酵母菌的分离纯化实验方案
酵母菌的分离及培养条件的优化
2. 酵母浸液0.5g (NH4)2SO4 2g 葡萄糖1g (2) 1.酵母浸液0.5g NH4NO3 1g 葡萄糖1g
2. 酵母浸液0.5g NH4NO3 2g 葡萄糖1g
(3) 1.酵母浸液0.5g NaNO3 1g 葡萄糖1g • 2. 酵母浸液0.5g NaNO3 2g 葡萄糖1g • 3.对比试验:酵母浸液0.5g 蛋白胨1g 葡萄糖1g • 4.配置完毕调PH值 PH等于5为准确 • 包三个移液管然后将以上培养基一起拿去灭菌
• 5.3减少进气量，控制罐压在0.02MPa左右后，点 燃接种火圈内的酒精棉球。
• 5.4 拧下进料口螺盖，放入盛有酒精的培养皿中。
• 5.5将接种瓶是瓶口在火焰上烧一下，并在火焰的 保护下拔下瓶塞，迅速将菌种倒入发酵罐内。
• 5.6旋上进料口螺盖后灭火焰，拧紧螺盖，并用酒 精棉球将进料口擦洗干净。
二、配制
1、配多少培养基 10L罐装料量60%：10X60%=6L 接种量10%：培养基5400ml(实际操作培养基
5000ml)，种子液600ml 2、配方用多少
6L:60g酵母浸粉1%,120gc120g葡萄糖2%； 150ml:1.5g酵母浸粉1%,3g酵母浸粉1%,3g葡 萄糖2%.其中100ml加1g琼脂配成固体培养基用于 倒平板；50g原液用于测OD时做标准液。 3、所需器材包扎灭菌 4个装有9ml蒸馏水的试管，6个空试管，4个涂 布器，4个移液管1ml，6个平板
四 实验内容
1、分离单菌落
（1）实验物品灭菌
仪器：包扎9个移液管、9个涂布器、9个装有9ml 蒸馏水的试管、16个平板、
液体：3g酵母浸粉1%、6g蛋白胨2%、6g葡萄糖 2%，配成300ml溶液，取240ml溶液平均分装两个三 角瓶中，然后每个三角瓶放入2.4g琼脂，剩下60ml 为液体培养基，然后将以上设备拿去灭菌
细菌 、放线菌 、酵母菌及霉菌的分离与纯化
土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化一、实验目的1. 学习、掌握从土壤稀释分离、划线分离各类微生物的技术。
2. 学习从样品中分离、纯化出所需菌株。
3. 学习并掌握平板倾注法和斜面接种技术，了解培养细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物的培养条件和培养时间。
4. 学习平板菌落计数法。
二、实验原理将待分离的样品进行一定的稀释，使微生物的细胞（或孢子）尽量呈分散状态，选用有针对性的培养基，在不同温度、通风等条件下培养，让其长成一个纯种单个菌落。
要想获得某种微生物的纯培养，还需提供有利于该微生物生长繁殖的最适培养基及培养条件。
微生物四大类菌的分离培养基、培养温度、培养时间见表2-1所示。
表2-1 微生物四大类菌的分离和培养要求样品来源分离对象分离方法稀释度培养基名称培养温度/℃培养时间/d土样细菌稀释分离10-5，10-6，10-7牛肉膏蛋白胨30～37 1～2土样放线菌稀释分离10-3，10-4，10-5高氏1号28 5～7土样霉菌稀释分离10-2，10-3，10-4马丁氏琼脂28～30 3～5面肥或土样酵母菌稀释分离10-4，10-5，10-6马铃薯葡萄糖28～30 2～3细菌分离平板细菌单菌落划线分离10-2 牛肉膏蛋白胨30～37 1～2三、实验材料1. 菌源土样2. 培养基牛肉膏蛋白胨培养基，马丁氏培养基，高氏合成1号培养基，马铃薯葡萄糖培养基(制平板和斜面)，见附录Ⅲ。
3. 无菌水 250 mL锥形瓶，每瓶装99 mL无菌水(或95mL为分离霉菌用)，内装10粒玻璃珠。
4.5 mL无菌水试管(每人5～7支)。
4. 其他物品无菌培养皿，无菌移液管，无菌玻璃涂棒(刮刀)，称量纸，药勺，橡皮头，10%酚溶液。
（一）系列稀释平板法1. 取土样选定取样点，按对角交叉（五点法）取样。
先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。
盛土的容器应是无菌的。
将5点样品约1kg充分混匀，除去碎石、植物残根等杂物，装入已灭过菌的牛皮纸袋内，封好袋口，并记录取样地点、环境及日期。
酵母菌的分离纯化
酵母菌的分离纯化-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN酵母菌的分离纯化、固定化和酒精发酵第一部分酵母菌的分离纯化一、实验目的应用酵母菌的生理生化和生态学的特点，从自然环境中分离酵母菌，并掌握微生物分离纯化的基本方法。
二、实验原理酵母菌常见于含糖份比较高的环境中，如果园土、菜园土及果皮等的表面。
多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为酵母菌生长迅速，容易分离培养。
在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长快，利用酸性条件则可以抑制细菌的生长。
因此常用酸性液体培养基获得酵母菌的加富培养，然后在固体培养基上划线分离纯化。
三、器材和用品1、甘蔗、苹果皮、葡萄皮、果园土、菜园土等。
2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：马铃薯200g（煮开10min后过滤取汁），葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml，pH自然。
分装三角瓶；试管斜面1支/组3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上，不加琼脂加乳酸，按1000ml培养基加入5ml乳酸，pH为左右，再分装试管9ml2支/组。
4、无菌吸管3支/组、无菌培养皿、100ml无菌水1瓶/组、涂棒、美兰染液、显微镜、接种环等。
四、实验方法1、接种：取果皮（不需冲洗）或土壤5克，加入到100ml无菌水中，充分搅拌后，用无菌吸管取1ml接入到9ml乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h，可见培养液变浑浊。
2、加富培养：用无菌吸管取上述培养液1m l，注入另1管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h。
3、镜检：用无菌操作法用接种环取少量菌液置于载玻片上，中央滴一滴美兰染液，混合均匀后制成水浸片，在高倍镜下观察酵母菌的形态及出芽方式，并可根据菌体是否染色来区分酵母菌的死活细胞，因活细胞使美兰染液还原，故菌体不着色。
4、涂皿：用马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板，用无菌吸管取加富培养液到平板中，用涂棒涂匀后培养24h。
5、分离纯化：用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上四区划线，培养后分离得到单个菌落。
酵母菌的分离纯化
酵母菌的分离纯化、固定化和酒精发酵第一部分酵母菌的分离纯化一、实验目的应用酵母菌的生理生化和生态学的特点，从自然环境中分离酵母菌，并掌握微生物分离纯化的基本方法。
二、实验原理酵母菌常见于含糖份比较高的环境中，如果园土、菜园土及果皮等的表面。
多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为4。
5—6.0。
酵母菌生长迅速，容易分离培养。
在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长快，利用酸性条件则可以抑制细菌的生长。
因此常用酸性液体培养基获得酵母菌的加富培养，然后在固体培养基上划线分离纯化.三、器材和用品1、甘蔗、苹果皮、葡萄皮、果园土、菜园土等。
2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基:马铃薯200g（煮开10min后过滤取汁),葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml，pH自然。
分装三角瓶;试管斜面1支/组3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上,不加琼脂加乳酸，按1000ml培养基加入5ml乳酸，pH为5。
5左右，再分装试管9ml2支/组.4、无菌吸管3支/组、无菌培养皿、100ml无菌水1瓶/组、涂棒、美兰染液、显微镜、接种环等.四、实验方法1、接种：取果皮（不需冲洗)或土壤5克，加入到100ml无菌水中,充分搅拌后，用无菌吸管取1ml接入到9ml乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28—30℃培养箱中培养24h，可见培养液变浑浊.2、加富培养：用无菌吸管取上述培养液1m l，注入另1管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中,在28-30℃培养箱中培养24h.3、镜检：用无菌操作法用接种环取少量菌液置于载玻片上，中央滴一滴美兰染液,混合均匀后制成水浸片，在高倍镜下观察酵母菌的形态及出芽方式，并可根据菌体是否染色来区分酵母菌的死活细胞，因活细胞使美兰染液还原,故菌体不着色。
4、涂皿：用马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板，用无菌吸管取0.1ml 加富培养液到平板中，用涂棒涂匀后培养24h。
5、分离纯化：用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上四区划线，培养后分离得到单个菌落。
酵母菌的分离纯化实验方案
酵母菌的分离纯化∙实验目的1.了解培养基的配置与灭菌技术；2.无菌操作技术；3.工业微生物的分离与纯化技术；4.工业微生物的检测及保藏。
∙基本原理1、培养基是人工配置的用于培养、分离、鉴定和保存各种微生物的营养基质。
也适合微生物在生命活动中积累各种代谢产物。
由于微生物种类不同，营养类型各异以及实验目的不同，因此培养基的种类也很多。
不同微生物对营养的要求不同，在配置时根据微生物对PH 的要求选择合适的PH。
由于本次实验主要是分离纯化酵母菌，所以配置的培养基是适合酵母菌生长麦芽汁平板培养基，同时添加抗生素抑制霉菌及其它菌的生长。
2、接种和培养过程中必须保证不被其它微生物所污染，关键在于严格进行正确的无菌操作，但是绝对无菌是不可能的，只能人工创造相对无菌的环境。
所以本次实验无菌操作是在超净工作台的酒精灯火焰旁进行。
3、把特定微生物从混杂的微生物群体中分离出来而获得某一种或某一株微生物的过程叫微生物的分离与纯化。
首先根据其生长特性设计只利于此菌生长的条件，再根据各种稀释法使他们在固体培养基上单独长成菌落。
分离纯化的方法通常有：稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法和平板划线。
此次实验采用梯度稀释涂布平板法。
4、微生物检测项目最常用的是细胞数的检测，方法比较多，主要有显微镜直接计数法、平板菌落计数法（CFU）、光电比浊计数法等。
本次实验设计酵母菌的数量检测，选用显微镜直接计数法和平板菌落计数法。
实验器材仪器设备恒温水浴锅、电热干燥箱、蒸汽灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、恒温摇床、水浴锅、电炉、铜锅、酒精灯、接种环、电子天平、研钵、光学显微镜、血细胞计数器玻璃器皿烧杯、锥形瓶、大小试管、培养皿、漏斗、三角涂棒、吸管、试管架、玻璃涂棒、盖玻片试剂与材料苹果、大麦芽、琼脂、蒸馏水、碘液、抗生素、染色液其它纱布、滤纸实验内容及操作步骤(一)、样品的选择酵母菌一般在果园的土壤中或者水果的表面含量较多，因此选择苹果为样品。
酿酒酵母的分离纯化实验
四、实验步骤
1.实验准备
1）将12支大试管、两个三角瓶、6支1mL吸量管、涂布器洗干净烘干，将玻璃珠装入一个三角瓶铺满瓶底。
2）制做棉塞塞紧大试管管口和三角瓶瓶口，用棉丝插入吸量管做滤菌之用，用报纸将大试管、三角瓶、涂布器、平板培养皿包扎好，干热灭菌。
9）物是否为纯培养。
10）对纯培养酿酒酵母进行性能测定。
实验日期：2011.12.12
指导老师：黄
酿酒酵母分离纯化实验设计
学院：轻纺与食品学院专业：轻工生物技术姓名：王克寒学号：0943095015
一、实验目的
1.学习和掌握对酿酒酵母的纯种分离和纯化的原理和方法。
2.了解工业上酿酒酵母的菌种保存、活化及复壮工艺。
3.学习和掌握血球计数板的原理和使用方法。
二、实验原理
传代培养中的细胞传代培养，当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，一则细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度减慢甚至停止；另一方面也会因营养物不足和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。此时就需要将培养物分割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿（瓶）内，再进行培养。这个过程就称为传代或者再培养。
酿酒酵母是与人类关系最广泛的一种酵母，细胞为球形或卵形，繁殖方法为出芽生殖，是一种真核生物，最适生长温度为25℃~30℃。
本实验采用麦芽汁培养基培养酿酒酵母，平板分离主要有混菌法，涂布法和划线法，由于划线法分离效果不好，涂布法容易染菌，所以本实验主要采用混菌分离法。
三、实验器材
1.菌种：酿酒酵母
2.实验试剂和药品：麦芽汁培养基粉末、蒸馏水
实验一 酵母菌株的筛选分离
一、实验目的：1.通过酒母中酵母的筛选实验，熟悉微生物分离纯化、接种微生物操作实验；2.熟悉产酒精酵母的TTC显色平板等性能筛选实验；二、实验材料与仪器：培养基：YPD培养基、MEB、TTC显色培养基；酵母膏、蛋白胨、葡萄糖、TTC、0.1%吕氏碱性美蓝仪器：灭菌锅、恒温培养箱、厌氧培养箱；移液管、涂布棒，接种环，平板、三角瓶、试管（15*150mm）、硅胶塞、杜氏小倒管、纱布、报纸；三、实验步骤：1.1 培养基的配制YPDS固体培养基（1L）：称取酵母膏10g、蛋白胨20g、葡萄糖20g溶于1L的水当中，分装到三角瓶中后加入2%琼脂粉，115℃灭菌20min；注：为抑制霉菌菌丝的生长。
可在培养基中加入0.5%-1%的脱氧胆酸钠。
YPD液体培养基（1L）：按YPDS配方配制，不加琼脂，121℃灭菌20min；TTC显色培养基：每100mlYPDS培养基中加入0.05g的TTC；1.2 酵母的分离纯化：1.2.1 梯度稀释将酒样混匀后取1ml加入到9ml的无菌水中制成10-1浓度梯度，之后从中取出1ml再加入到9ml的无菌水当中，浓度梯度为10-2，依次往下推，分别制得10-3,10-4,10-5,10-6不同稀释度的菌液；1.2.2 涂布将稀释得到的10-2,10-3,10-4三个梯度的菌液取0.5 ml到预先倒好的TTC显色培养基平板中，沿一个方向均匀的进行涂布，然后将涂布好的平板用报纸包好避光培养，倒置于恒温厌氧培养箱中28℃培养2-3d。
1.3 酵母的保藏将划线纯化后的酵母菌株接种在YPDS斜面试管上，用记号笔写上将接种的菌名、日期和接种者，28℃培养1-2d，培养好后放置于4℃冰箱保存；四、实验结果1、对实验过程中所得到的实验结果进行拍照；注：左上图浓度梯度10-2，右上图浓度梯度10-3左下图浓度梯度10-4，右下图为酵母菌株接种在YPDS 斜面试管2、 记录所筛选到酵母菌株的颜色分级并进行编号；酵母菌株的颜色随浓度梯度增加而变深，如颜色深：10-2>10-3>10-4五、思考题1、涂布之前稀释的目的？答：稀释涂布平板的目的是降低菌的浓度.浓度过高的菌会在培养基上长出过多的菌落,以至于没法挑出单菌落,那样就无法获得单一种类的菌,或者无法统计菌落数来计算菌液浓度了.2、如何获得纯化的微生物菌株？ 答：1）划线分离法2）稀释分离法3）组织分离法3、酵母菌TTC 筛选的原理是什么？答：TTC （2，3，5一氯化苯基四氮哇）是一种显示剂。
纯化酵母菌分离方法
纯化酵母菌分离方法
纯化酵母菌的分离方法包括以下几个步骤：
1. 选择合适的培养基：使用含有适当营养物质和抑制其他微生物生长的培养基。
常用的选择包括酵母营养琼脂糖培养基和酵母抑制琼脂糖培养基。
2. 样品处理：将酵母菌样品（例如酵母悬液或含有酵母菌的混合物）以适当稀释倍数取出，避免过度稀释或稀释不够。
3. 观察与筛选：将适量的稀释液均匀平铺于琼脂糖培养基上，培养一段时间后观察培养基上的菌落。
通过观察菌落形态、颜色和其他特征，选择单独的菌落。
4. 分离纯化：将所选的菌落用无菌的酵母菌营养琼脂糖培养基进行分割传代，最终得到纯化的酵母菌培养基。
5. 培养与保存：将纯化的酵母菌培养液进行扩大培养，得到足够数量的酵母菌。
然后，可以将其中一部分保存在液氮中，以备日后使用。
需要注意的是，以上方法只能分离到可培养的酵母菌，对于某些酵母菌可能不适用。
另外，为了避免污染，所有实验操作都应在无菌条件下进行。
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酵母菌的分离纯化
•实验目的
1.了解培养基的配置与灭菌技术；
2.无菌操作技术；
3.工业微生物的分离与纯化技术；
4.工业微生物的检测及保藏。
•基本原理
1、培养基是人工配置的用于培养、分离、鉴定和保存各种微生物的营养基质。
也适合微生物在生命活动中积累各种代谢产物。
由于微生物种类不同，营养类型各异以及实验目的不同，因此培养基的种类也很多。
不同微生物对营养的要求不同，在配置时根据微生物对PH 的要求选择合适的PH。
由于本次实验主要是分离纯化酵母菌，所以配置的培养基是适合酵母菌生长麦芽汁平板培养基，同时添加抗生素抑制霉菌及其它菌的生长。
2、接种和培养过程中必须保证不被其它微生物所污染，关键在于严格进行正确的无菌操作，但是绝对无菌是不可能的，只能人工创造相对无菌的环境。
所以本次实验无菌操作是在超净工作台的酒精灯火焰旁进行。
3、把特定微生物从混杂的微生物群体中分离出来而获得某一种或某一株微生物的过程叫微生物的分离与纯化。
首先根据其生长特性设计只利于此菌生长的条件，再根据各种稀释法使他们在固体培养基上单独长成菌落。
分离纯化的方法通常有：稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法和平板划线。
此次实验采用梯度稀释涂布平板法。
4、微生物检测项目最常用的是细胞数的检测，方法比较多，主要有显微镜直接计数法、平板菌落计数法（CFU）、光电比浊计数法等。
本次实验设计酵母菌的数量检测，选用显微镜直接计数法和平板菌落计数法。
实验器材
仪器设备
恒温水浴锅、电热干燥箱、蒸汽灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、恒温摇床、水浴锅、电炉、铜锅、酒精灯、接种环、电子天平、研钵、光学显微镜、血细胞计数器
玻璃器皿
烧杯、锥形瓶、大小试管、培养皿、漏斗、三角涂棒、吸管、试管架、玻璃涂棒、盖玻片
试剂与材料
苹果、大麦芽、琼脂、蒸馏水、碘液、抗生素、染色液
其它
纱布、滤纸
•实验内容及操作步骤
(一)、样品的选择
酵母菌一般在果园的土壤中或者水果的表面含量较多，因此选择苹果为样品。
（二）、样品的处理
制备苹果悬液
1.首先将1g苹果在研钵中磨细，放入装有10ml生理盐水和玻璃珠的100ml三角瓶中去。
2.激烈震荡约10min,使菌体分散并悬浮与液体中。
3.用无菌吸管吸取1ml苹果悬液注入盛有9ml生理盐水的试管中，吸取三次并混匀。
4.再去一只无菌吸取管，从此试管中吸取1ml，注入另一盛有9ml生理盐水的试管中，取
三次并混匀。
5.同法类推制成10-3、10-4、10-5、10-6、10-7的各种稀释度的苹果悬液。
（三）、培养基的制备与灭菌
1、培养基的选择：选择麦芽汁为培养基培养酵母菌
2、麦芽汁琼脂培养基的制备
取新鲜麦芽汁200mL在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。
加水约400mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
将滤液稀释到5—6波美度，pH 约6.4，加入2%琼脂即成。
121℃灭菌30min。
培养皿采用干热灭菌（蒸汽灭菌锅）生理盐水
称取氯化钠0.43g，加入50ml水，装入100ml小锥形瓶中，灭菌备用。
3、分装
已过滤灭菌的培养基应进行分装。
因要制作平板和斜面培养基，所以需将培养基分装于培养皿和试管中。
分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一只手握住几支试管或培养皿，依次接取培养基。
分装时，注意不要使培养基粘附管口或培养皿口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。
装入试管的培养基量，视试管和培养皿的大小及需要而定。
一般制作斜面培养基时，每只15×150毫米的试管，约装3～4毫升（1/4～1/3试管高度），如制作深层培养基，每只20×220毫米的试管约装12～15毫升。
4、加棉塞
分装完毕后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。
堵棉塞的主要目的是过滤空气，避免污染。
棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作，不要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。
制作棉塞时，要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度，揪取手掌心大小一块，铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中，用右手食指插入棉花中部，同时左手食指与姆指稍稍紧握，就会形成1个长棒形的棉塞。
棉塞作成后，应迅速塞入管口或瓶口中，棉塞应紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿皱折侵入。
棉塞不要过紧过松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。
棉塞的2/3应在管内或瓶内，上端露出少许棉花便于拔取。
塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌。
5、制作斜面培养基和平板培养基
培养基灭菌后，制作斜面培养基和平板培养基，须趁培养基未凝固时进行。
(1)制作斜面培养基。
在实验台上放1支长0.5～1米左右的木条，厚度为1厘米左右。
将试管头部枕在木条上，使管内培养基自然倾斜，凝固后即成斜面培养基。
(2)制作平板培养基。
将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，右手迅速将培养基倒入培养皿中，每皿约倒入10毫升，以铺满皿底为度。
铺放培养基后放置15分钟左右，待培养基凝固后，再5个培养皿一叠，倒置过来，平放在恒温箱里，24小时后检查，如培养基末长杂菌，即可用来培养微生物。
（四）、样品的分离纯化
1、倒制平板
将麦芽汁琼脂培养基加热熔化，冷却至55-600C。
加入抗生素1ml并混匀。
在超净工作台的酒精灯火焰旁倒制平板。
2、涂布平板
将上述培养基的5个培养基的四个平板分别标上10-3、10-4、10-5、10-6、10-7五种稀释度。
取5只无菌吸管，分别从四种苹果悬液的稀释液中各取0.1ml。
对号放于已标记好稀释度的平板中，用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻涂布均匀。
重复以上4步骤。
3、倒置培养
将培养基平板倒置，与30-320C温箱中培养2天。
4、观察挑菌
观察培养后长出的酵母菌的单个菌落，分别挑取并接种于斜面培养基上，再培养。
待菌苔长好后，检查是否有杂菌，若有则需再一次进行分离纯化，直到获得纯菌株培养物。
5、最大然数法计数
原每毫升样品中酵母数量=稀释倍数*最大然数
（五）、酵母菌的制片、染色及形态观察以及计数
酵母菌的个体形态一般可采用水浸片进行活体观察。
1、观察菌落和菌苔并记录菌落形态特征
制作酵母菌水浸片显微标本片
1、在干净的载玻片上滴上一滴蒸馏水，用接种环进行无菌操作，挑取培养物少许，
置载玻片的水滴中，与水混合做成悬液并涂成直径约1厘米的薄层，为避免因菌
数过多聚成集团，不利观察个体形态，可在载玻片之一侧再加一滴水，从已涂布
的菌液中再取一环于此水滴中进行稀释，涂布成薄层，若材料为液体培养物或固
体培养物中洗下制备的菌液，则直接涂布于载玻片上即可。
2、酵母菌美蓝水浸片的制作：染色--------加盖玻片--------观察鉴别
3、酵母菌碘液水浸片的制作：制片---------染色
4、酵母菌子囊孢子染色标本片的制作：菌种活化----------产孢培养--------制片-------染色
-------脱色----------复染---------镜检。
计数、采用显微镜直接计数。
将酵母菌悬浮液放在血细胞计数器的载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下直接进行计数。
注:第一大组第三小组
杨鑫090603021
涂强090603037
钟俊090603031。