单脱氢抗坏血酸还原酶活性测定试剂盒使用说明
琥珀酸脱氢酶(SDH)活性检测试剂盒说明书__微量法UPLC-MS-4333
琥珀酸脱氢酶（SDH）活性检测试剂盒说明书货号：UPLC-MS-4333规格：100T/96S微量法产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件试剂一液体110mL×1瓶-20℃保存试剂二液体1mL×1支-20℃保存试剂三液体18mL×1瓶4℃保存试剂四粉剂×1支4℃保存试剂五粉剂×1瓶4℃保存试剂六粉剂×1瓶-20℃保存溶液的配制：1、试剂四：临用前加入到试剂三中溶解待用；2、试剂五：临用前加入4mL双蒸水，用不完的试剂仍4℃保存；3、试剂六：临用前加入3.333mL双蒸水，用不完的试剂4℃保存。
产品说明：SDH（EC1.3.5.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。
SDH是线粒体的一种标志酶，位于线粒体内膜上的一种膜结合酶，是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。
此外，为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。
SDH催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（PMS）传递还原2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），并且在600nm处具有特征吸收峰，通过600nm吸光度的变化，测定2,6-DCPIP的还原速度，代表SDH酶活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）准确称取0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10μL试剂二，用冰浴匀浆器或研钵匀浆充分研磨，4℃11000g离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至600nm，蒸馏水调零。
NADP-苹果酸脱氢酶活性检测试剂盒说明书__紫外分光光度法UPLC-MS-4348
NADP-苹果酸脱氢酶（NADP-MDH）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法货号：UPLC-MS-4348规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体50mL×1瓶4℃保存试剂一液体40mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×2支-20℃保存试剂三粉剂×2支-20℃保存溶液的配制：1.试剂二：临用前加入250μL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存；2.试剂三：临用前加入300μL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存。
产品说明：MDH（EC1.1.1.37）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。
草酰乙酸是重要的中间产物，连接多条重要的代谢途径。
因此，MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色，包括线粒体的能量代谢、苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。
根据不同的辅酶特异性，MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH，NADP-MDH主要存在于真核细胞中。
NADP-MDH催化NADPH还原草酰乙酸生成苹果酸，导致340nm处光吸收下降。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，弃上清，按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20%，超声3s，间隔10s，重复30次），8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
硝酸还原酶活性检测试剂盒说明书 (可见分光光度法)
第1页，共2页硝酸还原酶（NR）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC0080规格：50T/24S 产品内容：诱导剂储备液：液体50mL×1瓶，4℃保存。
提取液：液体25mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体40mL×1瓶，-20℃保存。
试剂二：液体10mL×1瓶，-20℃保存。
试剂三：液体20mL×1瓶，4℃保存。
试剂四：液体20mL×1瓶，4℃保存。
标准液：NaNO 2标准储备液1mL，10μmol/mL，-20℃保存。
诱导剂应用液的配制：用时将诱导剂储备液稀释10倍，即取10mL 诱导剂储备液加90mL 蒸馏水，充分混匀。
标准液的配制：将标准储备液用蒸馏水稀释为1.5、1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1μmol/mL 浓度的标准溶液。
产品说明：NR（EC 1.7.1.3）广泛存在于植物中，是植物硝态氮转化为氨态氮的关键酶，也是诱导酶，对作物的产量和品质有影响。
NR 催化硝酸盐还原为亚硝酸盐，NO 3ˉ+NADH+H ＋→NO 2ˉ+NAD ＋+H 2O；产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下，与对–氨基苯磺酸α-萘胺定量生成红色偶氮化合物；生成的红色偶氮化合物在540nm 有最大吸收峰，可用分光光度法测定。
需自备的仪器和用品:可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样品测定的前处理1、取适量诱导剂于烧杯中，将新鲜标本洗净，滤纸吸干，放入诱导剂应用液中（淹没即可），浸泡2h，取出样本，滤纸吸干后，-20℃冷冻30min，取出样本，滤纸吸干。
（根据需要进行诱导处理）2、称取约0.1g 样本，加入1mL 提取液，冰浴研磨，4000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
二、测定步骤1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)活性检测试剂盒说明书__微量法UPLC-MS-4349
NADP-苹果酸脱氢酶（NADP-MDH）活性检测试剂盒说明书微量法货号：UPLC-MS-4349规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体100mL×1瓶4℃保存试剂一液体20mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1支-20℃保存试剂三粉剂×1支-20℃保存溶液的配制：1.试剂二：临用前加入500μL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存；2.试剂三：临用前加入600μL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存。
产品说明：MDH（EC1.1.1.37）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。
草酰乙酸是重要的中间产物，连接多条重要的代谢途径。
因此，MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色，包括线粒体的能量代谢、苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。
根据不同的辅酶特异性，MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH，NADP-MDH主要存在于真核细胞中。
NADP-MDH催化NADPH还原草酰乙酸生成苹果酸，导致340nm处光吸收下降。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研钵/匀浆器、蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，弃上清，按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20%，超声3s，间隔10s，重复30次），8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
琥珀酸脱氢酶（SDH）活性检测试剂盒说明书
琥珀酸脱氢酶（SDH ）活性检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0955 规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 规格 保存条件 试剂一 液体110 mL×1瓶 -20℃保存 试剂二 液体0.6mL×2支 -20℃保存 试剂三 液体18 mL×1瓶 2-8℃保存 试剂四 液体3mL×1瓶 2-8℃保存 试剂五液体3mL×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、 试剂二：为易挥发试剂，用完后尽快密封，-20℃保存； 产品说明：SDH （EC 1.3.5.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。
SDH 是线粒体的一种标志酶，位于线粒体内膜上的一种膜结合酶，是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。
此外，为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。
SDH 催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（PMS ）传递还原2,6-二氯酚靛酚（DCPIP ），并且在600nm 处具有特征吸收峰，通过600nm 吸光度的变化，测定2,6-DCPIP 的还原速度，代表SDH 酶活性。
Succinic Acid + FAD Fumaric Acid + FADHFADH + PMS FAD + PMSH 2PMSH 2 + Dichlorophenolindophenol(600nm) PMS + Reduced Dichlorophenolindophenol 注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1. 组织样本：称取约 0.1g 组织，加入1mL 试剂一和 10μL 试剂二，用冰浴匀浆器或研钵匀浆充分研磨，4℃11000g 离心10min ，取上清，置冰上待测。
NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法
NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC1040规格：50T/48S产品内容：提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体40mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×2支，-20℃保存；临用前加入360μL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存；试剂三：粉剂×2支，-20℃保存；临用前加入327μL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存。
产品说明：MDH（EC 1.1.1.37）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。
草酰乙酸是重要的中间产物，连接多条重要的代谢途径。
因此，MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色，包括线粒体的能量代谢、苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。
根据不同的辅酶特异性，MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH，细菌中通常只含有NAD-MDH，在真核细胞中，NAD-MDH分布于细胞质和线粒体中。
NAD-MDH催化NADH还原草酰乙酸生成苹果酸，导致340nm处光吸收下降。
需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿和蒸馏水。
操作步骤：一、样品测定的准备：1、细菌、细胞样品的制备：细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，弃上清，按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次），8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：称取约0.05g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
二、测定步骤和加样表：紫外分光光度计提前预热30min，调节波长至340nm，蒸馏水调零，试剂一37℃预热15min。
NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)试剂盒说明书
NADP—苹果酸脱氢酶（NADP—MDH）试剂盒说明书NADP苹果酸脱氢酶（NADPMDH）试剂盒说明书微量法100管/96样注意：正式测定前务必取23个预期差异较大的样本做推测定测定意义：MDH（EC1.1.1.37）广泛存在于动物、植物、微生物和培育细胞中，线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。
草酰乙酸是紧要的中心产物，连接多条紧要的代谢途径。
因此，MDH在细胞多种生理活动中扮演侧紧要的角色，包括线粒体的能量代谢、苹果酸天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。
依据不同的辅酶特异性，MDH分为NAD倚靠的MDH和NADP倚靠的MDH，NADPMDH重要存在于真核细胞中。
测定原理：NADPMDH催化NADPH还原草酰乙酸生成苹果酸，导致340nm处光汲取下降。
需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。
试剂的构成和配制：试剂一、提取液100mL×1瓶，在4℃保存；试剂二、液体20mL×1瓶，在4℃保存；试剂三、粉剂×1瓶，20℃保存；样本测定的准备：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培育细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；依照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500～1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一），超声波碎裂细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：依照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为1：5～10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一），进行冰浴匀浆。
8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调整波长至340nm，蒸馏水调零。
乙醛脱氢酶(ALDH)活性检测试剂盒说明书__紫外分光光度法UPLC-MS-4344
紫外分光光度法乙醛脱氢酶（ALDH）活性检测试剂盒说明书货号：UPLC-MS-4344规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体60mL×1瓶4℃保存试剂一液体20mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1瓶-20℃保存试剂三液体1mL×1支4℃保存试剂四液体2mL×1瓶4℃保存试剂五液体3mL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用前加入6mL蒸馏水溶解，-20℃分装保存；2、试剂五：沸点低，在使用时保持低温以保证正确的吸取量。
产品说明：乙醛脱氢酶(EC1.2.1.10)是醛脱氢酶的一种，广泛存在于各种动物、植物和微生物体内。
在辅酶I的存在下，它催化乙醇在内的某些一级或二级醇、醛或酮的脱氢反应。
在人类和许多动物体内，线粒体乙醛脱氢酶能把对生物体有害的醇类转化，所以在细胞解毒研究中乙醛脱氢酶受到高度关注；同时，乙醛脱氢酶在分子生物学以及相关疾病的检测方面有较广泛的研究应用。
乙醛脱氢酶催化乙醛和NAD+转化为乙酸和NADH，利用NADH在340nm处吸光值的变化即可计算得到乙醛脱氢酶的活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心20min，取上清置于冰上待测。
细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心20min，取上清置于冰上待测。
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单脱氢抗坏血酸还原酶活性测定试剂盒使用说明
分光光度法货号：BC0650
规格：50T/48S
产品内容：
试剂一：液体×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体×1瓶，室温保存；
试剂三：粉剂×1瓶（棕色），4℃保存。
临用前加入5mL双蒸水充分溶解；
试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加入5mL双蒸水充分溶解；
试剂五：液体×1瓶，4℃保存。
临用前加入5mL试剂二充分溶解。
试验中所需的仪器和试剂：
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液器、蒸馏水。
产品说明：
MDHAR催化MDHA还原MDHA生成AsA；在抗坏血酸氧化还原代谢中具有重要作用。
MDHAR催化NADH还原MDHA生成AsA和NAD＋，NADH在340nm有特征吸收峰，但NAD＋没有。
通过测定340nm光吸收下降速率，来计算MDHAR活性。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积（ml）1：5-10的比例（建议称取约0.1g
组织，加入1ml试剂一进行冰浴匀浆。
10000rpm，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（ml）为500-1000：1的比例
（建议500万细胞加入1ml试剂一），冰浴超声超声破碎细胞（功率300w，超声3s，间隔7s，总时间3min）；然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
二、DHAR测定操作：
1.分光光度计预热30min，调节波长到340nm，蒸馏水调零。
2.试剂二在25℃水浴锅中预热30min以上。
3.空白管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL试剂三、100μL试剂四和100μL
试剂五、600μL试剂二，最后加入100μL蒸馏水，迅速混匀后于340nm比色，记录30s和150s的吸光值A1和A2，△A=A1-A2。
4.测定管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL试剂三、100μL试剂四和100μL
试剂五、600μL试剂二，最后加入100μL上清液，迅速混匀后于340nm比色，记录30s和150s的吸光值A3和A4，△A=A3-A4。
三、DHAR活力计算：
（1）按蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1μmol NADH为1U。
MDHAR(U/mg prot)=[(△A测定管-△A空白管)÷ε÷d×V反总×106]÷（Cpr×V样）÷T
=0.804×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr
（2）按样本质量计算
活性单位定义：25℃中每克样本每分钟氧化1μmol NADH为1U。
MDHAR(U/g)=[(△A测定管-△A空白管)÷ε÷d×V反总×106]÷（W×V样÷V样总）÷T
=0.804×(△A测定管-△A空白管)÷W
（3）按细胞数量计算
活性单位定义：25℃中每104个细胞每分钟氧化1μmol NADH为1U。
MDHAR(U/104cell)=[(△A测定管-△A空白管)÷ε÷d×V反总×106]÷（细胞数量×V样÷V样总）÷T=0.804×(△A测定管-△A空白管)÷细胞数量ε:NADH摩尔吸光系数，6220L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应体系总体积，1mL=0.001L；V样：加入反应体系中上清液体积，100μL=0.1mL；Cpr：上清液蛋白浓度，mg/ml；蛋白质浓度需要另外测定，建议使用本公司产品蛋白含量BCA试剂盒；V样总：加入提取液体积，1ml；W，样本质量，g；T：反应时间，2min。