奥扎格雷钠注射液无菌检查方法适用性试验
建立注射用奥扎格雷钠无菌检查方法
表 ３金黄色葡萄球 菌的生长情况
表 ４ 供试品对其它试验 菌的试验结果
培 养 基 管 微 生 物 生 长 情 况 ２ ． １ ． １ 无菌性检查 。依法配制硫 乙醇酸盐培养 基和改 良马丁培 大 肠 埃 希 菌 养基 ， 每批培养基随机取 ５支 ， 按照培养条件 ， 培养 ｌ ４天 ， 逐 日观察 大 肠 埃 希 菌 ＋ 供 试 品 枯 草 芽 孢 杆 菌 结 果。结果 表明 ： 各培养基均无菌生长 。 枯 草 芽 孢 杆 菌 ＋供 试 品 ２ ． １ ． ２灵敏度检查 。取 ９支装 量为 １ ２ ｍ ｌ 的硫乙醇酸盐流体培养 生 孢 梭 菌 生 孢 梭 菌 ＋供 试 品 基 分别 接种含菌量小于 ｌ Ｏ Ｏ ｃ ｆ ｕ的金黄色葡萄球菌 、大肠埃希菌 、 枯 白 色 念 珠 菌 草牙孢 杆菌 、 生孢梭菌各 ２支 ， 另１ 支为空 白对 照。培养 ３天 ， 逐日 白 色 念 珠 菌 ＋ 供 试 品 ＋ 观察结 果 ， 见表 １ 。取 ３支装量为 ９ ｍ ｌ 的改 良马丁培养基 ， ２ 支接 种 小于 ｌ Ｏ Ｏ ｃ ｆ ｕ的 白色念珠菌 ， 另１ 支 为空 白对 照。培养 ５天 ， 逐 日观 察结果 ， 见表 ２ 。 ２ ． ２试验方法验证 ２ ． ２ ． １ 冲洗液的制备。取蛋 白胨 １ ． ０ ｇ ， 加水 ｌ Ｏ ０ ０ ｍ ｌ ， 微温溶解 ， 滤 清， 调节 ｐ Ｈ值 至 ７ ． １ ±０ ． ２ ， 分装 ， 灭菌 。 ２ ． ２ ． ２考察加冲洗液 的检 查方法 。取本 品 ２ ０支 ， 每 支分别加入 适量生理盐水溶解后 ， 在溶液中加入少于 ｌ Ｏ Ｏ ｃ ｆ ｕ的金黄 色葡 萄球 菌 液ｌ ｍｌ ， 混匀 ， 采用开放式滤器过滤 ， 以０ ． １ ％蛋 白胨水 溶液作为 冲洗 液， 冲洗量 ３ ０ ０ ｍｌ 。取滤膜放人 ５ ０ ｍ ｌ 的硫 乙醇 酸盐培养基 。另取一 装有 同体积培养基 的试管 ，加入等量 的金 黄色葡萄球 菌液 ｌ ｍ ｌ ， 作 为对 照 ， 在３ ０ ～ ３ ５ ￣ Ｃ温度 下培养 ３ ５天 ， 考 察金黄色葡 萄球 菌的生 成情况 ， 结果见表 ３ 。上述结果表明 ， 本 品按上述方法检查时对金黄 色葡萄球菌不体现抑菌性 。 ２ ． ２ ． ３其他试验菌考察 。以同样的方法 对其余 ４种试验 菌逐一 阴性对 照 一 试验 ， 其 中大肠埃希茵 、 枯草 芽孢杆菌 、 生孢 梭菌加 到 ５ ０ ｍ ｌ 硫 乙醇 阳 性 对 照 ＋ ＋ 酸盐流体培养基 中， 白色念珠菌 、 黑 曲霉加到 ５ ０ ｍ ｌ 改 良马丁培养基 ” 表示呈阴性反应 ， “ ＋ ” 表示呈 阳性反应 ， “ ＋ ＋ ” 表示生长 良好。 中， 其他同上操作 ， 结果见表 ４ 。从表 ４可 以看 出： 在规定的时限内 ， Ｏ Ｉ １ １ １ 的硫 乙醇酸盐流体培 养基和改 良马丁培养基 的试管 中 ， 另 与对照管 比较 ，各培养管 中含供试 品的试验菌均 同样生长 良好 ， 说 到 ５ 份作为供试 品阳性对 照加 到含金黄 色葡 萄球 菌的培养 管中 ， 按规 明供试 品在该检查条件下无抑菌作用 。 可照此条件进行供试 品的无 定的温度培养 ４ ８～７ ２小时。同时取相应 的溶剂 、 冲洗液同法操作 ， 菌检查 。 作为阴性 对照。结果见表 ５ 。 ３供试 品的无菌检查方 法 结果表明 ： 上述试验具有可操作性 。 取注射用奥扎格雷钠 同一批号 的供 试品 ６ ０支 ，每支加入适量 参考文献 生理 盐水溶解 后 ， 混匀 ， 采用 开放式 滤器过滤 ， 以０ ． １ ％蛋 白胨水 溶 １ １ 中国药典（ ２ ０ １ ０年版 ） ． 液作为 冲洗液 ， 冲洗量 ３ ０ ０ ｍ ｌ 。取出滤膜分成三份 ， 其 中两份分别加 『 『 ２ １ 中国药品检验标准操作规 范（ ２ ０ １ ０年版 ） ．
注射液无菌检查的方法学验证方案
注射液无菌检查方法（中国药典2010版）验证方案验证方案编号：2010•MEF•041•05•004起草单位(Composed by)：质检部(QC Department)起草人(Composer)：日期(Date)：审核人(Reviewed by QC)：日期(Date)：审核人(Reviewed by QA)：日期(Date)：批准人(Approved by)：日期(Date)：目录1. 验证目的2. 验证人员3. 验证依据及参考文件4. 仪器与设备5. 验证过程5.1 培养基及稀释液5.2 菌液的培养与制备5.3 方法验证试验6. 验证总结1. 验证目的：本试验是注射液的抑细菌、抑真菌活性及所用的无菌检查方法的可靠性进行验证，以确认该产品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性已被充分消除至可以忽略。
即：保证所用的无菌检验方法能对该产品进行准确、可靠的检验。
2. 验证人员：验证小组组长：刘长宏验证小组副组长：宋芳良验证小组成员：曲晓燕、常西胜3. 验证依据及参考文件：验证依据：中华人民共和国药典2010版二部参考文件：2010年版中国药典无菌检查方法、验证操作学习班讲稿汇编（中国药品检验所）4. 仪器与设备XG1.DM-0.36B型机动门脉冲真空灭菌器细菌培养箱霉菌培养箱净化工作台5. 验证过程：5.1 培养基及稀释液5.1.1 培养基及稀释液的配制按“中国药典2010版二部附录Ⅺ H无菌检查法”中，有关规定配制本验证所需培养基:5.1.2培养基的适用性检验5.1.2.1 培养基无菌性检查从以上培养基及稀释液中，每批随机取5支（瓶），培养14天，应无菌生长。
结果记录：结论：5.1.2.2 培养基灵敏度检查取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天，逐日观察结果。
无菌检验方法适用性试验方案
无菌检验方法适用性试验方案目录1.概述1.1试验背景为保证无菌检验结果的准确可靠，当建立产品的无菌检查法时，应进行方法的适用性试验，以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可以忽略不计，所采用的方法适合于该产品的无菌检查。
按照《中国药典》2015年版四部“通则1101无菌检查法”要求，检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，检查方法应进行重新试验。
根据2015年版药典及药品微生物实验室质量管理指导原则要求，检测环境由原来的为C级背景下局部A级空气单向流，在层流净化工作台下进行无菌检测，变更为在C级背景下，无菌检查ORABS隔离系统中进行无菌检测,且由原来的臭氧消毒，变更为臭氧+过氧化氢灭菌消毒；培养基发生变更：由培养真菌用的改良马丁培养基变更为胰酪大豆胨液体培养基，培养温度由23-28℃变更为20-25℃，现针对XXX注射液进行适用性试验，以证明所采用的方法适合该药品的无菌检查。
1.4方案说明验证过程中严格按照经批准的方案规定的内容进行，若因特殊原因需要变更时，应填写方案变更申请及批准书，报试验领导小组批准。
2.确认目的按照《中国药典》2015年版四部“通则1101无菌检查法”规定对小儿氨基酸注射液无菌检查方法进行试验，在现有检验程序、检测条件及培养条件下，对该供试品的适用性试验进行确认，证明所采用的方法适合该药品的无菌检查。
验证过程中应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写验证方案变更申请及批准书，报验证领导小组批准。
3.小组人员4.风险评估4.1风险等级标准A.严重程度（S）：测定风险的潜在后果，分为以下四级：B.可能性程度(P)：测定风险产生的可能性，为建立统一基线，建立以下四个等级：C.检测能力（D）：在潜在风险造成危害前，检测发现的可能性，设为以下四个等级：风险分析及评价：根据确定的风险标准对已经识别并分析的风险进行评价，即通过评价风险的严重性和可能性从而确认风险的等级。
奥扎格雷钠的临床应用
奥扎格雷钠的临床应用作者:作者：张梅兰孟笑梅作者单位：050011 石家庄市，河北省直属机关第二门诊部药剂科（张梅兰）;河北省人民医院（孟笑梅）来源：医学期刊/ 医药科学综合收藏本文章【关键词】奥扎格雷钠奥扎格雷钠注射液又名晴尔或丹奥，作为一种选择性血栓素A 2 （TXA 2 ）合成酶抑制剂，可抑制TXA 2 的生成，同时可促进前列环素（PGI 2 ）产生，是一种新型抗血小板聚集药物，主要用于治疗脑梗死及其所伴随的运动障碍，也可用于其他疾病的治疗，现将其近年来的临床应用综述如下。
1 治疗急性脑梗死急性脑梗死发病机理是脑动脉供血区局部缺血引起脑细胞的能量代谢障碍，导致兴奋性神经递质的释放，钙离子过量内流，自由基产生一系列反应，最终导致神经细胞坏死，功能障碍。
脑梗死发生后出现中心坏死区和周围缺血半暗带区，特别是半暗带区，这部分脑血流是可逆的，脑组织是可能恢复功能的。
奥扎格雷钠的作用机理是:特异性地抑制TXA 2 合成酶，降低体内TXA 2 的浓度，促进PGI 2 的生成，改善TXA 2 和PGI 2 的平衡关系，从而抑制聚集、阻滞血栓形成，同时改善大脑局部缺血时的微循环和能量代谢，使受损的脑组织供血、供氧充足，神经细胞的损伤得以恢复。
苏汉文等［1］将95例急性脑梗死患者随机分为治疗组48例和对照组47例，治疗组用奥扎格雷钠注射液，对照组用尿激酶，同时2组患者视病情需要加用降压、降糖、降脂药物，不用其他抗血栓药物。
证明有效率治疗组（P<0.05）和对照组（P<0.01）之间差异均有显著性;在神经功能缺损评分与生活能力改善方面治疗组与对照组比较（P<0.01）差异有显著性。
奥扎格雷钠作为一种新型抗血小板以有效恢复神经功能的缺失，提高了急性脑梗死的治疗有效率，是治疗脑梗塞有效而安全的药物。
2 治疗脑出血奥扎格雷钠可改善脑出血周围水肿及半暗区血液供应，并可促进血肿吸收，减轻血肿周边水肿，增加脑细胞氧饱和度，促进神经细胞恢复，调节血脂代谢，增强机体免疫功能。
2022版小容量注射剂无菌检查方法适用性试验报告范文
2022版小容量注射剂无菌检查方法适用性试验报告范文某某某某有限公司第1页共6页某某某某有限公司无菌检查方法适用性试验报告第2页共6页起草人_____________审核人_____________批准人_____________部门____________部门____________日期___________日期___________日期___________无菌检查方法适用性试验报告第3页共6页1、概述为本公司主要产品之一，本产品规格为：，已进行批量生产并已进行工艺验证,由于《中华人民共和国药典》2022年版对无菌检查方法作了修改，其产品的无菌检查方法和培养基发生改变，可能影响检验结果的准确性。
为确保检测方法的准确性及适应性、测定方法的可靠性进行验证，根据该产品特性拟采用薄膜过滤法进行无菌检查，并按制定的方法及条件进行试验，根据验证结果判断该产品是否合适采用该方法进行无菌检查。
2、验证依据：《中华人民共和国药典》2022版四部通则1101无菌检查法。
3、验证目的建立该产品的无菌检查方法，并对其有效性进行评价，确保试验方法的准确性与适用性，保证检验结果的可靠性。
4、验证小组成员及职责人员姓名组长副组长成员职位质量部经理质量部QC主任职责质量负责人负责验证报告的审核、批准。
1.负责对确认记录、数据进行复核，确认报告的总结。
2.负责对验证及检验记录、数据、结果进行分析和汇总。
1、负责验证报告的起草检验人员2、负责检验数据的收集、记录的填写5、主要验证用仪器仪表的校验仪器名称立式压力蒸汽灭菌器生化培养箱超净工作台无菌隔离器规格型号检定/验证情况检定/确认部门结果：确认人：日期：无菌检查方法适用性试验报告第4页共6页6、验证用菌种及培养基菌种名称大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌生孢梭菌白色念珠菌黑曲霉培养基、缓冲液名称硫乙醇酸盐流体培养基胰酪大豆胨液体培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液0.1%无菌蛋白胨水溶液试验员无菌检查方法适用性试验报告第5页共6页7、试验菌液制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30-35℃培养18-24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基中，20-25℃培养24-48小时。
11注射用奥扎格雷钠质量标准
一、标准来源：国家食品药品监督管理局标准YBH19592006。
二、范围：注射用奥扎格雷钠的生产与质量控制。
三、责任：生产部、冻干粉针剂车间、质量部有关人员。
四、质量标准：注射用奥扎格雷钠Zhusheyong AozhageleinaOzagrel Sodium for Injection本品为奥扎格雷与适量氢氧化钠制成的无菌冻干品。
按平均装量计算，含奥扎格雷钠(C 13H 11N 2NaO 2)应为标示量的93.0％～107.0％。
【取样】 每批灯检后，QC 人员按《取样标准操作规程》（文件编号：SOP-QC-01-001/02）进行取样。
【性状】 本品为白色或类白色疏松块状物或粉末。
【鉴别】(1) 取本品10mg ，加枸橼酸醋酐试液lml ，于热水中加热，即显深红色。
(2) 取[含量测定]项下的溶液，照紫外—可见分光光度法(中国药典2010年版二部附录 Ⅳ A)测定，在274nm 的波长处有最大吸收，在233nm 的波长处有最小吸收。
(3) 本品显钠盐的鉴别反应(中国药典2010年版二部附录 Ⅲ)：①取铂丝，文件名称 注射用奥扎格雷钠质量标准 文件编号 TS-QM-01-211/03 编 制 人审 核 人 批 准 人 编制日期审核日期 批准日期 颁发部门 分 发 号 生效日期发送单位 档案室、质量部、生产部、冻干车间、化验室变更历史 2009年9月因厂址搬迁进行第一次修订；2012年6月因新版GMP 、公司名称和组织机构变动进行第二次修订2012年12月文件需增加产品代码、包装等内容，进行第三次修订。
用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色的火焰中燃烧，火焰即显鲜黄色。
②取供试品100mg，置10ml试管中，加水2ml溶解，加15%碳酸钾溶液2ml，加热至沸腾，应不得有沉淀生成；加焦锑酸钾试液4ml，加热至沸腾；置冰水中冷却，用玻棒摩擦试管内壁，应有致密的沉淀生成。
【检查】碱度取本品，加水制成每lml中含奥扎格雷钠20mg的溶液，依法测定(中国药典2010年版二部附录Ⅵ H)，pH应为8.0～9.5。
HPLC法测定注射用奥扎格雷钠的含量
８ ４・
Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ法测定注射用奥扎格雷钠
徐小 梅 程 庆兵
【 中图分类号 】 Ｒ ９ ７ １
－
【 文献标识码】 Ａ 【 文章编号】 １ ６ ７ １ — ８ ０ ５ ４ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ５ － ０ ０ ８ ４ — ０ ３
【 摘 要】 目的： 建立注射用奥扎格雷钠的含量测定方法。方法： 采用 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ法， 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂， 乙腈
结论 ： Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ法测定注射 用奥扎 雷钠含 量的方法准确 可靠 ， 重现性好 ， 可作 为该制 剂质量控制的方 法。 【 关键词 】 注射用奥扎格雷钠 奥扎 格雷钠 高效液相 色 谱法 含量测定
奥扎格雷钠 为血栓 素合 成酶抑制剂 ，能抑制 Ｔ Ｘ Ａ ２生成 ，因而具 有 抗 血小 板 聚 积 和扩 张血 管 作 用 。动物实验表 明， 静脉给药能降低血浆 Ｔ Ｘ Ｂ ２ 水 平， Ｋ ｅ ｔ ｏ — Ｐ Ｇ Ｆ １ ２ ／ Ｔ Ｘ Ｂ ２比值下降 ， 对不 同诱导剂所致 血小板聚集均有抑制作用 ，对大鼠中脑动脉引起 的 脑梗塞有预防作用。国家食品药品监督管理局标准 及文献报道多采用紫外分光光度法【 ｌ ＿ ３ 】 测 定其含量。 本文采用高效液相色谱法测定注射用奥扎格雷钠的 含量 ， 方法简便 ， 重复性好 ， 结果满意。 １ 仪 器 与试 药 １ ． １ 仪器 岛津 Ｌ Ｃ 一 ２ ０ Ａ Ｄ高效液相色谱仪 （ Ｄ Ａ Ｄ 检测器 ） ； Ｈ Ｕ １ ０ ３ ０ ０ ／ ４ ０ Ｂ超声波清洗器 （ 上海楚定分 析仪器有限公 司） ； ｘ ｐ 一 ２ ０ ５电子分析天平 （ 梅特勒 一 托利 多 ） 。 １ ． ２ 试药及试剂 奥扎格雷钠 对照 品 （ 中 国药 品 生 物 制 品 检 定 所 ；批 号 ： １ ０ ０ ８ ３ ７ — ２ ０ １ １ ０ ２ ；含 量 为 ｌ Ｏ 伽％） ； 注射用奥扎格雷钠（ 市售品， 批号 ： ２ ０ １ ２ ０ ５ ０ １ ， ２ ０ １ １ ０ ２ ２ ２ ， ２ ０ １ １ ０ ２ ７ ４ ） ； 甲醇（ 色谱纯 ， 美国 Ｔ Ｅ Ｄ Ｉ Ａ天 地试剂公 司 ） ； 乙腈 （ 色谱纯 ， 美国 ＴБайду номын сангаасＥ Ｄ Ｉ Ａ天地试剂 公 司） ； 乙醇（ 分析纯 ， 上海振兴化工一厂 ） ； 水为重蒸 馏水 ； 其他试剂均为分析纯。 ２ 方 法 与结 果 ２ ． １ 最佳检测波长的选择闭 奥扎格雷钠对照品溶 液在 ２ ０ ０～ ４ ０ Ｏ ｎ ｏ波长范围内进行紫外光谱扫描测 ｔ 定， 在２ ７ ７ ｎ ｍ有最大吸收 ， 故选择 ２ ７ ７ ｎ ｍ作为本 品 的检 测 波长 。图谱 见 图 １ 。 图 １ 检 测波 长
注射用奥扎格雷钠说明书
注射用奥扎格雷钠说明书通用名：注射用奥扎格雷钠生产厂家: 丹东医创药业有限责任公司批准文号：国药准字H10970307药品规格：20mg*4支药品价格：￥0元【药品名称】通用名称：注射用奥扎格雷钠商品名称：丹奥英文名称：Sodium Ozagrel for Injection【成份】奥扎格雷钠。
辅料：甘露醇【性状】丹奥为白色疏松冻干块状物。
【适应症】丹奥适用于治疗急性血栓性脑梗死和脑梗死所伴随的运动障碍。
【用法用量】成人每天2次，每次80mg4支，溶于500ml生理盐水或5%葡萄糖溶液中，连续静脉滴注，2周为一疗程。
【不良反应】胃肠道反应和过敏反应，如恶心、呕吐、荨麻疹、皮疹等，经适当处理后得到缓解。
少数可出现GpT、BUN升高，颅内、消化道、皮下出血及血小板减少等。
【禁忌】下列情况者禁用：1、出血性脑梗死，或大面积脑梗死深度昏迷者。
2、有严重心、肺、肝、肾功能不全，如严重心律不齐，心肌梗死者。
3、有血液病或有出血倾向者。
4、严重高血压，收缩压超过26.6kpa以上即200mmHg以上。
5、对丹奥过敏者。
【注意事项】丹奥避免与含钙输液林格氏溶液等混合使用，以免出现白色混浊。
【FDA妊娠药物分级】有充分证据证明，在对孕早期妇女进行的充分严格的对照研究中未见到对胎儿产生损害在其后6个月中也未见到危害证据【孕妇及哺乳期妇女用药】孕妇慎用。
【儿童用药】尚不明确。
【老年用药】尚不明确。
【药物相互作用】丹奥与抗血小板聚集剂、血栓溶解剂及其他抗凝药合用，可增强出血倾向，应慎重合用，必要时适当减量。
避免同含钙输液混合用。
【药理作用】丹奥为血栓素合成酶抑制剂，能抑制TXA2生成，因而具有抗血小板聚积和扩张血管作用。
动物实验表现，静脉给药能降低血浆TXB2水平，Keto-pGF12/TXB2比值下降。
对不同诱导剂所致血小板聚集均有抑制作用，对大鼠中脑动脉引起的脑梗死有预防作用。
【毒理研究】重复给药毒性：大鼠、狗静脉注射丹奥，大鼠高剂量组发现尿中电解质排泄量轻度增加，未见其他异常反应。
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奥扎格雷钠注射液无菌检查方法适用性试验发表时间：2018-03-05T11:28:42.313Z 来源：《中国医学人文》2017年第12期作者：张春景王晓旦王强周欣盈黄庆春[导读] 本文对奥扎格雷钠注射液的无菌检查方法进行试验研究，以确定奥扎格雷钠注射液的无菌检查方法的有效性。
浙江北生药业汉生制药有限公司浙江省 322100摘要：目的建立奥扎格雷钠注射液的无菌检查方法的适用性试验。
方法按《中国药典》2015年版四部无菌检查方法要求，采用薄膜过滤法，对奥扎格雷钠注射液（规格5 ml:80 mg）进行无菌检查方法适用性试验。
结果奥扎格雷钠注射液采用薄膜过滤法，以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌，进行无菌检查方法学验证，验证结果符合《中国药典》2015年版四部无菌检查方法适用性试验要求。
结论该方法可作为奥扎格雷钠注射液的无菌检查方法。
关键词：奥扎格雷钠注射液；无菌检查；薄膜过滤法；方法学适用性试验中图分类号：R284.1；R917.101 文献标志码：A 文章编号：1007-7693奥扎格雷钠注射液主要用于治疗急性血栓性脑梗塞和脑梗塞所伴随的运动障碍，及改善蛛网膜下腔出血手术后的脑血管痉挛收缩和并发脑缺血症状。
临床上也可联合用药，如与纳洛酮注射液联合用药治疗脑梗死。
与低分子肝素钙治疗不稳定型心绞痛效果显著，有助于改善患者血液流变学指标。
有研究表明奥扎格雷钠注射液对慢性阻塞性肺病有保护作用。
奥扎格雷钠注射液无抑菌性，可直接采用薄膜过滤法进行该产品的无菌检查。
本文对奥扎格雷钠注射液的无菌检查方法进行试验研究，以确定奥扎格雷钠注射液的无菌检查方法的有效性。
1 仪器与试剂1.1 供试品奥扎格雷钠注射液（规格：5 ml:80 mg；批号：1704271、1704272、1704273；），供试品均由浙江北生药业汉生制药有限公司提供。
1.2 培养基和试剂硫乙醇酸盐流体培养基（批号：150605）、胰酪大豆胨液体培养基（批号：150629）、胰酪大豆胨琼脂培养基（批号：1612262）、沙氏葡萄糖琼脂培养基（批号：1611283）、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（批号：1310292），培养基生产厂家均为北京三药科技开发公司。
聚山梨酯80（批号：20150608），生产厂家为国药集团化学试剂有限公司。
1.3 试验菌株金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC(B) 26003]、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC(B) 63501]、大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B) 44102]、白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC(F) 98001]、黑曲霉（Aspergillus niger）[CMCC(F) 98003]、生孢梭菌（Clostridium sporogenes）[CMCC(B) 64941]，菌种均来自浙江省食品药品检验研究院，所用菌种均为3代菌种。
1.4 仪器集菌培养器（杭州泰林生物技术设备有限公司）、隔水式电热培养箱（上海浦东荣丰科技仪器有限公司）、生化培养箱（上海申贤恒温设备厂）、电热手提压力蒸汽消毒器（上海医用核子仪器厂）、立式压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）、电热恒温鼓风干燥箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）、集菌仪（杭州高得(泰林)医疗器械有限公司）、生物安全柜（济南鑫贝西生物技术有限公司）。
2 方法与结果2.1 菌液制备接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌至胰酪大豆胨液体培养基中，30～35 ℃培养18～24小时。
取经培养的菌液培养物1 ml，加入9 ml pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，10倍稀释成含菌数不大于100 cfu的菌悬液，稀释级别为10-7、10-7、10-4、10-7，。
接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35 ℃培养18～24小时。
取经培养的菌液培养物1 ml，加入9 ml pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，10倍稀释成含菌数不大于100 cfu的菌悬液，稀释级别为10-5。
接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中，20~25 ℃培养24~48小时。
取经培养的菌液培养物1 ml，加入9ml pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，10倍稀释成含菌数不大于100cfu的菌悬液，稀释级别为10-5。
接种黑曲霉的新鲜培养物，至沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20~25℃培养5~7天。
取培养物，加入3ml含0.05%（ml·ml-1）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液将孢子洗脱，吸出孢子悬液转移至无菌空试管作为原液，加含0.05%（ml·ml-1）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10倍稀释成含菌数不大于100cfu的菌悬液，稀释级别为10-3。
2.2 试剂的制备培养基及所选的的溶剂按照《中国药典》2015年版四部无菌检查的规定进行配制、分装和灭菌后备用。
2.3 培养基适用性检查2.3.1 无菌性检查每批培养基随机取5瓶，硫乙醇酸盐流体培养基置30~35℃，培养14天，胰酪大豆胨液体培养基置20~25℃，培养14天，观察，无菌生长。
2.3.2 灵敏度检查取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种小于100cfu金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种，作为空白对照，培养3天；取每管装量为9ml的胰酪大豆胨液体流体培养基7支，分别接种小于100cfu枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种，作为空白对照，培养5天，逐日观察结果。
培养基的灵敏度检查符合规定。
结果见表1：表1 培养基灵敏度检查结果Tab 1 The medium sensitivity tests results注：+表示浑浊或有菌生长；“-”表示澄清或无菌生长。
下同。
Note: +, cloudy or bacterial growth; -, clear or no bacterial growth. The same as below.2.4 菌液计数2.4.1 分别取金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、生孢梭菌菌液1ml加入培养皿。
分别注入胰酪大豆胨琼脂培养基15~20ml，30~35℃培养3天，计数，每种菌液做两个平行样。
2.4.2 分别取白色念珠菌菌液、黑曲霉孢子菌悬液1ml加入培养皿，注入沙氏葡萄糖琼脂培养基约15~20ml，20~25℃培养5天，计数，每种菌液做两个平行样。
2.5 验证组的制备及培养2.5.1 试验菌对照组取一套三联封闭式集菌培养器，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液润湿滤膜，按无菌操作方法，直接在每个培养器内注入100ml硫乙醇酸盐流体培养基。
同法在三个封闭式集菌培养器内注入100ml胰酪大豆胨液体培养基。
将已注入硫乙醇酸盐流体培养基的三个集菌培养器中分别接种10倍稀释制成每1ml含菌数不大于100cfu的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌及生孢梭菌菌液。
置30~35℃温度，培养5天，逐日观察生长情况，并记录。
将已注入胰酪大豆胨液体培养基的三个集菌培养器中分别接种10倍稀释制成每1ml含菌数不大于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌及黑曲霉菌悬液。
置20~25℃温度，培养5天，逐日观察生长情况，并记录。
2.5.2 供试品试验组取供试品60支/每批，消毒供试品安瓿瓶外壁，分三组，每组20支。
取三套两联封闭式集菌培养器，照无菌检查法操作，将20支药液全部泵入两联集菌培养器（每批号供试品同法制备三组，得到六个加入供试品的集菌培养器），不加冲洗液，直接泵入培养基100ml，其中3个集菌培养器中泵入硫乙醇酸盐流体集菌培养，另外3个集菌培养器中泵入胰酪大豆胨液体培养基。
向已注入硫乙醇酸盐流体培养基的供试品3个集菌培养器中，分别接种10倍稀释制成每1ml含菌数不大于100cfu的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌及生孢梭菌菌悬液。
置30~35℃温度，培养5天，逐日观察生长情况，并记录。
向已注入胰酪大豆胨液体培养基的供试品的集菌培养器中，分别接种10倍稀释制成每1ml含菌数不大于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌及黑曲霉菌悬液。
置20~25℃温度，培养5天，逐日观察生长情况，并记录。
2.5.3 阴性对照组用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液润湿滤膜，按无菌操作方法，不加供试品、不加菌液，直接在每个培养器内注入100ml硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基。
2.5.4 供试品检查按供试品试验组的操作（不加试验菌液），对供试品进行无菌检查。
2.5.5 验证取三个批号供试品进行试验。
验证结果见下表2～5。
表2 菌液稀释级别及计数结果Tab 2 The dilution and cfu of bacteria liquid结果表明：供试品试验组和试验菌对照组培养器中实验菌均生长良好。
与试验菌对照组比较，含供试品各容器中的试验菌均生长良好，说明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计。
3 讨论3.1 薄膜过滤法《中国药典》2015年版要求“只要供试品性状允许应优先采用薄膜过滤法”，薄膜过滤法是将规定量的供试品或供试液通过薄膜过滤处理，使产品中可能存在的微生物过滤时被阻留、富集在微孔滤膜上，然后接种适宜的培养基，使滤膜上阻留的微生物得以生长繁殖到肉眼能观察到的状态而被检出。
奥扎格雷钠注射液无菌检查方法学验证采用封闭式薄膜过滤法进行，结果符合要求。
3.2 阳性菌选择根据《中国药典》2015年版通则无菌检查的规定，无抑菌作用及抗革兰阳性菌为主的供试品，以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌。
奥扎格雷钠注射液无抑菌性，无菌检查方法学验证阳性菌采用金黄色葡萄球菌，验证结果符合要求。
3.3 奥扎格雷钠注射液无抑菌性，采用直接过滤药液，无冲洗量。
试验过程中，为充分发挥滤膜的最大过滤效率，在过滤药液前先用pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液润湿滤膜。
3.4 采用上述方法对规格为5ml：80mg奥扎格雷钠注射液进行无菌检查方法学验证，验证结果符合《中国药典》2015年版的规定。
故可照此检査方法和检查条件进行供试品的无菌检查。
参考文献：[1]Wang C H, Yi L G.Study on the Compatibility Stability of Ozagrel Sodium for Injection and Injection Containing Fructose[J].Chin Pharm(中国药房), 2016，27(2):191-192.[2]Wang X W, Yu D Z, Fang X, On Bacterial Endotoxin Test For Ozagrel Sodium for Injection[J].Chinese Pharmaceutical Affairs(中国药事), 2017, 31(4):403-406.。