实验一 碱法提取质粒DNA
质粒DNA的提取实验一
实验一质粒DNA的制备一、实验目的掌握碱裂解法抽提质粒的原理、步骤及各试剂的作用。
二、实验原理碱变性抽提质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。
在pH值高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。
质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH值至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质－SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
三、实验材料:大肠杆菌 DH5ɑ pET HIS四、仪器与主要试剂(一)仪器设备1．恒温培养箱 2．恒温摇床 3．台式离心机 4．高压灭菌锅(二)器材1． 1.5mL 离心管 2．枪头、枪三)试剂溶液I： 50 mmol/L 葡萄糖、10 mmol/L EDTA 、25 mmol/L Tris-HCl (pH 8.0)溶液II： 200 mmol/L NaOH、1% SDS（新鲜配制：0.8ml ddH2O,0.1ml 2mol/LNaOH,混匀，0.1ml 10% SDS混匀）溶液III： 3 mol/L NaAc (pH4.8)溶液TE缓冲液：10 mmol/L Tris-HCl ,pH 7.5、1 mmol/L EDTA五、实验步骤1.取DH5ɑ pET HIS大肠杆菌菌液于LB（含Amp）平板上37℃过夜培养；2. 用无菌牙签挑取单菌落，接种于含有Amp抗生素的LB培养基中，37℃摇床~250 r/min 过夜培养；3.吸取1.5 ml菌液，12000 g离心5分钟，去上清（尽量将上清倒干净），收集菌体；4 加入100 μl溶液 I振荡打匀，重新悬浮细胞，震荡混匀（注意：应彻底打匀沉淀或碎块）；（剧烈）5.加入200 μl溶液II，轻柔颠倒混匀，放置至清亮，一般不超过5分钟；6.加入150 μl溶液III颠倒混匀，放置于冰上10分钟，使杂质充分沉淀；（温和）7.12000 g离心10分钟；取上清液400 μl（注意：不要吸取到飘浮的杂质）至另一Eppendorf 管中8.加入2倍体积的无水乙醇，充分混匀，-20度2小时（或2/3体积的异丙醇，室温下放置5分钟）；9.12000 g 常温离心15分钟；10 倒尽上清，加75％乙醇浸洗除盐（放置片刻或离心3分钟后倒去上清）；11.室温放置或超净台上风干DNA；12. 加20 μl灭菌超纯水或TE溶解；13.质粒、BAC的质量检测，于-20℃保存。
试验一碱裂解法抽提质粒DNA
3 质粒DNA的进一步纯化
加入TE使DNA溶液为200ul，加入等体积的酚/氯仿，充 分振荡：会分三层 12000rpm，离心5分钟，吸取上清液 加入等体积的氯仿， 12000rpm，离心5分钟，取上清 加入1/10体积的3MNaAc，加2倍体积的预冷的无水乙醇， 混匀。 置于-70℃冰箱约10min以上或者-20℃冰箱30min至数个 小时
三、材料、试剂及仪器
1 材料： （1）菌种E.coliDH 10B含质粒pSK （2）菌种E.coliDH 10B含质粒pMP3 2 试剂: LB培养基（ 固体和液体）;氨苄青霉素 (Amp,100mg/ml);20﹪SDS;溶液Ⅰ; 溶液Ⅱ （最好现配现用）;溶液Ⅲ（-20℃预冷）; 4N NaOH; 3MNaAc（PH5.2）;无水乙醇; TE缓冲 液（PH8.0）; RNaseA(10mg/ml); 70﹪乙醇;饱 和酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）
2.点样
1xTE或ddH2O:7μL 10ul混合液 10xloading buffer : 1ul 样品:2 ul 混合后点入点样孔中。其中最左边的两个孔点5ulMarker3和 DS2000作为分子量标准。 3.电泳
打开电源开关，调节电压至3-5v/cm即100V，可见溴酚蓝 条带由负极向正极移动，约一小时可观察
12000rpm离心15分钟（4℃），倒掉酒精，离心几秒， 用移液枪尽可能除去酒精 用0.5ml70 %酒精洗DNA沉淀一次，离心2分钟，倒掉酒 精 离心几秒，用移液枪尽可能除去酒精，风干。 加30ulTE溶解DNA沉淀（TE不加RNase）
五、实验注意事项
1 挑菌落应挑单菌落。 可用牙签挑取，也可用tip头挑取。市场上买的 牙签上有防腐剂，应用沸水煮过之后，烘干用 2 细菌培养过程应注意保持细菌的通气性： （1）培养基的体积不能占培养管的体积太多 （2）培养管的体积不用盖太紧 （3）培养管倾斜培养：可增大细菌与氧气接触 面积 （4）转速为200rmp：快一点的转速有利于保持 其的通气性
01碱裂解法抽提大肠杆菌质粒
1、实验目的 ： 学习与掌握碱裂解法抽提大肠பைடு நூலகம்菌质 粒DNA的原理与方法
2、实验原理：
碱裂解法抽提质粒DNA是基于染色体DNA与 质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离的目的。
3、实验步骤及各步注意事项
1. 取1.4ml大肠杆菌培养液12000rpm离心 2min，弃上清，收集菌体。 注意点：上清为培养基，必须尽量倾倒 干净，并在吸水纸上吸干，如有较多培 养基残留可能会影响后续实验。
6. 取上清，加等体积（400µ l）的酚/氯仿/ 异戊醇，充分混匀，室温，12000rpm离 心5min。
注意点：酚氯仿有腐蚀性，盖严离心管 盖，避免接触酚氯仿，如接触立即用水 冲洗。
7. 吸上层水相，再加1ml(约2.5倍体积）预 冷的无水乙醇，混匀。 注意点：一定避免吸到中间沉淀及下层 酚氯仿。宁可损失一定上清。
2. 加100µl的溶液 I，使菌体充分悬浮，室 温静置3min。 注意点：必须充分混匀至看不见沉淀， 可用移液器吹打或者用混匀器振荡。
3. 加入200µl溶液II，温和上下颠倒2-3次， 溶液转变为澄清透明。 注意点：不可剧烈振荡。
4. 加入150µl溶液III，上下颠倒混匀数次， 静置2-3min。 注意点：不可剧烈振荡，此时应出现白 色沉淀。 5. 12000 rpm离心5min。
8. 4℃，12000rpm离心10min。
9. 弃上清，加入0.5 ml 70％乙醇，4℃， 12000 rpm离心5 min。
10. 弃上清，沉淀自然干燥10 min后，加 20µ l无菌水溶解。 注意点：弃上清时尽量将酒精倾倒干净， 但注意不要将沉淀弃去。
1碱法提取质粒
6、13000g离心10min取上清，加入等体积的苯酚 /氯仿/异戊醇，振荡混匀，4℃离心14000g10min。 -抽提掉剩余蛋白。 7、小心移出上清于一新微量离心管中，加入1倍 体积的异丙醇，混匀，4℃离心12000g，10min。 -可以用两倍体积的无水乙醇，室温放置2-5min 离心。不要沉淀太久。 8、1ml 75%乙醇洗涤沉淀1次，4℃离心，弃上清， 将沉淀在室温下晾干。-不要太干，否则不易溶 解。。 9、沉淀溶于20μ l TE（含RNase A 20μ g/ml）， 37℃水浴30min以降解RNA分子，-20℃保存备用。 10、琼脂糖电泳检测。
原理
back
1、挑取单菌落，接种于含有相应抗生素的LB培养 基中，于37℃振荡培养14～18 h。-培养时间不 能太长，否则细菌老化，代谢产物太多。影响 质粒质量。 2、取1.5ml培养物入微量离心管中，室温离心 8000g×1min，弃上清，将离心管倒置，使液体 尽可能流尽。
3、将细菌沉淀重悬于200μ l预冷的溶液Ⅰ中，剧 烈振荡，使菌体分散混匀。
4、加200μ l新鲜配制的溶液Ⅱ，颠倒数次混匀 （不要剧烈振荡），使细胞膜裂解,DNA变性。放置时间不能太长。因为在碱性条件下基因组 DNA会慢慢断裂 。混匀动作要轻柔,既保证细 菌沉淀在试剂中充分扩散又要避免机械剪切已 变性的质粒DNA和染色体基因组DNA 。
5、加入200μ l预冷的溶液Ⅲ，将管温和颠倒数次 混匀，见白色絮状沉淀，放置5min。-中和溶液， 此时质粒DNA复性，染色体和蛋白质不可逆变性， 形成不可溶复合物，同时K+使SDS-蛋白复合物沉淀。
实验目的
了解掌握碱法提取质粒的原理和方法。
掌握微量移液器、高速离心机等的正确使用。
实验一 碱法提取质粒DNA
实验一碱法提取质粒DNA一、目的掌握微量移液器、高速离心机等的正确使用掌握碱法提取质粒DNA的原理和方法。
二、原理从细菌中分离质粒DNA的方法都包括3个基本步骤：培养细菌使质粒扩增；收集和裂解细胞；分离和纯化质粒DNA。
从大肠杆菌中抽提质粒DNA的方法很多，可以在实验中根据不同的需要采用不同的方法，碱变性法因其抽提效果好，收得率高，获得的DNA可用于酶切、连接与转化，因而被各实验室广泛采用。
碱变性法抽提质粒DNA的基本原理是根据染色体DNA和质粒DNA分子量的巨大差异而达到分离的。
首先用含一定浓度葡萄糖的缓冲液（溶液Ⅰ）悬浮菌体，再加入溶液II（NaOH、SDS）后，碱性环境下菌体的细胞壁裂解，而使质粒缓慢释放出来，并且碱性条件使DNA的氢键断裂，宿主染色体双螺旋结构解开而变性，而闭合环状的质粒DNA的两条链不会完全分离，当加入溶液III中和后，宿主染色体DNA相对分子质量大，还没来得及复性，就在冰冷的条件下与SDS、蛋白质、高分子量的RNA等缠绕在一起而沉淀下来，而质粒DNA由于能够迅速配对恢复原来的构型而溶解在上清液中。
然后用酚、氯仿多次抽提进一步纯化质粒DNA 。
氯仿可使蛋白变性并有助于液相与有机相的分开，异戊醇则可起消除抽提过程中出现的泡沫。
再用两倍体积的无水乙醇洗涤沉淀，以去除残留的氯仿。
最后用75％乙醇溶液洗涤沉淀，以去除残留的盐离子。
最后获得的质粒DNA储存在TE溶液中，-20℃保存。
用于下一步凝胶电泳鉴定。
三、仪器设备、材料与试剂仪器设备恒温培养箱恒温摇床台式离心机高压灭菌锅制冰机电子天平pH计量筒（10 mL，100 mL，500 mL，1 000 mL）烧杯（50 mL，100 mL，500 mL，1 000 mL）一次性手套无粉乳胶手套（光明牌，大、中、小三种号码）玻璃棒称量勺微量移液器（1 000 μL，200 μL，20 μL）酒精灯灭菌的1.5 mL 离心管（eppendorf管）灭菌吸头（1 000 μL，200 μL），相应的吸头盒吸水纸250mL三角瓶材料：含pKS质粒或pUC系列质粒的大肠杆菌。
碱裂解法提取质粒DNA的实验原理和操作步骤
碱裂解法提取质粒DNA的实验原理和操作步骤碱裂解法是一种常用的方法，用于提取质粒DNA（plasmid DNA）纯化。
以下是具体的实验原理和操作步骤。
实验原理：碱裂解法利用碱性溶液将细菌细胞的细胞壁和细胞膜溶解，使细菌细胞内的质粒DNA被释放出来。
接着，使用中性化剂中和碱性溶液，使DNA带正电荷，而细胞中的蛋白质则带负电荷，从而能够通过离心将DNA与蛋白质分离。
最后，通过浓缩、洗涤和纯化，得到高质量的质粒DNA。
操作步骤：1.培养细菌：选取含有质粒DNA的细菌菌株，如大肠杆菌。
在含有适当抗生素的培养基中培养细菌菌株。
2.收获细菌：当菌液呈现较稠的浑浊状态时，收取细菌培养物。
使用离心机将菌液离心，分离菌体沉淀和上清液。
将上清液倒掉，保留菌体沉淀。
3.碱裂解：将菌体沉淀溶解于碱性溶液中，如盐酸和十二烷基硫酸钠（SDS）溶液。
轻轻混合并将溶液放入水浴中加热，使细菌细胞壁和细胞膜被溶解。
4.中和：使用中性化剂，如醋酸，使溶液中的酸性物质中和。
这样可以确保DNA带正电荷，而蛋白质和其他污染物则带负电荷。
5.离心：将溶液离心，在离心过程中，DNA会与细胞内其他分子分离，形成一个DNA沉淀。
上清液中含有蛋白质和其他污染物。
6.洗涤：使用洗涤缓冲液，如乙酸盐缓冲液，洗涤DNA沉淀，去除残留的污染物。
7.纯化：用去离子水溶解DNA沉淀，使其溶解在水中。
将溶解的DNA沉淀通过滤纸等过滤装置过滤掉残余杂质。
8.浓缩：通过酒精沉淀法或其他方法，将DNA溶液浓缩到所需的浓度。
9.检测：使用紫外分光光度计等方法，测定提取的质粒DNA的纯度和浓度。
注意事项：1.在实验过程中保持操作环境和仪器无菌。
2.碱裂解法中使用的溶液需准备新鲜，并避免受到污染。
3.操作过程中需要低温处理和离心操作，以保护DNA的完整性。
4.质粒DNA的提取可以根据实验目的进行进一步的扩增、测序或转染等应用。
总结：通过碱裂解法，可以从细菌中提取纯化的质粒DNA。
质粒DNA的提取实验报告
质粒DNA的提取一、实验方法碱裂解法抽提质粒DNA二、实验原理基于质粒DNA与染色体DNA变性与复性的差异。
三、实验步骤1）质粒提取1. 10,000g,1min离心收集1.5－5ml菌液沉淀于1.5ml离心管中。
2. 加入100μl溶液1，振荡至彻底悬浮。
3. 加入200μl溶液2，立即轻柔颠倒离心管6次，使菌体充分裂解，随后将离心管冰上放置3分钟4. 加入150μl溶液3，立即温和颠倒离心管数次，冰上放置3分钟，10，000g离心10min。
5. 将步骤4的上清转移至新的离心管（尽量去除杂质），加入等体积的苯酚/氯仿/异戊醇混合均匀10，000g离心5min。
6. 将步骤5的上清转移至新的离心管，加入2倍体积的无水乙醇，室温放置5－10min，沉降DNA7. 10，000g离心10分钟,弃乙醇，保留沉淀，加入1ml 70％的乙醇洗涤沉淀，10，000g离心5分钟8. 倒掉乙醇溶液，用吸水纸吸净管壁上的水珠，室温蒸发痕量乙醇9. 加入适量含RNase的TE或灭菌双蒸水溶解质粒DNA2）质粒鉴定→琼脂糖凝胶电泳灌胶：胶中加入荧光染料(SYBR Green I)加样：质粒+上样缓冲液→混匀电泳结果观察：UV灯下四、实验结果五、实验分析裂解细胞中除含有质粒DNA外，还含有基因组DNA、各种RNA、蛋白质和脂类等物质，因此用碱裂解法除去杂质1、防止DNA裂解：Solution 11）、所含糖增加溶液黏度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切作用降解2）、所含EDTA抑制酶活性2、溶解与变性：Solution21)强碱使质粒DNA和染色体DNA变性2）离子型表面活性剂SDS可溶解膜蛋白3、沉降与复性：Solution31)质粒DNA复性2）在钾盐中，染色体DNA形成缠连的不溶性网状结构，和不稳定的大分子RNA以及变性的蛋白质和细菌碎片等一起沉淀预期结果为剩余质粒DNA4、琼脂糖凝胶电泳1）荧光染色染料分子可嵌入双链DNA分子配对碱基之间2）琼脂糖可起到电泳和分子筛的作用，因所带电荷、分子量大小和构型不同，泳动速度不同六、误差分析实验失败，本组实验出现4条带，3明1暗，明亮处应为DNA分子数最多的，为质粒DNA，质粒DNA前有较暗的两条带，推测其中一条为未复性质粒DNA，可能Solution2处变性过长，不易复性，或Solution3处时间过短，复性不充分。
实验1质粒DNA碱变性法小量提取
实验一质粒DNA碱变性法小量提取南京大学生命科学院一、实验目的1、学习和掌握碱变性法快速提取质粒DNA的原理和方法2、学习如何用琼脂糖凝胶电泳法鉴定质粒DNA的纯度3、学习有关琼脂糖凝胶电泳的技术4、熟悉核酸染色的方法和DNA条带的观察二、实验原理质粒（plasmid）通常指细菌中独立于染色体外，能自主复制的遗传因子，它能够稳定地遗传某些性状。
天然的质粒都是环状双链DNA，大小从5kb到400kb不等。
质粒虽然独立于染色体外自主复制和遗传，但其复制又依赖于宿主编码的酶和蛋白质复制因子。
质粒按照其稳定拷贝数的多少可分为严谨型和松弛型，严谨型质粒在每个细菌细胞中有1～5拷贝，松弛型质粒在每个细菌细胞中可达10～200个，甚至更多拷贝。
强碱性条件下，宿主的线状染色体DNA变性，但闭环质粒DNA链由于处于拓扑缠绕状态而不易被破坏。
当条件恢复正常时，质粒DNA迅速恢复天然状态。
离心除去变性沉淀物，质粒DNA留在上清液中，用乙醇或异戊醇沉淀质粒即可得到较纯的质粒DNA。
琼脂糖凝胶电泳是基因工程最常用的技术，主要用于分离、鉴定和纯化DNA分子。
带电颗粒在电场作用下，向着与其电性相反的电极移动，成为电泳。
以琼脂糖凝胶为支持介质的电泳方法已广泛用于核酸的研究中，DNA分子在高于其等电点的pH 溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。
DNA分子在电场中通过凝胶介质而泳动，除电荷效应外，凝胶介质还有分子筛效应，与分子大小及分子形态有关。
由于带电分子的分子量差异或分子形态不同，电泳时呈现迁移位置的差异。
电泳后用核酸染料染色，形成一种荧光络合物，凝胶中含有的DNA即可直接用254nm紫外线分析仪观察到绿色荧光条带。
三、实验仪器和试剂一）仪器：1、台式高速离心机2、漩涡振荡器3、低压电泳仪4、水平电泳槽及梳齿5、紫外投射仪二）药品：1、STET 溶液2、RNase A (10mg/ml)3、酚4、氯仿5、NaAc(pH 5.2)6、无水乙醇7、75％乙醇8、RNase A (2mg/ml)9、TE 缓冲液:10mmol/L Tris-HCl,1mmol/L EDTA pH8.0,10、溶液I ：50 mmol/L 葡萄糖，10 mmol/L EDTA ，25 mM Tris-HCl pH8.011、溶液II: 0.2mol/L-NaOH, 1%SDS12、溶液III:乙酸钾溶液(3M, pH=4.8)：60mL 的5mol/L KAc,11.5ml 冰醋酸，28.5mL O H 213、电泳级琼脂糖：1％琼脂糖凝胶14、电泳缓冲溶液（1×TAE）15、染料：GoldView 5μL/100mL凝胶四、操作步骤质粒提取1.取过夜培养的细菌液1.5ml于Eppendorf管中，10000r/min离心1min，去掉上清液，加入100μl溶液I，10μL的RNase A 充分混匀；2.加入200μl新配制的0.2mol/L NaOH+1％SDS（溶液II ），加盖颠倒6次使之混匀动作不可太大；3.加入150 μl乙酸钾溶液(溶液III)，加盖后颠倒6次混匀，动作不可以太大；4.12000rpm离心10min，将上清液转移至新的eppendorf管中，加入700μl无水乙醇；5.上清液中加酚抽提，振荡后10000rpm离心1min，吸300μL上清至新管中；同法用氯仿抽提一次，吸300μL上清至新管中，不足300μL加氯仿补足；6.上清中加2.2倍体积的无水乙醇，混匀后－20℃保存；7.12000rpm离心5min，弃去上清液，用1ml75％乙醇洗涤沉淀；8.12000rpm离心2min，弃去上清液，真空抽干后溶于30μLTE溶液。
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实验一碱法提取质粒DNA
一、目的
掌握微量移液器、高速离心机等的正确使用
掌握碱法提取质粒DNA的原理和方法。
二、原理
从细菌中分离质粒DNA的方法都包括3个基本步骤：培养细菌使质粒扩增；收集和裂解细胞；分离和纯化质粒DNA。
从大肠杆菌中抽提质粒DNA的方法很多，可以在实验中根据不同的需要采用不同的方法，碱变性法因其抽提效果好，收得率高，获得的DNA可用于酶切、连接与转化，因而被各实验室广泛采用。
碱变性法抽提质粒DNA的基本原理是根据染色体DNA和质粒DNA分子量的巨大差异而达到分离的。
首先用含一定浓度葡萄糖的缓冲液（溶液Ⅰ）悬浮菌体，再加入溶液II（NaOH、SDS）后，碱性环境下菌体的细胞壁裂解，而使质粒缓慢释放出来，并且碱性条件使DNA的氢键断裂，宿主染色体双螺旋结构解开而变性，而闭合环状的质粒DNA的两条链不会完全分离，当加入溶液III中和后，宿主染色体DNA相对分子质量大，还没来得及复性，就在冰冷的条件下与SDS、蛋白质、高分子量的RNA等缠绕在一起而沉淀下来，而质粒DNA由于能够迅速配对恢复原来的构型而溶解在上清液中。
然后用酚、氯仿多次抽提进一步纯化质粒DNA 。
氯仿可使蛋白变性并有助于液相与有机相的分开，异戊醇则可起消除抽提过程中出现的泡沫。
再用两倍体积的无水乙醇洗涤沉淀，以去除残留的氯仿。
最后用75％乙醇溶液洗涤沉淀，以去除残留的盐离子。
最后获得的质粒DNA储存在TE溶液中，-20℃保存。
用于下一步凝胶电泳鉴定。
三、仪器设备、材料与试剂
仪器设备
恒温培养箱恒温摇床台式离心机高压灭菌锅制冰机电子天平pH计
量筒（10 mL，100 mL，500 mL，1 000 mL）烧杯（50 mL，100 mL，500 mL，1 000 mL）一次性手套无粉乳胶手套（光明牌，大、中、小三种号码）
玻璃棒称量勺微量移液器（1 000 μL，200 μL，20 μL）酒精灯灭菌的1.5 mL 离心管（eppendorf管）灭菌吸头（1 000 μL，200 μL），相应的吸头盒吸水纸
250mL三角瓶
材料：
含pKS质粒或pUC系列质粒的大肠杆菌。
四、试剂配制：
●2M 葡萄糖：36g葡萄糖，溶于60ml 蒸馏水中，在加蒸馏水至100ml，
然后用0.22μm滤器除菌过滤，-20℃保存。
●10％SDS(十二烷基硫酸纳)：10gSDS，溶于60mL蒸馏水中（加热至68℃
助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2）再加蒸馏水至100ml，无需灭菌。
因SDS微粉易扩散，称量需戴面具。
称后要及时清洁称量区。
●2M NaOH：NaOH 8g，溶于10ml 蒸馏水中，再加蒸馏水至100ml。
●1M Tris·HCl (pH 8.0)：蒸馏水600ml，Tris 121.2g；HCl 35ml；用HCl将
pH调至8.0，再加蒸馏水至1000ml。
●2M Tris –HCl (pH7.4)：蒸馏水300ml；Tris121.2g；HCl35ml；用HCl
将pH调至7.4，再加蒸馏水至500ml。
●0.1M EDTA (pH8.0)：18.7g EDTA-Na2-2H2O,溶于300ml蒸馏水中，用10N
NaOH将pH调至8.0，加蒸馏水至500ml，室温保存。
●去离子灭菌水
●70%乙醇：用新开装的无水乙醇35mL，加去离子灭菌水定容至50mL配
成，储存于4℃冰箱，用后即放回。
●氨苄青霉素（Amp）：100mg/mL
●卡那霉素（Kan）：50 mg/mL
●培养基：LB液体培养基(pH 7.0)200ml分装在6个100mL体积的三角瓶内，
灭菌。
29.4g 乙酸钾，加50ml蒸馏水，用冰乙酸将pH 调至4.8，再加蒸馏水至100ml。
●T ris饱和酚（pH7.0）：苯酚需要重蒸后加Tris·HCl (pH7.4)制成饱和酚。
●T ris饱和酚（pH7.0）: 氯仿 : 异戊醇=25 : 24 : 1(Ｖ／Ｖ／Ｖ)
五、实验步骤及注意事项
六、实验结果：
肉眼观察：是否有白色絮状沉淀？量多还是少？下一步实验：琼脂糖凝胶电泳进一步检测、鉴定。
七、结果分析及讨论。