免疫分析技术和相关仪器
临床检验分析技术及仪器
临床检验分析技术及仪器1. 引言临床检验分析技术及仪器在现代医疗领域起着至关重要的作用，它们可以提供医生所需的实验数据以便做出准确的诊断和治疗决策。
本文将对几种常见的临床检验分析技术及仪器进行介绍。
2. 生化分析技术及仪器生化分析技术及仪器能够对体内的生物大分子（如蛋白质、酶、代谢产物等）进行分析，从而了解人体的健康状况。
其中，常见的仪器包括酶标仪、光谱仪和生化分析仪等。
这些仪器通过测量样本中特定物质的浓度或反应速率，帮助医生判断疾病的类型和程度，并制定相应的治疗方案。
3. 血液分析技术及仪器血液分析技术及仪器能够对血液中的各项指标进行测定，如血细胞计数、血红蛋白浓度、血小板计数等。
常见的仪器包括血细胞分析仪和血气分析仪等。
这些仪器可以帮助医生判断患者的贫血程度、血液流变学指标以及呼吸功能等，为临床诊断提供重要依据。
4. 免疫分析技术及仪器免疫分析技术及仪器能够检测体内的抗体、抗原及其相互作用，从而判断机体的免疫状态。
常见的仪器包括酶联免疫吸附法仪器、流式细胞仪和免疫荧光分析仪等。
这些仪器可以帮助医生诊断感染性疾病、自身免疫病以及肿瘤等，并监测疾病的进展和治疗效果。
5. 分子生物学分析技术及仪器分子生物学分析技术及仪器主要用于分析和研究基因、DNA、RNA 以及相关蛋白质等分子生物学构成。
常见的仪器包括PCR仪、电泳仪和基因芯片等。
这些仪器可以帮助医生进行遗传病的筛查、基因突变的鉴定，以及确定肿瘤的分子标记物，从而指导个性化治疗方案的制定。
6. 影像学分析技术及仪器影像学分析技术及仪器能够对人体内部的结构和功能进行直观展示和评估。
常见的仪器包括X线机、CT机、MRI和超声仪等。
这些仪器可以帮助医生发现和诊断肿瘤、骨折、心血管疾病等，同时为手术规划和治疗效果评估提供有效依据。
7. 结论临床检验分析技术及仪器在现代医疗中扮演着重要的角色，不仅能够提供医生所需的实验数据，还有助于准确诊断和有效治疗。
不断的技术创新和仪器更新将进一步推动临床检验的发展，为医务工作者提供更好的医疗服务。
化学发光与荧光免疫技术及仪器与分析
化学发光和荧光免疫技术及仪器和分析
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3．过碘酸盐氧化法
直接偶联
标记物可用发光剂或催化剂，适用于芳香伯胺或脂肪 伯胺发光剂，标记方法稳定标记物不易脱落，但此法不 适用于无糖基的蛋白质和含有糖基但氧化后会影响免疫 学活性的蛋白质。
化学发光和荧光免疫技术及仪器和分析
19
4．戊二醛法
间接偶联
氨基 芳香伯胺基
2．眯唑类化合物 较常用的是2，4，6-三苯基咪唑，即洛粉碱 (lophine)。
3．吖啶酯类 典型代表是N，N-二甲基二吖啶硝酸酯，即光泽精 (1ucigenin)。
4．苯酚类化合物 其中主要有邻苯三酚，即焦性没食子酸。 5．芳香草酸酯类 主要有双-(2，4，6，-三氯苯基)-草酸酯(TCPO)和 双-(2，4-二硝基苯基)-草酸酯(DNPO)。 6．(金刚烷)-1，2-二氧乙烷及其衍生物
熟悉电化学发光免疫分析的基本原理和标记物， 时间分辨荧光免疫分析法的基本原理及其标记物和螯 合物。
了解荧光偏振免疫分析法的基本原理和技术特点， 化学发光免疫分析的临床应用
化学发光和荧光免疫技术及仪器和分析
3
第一节 化学发光免疫分析技术
基本原理 反应的底物 标记方法 反应类型 相关仪器
化学发光和荧光免疫技术及仪器和分析
化学发光和荧光免疫技术及仪器和分析
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化学发光和荧光免疫技术及仪器和分析
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三、标记方法
按照标记物的应用:
化学标记 生物标记
化学标记: 用于化学发光(酶)免疫测定
➢直接用发光物质(如鲁米诺、吖啶酯类等)标记抗体或抗原
➢以催化剂(如HRP、GOD等)和／或协同因子(如ATP、 NAD等)标记抗体或抗原
反应速度
第11章 临床免疫学检验仪器与技术
施新明
目录
第一节 免疫荧光分析仪器与技术 第二节 散射比浊分析仪器与技术 第三节 酶免疫分析仪器与技术 第四节 化学发光免疫分析仪器与技术 第五节 自动化免疫分析仪的染色的技术原理是什么？ 2.时间分辨荧光免疫分析仪的基本原理和性能特点是什么？ 3.散射比浊仪器的分类和原理是什么？ 4.比浊法检测抗原过剩的方法有哪些？ 5.酶联免疫分析技术的原理是什么？ 6.化学发光酶免疫分析的技术原理是什么？ 7.吖啶酯化学发光免疫分析技术的原理是什么？ 8.电化学发光免疫分析技术的原理和特点是什么？ 9.光激化学发光免疫分析技术的原理是什么？
软件系统等。
1.条形码扫描器 2.样品轨架 3.样品针清洗站 4.清洗站 5.清洗机头 6.载片 托盘 7.试剂架 8.用于初始稀释的稀释板 9.用于系列稀释的稀释板
一、免疫荧光染色仪器与技术
（二）免疫荧光染色相关仪器
1.免疫荧光染色自动操作仪 加样系统由样品针和清洗站、样品轨架和试剂架等构成； 清洗系统包括储液桶、清洗站、清洗机头、废液排除管路
不足，存在抗原过量，需将待测样品进一步稀释复测。 3. 全程动力学空白对照，排除非特异性的干扰，确保检测结果
的可靠性。
五、散射比浊分析仪的性能要求
1.灵敏度 2.精密度 3.准确度 4.携带污染 5.温度准确度与波动度 6.样品和试剂加样准确度与重复性
第三节 酶免疫分析仪器与技术
一、酶联免疫吸附试验
三、全自动酶免疫分析系统
（一）全自动酶免疫分析系统的基本结构
全自动酶免疫分析系统是具有自动加样本、加试剂，自动控 温温育，自动洗板和自动判读计算等功能的分析系统。
可用于各种酶免疫实验、血库筛查、生化检测、细胞培养、 分子生物学等各个方面。
全自动单分子免疫分析仪
工作原理
通过将单分子免疫分析技术应用于全自动分析系统，对样本中的目标分子进行高 灵敏度检测和分析。
在系统中，样本经过免疫反应后，产生的光信号通过光电倍增管转换为电信号， 再经过计算机处理和分析，最终得到目标分子的定量结果。
技术特点
高灵敏度
快速高效
全自动单分子免疫分析仪能够检测到低至单 个分子的水平，极大地提高了检测的灵敏度 和准确性。
高灵敏度
全自动单分子免疫分析仪具有极高的灵敏度，可以检测 出低浓度的抗原-抗体复合物，为早期诊断提供了可能。
应用广泛性
1 2 3
临床诊断
全自动单分子免疫分析仪在临床诊断中具有广 泛的应用价值，可用于感染性疾病、自身免疫 性疾病、肿瘤等疾病的检测。
生物研究
全自动单分子免疫分析仪也可用于生物研究领 域，如对生物分子相互作用、细胞信号转导等 的研究。
全自动分析系统可以同时处理多个样本，缩 短了分析时间，提高了工作效率。
自动化
广泛适用性
从样本处理到数据分析，全自动单分子免疫 分析仪都能够实现全自动化操作，减少了人 为误差和操作时间。
全自动单分子免疫分析仪适用于多种临床诊 断和科学研究领域，如肿瘤标志物检测、激 素水平检测、传染病检测等。
03
应用领域
实验结果
数据准确性
全自动单分子免疫分析仪具有极高的数据准确性，能够避免人为操作误差， 提高了实验结果的可靠性。
数据重复性
由于仪器自动化程度高，可以保证实验结果的重复性，为后续的数据分析提 供了有全自动单分子免疫分析仪可以自动完成数据的收集和分析， 通过专业的软件对数据进行处理，能够快速得到准确的实验 结果。
。
临床医学领域
疾病诊断
全自动单分子免疫分析仪可以 用于检测人体血清、组织等样 本中的蛋白质、核酸等分子， 为临床医学领域的疾病诊断提
最新16免疫分析仪器汇总
16免疫分析仪器第十六章免疫分析仪器* 免疫分析法：应用不同的标记物，以抗原抗体相互结合为基础的免疫学测定方法。
* 类型：(1)用酶作标记物，称为酶免疫分析法。
(2)以化学发光物质作标记，为化学发光免疫分析法。
(3)用放射性核素作标记物，称为放射免疫分析法。
第一节酶标分析仪一、酶免疫分析法* 分类：有两种类型。
(1)均相酶免疫测定：主要用于药物测定。
(2)非均相酶免疫测定：也叫酶联免疫吸附测定(ELISA)，常用于医学检验。
二、酶标仪的工作原理及结构(1)微机：可通过控制电路控制微孔板在X和Y方向的移动。
(2)微孔板：是一透明塑料板，板上有装载待测样品的多排小孔。
1、原理：采用比色法。
光源光线经滤光片后成单色光，射入微孔板中待测样品后被吸收掉一部分，透射光到达光电检测器，经放大及模数转换后，送入微机处理、显示和打印结果。
2、光路系统：光源发出的光，经聚光镜、光栏、到反射镜作900反射后，垂直通过比色溶液，然后经滤光片到达光电管。
3、酶标仪和光电比色计的不同点：两者都用比色法测定，不同点为(1)装载比色液的容器不是比色皿，而是塑料微孔板。
(2)光束垂直通过待测液即微孔板。
(3)通常不用吸光度A而是用光密度OD表示。
4、酶标仪类型：有两种。
(1)单通道：分自动型和手动型。
(2)多通道：均为自动型，特点是检测速度快。
三、EL312E型酶标仪简介是美国BIO-TEK公司的产品。
1、光学系统原理：采用比色法。
滤光片类型为后密封式干涉滤光片，半通带宽度10nm；比色板为标准96孔板。
2、技术指标：如表。
四、半自动微孔板式ELISA分析仪结构在酶标仪的基础上再配置加液器、温育器、洗板机、测读仪。
测定中需由手工将微孔板移至下一步骤的仪器中进行。
五、全自动微孔板式ELISA分析仪结构自动化酶免疫分析系统由加样系统、温育系统、洗板系统、判读系统、机械臂系统、液路动力系统、软件控制系统等组成第二节化学发光免疫分析仪* 发光剂：指能产生化学发光反应的物质，也叫发光底物。
POCT检测技术与相关仪器
4.1 POCT概述4.1.1 POCT的概念、基本原理及主要技术POCT是指在病人旁边分析病人标本的分析技术，或者说只要测试不在主实验室做，并且它是一个可移动的系统，就可以称为POCT。
“POCT”的组成包括：地点、时间（point)、保健、照料（care）、检验、试验（testing），point-of-care testing英文字面的意思是在受治疗者现场的保健检验。
POCT的基本原理是：把传统方法中的相关液体试剂浸润于滤纸和各种微孔膜的吸水材料中，成为整合的干燥试剂块，然后将其固定于硬质型基质上，成为各种形式的诊断试剂条；或把传统分析仪器微型化，操作方法简单化，使之成为便携式和手掌式的设备；或将上述两者整合为统一的系统。
POCT主要技术包括：（1）简单显色（干化学法测定）技术将多种反应试剂干燥、固定在纸片上，加上检验标本（全血、血清、血浆、尿液等）后产生颜色反应，用肉眼观察定性或仪器检测(半定量)。
（2）多层涂膜（干化学法测定）技术多层涂膜技术是从感光胶片制作技术移植而来的。
将多种反应试剂依次涂布在片基上，制成干片，用仪器检测，可以准确定量。
（3）免疫金标记技术胶体金颗粒具有高电子密度的特性，金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标记物在相应的标记处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，这一反应可以通过银颗粒的沉积被放大。
该类技术主要有斑点免疫渗滤法（DIGFA）和免疫层析法（ICA）。
（4）免疫荧光技术通过检测板条上激光激发的荧光，定量检测以pg/ml为单位的检测板条上单个或多个标志物。
检测系统通常由荧光读数仪和检测板组成。
检测板多用层析法，分析物在移动的过程中形成免疫复合物，通过检测区域、质控区域的荧光信号值的不同与分析物的不同浓度成一定的比例，获得定标曲线，可检测未知样本中分析物的浓度。
（5）生物传感器技术利用离子选择电极，底物特异性电极，电导传感器等特定的生物检测器进行分析检测。
免疫自动化仪器分析
2.将待测标本和标准抗原溶液（5个浓度抗原标准品）与适当过量的抗血清混合，在一定条件下，抗原抗体反应完成后，在340nm处测定各管吸光度。
3.按log-logit转换或y=ax3+bx2+cx+d方程进行曲线拟合，制备剂量-反应曲线，由计算机处理，计算出抗原浓度。
（三）方法评价
（2） 加入碱 （pH>10）
仪器测定技术要点
抗原抗体结合 洗涤、分离 加入氧化剂发光 信号检测
吖啶酯标记化学发光免疫测定示意图
ACS：180 SE和ACS∶CENTAUR化学发光免疫分析仪
ACS：180 SE
ACS∶CENTAUR
ci8200
i2000sr
酶联发光免疫分析仪是用参与催化某一化学发光或荧光反应的酶来标记抗原或抗体，在抗原抗体反应后，加入底物(发光剂)，由酶催化和分解底物发光，通过光信号的强弱来进行被测物的定量。 常用的标记酶有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶(ALP)，常用的发光底物有鲁米诺、AMPPD和4-MUP等。
鲁米诺增强化学发光的原理
辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫测定示意图
Vitros ECi全自动增强化学发光酶免分析仪
㈡ 碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析仪
该仪器是以碱性磷酸酶标记抗原或抗体，以 顺磁性微粒子为固相载体，用AMPPD作为化学发 光剂进行测定的自动化仪器。
AMPPD发光反应原理示意图
时间分辨荧光免疫测定（time resolved fluorescence immunoassay, TRFIA）是以镧系元素标记抗原或抗体作为示踪物，并与时间分辨测定技术相结合，建立起来的一种新型非放射性微量分析技术，具有灵敏度高，镧系元素发光稳定，荧光寿命长，不受样品自然荧光干扰，标准曲线范围宽等特点，已在临床实验室广泛使用。
临床检验分析仪器
临床检验分析仪器临床检验分析仪器在医学领域中起着至关重要的作用。
它们是现代医疗中不可或缺的工具，用于协助诊断和治疗各种疾病。
这些仪器具备高度的精确性和准确性，可以帮助医生和医疗人员快速获取必要的信息，以便为患者提供最佳的治疗方案。
一、血液分析仪器血液分析仪器是临床检验中最常见的一类仪器，广泛应用于血液常规指标测定和疾病相关指标检测。
血液常规指标包括血红蛋白、红细胞计数、白细胞计数、血小板计数等，这些指标可以为医生提供患者的基本健康状态信息。
在某些疾病的诊断和治疗中，血液分析仪器也可以检测特定的指标，如糖化血红蛋白、肝功能指标、肾功能指标等。
二、免疫分析仪器免疫分析仪器是用于检测体内免疫学指标的一类仪器。
随着医疗科技的进步，免疫分析技术不断发展，为临床医学提供了更多的诊断手段。
通过测定血清中的免疫球蛋白、肿瘤标记物等指标，免疫分析仪器可以帮助医生早期发现肿瘤、感染、自身免疫性疾病等疾病。
三、生化分析仪器生化分析仪器用于测定生物体内液体（血清、尿液等）中的生化指标，包括血糖、血脂、肝肾功能指标、电解质等。
这些指标的异常变化往往与多种疾病的发生和发展相关。
生化分析仪器的出现，使得临床医学可以通过测定这些指标来评估患者的健康状况，并提供相应的治疗方案。
四、核酸分析仪器核酸分析仪器主要用于检测和分析体内的核酸序列，如DNA和RNA。
这些仪器通过分子生物学技术，可以对基因突变、染色体缺失等进行精确的检测，为遗传性疾病的诊断和治疗提供有力的支持。
此外，核酸分析仪器在病毒感染检测和基因工程领域也有着广泛的应用。
五、图像诊断仪器图像诊断仪器包括CT扫描、MRI、X射线等，它们能够生成人体内部的高分辨率影像，帮助医生发现和诊断各种疾病。
CT扫描和MRI可以提供全身各个部位的详细结构图像，对于肿瘤、损伤和异常情况的检测非常有价值。
X射线影像则可以用于骨骼和肺部疾病的诊断。
在临床实践中，各类仪器的有效运用可以提高疾病的诊断和治疗效果，对于改善患者生活质量和健康状况起到重要作用。
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免疫分析技术和相关仪器4.1．酶免疫分析仪4.1.1酶免疫分析技术的分类酶免疫分析(enzyme immunoassay，EIA) 是目前临床应用最多的一类免疫分析技术，可分为非均相(或异相)酶免疫测定和均相酶免疫测定两种方法。
均相酶免疫分析法（homogeneous enzyme immunoassay，HEI）均相酶免疫分析主要有酶扩大免疫测定技术和克隆酶供体免疫测定两种方法。
非均相酶免疫分析法（heterogeneous enzyme immunoassay）常用的酶免疫分析法多为非均相法，又可分为液相酶免疫法和固相酶免疫法两种，以后者最常用，称为酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）。
ELISA是临床上最常用的免疫分析方法，目前常用的酶免疫分析仪都是基于ELISA技术，称为酶免疫分析仪。
4.1.2酶免疫分析仪的类型、工作原理及基本结构根据仪器结构和自动化程度, 针对固相支持物的不同（如微孔板、试管、小珠、磁微粒等）作为吸附免疫试剂的载体，因而设计成不同的酶免疫分析仪，其基本工作原理就是分光光度法，在光电比色计或分光光度计的基础上根据ELISA技术的特点而设计。
包括：微孔板固相酶免疫测定仪器国际上微孔板式ELISA使用的载体为96孔板，采用直接对微板孔测定吸光度（A）的比色计。
(1) 酶标仪酶标仪也称为ELISA测读仪（ELISA reader）,有单通道和多通道两种类型。
自动型多通道酶标仪有多个光束和多个光电检测器，检测速度快。
如8通道的仪器，设有8条光束（或8个光源）、8个检测器和8个放大器。
多通道酶标仪的检测速度较快。
酶标仪的工作原理与主要结构和光电比色计几乎完全相同（见图16-1）。
既可以使用和分光光度计相同的单色器，也可以使用干涉滤光片来获单色光，此时将滤光片置于微孔板的前、后的效果是一样的。
图16-1 酶标仪工作原理酶标仪的工作原理和光路与普通光电比色计的不同之处在于（见图16-2）：比色液的容器不是比色皿，而是用塑料微孔板；酶标仪以垂直光束通过微孔板中的待测液；酶标仪通常使用光密度OD来表示吸光度。
现在大部分的酶标仪还加上了判读系统和软件操作分析系统等。
图16-2 酶标仪光路系统简图(2) 半自动微孔板式ELISA分析仪半自动微孔板式ELISA分析仪在酶标仪的基础上再配置加液器、温育器、洗板机和测读仪等分别组成。
测定中需由手工将微孔板移至下一步骤的仪器中进行。
洗板机要求洗涤后固相表面非特异性物质洗涤干净，吸液后每孔中残留的液量极小。
较精密的洗板机有可调节的定时、洗涤液定量及振荡微孔板的功能。
(3) 全自动微孔板式ELISA分析仪自动化酶免疫分析系统由加样系统、温育系统、洗板系统、判读系统、机械臂系统、液路动力系统、软件控制系统等组成，这些系统既独立又紧密联系。
全自动微孔板式ELISA分析仪用在大批量标本的检测中，不但提高了工作效率，而且测定的精密度亦得到改善。
微孔板式ELISA仪器均为开放式的，即适用于所有微板式ELISA试剂。
ELISA检测结果的精密度主要取决于试剂的质量。
全自动ELISA仪器本身的精密度一般在3%左右。
应用优质试剂测定结果的精密度，定量测定可达到7%以下；常用的定性测定为感染性疾病抗原、抗体的检测，精密度在10%左右。
（4）管式固相酶免疫测定仪应用管式固相载体的ELISA分析仪器不多，在我国应用的有：① 1990年德国推出的全自动管式ELISA分析系统和配套试剂。
试剂包括用链霉亲和素包被的聚苯乙烯管、生物素结合的抗原或抗体，辣根过氧化物酶标记的抗体和显色底物ABTS。
测定中标准曲线可使用2星期，每次测定只需一点定标。
测定的精密度CV在3%左右。
测定项目齐全，包括激素、肿瘤标志、心肌标志和感染性疾病的抗原、抗体等。
② 法国生产的是一种特殊形状的管式全自动ELISA的分析仪，配套使用一个特别的“试剂条”（reagent strip）。
（5）微粒固相酶免疫测定仪美国生产自动酶免疫分析仪应用聚苯乙烯微粒（颗粒直径0.47μm）作为固相，特异抗体或抗原包被在微粒上。
第一次抗原抗体反应后，将反应液通过特制的玻璃纤维膜，聚苯乙烯微粒吸附在玻璃纤维膜上，液体则通过膜滤出。
以后的反应在膜上进行，用过滤方式洗涤。
标记酶为碱性磷酸酶，底物为4-甲基伞酮磷酸酶，反应后进行荧光测定。
其后生产的作药物测定的荧光偏振分析仪与一体多项目全自动免疫分析仪也在检验实验室广泛应用。
（6）磁微粒固相酶免疫测定仪磁微粒可用磁铁吸引与液相分离，是免疫测定中较为理想的固相载体，较早应用磁微粒作为酶免疫测定固相的是瑞士出品的分析系统，由分光光度测读仪、磁铁板和试剂3部分组成。
试剂包括抗异硫氰酸荧光素（FITC）抗体，特异抗体或抗原包被的磁微粒（颗粒直径1μm），FITC结合的特异抗体或抗原，碱性磷酸酶标记的特异抗体或抗原及底物酚肽（phenolphthalein）磷酸酯。
其应用的抗FITC-抗体是与亲和素-生物素原理相同的间接包被系统，反应模式与电化学发光免疫测定亦相似。
反应在试管中进行，基本上用手工操作。
反应结束后将试管架放在磁铁板上，磁微粒被磁铁吸引至管底，完成固相与液相的分离。
酶作用后反应液呈粉红色。
4.1.3 酶免疫分析仪的性能评价和维护保养评价指标和方法（1）滤光片波长精度检查及其峰值测定（2）灵敏度和准确度灵敏度准确度（3）通道差与孔间差检测通道差检测孔间差的测量（4）零点飘移（5）精密度评价（6）线性测定（7）双波长评价（8）全自动酶免分析仪的主要技术参数应达到如下要求：可随机安排项目检测，每板上可同时做8个相同条件的项目检测。
可用加样针或Tip头加样；加样速度应>700个／h；加样体积为：用针时2μl~300μl，用Tip头时10μl ~300μl，精度均为1μl可调；加样精度为：用针时CV<1％，用Tip头时CV<2％。
试剂加样速度应2800孔／h；加样体积2μl~300μl ，精度为lμl 可调；加样精度为100μl 时，CV<2％。
有液面感应装置。
标本架为可移动架，可同时放置92管标本。
标本架中心为12个可移动的试剂架，并有8个稀释液架。
有标本识别的条码阅读器，温育系统有可控温在200C ~400C的平台加热器，温度设置误差在±0.50C内，有>4个加热孵育板位，轨道式振荡，每个板位独立控温，互不干扰。
洗板机液残量控制在2μl 以内。
滤光片吸光度范围为0~3.0D。
酶免疫分析仪的维护酶免疫分析仪维护的重点是在光学部分，防止滤光片霉变。
应定期检测校正，保持其良好的工作性能。
4.1.4 酶免疫分析仪的临床应用1.病原体及其抗体的检测2.各种免疫球蛋白和细胞因子、补体等3.肿瘤标志物4.多种激素5.药物和毒品4.2发光免疫分析仪发光免疫技术根据示踪物检测的不同而分为荧光免疫测定、化学发光免疫测定及电化学发光免疫测定三大类。
化学发光免疫根据标记物的不同，有化学发光免疫分析、微粒子化学发光免疫分析、电化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和生物发光免疫分析等分析方法。
现临床以前三者较为常用。
本节主要介绍目前国内临床应用较多的化学发光免疫分析仪和电化学发光免疫分析仪。
4.2.1发光免疫分析的种类和基本原理4.2.1.1 发光免疫分析的基本种类根据标记物的不同有下列几种分析方法：1．化学发光免疫分析其标记物为氨基酰肼类及其衍生物如5—氢基邻苯二甲酰肼(鲁米诺)等。
2．化学发光酶免疫分析先用辣根过氧化物酶标记抗原或抗体，在反应终点时再用鲁米诺测定发光强度。
3．微粒子化学发光免疫分析其标记物为二氧乙烷磷酸酯等。
4．生物发光免疫分析荧光素标记抗原或抗体，直接或间接参加发光反应。
5．电化学发光免疫分析所采用的发光试剂标记物为三氯联吡啶钉[Ru(bpy)3]2++N羟基琥珀酰胺酯。
此种方法较常用。
4.2.1.2 发光免疫分析基本测定方法根据发光反应检测方式的不同可分为下列主要的测定方法。
1．液相法免疫反应在液相中进行，反应后经离心或分离措施后，再进行测定发光强度。
所用分离方法包括葡聚糖包被的活性炭末、SephadexG—25层析柱、第二抗体等。
2．固相法将抗原抗体复合物结合在固相载体(如聚苯乙烯管)或分离介质上(如磁性微粒球、纤维素、聚丙烯酰胺微球等)，再进行测定发光强度，此法较常用。
试验原理与固相RIA和ELISA方法基本相同。
3．均相法如同均相酶免疫测定一样，在免疫反应后，不需要经过离心或分离步骤，即可直接进行发光强度检测。
其原理是某些化学发光标记物(如甾体类激素的发光标记物)与抗体或蛋白结合后，就能增强发光反应的发光强度。
4.2.2 发光免疫分析仪的种类、工作原理和基本结构重点介绍全自动化学发光免疫分析系统、全自动微粒子化学发光免疫分析系统和全自动电化学发光免疫分析仪。
4.2.2.1 全自动化学发光免疫分析系统全自动化学发光免疫分析系统采用化学发光技术和磁性微粒子分离技术相结合的免疫分析系统。
在90年代初首次应用后又不断改进，将微机与主机分开，软件程序加以改进，使操作更灵活，试剂贮存时间长，结果准确可靠，自动化程度高等优点。
1．仪器测定原理该类分析技术有两种方法，小分子抗原物质测定采用的是竞争法，而大分子抗原物质测定采用的是夹心法。
仪器所用固相磁粉颗粒极微小，其直径仅1.0μm。
这样大大增加了包被表面积，增加抗原或抗体的吸附量，使反应速度加快，也使清洗和分离更简便。
其反应基本过程有： (1)竞争反应 (2)夹心法2．仪器组成一般由主机和微机两部分组成。
（1）主机部分：是仪器的运行反应测定部分，包括原材料配备部分、液路部分、机械传动部分、光路检测部分。
材料配备部分包括反应杯、样品盘、试剂盘、纯净水、清洗液、废水在机器上的贮存和处理装置；液路部分包括过滤器、密封圈、真空泵、管道、样品及试剂探针等；机械传动部分包括传感器、运输轨道等；电路部分包括光电倍增管和线路控制板。
（2）微机系统是仪器的核心部分，是指挥控制中心。
其功能有程控操作、自动监测、指示判断、数据处理、故障诊断等，并配有光盘。
主机还配有预留接口，可通过外部贮存器自动处理其它数据，并摇控操作，用于实验室自动化延伸发展。
4.2.2.2 全自动微粒子化学发光免疫分析系统全自动微粒子化学发光免疫分析系统采用微粒子化学发光技术对人体内的微量成分以及药物浓度进行定量测定。
系统具有高度的特异性、高度的敏感性和高度的稳定性等特点。
1．分析方法及过程采用磁性微粒作为固相载体，以碱性磷酸酶作为发光剂，固相载体的应用扩大了测定的范围。
以竞争法、夹心法和抗体检测等免疫测定方法为基础：(1)抗原抗体结合将包被单克隆抗体的顺磁性微粒和待测标本加入反应管中，标本中的抗原与微粒子表面的抗体结合，再加入碱性磷酸酶标记的抗体，经温育后形成固相包被抗体—抗原—酶标记抗体复合物；(2)洗涤、分离 (3)加入底物 (AMPPD)发光剂，AMPPD被结合在磁性粒子表面的碱性磷酸酶的催化下迅速去磷酸基因，生成不稳定的中介体AMPD，AMPD很快分解，从高能激发态回到低能量的稳定态，同时发射出光子，从标准曲线上计算出待测抗原的浓度。