ATP生物发光检测方法
ATP荧光检测仪使用说明解析
ATP荧光检测仪使用说明解析ATP荧光检测仪是一种用于快速检测水、食品、医疗设备、医疗器械、表面清洁、消毒和环境卫生等领域中生物负载和卫生问题的仪器。
它可以通过检测和测量样品中存在的三磷酸腺苷(ATP)的浓度来判断样品的卫生状况，从而评估清洁程度和卫生质量。
ATP荧光检测仪的工作原理是基于生物发光技术。
ATP是一种生物能量分子，存在于所有活细胞中。
ATP荧光检测仪使用酶(luciferase)和底物(d-luciferin)反应，产生可见光的生物发光，其强度正比于样品中的ATP浓度。
通过荧光光谱仪检测到的荧光强度，可以对样品进行定量分析。
在使用ATP荧光检测仪之前，首先需要准备样品收集器。
样品收集器是存储待测物的载体，可以是刷子、海绵或者其他合适的材料。
收集器需要提前清洗和消毒，确保样品不受污染。
开始检测之前，需要打开ATP荧光检测仪，并将其置于一个干净的工作台上。
仪器通常配备了一个显示屏，用于显示检测结果和设置参数。
接下来，将准备好的样品收集器放入一个干净的容器中，加入适量的溶液，使样品溶解。
然后，将样品收集器插入ATP荧光检测仪的检测槽中，并关闭检测槽的盖子。
确保检测槽紧密封闭，以防止外部光线的干扰。
然后，在仪器上选择适当的测试参数和荧光信号积分时间。
一般来说，积分时间越长，检测结果的准确性越高。
设置好参数后，点击开始测试按钮，并等待一段时间，以获取稳定的荧光信号。
测试完成后，仪器将显示荧光信号的数值。
这个数值表示样品中的ATP浓度，可以根据预设的标准或者参考值对结果进行评估。
一般来说，ATP浓度越高，样品的卫生状况越差。
在使用完ATP荧光检测仪之后，要及时清洁检测槽和样品收集器，并储存起来。
清洗过程可以使用水和适量的清洁剂进行，确保仪器的可靠性和使用寿命。
总结起来，ATP荧光检测仪是一种基于生物发光技术的仪器，用于快速检测样品的卫生状况。
使用时需要准备好样品收集器，将样品收集器插入检测槽中，并设置适当的参数开始测试。
LBY-420ATP生物荧光检测仪使用说明书
目录一、操作原理二、使用准备三、基本操作四、时钟设置和调整五、设定检测结果上下限六、标本检测和检测结果七、将检测结果传输到PC机八、仪器蜂鸣九、故障一览十、错误代码十一、技术参数ATP生物荧光检测系统一、操作原理ATP生物荧光检测仪利用生物化学发光技术将不可见的ATP浓度变为可见光输出，从而以定量的结果间接显示微生物数量，数值位于0—9999之间，以相对光单位RLUs表示。
虽然RLU并不是一个实实在在的光强度单位，但它能够为ATP生物化学发光检测提供一种真实的检测方法。
1RLU约等于1fmol的ATP。
RLU读数可以与用户设定的限值范围相比较，提供全面的结果限值，即通过、警戒或不通过。
为了确保您在使用ATP生物荧光检测系统时，能够得到及时准确的测试结果，请您注意以下内容：使用前请仔细阅读用户手册。
该手册适用于ATP。
ATP生物荧光检测仪务必与ATP荧光采样棒配套使用。
光盘一、使用之前请在使用之前仔细阅读用户手册，掌握本仪器的系统组成和使用方法。
请按ATP 荧光检测系统注明的组件内容，确认您购买的产品是否完整。
主机皮套AA 电池 数据线ATP荧光检测仪各部件组成液晶显示屏：显示测试过程及测试结果。
上盖：用以遮挡光线铭牌：显示仪器型号以及序列号。
电池后盖：用以安装两节AA电池。
上升键：查看上一组测试结果，并具有其他菜单选择结果。
下降键：查看下一组测试结果，并具有其他菜单选择结果。
确认键：按键开始检测。
限值选择按键：按键进入限值设置。
时间键：按键进入时间设置。
开关键：按键开关机。
特殊功能键：具有其他一些特殊功能，如进入删除界面等。
仪器上盖内部结构拭子插口：容纳ATP采样拭子数据接口：通过数据线可将数据传输到PC上。
2.3仪器显示存储说明：检测编号三位数字后面的1是表示第一组，001到999的编号。
三位数字后面的2表示第二组，000到999的编号。
如：048 2可以看作是第1048个编号。
2.4 安装电池：本机需要两节普通AA电池。
ATP检测方法
ATP检测方法1.电泳法：根据核苷酸分子同时携带酸碱基团，在一定条件下，利用其在电场中的迁移速度不同而实现分离。
1)纸电泳法：将电场加在浸泡过缓冲液的滤纸上，使ATP与其他杂质分离，再利用比色法测定ATP的吸收值，计算其含量。
此法是卫生部及地方采用的ATP标准检测方法。
2)凝胶电泳法：根据介质不同，可分为聚丙烯酰胺电泳法（PAGE），SDS-PAGE和琼脂糖凝胶电泳法，前两种方法常用于生物机制的研究。
琼脂糖凝胶电泳法是以琼脂糖为介质，柠檬酸为缓冲液，利用电泳将ATP与杂质分离，实现ATP含量检测。
3)毛细管电泳法：以毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，利用各组分间淌度和分配行为上的差异，实现ATP与杂质的分离。
2.光学分析法：因其操作简单、仪器要求低，常用于科研领域的ATP含量分析。
1)分光光度法：采用ATP试剂盒，因ATP腺嘌呤碱基上存在共轭双键，在紫外下有吸收峰，可用紫外分光光度法检测ATP含量。
2)生物发光法：利用荧光素在荧光素酶的作用下，与ATP发生反应，生成荧光素-ATP复合体，该复合体被分子氧氧化后激发荧光素发光，根据发光强弱可检测ATP含量。
3.层析法：利用样品各组分之间亲和力、分配系数等化学性质的差异，实现ATP与其它杂质的分离。
1)纸层析法：是检测核苷酸含量的常用方法之一。
该方法常以异丙醇、浓氨水和水按7：1：2的混合作为展开剂。
2)薄层层析法：该方法纸层析法原理基本相同，也是检测核苷酸含量的常用方法之一，其常用的展开剂是正丁醇、丙酮、冰乙酸、氨水、水按7：5：3：3：2的比例混合而成。
3)离子交换色谱法：利用样品各组分离子交换能力或选择系数之间的差异，实现分离，常用于工业生产中ATP含量检测。
4)高效液相色谱法：此方法具有强大的分离能力，操作简单，分析时间短，灵敏度高，结果准确，是目前应用最广泛的一种ATP检测方法。
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三磷酸腺苷生物发光法
三磷酸腺苷生物发光法摘要：一、引言二、三磷酸腺苷（ATP）的作用与意义1.生物学功能2.在生物发光中的应用三、生物发光法的原理1.发光生物分子的合成2.发光反应的触发与调控四、三磷酸腺苷生物发光法的实验操作步骤1.制备发光生物分子2.添加三磷酸腺苷3.激发发光反应4.检测与分析发光信号五、应用领域与前景六、总结与展望正文：一、引言三磷酸腺苷（ATP）作为生物体内能量的主要载体，其含量和分布对生物体的生理功能具有重要意义。
近年来，随着生物发光技术的发展，三磷酸腺苷生物发光法在生物学、医学等领域的研究中得到了广泛应用。
本文将对三磷酸腺苷生物发光法的原理、实验操作步骤及其应用领域进行详细介绍。
二、三磷酸腺苷（ATP）的作用与意义1.生物学功能ATP是生物体内能量的主要来源，通过其磷酸键的水解，释放出大量的能量，供给细胞进行各种生物活动。
ATP在细胞内的浓度梯度对于许多生物学过程，如细胞内物质的运输、生物大分子的合成与降解等，具有调控作用。
2.在生物发光中的应用ATP在生物发光过程中的作用主要体现在两个方面：一是作为能量源，为发光生物分子提供能量；二是作为发光反应的底物，参与发光过程。
在生物发光法中，ATP的浓度与发光强度成正比，从而可以间接反映生物体内能量代谢的水平。
三、生物发光法的原理1.发光生物分子的合成生物发光是由生物体内某些特定分子在受到激发后，通过发光反应产生的。
常见的发光生物分子有荧光素、荧光蛋白等。
在实验室中，可以通过基因重组技术或化学合成方法制备这些发光生物分子。
2.发光反应的触发与调控生物发光反应通常在特定条件下进行，如温度、pH值、酶的催化等。
在反应过程中，发光生物分子受到激活，产生发光现象。
ATP作为能量源，在反应中被消耗，使发光强度与ATP浓度呈动态平衡。
通过调控ATP的浓度，可以实现对发光强度的调节。
四、三磷酸腺苷生物发光法的实验操作步骤1.制备发光生物分子根据研究需要，通过基因重组技术或化学合成方法制备发光生物分子。
生物学发光检测法(ATP)
目
CONTENCT
录
• 引言 • ATP发光检测法的基本原理 • ATP发光检测法在生物学研究中的
应用 • ATP发光检测法的实验方法与技术 • ATP发光检测法的数据分析与解读 • ATP发光检测法的发展趋势与挑战
01
引言
目的和背景
研究目的
通过生物学发光检测法（ATP）快速、准确地检测和评估生物样本中 的活性细胞数量及其代谢状态。
ATP纯化
通过离心、过滤或层析等方法 去除提取液中的杂质和干扰物 质，以获得纯净的ATP溶液。
ATP定量
利用标准曲线法或比色法等方 法对提取的ATP进行定量，以 确定其浓度。
发光反应条件优化与信号检测
发光反应条件
优化反应体系中各组分的浓度和比例， 如荧光素、荧光素酶和ATP等，以获 得最佳的发光效果。
• 高通量筛选
适用于高通量药物筛选和细胞毒性评价，提高研究效率。
• 临床应用
可用于评估肿瘤细胞对药物的敏感性、预测疾病预后等， 为个性化医疗提供依据。
• 环境监测
可用于检测水体、土壤等环境中的微生物活性，评估环境 质量及生态毒性。
02
ATP发光检测法的基本原理
ATP与生物发光的关系
ATP（腺苷三磷酸）是生物体内能量传递的重要分子， 广泛存在于所有活细胞中。
生物发光现象与ATP水平密切相关，ATP浓度越高， 发光强度越大。
通过测量生物体内的发光强度，可以间接反映ATP含 量，从而评估细胞的活性、微生物污染程度等。
ATP发光检测法的反应机制
ATP与荧光素酶（Luciferase） 反应，生成氧化荧光素 （Oxyluciferin）并释放能量。
释放的能量激发荧光素 （Luciferin），使其从基态跃 迁到激发态。
ATP生物发光检测方法
优点
• 目前生物荧光反应法被广泛用于食品加工
条件的快速评价和食品中微生物的快速检 测，同时在HACCP管理中也被广泛用于关 键控制点检测，与传统检测方法不同之处 在于几分钟内可获得结果，而且荧光光度 计是便携式的，使用方便，适合现场检测， 不仅可以检测微小的污染物水平，还能检 测食品加工设备及其表面的清洁程度。
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检测仪器
• 结构原理 • 主要有三部分：自动进样单元、光电转换
单元和中，自动进样单元包括三套蠕动泵 。根据测试需要，
蠕动泵在控制单元控制下，向光电转换单元中的样品池加 入对应反应试剂。光电转换单元包括检测样品池和光电转 换器件。为消除外界光的干扰，整个光电转换单元被密封 在暗盒中。光电转换器件将反应释放荧光转化为电信号， 由信号采集处理单元采集并处理，并对测试结果进行实时 显示和存储。
放荧光强度的时间响应曲线。
• 本设计的针对细菌总数的检测仪具有检测速度快、
自动化程度高、操作简单、小型便携等特点，在 口岸、卫生监管部门、食品生产部门等对产品、 环境等的卫生状况进行现场快速检测领域具有很 好的应用前景。
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atp生物发光检测方法具有检测速度快成本低易于操作等特点aa22检测原理检测原理atpatp即即三磷酸腺苷三磷酸腺苷是广泛存在于生物体内的一种能量物是广泛存在于生物体内的一种能量物检测检测atpatp含量的一种方法是用含量的一种方法是用荧光光度计法荧光光度计法生物发光是生物发光是活细胞在活细胞在荧光素酶荧光素酶催化下发出的荧光目前使用的荧光素催化下发出的荧光目前使用的荧光素酶来源于北美的萤火虫相对分子质量为酶来源于北美的萤火虫相对分子质量为6200062000的蛋白质的蛋白质萤火虫荧光素酶简称萤火虫荧光素酶简称虫光素酶虫光素酶是一种能将化学能转变为是一种能将化学能转变为光能的活性蛋白质即生物催化剂
生物学发光检测法(ATP)
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使用方法----第一步
【SWAB】
1
球管 吸阀 棉拭棒
拭抹表面以获取标本,如需获 得清洗水溶液标本，则将棉拭 子浸入水中3到4秒钟。
棉拭子 检测管
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使用方法----第二步
[SNAP AND SQUEEZE]
将拭子插入检测管，用拇 指和中指捏住球管，轻挤球管 两次，挤出球管内液体。
2
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ATP检测技术实验结果准确可靠，值得信赖。美国多个专业 权威机构研究了1000个以上的样品，这种只需十几秒就能完 成检测的快速检测法所得实验结果90%以上与24-48小时标 准细菌培养法/平皿法所得结果一致
使细菌检查的工作量大幅度减轻，实现卫生监控的简捷化、 效率化，但只能用于细菌的定量分析，定性分析可用常规方 法进行培养检测。
通过检测ATP ，可以间接地 证明生物体的存在
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生物学发光检测法（ATP）
• 原理：ATP荧光检测仪基于萤火虫发光原理，利 用“荧光素酶—荧光素体系”快速检测三磷酸腺 苷（ATP）。由于所有生物活细胞中含有恒量的 ATP，细菌细胞裂解时会释放出ATP，ATP自细 菌细胞释放出来后，使用荧光虫素和荧光虫素酶 可使之释放出能量，这些能量产生莹光，光的强 度就代表ATP的量。ATP含量可以清晰地表明样 品中微生物与其他生物残余的多少，用于判断卫 生状况
食品快速检测
生物学发光检测法（ATP）
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ATP检测技术应用（国外）
20世纪80年代，英国首先研制出便携式ATP检测仪 随后在欧洲、美国、日本展开应用 应用范围涉及食品加工、超市、饮食、医药等行业 检测内容包括微生物和食品残渣
生物学发光检测法(ATP)
生物学发光检测法（ATP）
ATP检测技术应用（国外）
20世纪80年代，英国首先研制出便携式ATP检测仪 随后在欧洲、美国、日本展开应用 应用范围涉及食品加工、超市、饮食、医药等行业 检测内容包括微生物和食品残渣
检测技术应用（国内）
20世纪末，ATP检测技术被引进我国
当时，除个别省级卫生监督单位装备，主要在一些外资、
合资企业用于自检
2002年我国卫生部颁发了食品加工企业的HACCP实施指南， 鼓励食品加工企业引入ATP检测技术
2005年3月卫生部新出台《卫生监督机构建设指导意见》， 要求省、市、地配置
什么是ATP
ATP——三磷酸腺苷 【adenosine triphosphate， C10H16N5P3O13】存在于所有生物 体中，在细胞内主要作用是提 供能量 通过检测ATP ，可以间接地证 明生物体的存在
生物学发光检测法（ATP）
• 原理：ATP荧光检测仪基于萤火虫发光原理，利 用“荧光素酶—荧光素体系”快速检测三磷酸腺 苷（ATP）。由于所有生物活细胞中含有恒量的 ATP，细菌细胞裂解时会释放出ATP，ATP自细 菌细胞释放出来后，使用荧光虫素和荧光虫素酶 可使之释放出能量，这些能量产生莹光，光的强 度就代表ATP的量。ATP含量可以清晰地表明样 品中微生物与其他生物残余的多少，用于判断卫 生状况
[INSERT AND DETECT]
将检测管放入ATP荧光 检测仪中，盖上盖子，倒 计 时开始并检测。
ATP检பைடு நூலகம்反应原理
D-虫荧光素 荧光素酶 O2+Mg2+
氧化荧光素 PPi+AMP
ATP
光（RLU）
植物 微生物
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ATP生物发光技术以生物体内的ATP作为检测 对象，不仅包括细菌（大肠杆菌，沙门氏菌， 志贺氏菌等），也包括体细胞在内的食品残 渣等食品污染物，因此适合在食品卫生检测 领域对卫生状况进行快速检测。 ATP生物发光检测方法具有检测速度快、成本 低、易于操作等特点
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检测原理
• ATP即三磷酸腺苷，是广泛存在于生物体内的一种能量物
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检测仪器
• 结构原理 • 主要有三部分：自动进样单元、光电转换
单元和信号采集处理及控制单元
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• 其中，自动进样单元包括三套蠕动泵 。根据测试需要，
蠕动泵在控制单元控制下，向光电转换单元中的样品池加 入对应反应试剂。光电转换单元包括检测样品池和光电转在暗盒中。光电转换器件将反应释放荧光转化为电信号， 由信号采集处理单元采集并处理，并对测试结果进行实时 显示和存储。
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• 图中各响应曲线400 s内的测量值进行积分，作为各浓度
样品的输出信号。输出信号与浓度的关系如图5所示。由 图可以看出，输出信号随浓度增加而增加，且有明显梯度， 两者的线性相关系数达到0.986。这一结果说明本检测系 统可以对ATP浓度进行快速检测。由于细菌细胞中所含 ATP含量基本一致，因此，本检测仪可实现对细菌总数的 现场快速检测。
放荧光强度的时间响应曲线。
• 本设计的针对细菌总数的检测仪具有检测速度快、
自动化程度高、操作简单、小型便携等特点，在 口岸、卫生监管部门、食品生产部门等对产品、 环境等的卫生状况进行现场快速检测领域具有很 好的应用前景。
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• 实验选择标准ATP样品作为检测对象，浓度
范围为10-6～10-14mol／L，实验中所用荧 光素及荧光素酶购自美国普洛麦格公司。 实验采用联机测量方式，将本检测仪与计 算机通过。RS232接口相连接，仪表信号采 集单元采集荧光信号后直接上传至计算机 并将测试结果实时显示。测量结果如图4所 示。
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• 在反应中，加入发光反应试剂时，体系中样品浓
度相对较高，因此在短时间内即迅速反应释放大 量荧光，此时荧光光强较强，因此测量结果可能 会超出系统的测试量程。由于本仪表的最大输出 电压为2500 mV，反应初期释放的荧光可能会超 出该范围，在图中表现为前端的水平直线。随着 反应进行，体系中样品和试剂的浓度逐渐降低， 所释放荧光随之逐渐衰减。由图可见，不同样品 浓度的ATP随反应进行，进入测量量程的时间不 同，浓度越高，衰减越慢，进入测量量程的时间 越长，反之越短。
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• 。该检测仪在对现有产品进行分析的基础上，选
择H5773-02光电倍增管作为光电转换器件，其检 测波长与生物发光反应所释放荧光波长一致，可 有效提高检测灵敏度。
• 采用自动加样技术，在暗室内加入发光反应试剂，
消除了外界光的干扰，且获得了反应最初的信号。
• 将检测仪与计算机连接测量，获得了各反应所释
质
• 检测ATP含量的一种方法是用荧光光度计法，生物发光是
活细胞在荧光素酶催化下发出的荧光，目前使用的荧光素 酶来源于北美的萤火虫，相对分子质量为62000的蛋白质
• 萤火虫荧光素酶简称虫光素酶，是一种能将化学能转变为
光能的活性蛋白质，即生物催化剂。ATP在虫光素酶的催 化作用下，与荧光素在有氧环境及二价镁离子作用下，反 应释放出荧光。当荧光素及虫光素酶过量情况下，释放的 荧光与ATP在一定范围内成线性关系，因此可以通过测量 荧光光强检测样品中的ATP，进而检测其中的细菌总数。
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优点
• 目前生物荧光反应法被广泛用于食品加工
条件的快速评价和食品中微生物的快速检 测，同时在HACCP管理中也被广泛用于关 键控制点检测，与传统检测方法不同之处 在于几分钟内可获得结果，而且荧光光度 计是便携式的，使用方便，适合现场检测， 不仅可以检测微小的污染物水平，还能检 测食品加工设备及其表面的清洁程度。