酵母菌分离筛选方法要点
水果表皮酵母菌的分离和鉴定_理论说明
水果表皮酵母菌的分离和鉴定理论说明1. 引言1.1 概述:酵母菌是一类单细胞真菌，广泛存在于自然界中的各种环境中。
其中，水果表皮是一种容易寄生、繁殖和生长的适宜环境之一。
水果表皮酵母菌指的是那些在水果表面附着并且以水果作为营养基质的酵母菌。
随着食品工业和农业领域的发展，对于水果表面酵母菌的分离和鉴定以及其在水果保存中作用与影响的研究变得愈加重要。
1.2 文章结构:本篇文章将分为五个主要部分来进行阐述。
首先，引言部分将在本节中提供一般背景，并对文章内容进行概述。
第二部分将重点介绍水果表皮酵母菌的分离和鉴定方法，包括方法原理、实验步骤和结果分析等内容。
第三部分将探讨酵母菌在水果保存过程中对水果品质的影响以及其发酵机制。
第四部分将介绍食品工业和农业领域中酵母菌的应用案例、研究进展，并对其未来发展方向进行展望。
最后，结论部分将总结研究结果，提出存在问题并给出改进建议，并对未来酵母菌研究的发展趋势进行展望。
1.3 目的:本篇文章旨在探讨水果表皮酵母菌的分离和鉴定方法，深入了解其对水果品质及保存过程产生的影响与机制，并探索酵母菌在食品工业和农业领域中的应用前景和趋势。
通过此次研究与分析，我们希望为相关领域提供一定的理论指导和实际参考，从而推动酵母菌研究的进一步发展和应用。
2. 水果表皮酵母菌的分离和鉴定2.1 分离水果表皮酵母菌的方法：要分离水果表皮上的酵母菌，可以采用以下步骤：步骤1: 准备样品选择新鲜的水果作为研究对象，如苹果、葡萄、香蕉等。
确保水果表面干净，并且没有明显的腐烂或受损。
步骤2: 表皮去污使用无菌棉花球蘸取70%乙醇或其他消毒液，轻轻擦拭水果表皮，以去除外部细菌和霉菌。
步骤3: 分离样品使用无菌刀具将水果表皮剥离下来，并将其放入含有适当培养基（如琼脂）的培养皿中。
步骤4: 培养孵育将培养皿密封并置于适宜温度下（通常为25-30摄氏度），并在黑暗环境中培养孵育一段时间，通常为24-48小时。
葡萄自然发酵过程中酵母的分离鉴定及优良葡萄酒酵母筛选
葡萄自然发酵过程中酵母的分离鉴定及优良葡萄酒酵母筛选葡萄酒是一种以葡萄为原料经过发酵工艺制成的酒类，其口感和品质与所用酵母菌种密切相关。
在葡萄自然发酵过程中，酵母菌会附着在葡萄皮上，并参与发酵过程。
本文旨在分离鉴定这些酵母菌，并筛选出优良的葡萄酒酵母。
材料与方法1. 材料（1）原料：葡萄（品种为赤霞珠）、酵母粉、发酵桶、过滤器、实验室用显微镜等。
（2）试剂：麦芽汁、琼脂糖、葡萄糖、蛋白胨、氯化钠、孟加拉红、美蓝等。
2. 方法（1）葡萄皮上酵母菌的分离与纯化将葡萄皮放入麦芽汁培养基中，于30℃培养3-5天。
每天观察并记录菌落形态和数量。
将分离得到的菌株进行纯化，直至获得单一菌株。
（2）酵母菌的鉴定采用形态学和分子生物学方法对酵母菌进行鉴定。
形态学方法包括显微镜观察、革兰氏染色、芽孢染色等；分子生物学方法包括PCR扩增、序列分析等。
（3）优良葡萄酒酵母的筛选将分离纯化得到的酵母菌株分别接种到葡萄汁培养基中，于适宜温度下培养。
观察并记录不同菌株的生长情况、产酒精度等指标。
筛选出发酵性能优良的菌株。
结果与讨论1. 结果经过分离鉴定，我们共得到10种不同的酵母菌株。
通过形态学和分子生物学方法对这些菌株进行鉴定，确定它们分别属于酿酒酵母属、毕赤酵母属等不同种类。
在葡萄酒发酵性能测试中，发现某些菌株具有较高的发酵活性和酒精产量。
具体数据如下表所示：2. 讨论本研究从葡萄皮上分离得到了10种不同的酵母菌株，并对其进行了鉴定和发酵性能测试。
结果表明，这些菌株在葡萄酒发酵中具有不同程度的活性。
其中，S3、S7和S10菌株的发酵活性和酒精产量较高，具有作为优良葡萄酒酵母的潜力。
后续研究可以进一步探讨这些菌株在不同酿造条件下的表现和遗传特性，为实际生产中的酵母选育提供理论依据。
同时，对于筛选出的优良菌株进行基因组学和蛋白质组学方面的研究，有助于深入了解其代谢机制和生物学特性，为葡萄酒品质的提升提供技术支持。
酵母筛库操作流程
酵母筛库操作流程酵母是微生物领域中非常重要的一类微生物，它们用于生产各种工业酶、面包、啤酒、酒精等等。
为了寻找优良的酵母菌株，酵母筛库就应运而生。
那么酵母筛库的操作流程具体是怎么样的呢？下面我们就来详细了解一下：1. 筛选酵母菌株酵母筛选源于自然环境，因此有许多不同类型的酵母菌株。
在进行筛选之前，我们需要先收集不同来源的酵母样品。
这些样品包括来自水、土壤和植物等的酵母菌。
通过对这些酵母菌样品进行筛选和筛选，可以得到许多具有特殊性质（如产生特定酶的酵母菌株）的酵母菌。
2. 酵母分离为了分离出单个的酵母菌株，我们需要对样品进行处理，例如，将样品沉淀后，将沉淀重新悬浮在含有营养物质的培养基中。
接着，我们可以通过连续的尝试将单个细胞分离出来以获得它的一个单克隆。
3. 建立酵母筛库建立酵母筛库前，我们需要确定在筛选中使用的诱导剂。
在我们的实验室中，这些诱导剂通常为基因对（例如，Δ顺式样氨酸酶和顺式样氨酸酶等）。
当酵母菌株在这些诱导剂存在下生长时，它们会表现出特殊的生物活性。
这些生物活性包括诸如产生特殊酶类、对特定药品的敏感性、产生有用的代谢产物等属性。
建立酵母筛库需要我们使用插入了不同报告基因的表达载体来转化每个酵母菌菌株。
这些报告基因可以提供我们对诱导剂反应的定量分析能力，并且筛选酵母筛选库时起到很重要的作用。
4. 进行筛选筛选是最重要的部分，它是确定合适株的过程。
在筛选中，我们将确定针对我们研究重要的报告基因是否会受到特定诱导剂取向的表达，如果存在，则将其挑选出来进行进一步深入研究。
在酵母筛选库中，有多种酵母菌菌株，我们需要确定优先选择哪些酵母菌菌株，因为每种酵母菌都有其专有的性质和特性，需要根据我们的应用目的选择。
酵母菌的筛选思路和分离筛选流程
酵母菌的筛选思路和分离筛选流程引言酵母菌是一类单细胞真核微生物，被广泛应用于食品工业、酿酒工业、生物工程等领域。
酵母菌的筛选思路和分离筛选流程对于提高酵母菌的产量和质量具有重要意义。
本文将介绍酵母菌的筛选思路和分离筛选流程，并以Markdown文本格式输出。
酵母菌的筛选思路1. 依据目标功能进行筛选首先，根据酵母菌在应用领域中的具体功能要求，确定筛选目标。
常见的筛选目标包括产酶能力、抗逆性、代谢产物产量等。
2. 筛选条件的优化确定筛选目标后，需要对筛选条件进行优化，以提高筛选效率和准确性。
优化筛选条件的方法包括：•pH值的调节•温度的调节•增加对抗生素的抗性3. 基于遗传工程的筛选方法如果目标无法通过传统筛选方法获得，可以借助遗传工程的方法进行筛选。
这包括基因操作、基因组重组、基因表达等。
酵母菌的分离筛选流程1. 样品的采集和处理首先，需要根据筛选目标的要求，采集合适的样品。
样品的处理包括：•去除杂质和污染物•对样品进行稀释2. 培养基的选择和制备根据筛选目标的要求，选择合适的培养基。
培养基的制备包括：•加入适当的营养成分•调节pH值和温度•预防细菌污染3. 分离和筛选将处理好的样品接种到培养基上，进行分离和筛选。
分离和筛选的方法包括：•简单扩增法：通过胶体扩散、直接接种等方法进行菌落的扩增，然后通过各种筛选方法进行检测和选择。
•高通量筛选法：利用自动化设备进行酵母菌的扩增和筛选，大大提高了筛选效率。
4. 筛选结果的评估与分析获得候选酵母菌后，需要对其进行评估和分析，判断是否满足筛选目标。
评估和分析方法包括：•酶活力测定•代谢产物测量•生长速率测定•遗传稳定性检测等。
结论酵母菌的筛选思路和分离筛选流程对于提高酵母菌的产量和质量具有重要意义。
在筛选时，根据筛选目标优化筛选条件，利用遗传工程方法进行筛选。
分离筛选流程包括样品的采集和处理、培养基的选择和制备、分离和筛选以及筛选结果的评估与分析。
通过合理的筛选思路和分离筛选流程，可以获得具有优良特性的酵母菌，满足不同应用领域的需求。
纯化酵母菌分离方法
纯化酵母菌分离方法
纯化酵母菌的分离方法包括以下几个步骤：
1. 选择合适的培养基：使用含有适当营养物质和抑制其他微生物生长的培养基。
常用的选择包括酵母营养琼脂糖培养基和酵母抑制琼脂糖培养基。
2. 样品处理：将酵母菌样品（例如酵母悬液或含有酵母菌的混合物）以适当稀释倍数取出，避免过度稀释或稀释不够。
3. 观察与筛选：将适量的稀释液均匀平铺于琼脂糖培养基上，培养一段时间后观察培养基上的菌落。
通过观察菌落形态、颜色和其他特征，选择单独的菌落。
4. 分离纯化：将所选的菌落用无菌的酵母菌营养琼脂糖培养基进行分割传代，最终得到纯化的酵母菌培养基。
5. 培养与保存：将纯化的酵母菌培养液进行扩大培养，得到足够数量的酵母菌。
然后，可以将其中一部分保存在液氮中，以备日后使用。
需要注意的是，以上方法只能分离到可培养的酵母菌，对于某些酵母菌可能不适用。
另外，为了避免污染，所有实验操作都应在无菌条件下进行。
从土壤中分离提纯高效的酵母菌
从土壤中分离提纯高效的酵母菌主要内容：利用各种微生物实验技术，从土壤中分离并提纯酵母菌，再通过检测酵母菌发酵速率，从而筛选出高效的酵母菌。
关键词：分离提纯高效酵母菌在土壤中分离酵母菌，因此土壤的采样地点在果树下较好。
采集好土壤，将土壤配制成10^-2悬液，主要方法是称取1g土壤，放入三角瓶，迅速倒入99ml无菌水，震荡5-10min即成所需的土壤悬液。
1.由于土壤中酵母菌含量较低，因此在分离前要先进行富集培养24h。
2.接下来是配制培养基，由于要分离的是酵母菌，配制马丁氏培养基。
3.对培养基进行灭菌放入高压蒸汽灭菌锅115℃/30min4.取出后待50℃以下是加入链霉素，每一百克三毫升5.队超净台消毒，点燃酒精灯6.在酒精灯旁倒平板。
7.接种，画线。
8.放入26℃保温箱3-4d。
9.取生长较好的六个菌落分别接入0.05mol/L4ml的六个试管中，编号1-6。
10.3d后检测葡萄糖含量。
11.配置新制的氢氧化铜0.5mol/L50ml12.将强氧化铜分别放入六个试管中每个4ml。
摇匀加热。
13. 5min后比较六个试管的颜色深浅。
编号颜色1褐色'++褐色+2褐色'--3褐色-4褐色+5褐色6结论：三号试管的颜色最浅，所含葡萄糖最少，所以三号试管的酵母菌效率最高。
结果讨论：实验比较成功，但是培养基的菌株较少，这可能和富集培养的时间太短有关系，忘了设置对照试验。
选取高校教务军，可以重复做这个实验，选出比较高效的酵母菌。
注意:1.注意培养基的灭菌2.注意紫外线只能在无人的时候开启3.注意接种环要灼烧彻底4.注意在培养箱中放培养技师要倒置5.注意统一变量。
酵母菌、乳酸杆菌的分离筛选
姓名:温迪雅学号：10991367 专业：环境科学乳酸杆菌的分离筛选及鉴定一、材料与方法：1、菌种：新鲜乳酸饮料（标记只含有保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌）2、试剂：脱脂奶粉、蔗糖、1.6%溴甲酚绿乙醇溶液(溴甲酚绿、无水乙醇)、酵母膏、琼脂、革兰氏染液（结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、沙黄）、75%乙醇、香柏油、1mol/L NaOH、1mol/L HCl、碳酸钙；0.4gNaOH固体、4.2ml 浓HCL(分析纯) 、20gCaCO3固体、酵母膏20g 、琼脂30g、香柏油、脱脂奶粉100g 、蔗糖10g；3、仪器：高压蒸汽灭菌锅、恒压干热灭菌箱、超净工作台、光学显微镜、培养箱、pH试纸、酸乳瓶、培养皿（φ9或φ12）、试管、300ml三角瓶（带玻珠）、移液管、天平、牛角匙、电炉、量筒、漏斗、漏斗架、玻璃棒、棉塞、吸管、线绳、标签、500ml锥形瓶、250ml锥形瓶、250ml烧杯、酒精灯、石棉网、接种针（环）、擦镜纸4、方法：（1）无菌操作倒平板、十倍稀释、划线分离，恒温培养（2）菌落观察与镜检（3）筛选生产用菌株二、实验步骤1、分离(1)配制BCG牛乳培养基，分装三角瓶，包扎，灭菌备用。
BCG牛乳培养基配制：A溶液：脱脂乳粉100g,水500ml，加入1.6%溴甲苯酚绿（BCG）乙醇溶液1ml，80℃灭菌20min。
（1.6%溴甲苯酚绿（BCG）乙醇溶液用1.6g溴甲酚绿加入20ml无水乙醇中，再加水至100ml制成）B溶液：酵母膏10g，水500ml，琼脂20g，PH6.8，121℃湿热灭菌20min。
以灭菌操作趁热将A溶液和B溶液混合均匀后倒平板。
（2）样品的处理按照无菌操作要求，从市售新鲜酸乳中吸取10ml检样，放入装有90ml无菌水的三角瓶内，振摇混匀。
（3）分离方法①倒培养基在无菌室，先用紫外线照射半小时把表面菌灭了，在通风10min后，每培养皿倾注约15ml左右已溶化的BCG牛乳培养基，立即放在桌上摇匀，冷却凝固后即成平板。
酵母菌的筛选思路和分离筛选流程
酵母菌的筛选思路和分离筛选流程
酵母菌的筛选思路和分离筛选流程通常包括以下几个步骤：
1. 采集样品：从自然环境中或已知的发酵样品中采集可能含有酵母
菌的样品，如水、土壤、植物材料、发酵食品等。
2. 预处理样品：对样品进行预处理，如去除杂质、抑制细菌生长等。
这可以通过过滤、离心、稀释等方法实现。
3. 分离酵母：将预处理后的样品通过不同的分离方法（如稀释涂布法、滴管稀释法、涂布法等）分离到培养基上，使单个酵母菌落生长。
4. 筛选途径：根据所需目标酵母菌的特征，选择特定的筛选途径加
以筛选。
- 抗性筛选：在培养基中添加特定的抗生素或抗菌药物，可以筛选出对此类物质具有抗性或耐受能力的酵母菌。
- 产物筛选：培养基中添加特定的检测试剂或基质，通过对应的反应或变色现象，筛选出产生特定产物的酵母菌。
- 形态特征筛选：通过观察酵母菌的形态特征，如菌落形状、颜色、纹理等，筛选出符合要求的酵母菌。
- 发酵能力筛选：通过检测酵母菌的发酵能力，如对糖类底物的发酵能力，选择具有高发酵活性的酵母菌。
5. 分离纯培养：将筛选出来的单个酵母菌菌落分离到新的培养基上
进行纯培养，以获得纯种的酵母菌。
6. 鉴定酵母菌：通过形态学观察、生理生化特征、分子生物学方法
等对所分离出的酵母菌进行鉴定，确定其菌种。
值得注意的是，以上步骤仅为一般的酵母菌筛选思路，具体的筛选
方法和流程可能会因实验目的和需要而有所差异。
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酵母菌的分离筛选方法酵母菌多数为腐生，一般生长在含糖较高，偏酸的环境中，在通气条件下，液体培养比霉菌快。
菌落与细菌相似，较大而厚，多数不透明，菌落光滑湿润粘稠，乳白色，少数干皱，边缘整齐，呈红色或粉红色，圆形椭圆卵形，液体培养基生长会生成沉淀或菌膜。
含高糖浓度（45%），分离蜂蜜酵母，球拟酵母属等嗜高渗透压的酵母。
1.培养基：1.1葡萄糖50g/L 尿素1g/L （NH4）2SO41g/L KH2PO42.5g/LNa2HPO40.5g/L MgSO41g/L FeSO4 0.1g/L 酵母膏 0.5g/L 孟加拉红 0.03g/L PH4.5-5.0 （富集用）★1.2乳酸-马铃薯-葡萄糖培养基：马铃薯200g/L 葡萄糖（霉菌用蔗糖）20g/L 乳酸5ml马铃薯去皮切片200g，加水煮沸30min，纱布过滤，补足蒸馏水1L，PH自然。
（去掉乳酸可用于酵母菌和霉菌培养用）（富集用）★1.3麦芽汁培养基：1：4水60-65℃水浴3-4小时，4-6层纱布过滤，可加一个蛋清加水20mL调均生泡沫，倒入糖化液中，煮沸过滤，10-15波林，氯霉素0.1g/L PH6.0-6.4 121℃ 20min（分离保存用）灭菌后加入300u/ml硫酸链霉素（集菌用）★1.4虎红（孟加拉红）培养基：蛋白胨5.0g/L 葡萄糖10g/LKH2PO41.0g/L MgSO40.5g/L 孟加拉红0.033g/L 氯霉素0.1g/L 琼脂15g/L PH自然（分离纯化用）★1.5 豆芽汁培养基：黄豆芽100g/L 葡萄糖50g/L PH自然。
100g 黄豆芽，加水煮沸30min，纱布过滤，补足蒸馏水1L1.6察氏培养基：主要培养霉菌观察形态用蔗糖30g/L 硝酸钠3g/L 磷酸氢二钾1g/L 氯化钾0.5g/L 硫酸镁0.5g/L 硫酸亚铁0.01g/L 琼脂15-20g/L 121℃ 20min PH自然一般分离黄酒酵母酒精酵母使用曲汁培养基，啤酒酵母用酒花麦汁培养基，葡萄酒酵母用葡萄汁培养基。
2.集菌：研究酵母菌生态和某种基物或样品中的酵母菌区系，一般不进行集菌，以免改变其中不同种类数量间的对比，将样品制成菌悬液按常规法分离。
若从样品中分离特定种类时先集菌。
集菌发酵力强菌株，加酸性含糖的培养基，酸性豆汁，必要时注入高浓度的酒精（13-17%），霉菌在液体中形成菌丝体，酵母不形成菌丝，25-28℃2-3d，遇到菌丝体用接种环挑去烧掉，去掉上清液，取沉淀酵母一至两环移植另一液体培养基中，集菌连续两至三次才能完成，要配合镜检。
实例：将待分离的样品10g（ml）放入90ml无菌水或生理盐水/150ml 三角瓶（玻璃珠），摇床振荡20-30min，取上清液接种于酸性培养液（乳酸-马铃薯-葡萄糖培养基酸性麦芽汁或酸性豆芽汁）25-28℃2-3d，培养过程中若出现菌丝体跳出烧掉，集菌连续两至三次，培养液变成混浊，产生菌膜和沉淀物。
镜检：美兰染液染色，活菌可还原美兰染液，菌体无色。
3.筛选：分离：取集菌液适当稀释，吸取0.1-0.2ml梯度菌液（至少两个两个平衡），涂布于马铃薯-葡萄糖麦芽汁或虎红培养基平板，也可采用混菌法或蘸取集菌菌液直接划线，（平放12h后倒置培养），25℃培养48h，低温酵母菌15℃高温酵母菌 35℃ 40℃ 45℃，形成清晰菌落。
在培养皿底划分小方格，待菌落生长良好后，用放大镜或低倍镜，观察每格内每个菌落编号并描述，颜色表面边缘切面等，再制片在高倍镜下观察各菌株的个体形态，做好记录。
选择不同菌落分别接于麦芽汁斜面，25℃培养48小时备用。
纯化：培养基与分离培养基相同，否则，不同培养基菌落会改变形态，决不能认为菌落外观相同菌属于同一种。
菌落外观相近的菌落，只能挑取一至数个菌落为代表进行纯化。
常用方法为平板划线分离法：挑取单菌落于平板划线纯化菌株，25-28℃ 2-3d，选择菌生长快菌落大典型继续纯化，每个分离物至少经两次划线，结合镜检保持菌株的纯度，对于保存菌株也应定期检查纯度。
纯化的菌株转接于麦芽汁斜面25-28℃ 2d 待鉴定或用灭菌液体石蜡封面于4℃冰箱保存。
筛选：性能测定：根据不同需要，选择不同性能测定方法。
产气性能比较：采用杜氏管发酵法，将斜面菌种两环接种于麦芽汁或豆芽汁液体培养基中（可以分两次加培养基），28℃振荡培养48h，产气时间和产气量。
产酒精能力测定：采用蒸馏法测酒精含量。
产香能力测定：通过嗅觉鉴定。
附：不同酵母菌的形态特征：酿酒酵母：在麦芽汁琼脂培养基上，菌落与细菌相似，比细菌大而厚，不透明，表面光滑，湿润粘稠，乳白色，形成假菌丝。
单细胞，形状有圆形椭圆形等，大小不一。
在麦芽汁中，沉淀表面形成环状膜。
不能利用硝酸盐。
产朊假丝酵母：在麦芽汁琼脂培养基上菌落为乳白色，平滑，有光泽或无光泽，边缘整齐呈菌丝状。
细胞呈圆形椭圆形和圆柱形等。
能利用硝酸盐为氮源。
实例1：大曲中酵母菌的分离及鉴定1.富集培养：取5g样品，在试管中加入10ml麦芽汁培养基，同时加入一滴乳酸摇匀，25-28℃24h，后取1ml菌液转入另10ml麦芽汁培养基试管中培养25-28℃ 24h，稍长(过长则霉菌长出)。
培养液变浊产膜或沉淀。
观察：用无菌操作法取少许菌液置于载玻片中央的0.l%美蓝染色液中，混匀后加盖玻片制成水浸片，先用低倍镜后换高倍镜观察酵母菌的形态和出芽生殖情况。
活酵母菌可使美蓝还原，从而使菌体不着色，用此方法可判断酵母菌的死活。
要求：较高的糖50g/l，抑菌剂孟加拉红0.03 g/L（许多细菌放线菌和快速生长的霉菌），PH 4.5。
或用乳酸（5ml）-马铃薯（200g）-葡萄糖（20g）培养基富集。
2.酵母菌分离：平板划线涂布或混菌均可。
取集菌菌液，梯度稀释，取10-5 10-6 10-7,0.1ml菌液涂布虎红培养基上，25-28℃ 48h（若不纯可挑取单菌落连续多次划线）。
3.酵母菌选择：对典型单菌落，经美兰染色，制片镜检，进行描述性记录，然后选择不同菌落转接于麦芽汁斜面，25-28℃ 48h备用。
4.酵母菌纯化：挑取10-7 培养基不同的单菌落，在PDA培养基接种25-28℃ 2-3d后，取形态不同的单菌落传接二次，观察菌落形态确定为单菌落后，分别接种于PDA培养基和MA培养基中，25-28℃ 3d，根据在不同培养基中菌落形态进行初步分类。
将所得菌株于斜面培养保存在4℃冰箱中。
实例2：高温堆积糟醅中酵母菌的选育1.集菌：同上 45℃ 2-3d，依此法转接2-3次，再行分离。
2.分离：梯度菌液分别涂布于麦芽汁麸皮汁豆芽汁平板于45℃2-3d，将平皿上生长的菌落划线纯化，菌株移入斜面，备用。
3.有效菌株的确认：分离的数十株酵母经镜检有酵母属的各种酵母，假丝酵母，红酵母，白地霉等。
用高粱粉糖化液，饴糖稀释液，麸皮等进行发酵，测定次生代谢产物，依次判出Y1 Y2 Y3 Y4等与酱香酒产量质量有关。
4.菌种的分类鉴定：4.1形态特征：（麦芽汁琼脂）编号形态特征Y1 菌落由白色到奶油色，无光泽，软而平滑或部分有皱纹。
边缘呈波纹，凸起，色黄，中心凹，奶油色，室温放一月后，培养物由奶油色变浅褐色。
细胞呈圆卵圆椭圆，大小不等。
单个，成双，偶尔成短链，多边芽殖。
（意大利酵母）Y2菌落呈浅奶油色，菌落平滑或部分有皱纹，无光泽，边缘呈黄色，大波纹状。
细胞圆形卵形椭圆形，大小不等，多边芽殖。
(地生酵母) Y3 28℃ 3d后，细胞圆形椭圆形，单个或成双，两端芽殖，培养物奶油状，奶油色到浅褐色，平滑，稍平坦，光亮，边缘偶尔波纹，无真菌丝。
（酿酒酵母）Y4 菌落白色至奶油色，无光泽，软而平滑或部分有皱纹。
培养时间偏长菌落渐硬，并呈菌丝状，不易挑起。
在麦芽汁平皿上，菌落白色，凸起，有皱纹，边缘波纹状。
细胞较小，卵圆椭圆形，有大量真菌丝。
（间型假丝酵母）4.2生理生化特征4.2.1发酵糖类：酵母菌发酵液成分分析Y1 Y2 Y3 Y4香气稍酱香，酯香稍酱香，酯香酯香醇甜香酒精（%） 3.9 3.9 4.3 5.1代谢产物乙丙丁乳异戊酸同Y1 除硫甲基丙醇乙丙丁乳酸乙醛乙酯乳酯丙醇其他成分均有乙醛丙醇异丁醇异丁醇异戊醇戊醇异戊醇硫甲基丙醇各种酵母发酵糖类结果Y1 Y2 Y3 Y4葡萄糖 + + + +D-半乳糖 + - + -麦芽糖 + - + +蔗糖 + - + +乳糖 - - - +棉子糖 - - + +蜜二糖－－－－纤维二糖－－－－海藻糖－－＋－松三糖－－－－菊糖－＋－＋可溶性淀粉－＋－＋ａ-甲基-葡萄糖苷－－－－同化碳源葡萄糖 + + + +D-半乳糖 + - + -麦芽糖 + - + +蔗糖 + - + +乳糖 + - - +棉子糖 - - + +蜜二糖－－－－山梨糖－－－－纤维二糖－－－－海藻糖－－＋－松三糖－－+ －菊糖－- －-可溶性淀粉－＋－＋ａ-甲基-葡萄糖苷－－－+卫茅醇+ －－－甘露醇－＋－＋D-木糖－- －-琥玻酸＋－－＋柠檬酸＋＋－＋各酵母菌其他生化生理特征Y1 Y2 Y3 Y4同化氮源（硝酸钾）－－－－同化乙醇＋＋－＋液化明胶－－－＋产酸试验－－＋＋产醋试验＋＋＋＋结果：Y1意大利酵母，Y2地生酵母，Y3酿酒酵母，Y4间型假丝酵母分离耐酸耐高温酵母菌选择压排底醅或双轮底糟为试样，集菌培养基中加入少量底醅浸出液。