实验七酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告实验目的，通过实验，掌握酵母核糖核酸的分离及组分鉴定方法，加深对核糖核酸的结构和功能的理解。
实验原理，酵母核糖核酸是由核糖核苷酸单元组成的，核糖核酸的主要结构是由磷酸、核糖和碱基组成的链状分子。
核糖核酸通过加热、冷却和酸性条件下，可将其分离成RNA的不同组分，如tRNA、rRNA和mRNA等。
实验步骤：1. 酵母细胞的培养和收获，将酵母菌落接种在含有葡萄糖和氨基酸的培养基中，培养一定时间后，收获酵母细胞。
2. 酵母细胞的裂解，将收获的酵母细胞用裂解液处理，使细胞膜破裂，释放出细胞内的核糖核酸。
3. 酵母核糖核酸的分离，利用差速离心法，将裂解后的酵母细胞液在不同离心速度下进行离心，分离出不同密度的RNA组分。
4. RNA组分的鉴定，通过琼脂糖凝胶电泳，将分离出的RNA组分进行电泳，根据不同RNA组分的迁移速度和位置，进行鉴定和分析。
实验结果：经过实验，成功分离出了酵母核糖核酸的不同组分，包括tRNA、rRNA和mRNA等。
通过琼脂糖凝胶电泳，得到了不同RNA组分的电泳图谱，根据图谱分析，确认了各个RNA组分的存在和相对含量。
实验结论：通过本次实验，我们成功掌握了酵母核糖核酸的分离及组分鉴定方法，加深了对核糖核酸的结构和功能的理解。
同时，实验结果也为进一步研究RNA的结构和功能奠定了基础。
实验中遇到的问题及解决方法：在实验过程中，可能会遇到RNA的降解、污染等问题，可以通过在实验中加入RNase抑制剂、严格控制实验条件等方法来解决。
总结：本次实验为我们提供了一种了解RNA结构和功能的方法，也为我们今后的科研工作提供了重要的参考。
通过实验，我们不仅学会了实验操作技能，还深化了对核糖核酸的理解，为我们今后的学习和研究打下了坚实的基础。
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告一、实验目的本次实验旨在通过实验方法，对酵母细胞中的核糖核酸进行分离和组分鉴定，了解酵母细胞中核糖核酸的基本特性和组成。
二、实验原理1. 酵母细胞中RNA的基本特性RNA是一种由核苷酸构成的生物大分子，它与DNA类似，但其主要功能是参与蛋白质合成。
RNA包括mRNA、tRNA和rRNA三种类型。
其中mRNA是转录过程中产生的信息分子，tRNA则将氨基酸运输到肽链上进行合成，而rRNA则是构成核糖体的重要组成部分。
2. RNA的提取方法常用的RNA提取方法包括：碱裂解法、有机溶剂提取法、硫酸盐沉淀法等。
其中硫酸盐沉淀法在提取纯度高、效率高等方面表现较好。
3. RNA电泳将提取出来的RNA样品经过琼脂糖凝胶电泳后可以得到不同大小的带状图谱，根据不同大小可以初步判断出样品中含有哪些类型的RNA。
三、实验步骤1. 酵母细胞的培养和收获将酵母菌株接种到含有YPDA培养基的锥形瓶中，在室温下静置培养48小时，直至菌落生长到一定程度。
然后将菌液离心收获，去除上清液。
2. RNA的提取和纯化将离心后的酵母细胞加入10ml Tris-EDTA缓冲液中，加入等体积的酚/氯仿混合液混合均匀，离心分离上清液中的DNA和蛋白质。
再用等体积异丙醇沉淀RNA，在70%乙醇中洗涤，最后用DEPC水重悬RNA。
3. RNA电泳将提取出来的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，经过染色后在紫外线下观察不同大小带状图谱。
四、实验结果与分析通过实验方法得到了纯化后的RNA样品，并进行了琼脂糖凝胶电泳。
实验结果显示，在琼脂糖凝胶电泳中可以看到明显的28S、18S两种大小不同的RNA带，表明样品中含有rRNA和mRNA两种类型的RNA。
五、实验结论通过本次实验，成功地提取出了酵母细胞中的RNA，并进行了琼脂糖凝胶电泳分析。
结果表明，酵母细胞中含有rRNA和mRNA两种类型的RNA。
这为我们深入了解酵母细胞内部核糖核酸的组成和特性提供了基础数据。
酵母核糖核酸的提取、水解及组成成分的鉴定
酵母核糖核酸的提取、水解及组成成分的鉴定目的和要求了解核糖核酸（RNA）的提取方法及其组成成分的定性测定原理核酸在机体生命活动中具有重要意义，核酸可分为核糖核酸和脱氧核糖核酸两类。
酵母中富含的核糖核酸在碱处理下成为可溶性的钠盐与蛋白质等其它成分分开，然后用乙醇提取。
加酸水解核酸，可鉴定其组成成分。
用硫酸水解RNA时，可以生成磷酸、戊糖和碱基。
各种成分以下列反应鉴定：（1）磷酸与钼酸铵试剂作用能产生黄色的磷钼酸铵沉淀。
（2）核糖与地衣酚试剂反应呈鲜绿色。
（3）嘌呤碱与硝酸银能产生白色的嘌呤银化物沉淀。
用硫酸水解RNA时，可以生成磷酸、戊糖和碱基。
各种成分以下列反应鉴定：（1）磷酸与钼酸铵试剂作用能产生黄色的磷钼酸铵沉淀。
（2）核糖与地衣酚试剂反应呈鲜绿色。
（3）嘌呤碱与硝酸银能产生白色的嘌呤银化物沉淀。
操作方法一、酵母RNA的提取（1）取酵母3克置于研钵中，加入25毫升0.5%氢氧化钠溶液研成匀浆。
（2）将匀浆移入三角瓶中，在沸水浴上加热水30分钟。
（3）离心沉淀10-15分钟。
（4）取上清液用3M醋酸4-5滴酸化至兰色石蕊试纸变红色。
（5）一面搅拌一面加入含2%HCL的95%酒精溶液10毫升。
（6）离心5分钟，将沉淀用无水乙醇5毫升洗涤一次，离心5分钟，沉淀再用3毫升洗涤一次，离心5 分钟，回收。
（7）用手心握住离心管并不断搅拌使挥发而使RNA迅速干燥。
二水解RNA 取1/2左右的RNA粉末于试管中加入8%硫酸4毫升在沸水浴上水解5分钟。
三、组成成分鉴定（1）嘌呤碱基的检查取水解液6滴，于试管中加氨水10滴，再加0.1M硝酸银溶液6滴，在沸水浴上加热，观察变化，何故？（2）磷酸的检查取水解液5滴，于试管中加5滴浓硝酸酸化，再加入5滴钼酸铵溶液在沸水浴上加热，冷却静止有何现象。
（3）核糖的检查取水解液6滴，于试管中加10%氢氧化钠，使其成碱性，然后加地衣酚3毫升，在沸水浴上加热，观察变化，何故？试剂和器材一、试剂（1）0.5% NaOH（2）3M 醋酸（3）8% 硫酸（4）无水酒精（5）氨水（6）含2% HCL的95%酒精（7）浓硝酸（8）0.1M AgNO3（9）酵母（10）石蕊试纸（11）钼酸铵试剂：将2克钼酸铵溶解在100毫升10% 硫酸中。
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告实验目的，通过实验，掌握酵母核糖核酸的分离及组分鉴定方法，加深对核酸的理解。
实验仪器和试剂，离心机、pH计、琼脂糖凝胶电泳仪、琼脂糖、酵母细胞、蛋白酶K、RNase A、RNase T1、DNase I、酚/氯仿、异丙醇、无水乙醇、三氯乙酸、乙醇、磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、EDTA、蛋白酶K缓冲液、RNase A 缓冲液、RNase T1缓冲液、DNase I缓冲液。
实验步骤：1. 酵母细胞的裂解。
将酵母细胞加入磷酸盐缓冲液中，加入蛋白酶K，用pH计调节至碱性，加入酚/氯仿混合液，离心分离上清液和沉淀。
2. RNA的提取。
将上清液加入异丙醇，离心，取上清液，加入无水乙醇，沉淀RNA，用乙醇洗涤沉淀物，最后用DEPC水溶解RNA。
3. RNA的纯化。
将RNA加入三氯乙酸和乙醇混合液，沉淀RNA，用乙醇洗涤沉淀物，最后用DEPC水溶解RNA。
4. RNA的酶切。
将RNA加入RNase A缓冲液，RNase T1缓冲液和DNase I缓冲液进行酶切反应。
5. RNA的电泳分析。
将酶切后的RNA样品加入琼脂糖凝胶电泳仪中进行电泳分析，观察RNA的组分鉴定。
实验结果：经过琼脂糖凝胶电泳分析，我们观察到了酵母核糖核酸的分离及组分鉴定结果。
根据不同的迁移率，我们可以清晰地看到RNA在凝胶上的分布情况，从而确定RNA的组成和大小。
实验结论：通过本次实验，我们成功地实现了酵母核糖核酸的分离及组分鉴定。
通过实验，我们加深了对核酸的理解，掌握了相关的实验技术和方法。
实验总结：本次实验不仅是对课堂知识的巩固和实践，也是对科学研究方法的探索和运用。
通过实验，我们不仅学到了理论知识，更加深了对实验技术和方法的理解和掌握。
在今后的学习和科研工作中，我们将继续努力，不断提高实验技术水平，为科学研究做出更大的贡献。
以上就是本次酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验的报告内容，谢谢阅读。
酵母核糖核酸的提取及测定
酵母核糖核酸的提取及测定酵母核糖核酸的提取及测定⼀、实验背景及⽬的核糖核酸(RNA)和它的降解物核苷酸、核苷及其衍⽣物在⽣物化学、医药、⾷品添加剂、农业等领域有着⼴泛的应⽤。
⽐如能够促进作物的⽣长，在⽔稻、⼩麦、柑橘及多种蔬菜⽣产中应⽤，取得了明显的增产效果。
像鸟苷酸(GMP)和肌苷酸(IMP)还是强⼒助鲜剂，胞苷酸(CMP)和尿苷酸(UMP)可作为⽣产治疗癌症、肝炎及冠⼼病等药物的原料。
⽽利⽤微⽣物资源提取氨基酸、核苷酸等⽣物⼩分⼦，具有成本低、⾮化学合成、⽆毒、⽆害的特点。
[1] 随着啤酒等发酵⾏业的快速发展，产⽣了相应的⼤量发酵副产物，如何利⽤这些副产物，既做到不污染环境，还能产⽣良好的经济效益，⼀直是研究的热点。
⽽啤酒废酵母中RNA 含量达6%~8%，是⽣产RNA的较好原料，此外，抽提后的菌体蛋⽩质(占⼲菌体的50%)还具有很⾼的利⽤价值。
所以利⽤啤酒废酵母⽣产RNA形成了⾮常有益的产业链。
[2] 本实验⽬的就是学习从酵母中提取RNA的⽅法并掌握其测定⼿段。
⼆、实验原理微⽣物是⼯.业上⼤量⽣产核酸的原料，其中以酵母最为理想，酵母核酸中主要是RMA (2.67~10.0%)，DNA很少(0.03~0.516%)，菌体容易收集，RMA也易于分离。
RMA提制过程是先使RNA从细胞中释放，并使它和蛋⽩质分离，然后将菌体除去，再根据RNA等电点在pH2. 0~2.5的特点，将体系pH调⾄其等电点，使之沉淀，进⾏离⼼收集。
提取RNA的⽅法很多，在⼯业⽣产上常⽤的是稀碱法和浓盐法。
稀碱法利⽤碱使细菌细胞壁⽔解，使RNA释放出来，浓盐法是在加热条件下，利⽤⾼浓度的盐改变细胞膜的通透性，使RNA释放出来，RNA 钠盐易溶于⽔，在含盐的菌体溶液中，RVA 有较⾼的溶解度。
⼆者均通过控制温度使蛋⽩质变性沉淀，通过离⼼将RNA及蛋⽩质和酵母菌体分离，进⽽在等电点沉淀RNA，从⽽达到提取⽬的。
本实验采⽤浓盐法(10% NaCl),是⾷品医药卫⽣领域制备RNA 制剂的经典⽅案。
实验七 核酸的定量
成分测定
取200mg提取的核酸，加入3mol/L硫酸10ml，在沸 水浴中加热10min制成分解液并进行组分的鉴定。
1、嘌呤碱 取水解液1ml加入过量浓氨水，然后加 入约1ml 0.1mol/L硝酸银溶液，观察有无嘌呤碱的 银化合物沉淀。
2、核糖 取一支试管加入水解液1ml、三氯化铁浓 盐酸溶液2ml和苔黑酚乙醇溶液0.2ml。放沸水浴中 10min。注意溶液是否变成绿色，说明核糖的存在。
二、器材与试剂
1、试剂的配制 钼酸铵-过氯酸沉淀剂[0.25%钼酸按-2.5%过
氯酸溶液]：取3.6ml 70%过氯酸和0.25g钼酸 铵溶于96.4ml蒸馏水中。 样品DNA 2、器材 容量瓶（50ml）、离心管、离心机、紫外分 光光度计。
三、操作步骤
取两支1.0ml小离心管，甲管加入0.5ml样品 和 0.5ml 蒸 馏 水 ； 乙 管 加 入 0.5ml 样 品 和 0.5ml钼酸铵-过氯酸沉淀剂，摇匀，在冰浴 中放置15min，以3000r/min离心10min，分 别取上清液0.75ml在量筒中定容到25ml，备 用。
干扰因素
蛋白质由于含有芳香氨基酸，因此也能 吸收紫外光。通常蛋白质的吸收高峰在 280nm波长处，在260nm处的消光值仅为核 酸的十分之一或更低，故核酸样品中蛋白质 含量较低时对核酸的紫外测定影响不大。 RNA的260nm与280nm消光值的比值在2.0以 上；DNA的260nm与280nm消光值的比值则 在1.8左右。当样品中蛋白质含量较高时比 值即下降。
2、二苯胺试剂为什么要溶于浓醋酸? 3、请分析自己的DNA样品。
三、操作 1、提取 称取干酵母粉2g于50mL三角瓶内。加
10% NaCl溶液10mL，搅拌均匀，然后于沸水浴 中提取半小时。 2.分离 将上述提取液取出，用自来水冷却，分装 在离心管内，以3500r/min离心10min，使提取 液与菌体残渣等分离。 3.沉淀RNA 将离心得到的上清液倾于50mL烧杯 内，并置于有冰块的250mL烧杯中冷却。待溶液冷 至10℃以下时，在搅拌下小心地加入等体积的酸性 乙醇，随着酸性乙醇的加入，溶液的逐步下降，溶液 中白色沉淀也逐渐增加，当 pH=2.5（RNA 等电 点）时沉淀量最多（注意严格控制pH值），继续于 冰浴中静置10min，使沉淀充分，颗粒变大。
实验七酵母RNA的提取及鉴定
实验七酵母RNA的提取及鉴定姓名：郭沈杰年级专业：2012级生物科学同组者：蔡萍萍学号：12050011012实验七酵母RNA的提取及鉴定一、实验目的掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法。
二、实验原理酵母核酸中RNA含量较多，DNA含量则少于2%。
RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，有此可得粗RNA制品。
用碱液提取的RNA有不同程度的降解。
三、实验仪器1、离心机2、水浴锅3、电炉4、烧杯5、量筒6、移液管7、玻璃棒8、滤纸9、漏斗10、试剂瓶11、电子天平12、pH试纸（pH1~14）四、实验试剂1、干酵母粉2、0.2%氢氧化钠溶液：2g氢氧化钠溶于蒸馏水并稀释至1000ml。
3、乙酸（A.R.）4、95%乙醇5、无水乙醚（A.R.）6、10%硫酸：浓硫酸（比重1.84）10ml，缓缓倾于水中，稀释至100ml。
7、氨水（A.R.）8、5%硝酸银溶液：5g硝酸银溶于蒸馏水并稀释至100ml，贮于棕色瓶中。
五、实验步骤(一)RNA的提取：1、称取2g干酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%氢氧化钠溶液10ml，沸水浴加热30分钟，经常搅拌（如沸水浴过程中溶液蒸干可再加5~8ml氢氧化钠）。
冷却，然后加入乙酸数滴，使提取液呈酸性（pH试纸检验，pH5~6），离心10-15分钟（4000r.p.m）。
倒取上清液，加入2倍体积的95%乙醇，边加边搅，加毕，静置，待完全沉淀，过滤。
2、滤渣先用95%乙醇洗2次，每次约5毫升，再用无水乙醚洗2次，每次也约5ml。
3、洗涤时可小心地用玻璃棒搅动沉淀。
乙醚滤干后，滤渣即为粗RNA，可鉴定和测定含量用。
（二）鉴定：1、取上述RNA约0.5g，加10%硫酸5ml,加热至沸1~2分钟，将RNA水解。
2、水解液2ml，加入氨水2ml和5%硝酸银溶液1ml，观察是否产生絮状嘌呤银化合物。
注意事项：1、离心管回收2、离心的时候，要两两对称放置，且离心管中溶液的量基本一样。
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
实验名称：酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
实验目的：通过实验，掌握分离酵母核糖核酸的技术和方法，
了解酵母核糖核酸的结构和组成，为深入研究生物分子提供基础
知识。
实验原理：酵母是常见的单细胞真菌，其细胞内含有多种生物
分子，其中包括核糖核酸，其主要作用是传递遗传信息。
酵母核
糖核酸在组成上分为核糖体RNA和转运RNA两类，其中核糖体RNA分子量较大，可以通过葡萄糖等物质的离心分离、盐析和凝
胶过滤等方法进行纯化。
实验步骤：
1.将酵母菌株培养至对数生长期，并收集其含有核糖核酸的细胞。
2.将酵母菌细胞裂解，并加入一定量的盐，使其发生盐析反应。
3.将含有核糖核酸的盐析液进行凝胶过滤，通过分子量筛选，
分离出核糖体RNA。
4.对分离出的核糖体RNA进行电泳实验，检测该分子的分子量和组成。
实验结果：
1.通过盐析实验，成功从酵母菌细胞中分离出核糖体RNA，依
据电泳图谱，该分子的分子量约为20kD。
2.通过对核糖体RNA的电泳图谱进行分析，可以发现，在核糖体RNA中，存在大约四分之三的核糖核酸分子为16S rRNA，其
它分子为其他转运RNA。
结论：通过本次实验，我们成功地从酵母菌的细胞中分离出核
糖体RNA，掌握了酵母核糖核酸的分离和组分鉴定等技术和方法，为深入研究生物分子提供了基础研究支持。
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三 仪器、原料和试剂
仪器：试管；试管架；烧杯；移液管； 量筒；滴管；水浴锅；
离心机；离心管；锥形瓶。
原料：干酵母粉
试剂： （1）0.04mol／L氢氧化钠溶液；
（2）酸性乙醇溶液；
（3）1.5mol／L硫酸；
（4）0.1mol/L硝酸银溶液；
生
（5）1mol/L浓氨水；
物
（6）三氯化铁-浓盐酸溶液；
生 物 化 学 实 验
稀碱法使用稀碱使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去
化 学
蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA。
实
验
二实验原理
酵母含RNA达2.67-10.0%，而DNA含量仅
为0.03-0.516%，为此，提取RNA多以酵母为原
料。
酵母中的核糖核酸可溶于碱，在碱提取液中
加酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由
生 此得到粗核糖核酸。核糖核酸含有核糖，嘌呤
《生物化学实验》课件
实验七
酵母核糖核酸的分离 及组份鉴定
一实验目的
1.了解并掌握稀碱法提取RNA的基本 原理及方法。
2.了解RNA的化学组成及定性鉴定的 生 原理与操作过程。
物 化 学 实
苯酚法 去污剂法 盐酸胍法
工业生产： 稀碱法---本实验
生
（无活性的） 浓盐法
（2）嘌呤碱： 在1支干净试管内加入水解液5滴，再逐滴
生 物
加入15滴氨水，然后加入约5滴硝酸银溶液，放置片刻，
化 观察有无白色嘌呤碱的银化合物沉淀。
学 实
（3）磷酸： 取1支试管，加入水解液10滴和定磷试剂10
验 滴。在水浴中加热，观察溶液颜色变化，溶液变蓝色，说
明磷酸的存在。
五 思考题
1、如何得到高产量RNA的粗制品？ 2、本实验RNA组分是什么？怎样验证的？
生 心管中。注意要缓缓倾入，且用胶头吸管吹匀；
物 化
（4）离心(3000r／min)3分钟，弃去上清液；
学
实
验
四操作步骤
（二）RNA成分的鉴定
在沉淀中，加入1.5 mol／L硫酸溶液3ml，在沸水浴中加 热至少10分钟制成水解液并进行组分的鉴定。
（1）戊糖： 取1支试管加入水解液5滴、三氯化铁浓盐 酸溶液10滴和苔黑酚乙醇溶液2滴。用木夹夹好后放沸水 浴中10分钟。注意溶液是否变成绿色，说明核糖的存在。
物
化 碱，嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水
学 实
解，从水解液中可以测出上述组分的存在。
验
二实验原理
鉴定方法： (1)磷酸与定磷试剂作用能产生蓝色的钼蓝沉淀。 (2)核糖与地衣酚试剂反应呈鲜绿色。 (3)嘌呤碱与硝酸银产生白色的嘌呤银化合物沉淀。
生 物
化 嘌呤碱的糖苷键比嘧啶碱的糖苷键易于水解
物
化
学
实
验
二实验原理
组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱
和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中。向水层加入乙醇
后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好的除去DNA和
蛋白质。
浓盐法使用10%左右氯化钠溶液，90℃提取3-4h，迅速
冷却，提取液经离心后, 上清液用乙醇沉淀RNA。
生 物
化
学
（7）苔黑酚乙醇溶液 ；
实
（8）抗坏血酸 ；
验
（9）钼酸铵试剂。
四操作步骤
（一）酵母RNA的提取
（1）将2g酵母悬浮于10ml 0.04 mol／L氢氧化钠溶液中；
（2）在沸水浴上加热30分钟后，将匀浆液转移至10ml离心
管中，冷却。配平离心(3000r／min)15分钟；
（3）将上清液缓缓倾人盛有4ml酸性乙醇溶液的另一10ml离