血液同型半胱氨酸的测定方法及临床意义
同型半胱氨酸的实验室检测方法和临床意义
学 术 论 坛引言同型半胱氨酸(HCY)是一种含硫氨基酸,又称为高半胱氨酸,为蛋氨酸代谢过程中的重要中间产物,是氨基酸半胱氨酸的异种。
正常人血浆中,HCY以还原型存在的占1%左右,与白蛋白结合的占70%左右,形成小分子二硫化物占30%左右。
同型半胱氨酸与多种先天性代谢缺陷疾病有关,如胱硫醚β合成酶缺乏;血清内高同型半胱氨酸是潜在心血管疾病的标记,能促进动脉粥样硬化及血栓形成,是心血管疾病和中风的危险因素,使其发病率及死亡率增加。
因此,测定血中HC Y浓度对心脑血管等疾病的早期诊断具有一定的临床意义。
1 实验室检测方法1.1同位素检测法该方法的原理是:14C标记的腺苷与HCY缩合后,通过色谱分离,液体闪烁计数放射强度来检测H C Y的含量。
同位素检测法的灵敏度和特异度均较强,但实际操作比较复杂、繁琐,且可造成放射性污染,所以,未能得到临床大范围推广应用。
1.2气相色谱检测法该方法可同时测定半胱氨酸、蛋氨酸、甲基甘氨酸和胱硫醚等多种相关物质。
尽管该方法的灵敏度和特异度均较高,但因为仪器价格昂贵,不能得以临床大范围推广应用。
目前比较成熟且推广应用的是高效液相色谱法(HPLC),但在样品处理、层析条件、样品检测及定量的存在许多变异的缺陷,容易出现随机误差,使其难以标准化。
根据HPLC 为柱前或柱后衍生的方式、荧光、电化学检测方法的不同,又可分为多种检测方法。
只有具备优良的检测设备、熟练的检测技术和经验,应用HPLC的时间足够长,准确选择和制备内部质控,才能应用HPLC准确测定血清中同型半胱氨酸的含量。
1.3免疫学测定法这是目前医疗机构的主要检测方法。
该方法应用特异性较高的抗S-腺苷同型半胱氨酸单克隆技术,采用免疫法或荧光偏振法检测其含量。
美国雅培公司采用全自动荧光偏振免疫技术,用A X S Y M仪器检测H C Y的含量。
全自动荧光偏振免疫技术的原理为:含二硫苏糖醇预处理液血浆标本后,各种形式的H C Y均被还原成游离H C Y (tHCY),后者在过量腺苷存在和S-腺苷-L-同型半胱氨酸(SAH)水解酶的作用下,生成SAH;此时,将预稀释的SA H混合物、抗-SAH单克隆抗体和标记的荧光S-腺苷-L-半胱氨酸示踪物一同孵育,检测仪器会自动检测偏振光的变化,即可检测出血标本中总HC Y的含量。
同型半胱氨酸的检测及临床意义范文
同型半胱氨酸的检测及临床意义一、同型半胱氨酸同型半胱氨酸（homocysteine, Hcy）是一种人体内的含硫氨基酸，为蛋氨酸和半胱氨酸代谢过程中的重要中间产物，部分以同型半胱氨酸-半胱氨酸二硫化物存在，微量以还原型同型半胱氨酸存在，大部分通过二硫键与白蛋白结合而存在。
大量对Hcy的研究表明Hcy是心脑血管疾病的独立危险因素，危险度随着浓度的升高而增加。
Boushey等的研究结果显示，血浆总Hcy水平每升高5umol/L，相当于胆固醇升高500umol/L。
伴有血浆Hcy升高(>10umol/L)的原发性高血压定义为H型高血压。
二、影响血液Hcy水平的因素1、遗传因素：C667T点突变可引起Hcy升高。
CBS基因多态性。
蛋氨酸合成酶基因多态性。
2、性别与年龄：国内外不少研究发现，Hcy随年龄增长而升高，而且男性>女性。
女性在绝经前的水平较低，绝经后显著升高，认为其机制可能与雌激素水平的变化有关。
3、营养因素：①VitB6、VitB12、叶酸等Hcy代谢辅酶摄入不足时，则Hcy升高。
②饮酒：长期饮酒可引起肝细胞蛋氨酸合成酶活性下降，从而造成Hcy血症。
③饮食中蛋氨酸过高：有报道认为高动物蛋白饮食可能是Hcy血症的危险因素之一。
三、同型半胱氨酸致病机理1、内皮毒性作用。
2、刺激血管平滑肌细胞增生。
3、致血栓作用：Hcy可促进血栓调节因子的表达，激活C蛋白和凝血因子Ⅻ、Ⅴ，血小板内前列腺素合成增加，从而促进血小板粘附和聚集。
4、脂肪、糖、蛋白代谢紊乱：Hcy可促进脂质沉积于动脉壁，泡沫细胞增加，还可改变动脉壁糖蛋白分子纤维化结构，促进斑块钙化。
5、干扰谷胱甘肽的合成：谷胱甘肽是一种重要的高氧化剂，它能防止很多细胞成分的氧化互相作用，对血管产生保护作用。
Hcy干扰谷胱甘肽的合成，从而对机体造成危害。
6、影响体内的转甲基化反应：Hcy浓度的升高会影响体内许多物质的甲基化过程，甲基化能力的降低影响细胞的发育及分化，这可能是Hcy致病的关键因素。
同型半胱氨酸临床意义及检测方法
[5 ] Guttormsen AB , Svarstad E , Ueland PM , Refsum H. Elimination of ho2 mocysteine from plasma in subjects with end - stage renal failure. Irish J Med Sci 1995 ;164 (Suppl . 15) :8.
医学检验与临床 2008 年第 19 卷第 3 期 Medical Laboratory Science and Clinics ,2008 ,Vol19 ,No. 3 · 10 1 ·
同型半胱氨酸临床意义及检测方法
袁玉亮
(北京大兴中医院检验科 ,北京)
1 同型半胱氨酸概述
© 1994-2009 China Acadehing House. All rights reserved.
· 10 2 · Medical Laboratory Science and Clinics ,2008 ,Vol19 ,No. 3 医学检验与临床 2008 年第 19 卷第 3 期
参考文献
[ 1 ]Malinow , M. René, Plasma Homocyst (e) ine and Arterial Occlusive Dis2 eases : A mini - review. Clin. Chem. 1995 ;40 :173 - 176.
同型半胱氨酸的检测及临床意义
同型半胱氨酸的检测及临床意义一、同型半胱氨酸同型半胱氨酸（, ）是一种人体内的含硫氨基酸，为蛋氨酸和半胱氨酸代谢过程中的重要中间产物，部分以同型半胱氨酸-半胱氨酸二硫化物存在，微量以还原型同型半胱氨酸存在，大部分通过二硫键与白蛋白结合而存在。
大量对的研究表明是心脑血管疾病的独立危险因素，危险度随着浓度的升高而增加。
等的研究结果显示，血浆总水平每升高5，相当于胆固醇升高500。
伴有血浆升高(>10)的原发性高血压定义为H型高血压。
二、影响血液水平的因素1、遗传因素：C667T点突变可引起升高。
基因多态性。
蛋氨酸合成酶基因多态性。
2、性别与年龄：国内外不少研究发现，随年龄增长而升高，而且男性>女性。
女性在绝经前的水平较低，绝经后显著升高，认为其机制可能与雌激素水平的变化有关。
3、营养因素：①6、12、叶酸等代谢辅酶摄入不足时，则升高。
②饮酒：长期饮酒可引起肝细胞蛋氨酸合成酶活性下降，从而造成血症。
③饮食中蛋氨酸过高：有报道认为高动物蛋白饮食可能是血症的危险因素之一。
三、同型半胱氨酸致病机理1、内皮毒性作用。
2、刺激血管平滑肌细胞增生。
3、致血栓作用：可促进血栓调节因子的表达，激活C蛋白和凝血因子Ⅻ、Ⅴ，血小板内前列腺素合成增加，从而促进血小板粘附和聚集。
4、脂肪、糖、蛋白代谢紊乱：可促进脂质沉积于动脉壁，泡沫细胞增加，还可改变动脉壁糖蛋白分子纤维化结构，促进斑块钙化。
5、干扰谷胱甘肽的合成：谷胱甘肽是一种重要的高氧化剂，它能防止很多细胞成分的氧化互相作用，对血管产生保护作用。
干扰谷胱甘肽的合成，从而对机体造成危害。
6、影响体内的转甲基化反应：浓度的升高会影响体内许多物质的甲基化过程，甲基化能力的降低影响细胞的发育及分化，这可能是致病的关键因素。
许多有关高血症的生化基础有待明确，与各种疾病的关系及防治需继续探讨。
四、与其它因素对心脑血管疾病的协同作用吸烟：研究发现，每日抽烟量大于20支，同时血浆>12的人群，心血管疾病危险性是水平正常且不吸烟者的12倍。
血液中同型半胱氨酸的检测及意义讲述讲解
血液中同型半胱氨酸的检测及意义由于同型半胱氨酸检测技术的发展，对其研究逐渐深入，近年来的研究表明同型半胱氨酸可以作为判断心务管疾病危险性的独立指标，并认为与传统的指标相比，同型半胱氨酸具有更高的应用价值。
本文综述了同型半胱氨酸的测定方法和临床意义。
1 同型半胱氨酸的代谢过程人体内同型半胱氨酸作为蛋氨酸代谢的中间产物，其本身并不参与蛋白质的合成。
蛋氨酸分子含有S甲基；在与ATP作用生成S腺苷蛋氨酸后，可通过各种转甲基作用为体内已知的约50多种具有重要生理活性的物质提供甲基。
S腺苷蛋氨酸在甲基转移酶作用下将甲基转移至另一物质后，生成S腺苷同型半胱氨酸，后者进一步脱去腺苷，生成同型半胱氨酸。
而同型半胱氨酸则可通过N5甲基四氢叶酸转甲基酶（EC1.1.1.68）及其辅酶维生素B12的催化作用，接受N5甲基四氢叶酸提供的甲基，重新生成蛋氨酸。
而此过程又是已知的体内能利用N5甲基四氢叶酸的唯一反应。
故同型半胱氨酸与体内一碳单位代谢有着密切关系。
另外，同型半胱氨酸在胱硫醚-β-合成酶（EC4.2.1.22）催化下也可与丝氨酸缩合生成胱硫醚，后者近一步生成半胱氨酸和α酮丁酸。
2 影响同型半胱氨酸水平的因素血浆中的同型半胱氨酸约70%与白蛋白结合，为结合型。
其余的游离型则主要以二硫同型半胱氨酸和以二硫键结合的同型半胱氨酸-半胱氨酸化合物形式存在，只有少量以还原型同型半胱氨酸存在于血浆中。
我们通常所指的是总的同型半胱氨酸浓度。
影响同型半胱氨酸水平最主要的因素莫过于遗传与食物营养缺乏。
遗传因素主要包括N5甲基四氢叶酸转甲基酶及胱硫醚-β-合成酶的基因发生突变，引起酶的活性降低，从而导致高同型半胱氨酸血症。
现在已经证明N5甲基四氢叶酸转甲基酶的缺陷，在体内叶酸缺乏的情况下，可以引起同型半胱氨酸浓度的明显升高。
而根据Mudd等的研究，由遗传缺陷引起的胱硫醚-β-合成酶的活性降低，可导致血浆中同型半胱氨酸的浓度超过正常值的十倍左右。
同型半胱氨酸的检测及临床意义
同型半胱氨酸的检测及临床意义一、同型半胱氨酸同型半胱氨酸（homocysteine, Hcy）是一种人体内的含硫氨基酸，为蛋氨酸和半胱氨酸代谢过程中的重要中间产物，部分以同型半胱氨酸-半胱氨酸二硫化物存在，微量以还原型同型半胱氨酸存在，大部分通过二硫键与白蛋白结合而存在。
大量对Hcy的研究表明Hcy是心脑血管疾病的独立危险因素，危险度随着浓度的升高而增加。
Boushey等的研究结果显示，血浆总Hcy水平每升高5umol/L，相当于胆固醇升高500umol/L。
伴有血浆Hcy升高(>10umol/L)的原发性高血压定义为H型高血压。
二、影响血液Hcy水平的因素1、遗传因素：C667T点突变可引起Hcy升高。
CBS基因多态性。
蛋氨酸合成酶基因多态性。
2、性别与年龄：国内外不少研究发现，Hcy随年龄增长而升高，而且男性>女性。
女性在绝经前的水平较低，绝经后显著升高，认为其机制可能与雌激素水平的变化有关。
3、营养因素：①VitB6、VitB12、叶酸等Hcy代谢辅酶摄入不足时，则Hcy升高。
②饮酒：长期饮酒可引起肝细胞蛋氨酸合成酶活性下降，从而造成Hcy血症。
③饮食中蛋氨酸过高：有报道认为高动物蛋白饮食可能是Hcy血症的危险因素之一。
三、同型半胱氨酸致病机理1、内皮毒性作用。
2、刺激血管平滑肌细胞增生。
3、致血栓作用：Hcy可促进血栓调节因子的表达，激活C蛋白和凝血因子Ⅻ、Ⅴ，血小板内前列腺素合成增加，从而促进血小板粘附和聚集。
4、脂肪、糖、蛋白代谢紊乱：Hcy可促进脂质沉积于动脉壁，泡沫细胞增加，还可改变动脉壁糖蛋白分子纤维化结构，促进斑块钙化。
5、干扰谷胱甘肽的合成：谷胱甘肽是一种重要的高氧化剂，它能防止很多细胞成分的氧化互相作用，对血管产生保护作用。
Hcy干扰谷胱甘肽的合成，从而对机体造成危害。
6、影响体内的转甲基化反应：Hcy浓度的升高会影响体内许多物质的甲基化过程，甲基化能力的降低影响细胞的发育及分化，这可能是Hcy致病的关键因素。
同型半胱氨酸和其临床意义
同型半胱氨酸和其临床意义同型半胱氨酸及其临床意义国外医学内科学分册1999年第26卷第3期北京医科大学附属第一医院肾内科（100034）李健（综述）李晓玫王海燕（审校）摘要同型半胱氨酸是一种含硫氨基酸，属于蛋氨酸循环的中间产物。
近年的研究发现，该物质是闭塞性血管疾病的一种独立危险因素。
本文对其代谢、测定、诊断和临床意义进行综述。
关键词：同型半胱氨酸动脉硬化慢性肾功能不全氨基酸代谢同型半胱氨酸（homocysteine，HCY）又称高半胱氨酸，是蛋氨酸去甲基后形成的一种含硫氨基酸，属于蛋氨酸循环的中间产物。
有关其代谢紊乱的报道最早来源于先天性胱硫醚合成酶缺乏导致出现同型半胱氨酸尿患者的观察。
此后，又相继发现其他几种参与HCY代谢的酶或辅酶改变所引起的代谢紊乱。
近几年来，随着测定技术方法的改进，已经能够对正常人血浆中以各种形式存在的HCY进行测定，并且发现在心、脑及外周血管疾病、慢性肾功能不全、牛皮癣、维生素B缺乏等疾病的患者中存在HCY的代谢紊12乱[1～3]。
本文就HCY的代谢、致病作用机制及其在肾脏疾病时的临床意义进行综述。
同型半胱氨酸的生化特征与代谢[4]HCY来源于饮食摄取的蛋氨酸，是蛋氨酸循环中S-腺苷HCY水解反应后的产物，同时，又是胱硫醚β合成酶合成胱硫醚的底物。
血液中的总HCY包括HCY、HCY二硫化物和胱氨酸-HCY3种形式，它们大部分以蛋白结合方式存在，小部分处于游离状态。
HCY代谢途径有3条：①HCY被重新甲基化为蛋氨酸：又称为再甲基化途径，再甲基化反应需要蛋氨酸合成酶参与，同时需要维生素B作12为辅酶，在此条件下，HCY与5′-甲基四氢叶酸合成蛋氨酸和四氢叶酸。
肝脏中存在着另一条再甲基化途径，该途径以甜菜碱为甲基供体，在甜菜碱HCY甲基转移酶催化下合成蛋氨酸和二甲基甘氨酸。
②HCY与丝氨酸缩合为胱硫醚的反应：又称为转硫化途径，反应由胱硫醚合成酶催化，维生素B为辅酶，缩合成胱硫醚及水。
血清同型半胱氨酸(HCY)—生化检测项目
血清同型半胱氨酸（HCY）
一、检测原理
氧化型的HCY被还原成游离的HCY，游离的HCY在HCY-甲基转移酶崔化下与S-腺苷甲硫氨酸（SAM）反应生成甲硫氨酸和S-腺苷同型半胱氨酸（SAH），SAH被SAH-水解酶水解形成腺苷和HCY。
生成的HCY进入HCY-甲基转移酶催化的转化反应，形成循环反应。
这个循环反应导致了检测信号的明显放大，形成腺苷立即脱氨转换为次黄苷和氨，氨进一步在谷氨酸脱氢酶崔化下和NADH反应，将NADH转变为NAD+，在340nm波长处检测NADH减少造成的吸光度下降量与样品中HCY的浓度成正比，从而求得样品中HCY的浓度。
二、参考区间
血清：6—14umol/L
三、临床意义
1、同型半胱氨酸目前作为一项血液生化中很常见的指标，主要用来判断心脑血管疾病危险因素。
一般需要配合甘油三酯，来综合判断。
2、同型半胱氨酸升高很容易造成脑梗塞、脑出血、冠心病、动脉硬化等疾病的发病率升高。
3、HCY浓度的上升是叶酸、维生素b6、维生素b12缺乏的敏感指标。
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血液同型半胱氨酸的测定方法及临床意义摘要同型半胱氨酸是人体内含硫氨基酸的一个重要的代谢中间产物，可能是动脉粥样硬化等心血管疾病发病的一个独立危险因子。
血浆中同型半胱氨酸含量与遗传因素、营养因素、雌激素水平、年龄因素等有关，与同型半胱氨酸代谢有关的N5N10-亚甲基四氢叶酸还原酶和胱硫醚-β-合成酶的基因突变，酶活性下降，也可引起高同型半胱氨酸血症。
同型半胱氨酸的测定方法有：气相色谱-质谱联用法、高效液相色谱法（HPLC）、全自动的荧光偏振免疫测定（Fluorescence polarization immunoassay FPIA）、高效毛细管电泳法。
HPLC最常用，而高效毛细血管电泳最有发展前途。
同型半胱氨酸（homocysteine, hCY）是一种人体内的含硫氨基酸，为蛋氨酸和半胱氨酸代谢过程中的重要中间产物，其本身并不参与蛋白质的合成。
近年来，国内外许多学者均认为血液同型半胱氨酸含量升高已成为动脉粥样硬化发生的一个独立危险因子，遂成为基础医学和临床医学研究的新热点。
本文综述血液同型半胱氨酸的测定方法及临床意义。
1 同型半胱氨酸的代谢过程1.1 人体内同型半胱氨酸是蛋氨酸脱甲基后的产物，蛋氨酸是重要的“一碳单位”供体，蛋氨酸在S-腺苷蛋氨酸合成酶崔化下与ATP结合生成S-腺苷蛋酸（SAM），SAM在供出甲基后，水解生成同型半胱氨酸和腺苷。
相反，体内的同型半胱氨酸在蛋氨酸合成酶的作用下，以维生素B12为辅助因子，接受N5-甲基四氢叶酸携带的甲基，再形成蛋氨酸。
此反应必须有N5-甲基叶酸作为甲基的供体，N5-甲基四氨叶酸是四氢叶酸经N5N10-亚甲基四氢叶酸还原酶（methyleneterahydrofolatereductase mTHFR）催化而产生的。
同型半胱氨酸另一代谢途径是在胱硫醚-β-合成酶（cystathionine-beta-synthase cBS）催化下，与丝氨酸缩合成胱硫醚。
因此，血浆同型半胱氨酸浓度的升高与遗传因素和营养因素有关，MTHFR和CBS基因发生突变，导致酶活性降低，产生高同型半胱氨酸血症。
1.2 人MTHFR基因定位在lp36.3上，cDNA全长约2.2kb，大鼠的MTHFR基因的cDNA 与人MTHFR基因有85％同源性。
人MTHFR基因有多个等位基因，经流行病学分析，纯合子与高同型半胱氨酸血症之间呈现很强相关性。
Frosst等应用PCR-SSCP分析证明MTHFR 基因在667位发生的突变与心血管疾病密切相关。
由于T代替了C，编码的氨基酸已由缬氨酸代替了丙氨酸，而缬氨酸可能与MTHFR活性中心密切相关，MTHFR酶活性大大降低。
1.3 CBS是一个63kD均一四聚体蛋白，定位于染色体21q22.3，可编码551个氨基酸，目前已鉴定出33个突变位点，与心血管疾病可能有关的是位于287密码子T283c，由编码的异亮氨酸代替了苏氨酸。
另一个突变位点为307密码子上的G919A，由编码的甘氨酸取代丝氨酸。
CBS这两个位点的突变均可使CBS酶活性降低，发生高同型半胱氨酸血症。
2 血液中的同型半胱氨酸2.1 由于氨基酸分析仪器的灵敏度限制，过去一般认为血液中不存在同型半胱氨酸。
Wicken等首先报道，男性血浆中同型半胱氨酸-半胱氨酸二硫化物总量为3.3±0.8μmol/L，女性为2.4±0.7μmol/L，男性显著高于女性。
他们使用磺基水杨酸沉淀蛋白质，层析用离子交换柱，氨基酸分析仪进行测定。
还发现，血浆同型半胱氨酸水平受雌激素水平、高脂饮食、维生素B12。
叶酸缺乏、年龄等因素的影响较大。
2.2 wu等发现正常人和高同型半胱氨酸血症患者血浆中，同型半胱氨酸大部分是与蛋白质结合，可达70％，血浆中与同型半胱氨酸结合的蛋白是白蛋白。
动物试验和人体试验表明，半胱氨酸不能取代同型半胱氨酸在血浆白蛋白上的结合位点，可能原因是同型半胱氨酸有更大的亲和力。
同型半氨酸在血液中的存在方式是，部分以同型半胱氨酸-半胱氨酸二硫化物存在，微量以还原型同型半胱氨酸存在，大部分可能通过二硫键与白蛋白结合而存在。
当血浆被有机酸沉淀蛋白质时，结合的同型半胱氨酸也被沉淀下来，测定上清液所得的称为游离同型半胱氨酸，游离半胱氨酸加上与白蛋白结合的同型半胱氨酸称为总同型半氨酸。
血浆标本的处理方式也使游离和结合的同型半胱氨酸重新分配。
在较高温度放置，游离同型半胱氨酸很快与血浆白蛋白结合，血浆在-20℃储存几周后，大部分都变成结合型同型半胱氨酸，只能检测到极少量游离同型半胱氨酸。
3 同型半胱氨酸测定方法同型半胱氨酸在血浆中以多种形式存在，标本的采集和处理方式显得非常重要。
通常要求血液标本采取后要尽快分离血浆，制成无蛋白滤液，所有操作尽可能在4℃进行。
无蛋白滤液在-20℃一般可保存数月。
可以检测三种不同的同型半胱氨酸组分：还原型同型半胱氨酸，氧化型同型半胱氨酸即同型半胱氨酸-半胱氨酸二硫化物占10％～20％，及结合型同型半胱氨酸（＞70％）。
为了准确测定，在分析前应加入巯基试剂如二硫苏糖醇（DTT）、硼氢化钠等打开二硫键。
3.1 stabler等首先报道气相色谱-质谱联用测定血浆中总同型半胱氨酸、总半胱氨酸和蛋氨酸。
所用的仪器为HP5992B气相色谱-质谱仪，标本的处理过程包括：先加入三种内标[D.L-3,3,3′,3′,4,4,4′,4′-2H8]同型胱氨酸，[D.L-3,3,3′,3′-2H4]胱氨酸和L-[甲基-2H3]蛋白酸，然后加EDTA-Na2和β-巯基乙醇100℃15min，再以磺基水杨酸沉淀蛋白，上清液用离子交换柱预处理，氮气吹干后，用水重新溶解，进行衍处理后上样。
气相色谱仪进行温度250℃，毛细血管柱箱温度180℃，以8℃/min速度升温至276℃，柱前端压力为26psi，以保留时间和质谱进行定性和定量。
此法操作十分复杂，耗时长，仪器设备要求高，现除了在某些专门的实验进行测定外，普及很困难。
3.2 氨基酸分析仪和高效液相色谱法（HPLC）这两种方法都属色谱分离技术，HPLC由于其分离的高效率和检测方式灵敏而更常用一些。
HPLC根据所用的色谱柱（反相柱或离子交换柱）、衍生方式（柱前或柱后衍生）、检测方式（紫外或荧光）又分为多种测定方法。
其中以Fiskerstrand等报道的方法较有代表性。
血液标本以EDTA-Na2抗凝，0℃～4℃，2000g 离心5min，碘基水杨酸沉淀蛋白质，上清液再与NaBH4溶液反应，还原二硫键，衍生化试剂为0.025mol/L的Monobromobimane，反应3min后以冰醋酸终止反应。
20μl衍生后的样本进入一根150mm×4.6mm oDS柱。
色谱柱预先以Ph3.5的硝酸铵缓冲液平衡，用含有乙腈的流动相进行梯度洗脱。
用荧光检测器激发波长365nm，发射波长475nm检测。
在此条件下，半胱氨酸、同型半胱氨酸的保留时间分别为8min和10.5min。
衍生化和色谱条件稍加改变之后也可用于尿标本的测定。
此方法灵敏度高，能分离、分析血液中存在的多种含硫氨基酸。
3.3 shipchandler等报道了全自动的荧光偏振免疫测定（Fluorescence polarizationimmunoasssay FPIA）是通过竞争性免疫反应来测定血浆中同型半胱氨酸。
血浆标本并不沉淀蛋白质，直接加入巯基试剂DTT，再加荧光素标记的同型半胱氨酸，标记的同型半胱氨酸分子较小，能在溶液中进行旋转运动，受偏光激发光照射后所发出的光不具有偏光性，荧光偏光度下降。
当标记的同型半胱氨酸与相应抗体结合后，抑制了旋转运动，用偏光激发光照射，发出的荧光具有偏光性，荧光偏光度增大。
样品中同型半胱氨酸与标记同型半胱氨酸竞争结合抗体，如果样品同型半胱氨酸越多，抗体与标记同型半胱氨酸结合就越少，游离标记物增多，荧光偏光度下降。
此法需要专门的荧光偏光免疫检测仪。
美国Abbot 公司已有专门的FPIA同型半胱氨酸的检测试剂盒，配合使用Abbot imx系列FPIA分析仪，简便快速。
3.4 高效毛细血管电泳法分析测定血液中硫氨酸及代谢产物如同型半胱氨酸，同型半胱氨酸-半胱氨酸二硫化物、蛋氨酸及胱硫醚等。
高效毛细血管电泳法快速测定血液中的游离氨基酸已经报道。
我们在此研究基础上，摸索适宜的分离条件，同时分离、分析血液中多种含硫氨酸及其代谢产物，目前国内外均没有文献报道。
与传统的反相高效液相色谱相比，高效毛细血管电泳是近年来发展的一项高效分离、分析技术，一般30min内即可完成一次分析，试剂消耗量少，重复性好，是一项十分有前途的分析方法。
4 血液同型半胱氨酸浓度变化的临床意义4.1 本世纪60年代末期，一些学者注意到患有遗传性高胱氨酸尿症的病人，大多数伴有亚临床心血管病。
1976年，Wichen等通过流行病学调查提出同型半胱氨酸是心血管病人一个独立危险因素，但一直未受到人们重视。
近年来，通过分子水平研究同型半胱氨酸在心血管发病中的作用已重新引起人们的关注。
动物试验表明，应用3％蛋氨酸饮食长期喂养家兔，诱发同型半胱氨酸血症。
家兔血中甘油三酯、游离脂肪酸、脂质过氧化物含量均明显升高，病理检查表明主动脉脂肪大量沉积，并发生动脉粥样硬化。
Glueck等报道，他们对482例高血脂病人进行分析，18例患者同时伴有血浆同型半胱氨酸含量升高。
其中13人患有动脉粥样硬化，发病率为72％，远高于血浆同型半胱氨酸含量正常的高血脂患者。
在18例高同型半胱氨酸血症患者的直系亲属中动脉粥样硬化的发病率可达78％。
目前关于高同型半胱氨酸血症诱发动脉粥样硬化的机制尚不了解。
可能有多方面因素起作用。
田学军等报道，同型半胱氨酸可以促进大鼠血管平滑肌细胞增殖，诱导血管平滑肌细胞中新的mRNA生成。
另外，同型半胱氨酸可以抑制内皮细胞增殖，促进氧自由基的生成，加速低密度脂蛋白的氧化，并可激活血小板的粘附和聚集。
总之，同型半胱氨酸是诱发心血管疾病的一个独立危险因素。
4.2 其他一些疾病，如肾功能障碍患者常伴有血同型半胱氨酸含量升高，机制未明。
机体缺乏维生素B12、叶酸也会引起血同型半胱酸含量升高，但给予维生素B12、叶酸一般能取得较好的疗效。