结果，并导致数据误差。
因此，对于化学试剂的纯度和杂质检测方法进行研究及验证，具有极大的意义。
一、纯度检测方法1. 数量检测法：数量检测法是最常见的一种纯度检测方法。
通过测定化学试剂中目标物质的含量来评估其纯度。
这种方法包括滴定法、重量法、气相色谱法等。
这些方法具有简便、快速、准确的特点，被广泛应用于化学试剂的质检工作中。
2. 色谱法：色谱法是一种分离和纯化化学试剂的有效方法。
常见的色谱法包括气相色谱、液相色谱等。
色谱法通过分离试剂中的不同物质，在吸附剂或移动相的作用下，使目标物质与杂质能够分离开来，从而评估化学试剂的纯度。
3. 光谱学方法：光谱学方法是一种通过测定化学试剂中物质的吸收、发射或散射光谱来评估其纯度的方法。
常见的光谱学方法包括紫外可见光谱、红外光谱、核磁共振等。
这些方法通过物质分子的特征吸收峰或发射峰，来判断其纯度及含量。
二、杂质检测方法1. 灰分确定法：灰分确定法是一种常用的杂质检测方法。
通过在高温条件下将化学试剂加热，将其中的有机物热分解为无机物，从而测定无机物的含量。
灰分确定法适用于有机试剂的纯度检测，能够评估试剂中是否含有无机杂质。
2. 蒸发残渣法：蒸发残渣法是一种通过将化学试剂蒸发至干燥得到残渣，然后对残渣进行定性或定量分析，从而检测试剂中的杂质。
这种方法适用于对颜色、结晶性、溶解性等特征敏感的杂质。
3. 离子色谱法：离子色谱法是一种专门用于分析溶液中离子量的方法。
通过离子交换柱对溶液中的离子进行分离和检测，从而确定化学试剂中的离子杂质的类型和含量。
综上所述，化学试剂的纯度和杂质检测是化学实验和研究中的重要环节。
选择合适的纯度检测方法和杂质检测方法有助于确保化学试剂的质量符合实验要求，并提高实验结果的准确性。
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1. 可用已知纯度的对照品或符合要求的原料药进行测定； 2. 用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果
进行比较
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Venturepharm PDS
1. 方法验证的主要内容
➢ 准确度
▪ 制剂：
1. 用含已知量被测物的各组分混合物进行测定； 2. 如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的
▪ 含量测定：在80%-120%浓度范围内配制样品。（考虑含量浓度、含 量均匀度浓度及溶出的浓度，实际操作采用20%-200%）
相关系数R≥0.998，Y轴截距在100%响应值的2%以内，RSD≤2.0% ▪ 杂质定量测定：在定量限至一定浓度范围内配制样品。（考虑实测
该杂质的值） 相关系数R≥0.990，Y轴截距在100%响应值的25%以内, RSD≤10%
中间精密度：同实验室的不同人员、时间和设备测定结果的精密度 含量测定RSD ≤2.0%，杂质定量RSD ≤20%
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Venturepharm PDS
1. 方法验证的主要内容
➢ 范围——能达到一定准确度、精密度和线性的浓度区间，
为规定值 ▪ 半成品或成品含量测试：80%-100%或更宽 ▪ 含量均匀度：70%-130%，据剂型特点有差异 ▪ 溶出度：限度的±20%，或下限的-20%至上限的+20% ▪ 定量杂质：规定限度的±20%，或采用峰面积归一化法与
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Venturepharm PDS
1. 方法验证的主要内容
➢ 精密度——多次取样测定同一均质供试品所得结果间的接近程度
▪ 使用偏差d、标准偏差SD和相对标准偏差RSD表示
▪ 偏差 ▪ 标准偏差
d=xi-x 测量值与平均值之差
SD
n
(xi x)2
i 1
n 1
▪ 相对标准偏差
RSD SD 100% x
▪ 含量测定：配制80%、100%和120%三个浓度。回收率在98.0%-102.0%之 间，RSD ≤2.0%
▪ 定量杂质：配制浓度根据有关物质定量限和该杂限度。回收率在80%120%之间（杂质浓度为定量限时放宽至70%-130%），RSD ≤10%
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Venturepharm PDS
1. 方法验证的主要内容 ➢ 准确度
1. 方法验证的主要内容
➢ 专属性——方法不受杂质、降解物、辅料的影响，可正确鉴定被分析物
▪ 鉴别反应：仅被分析物呈正反应，阴性对照呈负反应，结构相似及组分中 的有关化合物也呈负反应。
▪ 杂质检查：加入的杂质可与共存物质分离并被检出 与原理不同的可信方法比较；强制降解
▪ 含量测定：比较加入杂质或辅料前后的测定结果 与可信方法比较测定结果（强制降解样品）
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Venturepharm PDS
1. 方法验证的主要内容 ❖ 验证内容：
➢ 专属性 ➢ 线性
中国药典2010年版二部附录ⅪⅩ A 药品质量标准分析方法验证指
导原则
➢ 范围
➢ 准确度
➢ 精密度（重复性、中间精密度和重现性）、
➢ 检测限和定量限
➢ 耐用性
➢ 系统适用性
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Venturepharm PDS
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Venturepharm PDS
1. 方法验证的主要内容 ➢ 范围——能达到一定准确度、精密度和线性的浓度区间，为规定值
▪ 涉及到定量测定的检测项目均需要对范围进行验证，如含量测 定、含量均匀度、溶出度或释放度、杂质定量试验等。
▪ 分析方法的范围应根据具体分析方法以及对线性、准确度、精 密度的结果和要求确定，无特殊要求时，通常采用以下标准：
➢ 线性——在设计的测定范围内，样品浓度与响应值呈线性关系
▪ 线性是定量测定的基础，设计定量测定的项目，如 杂质定量检查、含量和溶出方法均需要验证其线性
▪ 可用同一贮备液精密稀释后配制，或分别精密称样 配制。
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Venturepharm PDS
1. 方法验证的主要内容
➢ 线性——在设计的测定范围内，样品浓度与响应值呈线性关系
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Venturepharm PDS
1. 方法验证的主要内容
➢ 精密度——多次取样测定同一均质供试品所得结果间的接近程度
▪ 使用SD和RSD表示时取样测定次数应至少6次。
重复性：同一分析人员在相同条件下测定结果的精密度； 可采用3样各测3次或1样测6次 含量测定RSD ≤2.0%，杂质定量RSD ≤15%
空白对照应无干扰，主成分与各杂质峰 （该杂质峰与其他峰）R≥2
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Venturepharm PDS
1. 方法验证的主要内容
➢ 专属性试验中需要注意的问题
▪ 波长的选择； ▪ 每次试验时必须运行空白样品； ▪ 试剂、玻璃容器、流动相和过滤介质可能会影响方法的
专属性。
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Venturepharm PDS
1. 方法验证的主要内容
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Venturepharm PDS
1. 方法验证的主要内容
➢ 准确度——方法测定结果与真实值或参考值的接近程度，用回收率表示
▪ 配制三个浓度下各三个样品，共九个样品平行两次测定
回收率：辅料+对照品 加样回收率：样品+对照品（扣除本底值）
能否得到制剂 的全部组分？
Q：制剂中某已知杂质的回收率如何测定？(含已知量被测物的各组分混合物)
化药质控分析方法验证和杂质研究
质控分析方法验证
1. 方法验证的主要内容 2. 含量方法验证可接受标准 3. 有关物质方法验证可接受标准 4. 溶出方法验证可接受标准
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Venturepharm PDS
质控分析方法验证
1. 方法验证的主要内容 2. 含量方法验证 3. 有关物质方法验证 4. 溶出方法验证
被测物进行测定（加样回收试验法） 3. 用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果
进行比较
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Venturepharm PDS
1. 方法验证的主要内容
➢ 准确度
▪ 杂质 ：
1. 往样品中加入已知量的杂质进行测定； 2. 若不可能得到某种杂质或降解产物，可把此方法的分析
结果与另一已验证的或药典的分析方法获得的结果进行 比较 。
含量同测时，为杂质限度的-20%至含量上限的+2
1. 方法验证的主要内容 ➢ 准确度——方法测定结果与真实值或参考值的接近程度，用回收率表示
▪ 准确度是定量测定的必要条件，涉及到定量测定的检测项目均需 要验证其准确度，如杂质定量测定、含量和溶出方法。
▪ 分析方法的准确度能够确保： 1. 样品中的待测物全部溶解 2. 待测物全部从检测器中检出