特殊毒性new
新药的临床前研究和评价
6.剂量
文献资料查询
剂量 范围
试验摸索 按体表面积剂量呼应：成人剂量←→动物剂量 离体试验浓度 参考药动学有效浓度
由分布容积估算最大浓度
最大浓度=成人剂量/最小分布容积（15L）法》（局令第28号）附录2
新药注册分类：15 类
1类：未在国内外上市销售的生物制品 2类：单克隆抗体 3类：基因治疗、体细胞治疗及其制品 4类：变态反应原制品 5类：由人或动物组织或体液提取、或通过发酵制备的具有生物活性的多组份制品 6类：由已上市销售生物制品组成新的复方制品 7类：已在国外上市销售但尚未在国内上市销售的生物制品 8类：含未经批准菌种制备的微生态制品 ……
10-10、3×10-10、10-9、3×10-9、10-8、3×10-8、10-7、3×10-7、
10-6
剂量间隔：体内：一般3个剂量组，比值～（1/3/10）
体外： > 5个剂量
尽量反映量效和／或时效关系，大动物（猴、狗等）试
验或在特殊情况下，可适当减少剂量组。
7.对照
包括： ⑴ 正常动物空白对照组 ⑵ 模型动物对照组 ⑶ 阳性药物对照组 应选用正式批准生产的药品 ，根据需要设一个或多个剂量组。 必要时增设溶媒或赋形剂对照组。
药学研究----新药发现
Drug Discovery
经验积累 偶然发现 药物筛选
Drug Discovery
老药新用 综合改造 定向设计
药学研究----主要内容
研究新药的结构、理化性质、鉴别、检查和含测方法等原料 研制出可控、稳定和使用方便的新药剂型 研制出适合于工业化生产的原料及制剂的技术工艺路线 研究原料和制剂的稳定性 制订原料药及其制剂的质量标准 提供临床前评价和临床试验所需的药品
新药的临床前研究与评价分析
新药注册分类：15 类 1类：未在国内外上市销售的疫苗 2类：DNA疫苗 3类：已上市销售疫苗变更新的佐剂，偶合疫苗变更新的载体 4类：由非纯化或全细胞(细菌、病毒等)疫苗改为纯化或者组份疫苗
5类：采用未经国内批准的菌毒种生产的疫苗
6类：已在国外上市销售但未在国内上市销售的疫苗 7类：采用国内已上市销售的疫苗制备的结合疫苗或者联合疫苗
请各省、自治区、直辖市食品药品监督管理局（药品监督管理局）加强对辖区 内药物非临床安全性评价研究的监督管理，并通知本辖区内药物非临床安全性评价 研究机构和相应药品研发机构按照以上要求，严格执行GLP。
国家食品药品监督管理局 二○○六年十一月二十日
药品临床前试验管理规范 （good laboratory practice ，GLP）
也称药物非临床研究质量管理规范 GLP是对从事实验研究的规划设计、执行实施、 管理监督和记录报告等实验室组织管理、工作方法 和有关条件所提出的法规性文件。 它主要是针对有关药品、食品添加剂、农药、化 学试剂、化妆品及其他医用物品的动物试验。
药品临床前试验管理规范 （ GLP）
为毒性评价而制定的法规，目的在于严格控制药品 安全性评价的各个环节，包括严格控制可能影响实验结 果准确性的各种主、客观因素，如保证实验研究人员具 备一定素质、实验设计慎密合理、各种实验条件合格、 数据完整准确以及总结资料科学真实等。
新药注册分类：15 类
1类：未在国内外上市销售的生物制品
2类：单克隆抗体 3类：基因治疗、体细胞治疗及其制品
4类：变态反应原制品
5类：由人或动物组织或体液提取、或通过发酵制备的具有生物活性的多组份制品 6类：由已上市销售生物制品组成新的复方制品
7类：已在国外上市销售但尚未在国内上市销售的生物制品
新药药理学：特殊毒性试验
刺激性试验
❖ 刺激性：非口服给药制剂给药后对给药部位产 生的可逆性炎症反应
❖ 刺激性试验：观察动物的血管、肌肉、皮肤、 粘膜等部位接触受试物后是否引起红肿、充血、 渗出、变性或坏死等局部反应
❖ 在急毒、长毒试验中已经评价过相关的刺激性， 其受试物与临床拟用的制剂相同或具有可比性， 可不必单独进行刺激性试验
特殊毒性试验
特殊毒性试验
❖ 狭义的特殊毒性试验：指遗传毒性试验、生 殖毒性试验、致癌试验，即一般常说的“三 致”试验
❖ 广义的特殊毒性试验：除“三致”试验以外， 还包括依赖性试验、过敏性试验、局部刺激 性试验、溶血性试验、免疫毒性试验、光敏 试验、眼毒试验、耳毒试验等等
药物依赖性试验
❖ 药物依赖性是指药物长期与 机体相互作用，使机体在生 理机能、生化过程和/或形态 学发生特异性、代偿性和适 应性改变的特性，停止用药 可导致机体的不适和/或心理 上的渴求
❖ 诱导试验：大部分镇静催眠药无竞争性受体对抗剂， 可采用诱导试验。通过应用各种诱发惊厥的方法， 只采用阈下刺激强度，对正常动物不引起惊厥反应， 对镇静催眠药产生依赖性的动物，在断药期间出现 反跳性兴奋，原来的阈下刺激就可能诱发惊厥
药物依赖性试验
❖ 镇痛药：自然戒断/替代试验以及催促试验 ❖ 镇静催眠药：自然戒断/替代试验以及诱导试
眼刺激性试验
眼用药物及可能接触眼睛的受试物均应考虑进行 眼刺激性试验 首选家兔，可采用同体左右侧自身对比法 试验前24h需检查动物双眼 每只眼睛滴入0.05~0.1ml或涂敷0.1g受试物 给药后1、2、4、24、48及72h进行眼部检查 持久性损伤需延长观察期限，一般不超过21d 采用裂隙灯进行眼部检查，记录眼部反应分值， 判断刺激程度
特殊毒性new
有关问题
受试物配制
样品难溶于水或其它溶剂，不能注射给药时，可改为 灌胃。口服给药尽量研磨均匀，必要时制成混悬液。 对细菌或细胞试验时，则可以将样品充分研磨均匀， 用水或其它合适的溶剂充分浸取灭菌后使用。
剂量设计
剂量设计与急性毒性的LD50值有关。但少数低毒西药 和MT许D多；基也因有工少程数产药品品，制往备往困测难不和出价L格D昂50值贵，，只此能时测允许 用多少倍ACD或MTD来表示。细胞染色体畸变试验， 毒性很低不能测出50%细胞生长抑制浓度时，其最高浓 度以不超过10mM为宜
如某些阳性或可疑阳性时，可选择哺乳动物培养 细胞基因突变试验或果蝇伴性隐性致死试验
哺乳动物培养细胞染色体畸变试验
细胞: 建议首选中国仓鼠肺细胞(CHL), 需定期 检查核型和有无支原体等污染。-80℃或液氮 冻存
剂量：高剂量以50％细胞生长抑制浓度为基准， 最高不要超过10mM分子量。溶解受限时可采 用饱和浓度。中低剂量用倍量稀释法。至少３ 个剂量
有关问题
结果的判定
阳性：有统计学意义、量－效关系、可重复 阴性：结合是否达到MTD，有无阳性对照 阳性物对照组不可省
其它问题
实验设计：剂量，对照组、观察指标、统计方 法、给药周期、给药途径、结果判定应合理
资料整理应规范
3.如遇阳性或可疑阳性时，可选择UDS试验或 SOS显色试验
生殖毒性(致畸)试验
一般生殖毒性试验 致畸敏感期毒性试验 围产期毒性试验
生殖毒性试验----致畸敏感期毒性试验
动物：首选Wistar 或SD大鼠，也可用小鼠或家兔 Ｉ类最好增加家兔或猪、猴、狗之一
动物数：每组孕大、小鼠≥１５只，孕兔≥ ８只 剂量：高、中、低三个剂量，限度剂量为1g/kg。
地球上最毒的16种毒物
1.伞形毒菌——灭绝师太地点：欧洲、美国在欧洲和美国东西海岸，这种菌菇的颜色从淡绿到橄榄黄不定；但在美国其他地方，它则淡至乳白深至淡棕色。
它所产生的蝇蕈素一旦进入血液，可以很快察觉。
起初身体症状常为恶心、呕吐和腹泻带血。
在刚开始感觉到轻微不适之后，突然之间患者会感觉胃部剧痛伴随强烈呕吐、极度干渴、脸色惨白。
如果肝脏遭受严重破坏，眼镜和肌肤的黄疸病也会并发。
病人直到断气之前很长一段时间几乎都是保持清醒的，只有在长时间神志清晰的情况下间断性地短暂失去意识。
最后丧失知觉陷入昏迷和休克，直至死亡。
解药和治疗方法：尚未发现伞形毒菌的解药，但是，中毒者可以通过肝脏移植存活下来。
2.河豚鱼毒性：50%的河豚鱼毒中毒者会一命呜呼。
鱼类。
这些有河豚出没的地区包括中美洲西海岸、印度洋、日本周围以及从澳大利亚到南非的水域。
四齿鲀科族里共有超过90个河豚鱼种类。
当河豚鱼受到惊吓时，它会将自己膨胀成球状。
河豚毒素囤积在河豚鱼的卵巢中而且烹饪时也不会被破坏。
但是，如果在烹饪之前内脏完全剔出而且腹腔清洗干净的话，河豚还是无毒无害的。
效果和症状：语言表达障碍，呼吸系统迅速开始麻痹，随后中枢神经系统麻痹。
中毒者往往在摄入毒素后一到两小时内抽搐或呼吸停止而死。
案例：在电影《蛇与彩虹》中这种毒素被用于减缓演员的呼吸，以便使其看上去像是已经死亡。
在很快将其掩埋后，这名演员被挖出来并继续输入这种药物毒素，虽然剂量减小了，但还是足够使其大脑停止思维。
结果就是，这名可怜的演员受害者变成了行尸走肉“植物人”。
3.蓖麻籽毒性：两粒小小的豆子，如果充分咀嚼，都是可能致命的。
地点：蓖麻以前只生长在非洲和印度，用作装饰和贩卖，现在我们在北美和大多数赤道地区都可以发现它们的踪影，最主要的用途还是装饰。
效果和症状：口腔灼烧感、恶心、呕吐、筋挛、困倦、脸色发白、麻木、循环衰竭、血尿、抽搐、昏迷最终死亡。
毒剂会导致极度错觉和大出血症状并伴有溶血症（红细胞破裂，血红蛋白逸出）。
新药开发-绪论
• Identification of viable drug targets(活性药物靶点的识别) • Rapid growth in sequences(序列的快速增长) • Sequence-function relationships(序列-功能相互关系) • Sequence similarity searching(序列相似性研究)
急性毒性 研究一次给药后动物的毒性反应，并测定其半数致死量 （LD50）。若测不出LD50时可做最大耐受量测定，即选用拟推荐 临床试验的给药途径，给动物最大浓度、最大体积的药量，
慢性毒性 研究系观察动物因连续而产生的毒性反应，中毒时首先 产生的症状，严重程度及停药后组织和功能损害的发展和恢复情 况。
sequencing 基因组学、生物信息学、序列测定
• Target Validation 确认
• In vivo disease model 体内疾病模型
• Assay Development 检定
• Ensure presence of target at each step of
screening cascade 筛分过程中靶点的存在
– True vs. spurious homology(同系序列真伪判断) – Twilight zone(朦胧带)
㈡、 可行性分析
• 可行性分析（Feasibility）：
是考察基础研究成果的可靠性、有效性以及适 应市场的价格能力等的过程 • 检测系统的建立 建立对于作用靶点作用可评价的检验测定的生 物模型，在分子水平、细胞水平或离体器官等 进行活性评价（离体）。在此基础上用实验动 物的病理模型进行体内实验。
• 研究内容：
1. 20世纪研究集中于细胞膜上的酶和受体靶，21 世纪将扩展到核酸和糖类等，通过对细胞和基 因的进行修饰与调控，达到治疗疾病的目的， 研究的重心将转向细胞核内。
世界级 7 大剧毒
世界级7 大剧毒2 月13 日，在大马吉隆坡国际机场，朝鲜最高领导人金正恩同父异母的兄长金正男遭遇不明毒物袭击身亡。
对于金正男所中的毒品是什么，各界是众说纷纭，但在极短时间内令人死亡，应该是剧毒中的剧毒。
本文就为大家介绍一下其所中剧毒可能是哪些，中毒后应该怎么解救。
1. 氰化物电影中常见的毒物，可经口或呼吸道吸入中毒，抑制细胞色素氧化酶，使组织不能进行细胞内呼吸，人体中毒后会在几秒内死亡（闪电式死亡）。
氰化物中毒后，应立刻（重点是立即）使用解毒剂-- 高铁血红蛋白形成剂，如立即肌内注射抗氰急救针（10% 4-DMAP，4- 二甲氨基苯酚）一支，再静脉注射25% 硫代硫酸钠20 mL，2.5~5 mL/min 输注速度。
必要时1 小时后重复注射半量或全量。
口服者应用0.2% 高锰酸钾或5% 硫代硫酸钠洗胃，其他对症处理。
2. 毒鼠强化学名四亚甲基二砜四胺，强神经毒性，人口服半数致死量0.1 mg/kg。
中毒后半小时内发作，中毒者全身惊厥发作，呈癫痫大发作持续状态，甚至呼吸和（或）心脏停搏。
不明原因呈现中毒且突发惊厥发作患者，应该考虑毒鼠强中毒。
惊厥控制后数天内出现躁动、恐惧、被害妄想，容易被误诊为精神分裂症。
一旦发现毒鼠强中毒，需马上对中毒者进行胃肠道去污，并行血液灌流排毒，同时予以脱水利尿以减轻中毒和缺氧所导致的脑水肿。
对出现惊厥者予以地西泮0.2～0.5 mg/kg/ 次静注止惊。
用二巯丙磺酸钠5 mg/kg，依病情2.5 mg 肌注，每6～8 小时 1 次，连续3～4 天。
惊厥、抽搐严重者加地西泮0.5 mg/kg。
惊厥大发作控制后，建议继续二巯丙磺酸钠联合丙酸酸钠或苯巴比妥钠等AEDs 促进康复。
3. 河豚毒素河豚毒素存在于河豚的卵巢、肝脏和血液等部位中，其毒性为氰化钾的1250 倍，0.48 mg 即可致死。
中毒后表现为全身麻木，四肢瘫痪，呼吸麻痹，心律失常等。
河豚毒素为非蛋白神经毒素，用亚铁酸钠煮食或120℃加热30 分钟可以破坏其毒性。
奇怪的毒药
龙源期刊网 奇怪的毒药作者：袁越来源：《大众健康》2013年第01期普通毒药都和剂量成正比关系，剂量越大毒性越大，但有些毒药反其道而行之，只需很小的剂量就能产生很大的毒性。
最近闹得沸沸扬扬的某白酒品牌塑化剂超标事件让大家记住了DEHP这个化学名词，这是邻苯二甲酸二（2-乙基己）酯的缩写，它能够增加塑料制品的柔软性，所以又叫增塑剂。
这玩意的急性毒性并不大，给大鼠腹腔注射2克以上的DEHP才会致死，但它能够模仿雌激素，在小剂量的情况下就能引起很多严重后果，包括导致不孕、畸胎、男童女性化和女童性早熟等等，属于慢性毒药。
提起毒药，一般人首先想到的肯定是砒霜、水银、蛇毒和氰化物这几个惊险小说中的常客，其实很多我们平时常见的东西如果使用不当的话都能毒死人，比如酒喝多了会死于酒精中毒，烟抽多了会死于尼古丁中毒，就连水喝多了都有可能死于水中毒。
那么，到底应该怎样定义毒药呢？17世纪瑞士游医菲利普斯·帕拉塞尔苏斯（Philippus Paracelsus）提出了一个著名的定义：“万物皆有毒性，没有任何一种物质是无毒的，有毒无毒的唯一区别就是剂量。
”按照这个定义，所谓“毒药”就是小剂量就足以毒死人的物质，但如果低于某个下限的话，再毒的药也毒不死人。
这个定义经过现代医学的检验，被认为是关于毒药的最佳理论，帕拉塞尔苏斯本人也被后人尊称为“毒理学之父”。
这个定义的核心概念就是“离开剂量谈毒性纯属耍流氓”，而这个概念背后有个隐含的前提，那就是剂量越小，毒性也就越小。
如果把剂量和毒性分别作为X轴和Y轴做一条曲线的话，那么这条线肯定是一直上升的，只是上升的速度有所不同罢了。
这个前提很符合一般人的常识，也被大多数实验所证实，因此成为了毒理学的金科玉律。
目前所有关于食品、药品或者环境污染的安全标准都是在上述前提的基础上制定出来的。
比如我们经常看到“某某物质的含量不得高于多少多少”这样的安全标准，其背后隐含的逻辑就是某种物质不论听上去有多毒，只要低于此含量就被认为是安全的。
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啮齿动物微核试验
注意: 注意:
1. 对 Giemsa 染色中获得可疑阳性或弱阳性结果 Giemsa染色中获得可疑阳性或弱阳性结果 的药物, 的药物, 必须用荧光染色以进一步肯定或否定 阳性结果 2. 不易通过骨髓屏障的药物 , 可补充用哺乳动 不易通过骨髓屏障的药物, 物胎肝细胞微核试验进一步研究 3. 如遇阳性或可疑阳性时 , 可选择 UDS试验或 如遇阳性或可疑阳性时, 可选择UDS 试验或 SOS显色试验 SOS显色试验
生殖毒性试验---生殖毒性试验----致畸敏感期毒性试验
报告:将数据列成表 , 提供药物对孕期和胚胎的 报告 : 将数据列成表, 影响,包括孕鼠数及体重变化,黄体总数及均数, 影响 , 包括孕鼠数及体重变化 , 黄体总数及均数 , 活胎总数及均数,活胎重,性别, 活胎总数及均数 , 活胎重 , 性别 , 死胎总数及着 床数,吸收胎,早期和晚期死胎等; 床数 , 吸收胎 , 早期和晚期死胎等 ; 药物对胎仔 各器官的影响, 各器官的影响 , 包括在外观和内部检查中发现的 各种畸形;药物对胎仔骨骼发育的影响, 各种畸形 ; 药物对胎仔骨骼发育的影响 , 包括头 颅骨,胸骨, 后肢骨和其它骨骼的骨化程度, 颅骨 , 胸骨 , 前 , 后肢骨和其它骨骼的骨化程度 , 变异和畸形等 判定:各项数据经统计处理后判定药物的胚胎毒 判定 : 性和致畸潜力
啮齿动物微核试验
标本制作:取骨髓,涂片,Giemsa或丫啶橙荧光 标本制作:取骨髓,涂片,Giemsa或丫啶橙荧光 染色 镜 检 : 每 只 动 物 至 少 计 数 1000 个 多 染 红 细 胞 , Giemsa染色 Giemsa染色,观察其微核出现的频度及多染红细 染色, 胞和正常红细胞的比率.丫啶橙荧光染色, 胞和正常红细胞的比率 . 丫啶橙荧光染色 , 则直 接观察微核出现的频度 判定: 判定: 1.受试物所诱发的微核率的增加与剂量相关 2.某一测试点微核增加可重复并有统计学意义 符合上述一条即可判为阳性
哺乳动物培养细胞染色体畸变试验
药物作用时间: 药物作用时间: 药物和细胞接触非活化组作 24h 48h收获细胞, 代谢活化组作用6 用24h和48h收获细胞, 代谢活化组作用6小时 以上 标本制作时间:药物和细胞接触后起算, 标本制作时间:药物和细胞接触后起算,分 别在24h 48h 别在24h和48h收获细胞 对照:空白,溶剂,阳性和S 对照:空白,溶剂,阳性和S9对照 镜检:每种浓度至少观察100个中期分裂相 个中期分裂相, 镜检:每种浓度至少观察100个中期分裂相, 在油镜下分别记录染色体的结构畸变, 在油镜下分别记录染色体的结构畸变,多倍 体以及畸变细胞数和畸变类型
定量差异
致畸剂量在人与动物,动物与动物间差异明显 致畸剂量在人与动物,
表 人类与动物致畸剂量比较
最低致畸剂量(/kg/d) 最低致畸剂量( 人 动 物 0.5反应停 0.5-1.0mg 兔 2.5mg 氨基喋呤 50g 大鼠 100g 氨甲喋呤 42g 大鼠 200g 20乙烯雌酚 20-80g 恒河猴 200g 苯妥英钠 2mg 小鼠 50mg 药物 人与动物比值 5-2.5 2 4.8 1010-2.5 25
微生物回复试验
菌 株 : 组 胺 酸 缺 陷 型 鼠 伤 寒 沙 门 氏 菌 (S.Typhimurium), 采用TA98,100,97,102, 检定 (S. 采用TA98,100,97,102, 符合要求, 80℃ 符合要求, -80℃或液氮冻存备用 剂量: 剂量:由药物对细菌的毒性和溶解度决定 最高剂量: 一般5mg/ 最高溶解度, 最高剂量:a.一般5mg/皿,b.最高溶解度, c.根据杀菌情况确定最大浓度 最低剂量:一般1g/皿或0.1g/皿. 最低剂量:一般1g/皿或0 g/ 剂量级: 剂量级:5个以上
致癌试验
哺乳动物培养细胞恶性转化试验(短期) 短期)
判定:1.有明确量效关系;2.若无量效关系,但在 判定: 有明确量效关系; 若无量效关系, ≥2个浓度中发生细胞转化;3.在单一剂量下出现 个浓度中发生细胞转化; ≥3个转化集落时 符合上述一条件者可判为阳性,否则为阴性.如 符合上述一条件者可判为阳性,否则为阴性. 判定有困难时,应进一步对细胞进行核型分析, 判定有困难时,应进一步对细胞进行核型分析, 软琼脂接种等观察判定, 软琼脂接种等观察判定,必要时可做动物接种生 瘤试验
哺乳动物培养细胞染色体畸变试验
受试物所诱发的染色体畸变数的增加与剂量 相关; CHL系统判定如下 系统判定如下: 相关; CHL系统判定如下: 畸变率 < 5% 阴性 (-) 畸变率 > 5% 可疑 (±) 10% 畸变率 >10% 阳性 (+) 20% 畸变率 >20% 阳性 (++) 50% 畸变率 >50% 阳性 (+++) 注意:遇阳性或可疑阳性时,可选啮齿动物 注意:遇阳性或可疑阳性时, 显性致死试验或精原细胞染色体畸变试验
啮齿动物微核试验
动物:首选 NIH 小鼠 , 每组 10 只性成熟小 NIH小鼠 10只性成熟小 动物 : 首选NIH小鼠,每组10 雌雄各半,或至少6 鼠,雌雄各半,或至少6只性成熟雄性小鼠 给药途径与方法:尽可能和临床拟用途径相同, 给药途径与方法 : 尽可能和临床拟用途径相同 , 一般为单次给药或诱导给药, 一般为单次给药或诱导给药 , 必要时可多次给 药 骨髓采样时间: 通过预试, 12-72h 骨髓采样时间 : 通过预试 , 在 12-72h 不同时间 个作用点,找出合适采样时间, 内,取5个作用点,找出合适采样时间,如无差 别一般采用24h 别一般采用24h采样 剂量: 最高剂量1 剂量:≥3个,最高剂量1/2 LD50 对照组:用溶媒作阴性对照, 对照组 : 用溶媒作阴性对照 , 用已知能诱发微 核增加的物质作阳性对照
生殖毒性试验---生殖毒性试验----致畸敏感期毒性试验
给药时期:于胚胎器官形成期连续给药 , 大鼠孕 给药时期 : 于胚胎器官形成期连续给药, 15天 小鼠6 15天 家兔6 18天 后6-15天,小鼠6-15天,家兔6-18天 对照:必须设溶剂对照. 对照:必须设溶剂对照.必要时设阳性对照 观察和检查:查到精子或阴栓作为妊娠零天, 观察和检查 : 查到精子或阴栓作为妊娠零天 , 记 录实验动物症状,大鼠于0 10,13,16, 录实验动物症状 , 大鼠于 0, 3, 7, 10, 13, 16, 20 天称量体重 , 20 天处死 , 记录孕鼠重 , 黄体 20天称量体重 20天处死 记录孕鼠重, 天称量体重, 天处死, 死胎数(着床数,吸收胎,早期死胎, 数 , 死胎数 ( 着床数 , 吸收胎 , 早期死胎 , 晚期 死胎) 活胎数,活胎重,性别,外观异常等. 死胎 ) , 活胎数 , 活胎重 , 性别 , 外观异常等 . 胎仔固定于Bouin氏液 作内脏检查, 氏液, 约1/2胎仔固定于Bouin氏液,作内脏检查,另1/2 固定于95% 固定于95%洒精作骨骼畸形检查
致癌试验
短期致癌试验 短期致癌试验 哺乳动物培养细胞恶性转化试验 小鼠肺肿瘤诱发短期试验 长期致癌试验
致癌试验
哺乳动物培养细胞恶性转化试验(短期) 短期)
剂量: ≥ 3 组 , 高剂量一般以抑制 50% 集落生长浓 高剂量一般以抑制50% 剂量 : 度为基准 药物接触时间:药品一般和细胞接触24h 药物接触时间:药品一般和细胞接触24h,然后再 培养7 14天 培养7-14天 代谢活化: 代谢活化:应说明外源性代谢活化系统 对照:空白,溶媒, 对照:空白,溶媒,阴性和阳性对照 观察报告:将细胞固定 , 染色 , 分别计算每皿集 观察报告 : 将细胞固定,染色, 落数, 转化集落数, 转化频度= 转化集落数/ 落数 , 转化集落数 , 转化频度 = 转化集落数 /106 存活细胞,转化率=转化集落数/ 存活细胞,转化率=转化集落数/总集落数
致突变试验
微生物回复试验(Ames试验) Ames试验 试验) +哺乳动物培养细胞基因突变试验 +果蝇伴性隐性致死试验 染色体畸变试验 +啮齿动物显性致死试验 +精原细胞染色体畸变试验 动物微核试验 +程序外DNA合成(UDS)试验 程序外DNA合成(UDS) DNA合成(UDS)试验 +SOS显色试验 +SOS显色试验
特殊毒性试验
致突变试验 致畸) 生殖毒性 (致畸)试验 致癌试验
目的意义
研究对遗传物质是否有损伤, 研究对遗传物质是否有损伤,是 否会引起肿瘤, 否会引起肿瘤,衰老及畸胎等 特殊毒性试验存在着种属差异性 定性差异 定量差异
定性差异
反应停对家兔和7种灵长类动物致畸,但至少 反应停对家兔和7种灵长类动物致畸, 10种品系大鼠 15种品系小鼠 种品系大鼠, 种品系小鼠, 种家狗, 对10种品系大鼠,15种品系小鼠,2种家狗,3 种田鼠和8 种田鼠和8种灵长类动物不致畸 可的松对兔子和小鼠强力致畸, 可的松对兔子和小鼠强力致畸,但对大鼠不致 畸 硫唑嘌呤对大鼠不致畸,但对兔子强致畸 硫唑嘌呤对大鼠不致畸, 氨磺丁脲引起大鼠,小鼠眼畸形, 氨磺丁脲引起大鼠,小鼠眼畸形,但对兔子却 引起脸和内脏畸形
生殖毒性(致畸) 生殖毒性(致畸)试验
一般生殖毒性试验 致畸敏感期毒性试验 围产期毒性试验
生殖毒性试验---生殖毒性试验----致畸敏感期毒性试验
动物:首选Wistar 或SD大鼠,也可用小鼠或家兔 SD大鼠 大鼠, 动物:首选Wistar 类最好增加家兔或猪, I类最好增加家兔或猪,猴,狗之一 动物数:每组孕大,小鼠≥15只 孕兔≥ 动物数:每组孕大,小鼠≥15只,孕兔≥ 8只 剂量: 低三个剂量,限度剂量为1g/kg. 剂量:高,中,低三个剂量,限度剂量为1g/kg. 高剂量产生母体毒性,或为最大给药量. 高剂量产生母体毒性 , 或为最大给药量 . 摄食量 减少,体重增加缓慢或下降, 阴道流血, 减少,体重增加缓慢或下降, 阴道流血,流产等均 是毒性反应表现. 是毒性反应表现.低剂量无母体和胚胎毒性 给药途径:同推荐临床给药途径 , 但不宜采用腹 给药途径 : 同推荐临床给药途径, 腔注射,口服制剂除灌胃外, 腔注射 , 口服制剂除灌胃外 , 还可在严格测定其 消耗量的前提下自由摄取或拌入饲料