Cell+培养技术

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细胞培养

CO2培养箱
CO2培养箱设定的条件： 37 ℃ 5％CO2
作用：维持培养液的 PH值 7.2~7.4范围
NaHCO3+H2O Na+ + OH - + H2O + CO2↑
CO2培养箱使用时注意的问题
用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微松，以保证通气。
为了保持箱内湿度,需放置3000毫升蒸馏水于槽中, 以避免培养液蒸发。
组织培养：从生物体内取出活的组织块，大小在（O.5 ～1立方毫米）或薄片（厚0.2 毫米）在体外进行培养的方法。
器官培养：使用器官原基或器官的一部分或整个器官 (一般指胚胎器官)在体外进行培养的方法。
细胞培养的基本概念
原代培养 primary culture : 指从供体取得组织，分
离所得到的细胞接种于培养瓶,进行首次培养称为原代培养（初代培养）。
原
代
取鼠
细
胚胞
组织
培
养
机械解离细胞法
消化培养法
制成细胞悬液
培养细胞贴壁过程
血清中有促使细胞贴壁的纤维连接素LETS、胶原、糖蛋白（生长基质）等，这些带正电荷的糖蛋白是促贴壁因子先吸附于底物上，悬浮细胞的表面蛋白参与贴附过程。
每代贴附生长细胞的生长过程
游离期贴壁期潜伏期对数生长期停止期（平台期）
系(永生细胞系)。
正常细胞、永生细胞和肿瘤细胞的性状区别
正常细胞
永生细胞
肿瘤细胞
接触抑制
有
有
无
永生性
无
有
有
克隆形成率
无
弱
强
核型改变
无
常有

cell steam细胞培养技术名词解释

题目：探秘细胞培养技术：深入解读cell steam细胞1. 什么是细胞培养技术？细胞培养技术是一种在实验室中对细胞进行体外培养和增殖的技术，旨在研究和应用细胞生物学相关的科学问题。

它是生命科学领域中非常重要的工具和技术之一，被广泛应用于细胞生物学、药物筛选、疾病研究等方面。

2. cell steam细胞是什么？cell steam细胞是指一类具有潜在分化能力和自我更新能力的细胞，可以发育成多种类型的成体细胞。

它有着特殊的细胞特征和功能，被认为是生物学上的一种极度重要的细胞类型。

3. cell steam细胞培养技术的名词解释在细胞培养技术中，cell steam细胞培养技术是指将这种特殊的细胞进行培养和增殖的技术，旨在利用其分化潜能和自我更新能力，为生物医学研究、再生医学和临床治疗提供重要的细胞资源。

4. cell steam细胞培养技术的广度和深度从广度上来看，cell steam细胞培养技术涉及到细胞培养基、培养条件、生长因子、分化诱导剂等多个方面的技术和方法；从深度上来看，它涉及到细胞增殖与分化的机制、细胞信号传导、基因表达调控等一系列生物学问题。

5. 如何撰写高质量的文章为了更好地探讨cell steam细胞培养技术，我将从浅入深地逐步解释其相关名词和概念，帮助您更全面地理解这一技术。

接下来，我们将从细胞培养基、培养条件和生长因子等方面入手，逐步深入探讨cell steam细胞培养技术的原理和应用。

6. cell steam细胞培养技术的应用除了在基础科学研究中的应用外，cell steam细胞培养技术还被广泛应用于再生医学、组织工程、药物研发等领域。

通过利用其分化潜能和自我更新能力，人们可以培育出特定类型的细胞，用于治疗某些疾病或损伤的修复。

7. 结语在本文中，我们深入探讨了cell steam细胞培养技术的名词解释、广度和深度，并介绍了其在生物医学领域中的重要应用。

通过本文的阅读，相信您能对这一技术有更深入的理解，并对其在未来的发展和应用有更加全面的认识。

细胞培养的注意事项及方法

细胞培养的注意事项及方法细胞培养(cell culture)是指在体外模拟体内环境(无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等)，使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。

细胞培养也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。

不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养都是一个*的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。

细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术*的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。

细胞培养技术是细胞生物学研究方法中重要和常用技术，通过细胞培养既可以获得大量细胞，又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等。

环境因素：1.无菌环境无毒和无菌是体外培养细胞的首要条件。

细胞在活体内，解毒系统和免疫系统可抵抗微生物或其他有害物质的入侵，但细胞在体外培养的过程中，缺乏机体免疫系统的保护而丧失对微生物的防御能力和对有害物质的解毒能力。

为保证细胞能在体外环境中生长繁殖，必须要确保无菌工作区域、良好的个人卫生、无菌试剂和培养基以及无菌操作。

常见的微生物污染有支原体、细菌、真菌。

支原体无致死毒性，可与细胞长期共存，对细胞有潜在影响，但体积小，不易鉴别，可借助于地衣红或Hoechst33342染色来进行检测。

细菌增殖快，在短时间内即可大量扩增，并产生毒素杀死细胞。

真菌的种类繁多，肉眼可见，漂浮于培养液面上，可呈丝状、管状或树枝状等。

2.合适的温度一般哺乳类与禽类细胞在体外培养的适宜温度是37～38℃，不适宜的环境温度会影响细胞的生长。

细胞对低温的耐受能力要强于对高温的耐受能力，在低温下，细胞的代谢活力及核分裂能力降低。

若温度不低于0℃，虽然细胞代谢受到影响，但无损伤作用;25～35℃时，细胞以缓慢的速度生长;但若被置于40℃数小时，则不仅不利于细胞生存、生长，甚至可导致其死亡。

3.适宜的渗透压高渗溶液或低渗溶液会引起细胞发生褶皱、肿胀、破裂。

细胞培养常规操作流程

细胞培养常规操作流程英文回答：Cell culture is a fundamental technique in biological research, allowing scientists to study and manipulate cells in a controlled environment. The standard procedure forcell culture involves several key steps.First, I need to prepare the culture medium. This is the nutrient-rich solution that provides cells with the necessary nutrients and growth factors to survive and multiply. The medium is usually composed of a basal medium, such as DMEM or RPMI, supplemented with fetal bovine serum, antibiotics, and other additives. I carefully measure and mix the components to ensure a proper balance of nutrients.Next, I sterilize all the equipment and materials that will come into contact with the cells. This includes the culture dishes, pipettes, and media bottles. Sterilization can be achieved by autoclaving, which uses high-pressuresteam to kill any microorganisms present. Alternatively, I can use a filter to remove bacteria and fungi from the media.Once everything is sterilized, I can start the cell culture process. I thaw frozen cells or obtain fresh cells from a tissue sample. I then count the cells using a hemocytometer or an automated cell counter. This step is important to determine the cell density and ensure that I seed the appropriate number of cells for the experiment.After counting the cells, I seed them into the culture dishes or flasks. The dishes are usually coated with a substance that promotes cell attachment, such as collagen or gelatin. I carefully distribute the cells evenly across the surface and place the dishes in an incubator set at the appropriate temperature and CO2 concentration. The incubator provides a controlled environment that mimics the conditions inside the body.Over the next few days, I regularly check the cells under a microscope to monitor their growth and health. Ialso change the culture medium every 2-3 days to provide fresh nutrients and remove waste products. This process is known as feeding the cells.Sometimes, I need to subculture the cells to maintain their health and prevent overcrowding. This involves detaching the cells from the culture dish using an enzyme called trypsin, and then transferring them to a new dish with fresh medium. Subculturing allows the cells to continue growing and dividing without becoming too dense.Throughout the cell culture process, I need to maintain aseptic technique to prevent contamination. This means working in a clean and sterile environment, wearing gloves, and using sterile tools. Contamination can lead to the growth of unwanted microorganisms and compromise the experiment.In conclusion, cell culture is a meticulous processthat involves preparing the culture medium, sterilizing equipment, seeding the cells, maintaining them in the incubator, and regularly feeding and monitoring theirgrowth. It requires attention to detail, patience, and aseptic technique to ensure successful cell culture experiments.中文回答：细胞培养是生物研究中的一项基本技术，允许科学家在受控环境中研究和操作细胞。

CELL-基本培养方法精品文档

弱的细胞在接种后放置于CO2 培养箱中培养3-5 小时，使细胞黏附牢靠后再补加充足的营养液，继续培养） 5、每隔2-3天换液，换液时先将旧的培养液吸出，加入平衡盐溶液洗涤，吸出平衡盐溶液，再加入新的培养液。盖上盖子继续培养。
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六、转瓶培养
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（二）双盖玻片悬滴培养法
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双盖玻片图解： 1、载体盖玻片 2、带培养物盖玻片
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与单盖玻片不同之处：
1、载体盖玻片加一滴消毒纯水贴到带有组织块的另一面。
2、再培养时：直接取下带培养物的盖玻片漂洗，换一张新的载体盖玻片 ,可减少污染。
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二、培养瓶培养方法 20世纪50年代Carrel设计了卡氏瓶 Earle设计了T-培养瓶
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用血浆固定组织块的培养方法
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图:卡氏瓶培养组织块 1.消毒卡氏瓶 2.火焰略烧瓶口 3.取少量血浆加入瓶底 4.再加等量胚胎浸出液 5.接种组织块 7.上盖 8.消毒 9加入培养液 10.通气
培养液的吸管）。
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二、培养操作中注意：动作准确敏捷有序；培养用液开口后应45度倾斜，不再重复使用的应立即封口；一个吸管只能吸一种液体；不能面向操作台讲话或咳嗽。
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基本的培养方法
悬滴培养方法：
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muralcells培养方法

muralcells培养方法Muralcells是一种新型的细胞培养方法，该方法通过将细胞培养在壁画结构上，可以更好地模拟体内组织的复杂结构和功能。

本文将详细介绍Muralcells培养方法的原理、步骤和应用前景。

一、Muralcells培养方法的原理Muralcells基于壁画的原理，将细胞培养在具有多种细胞支架的结构上。

这些支架可以是由聚合物、生物材料或其他可降解材料构成的微小颗粒。

细胞可以通过这些支架进行粘附和生长，形成具有三维结构的细胞团。

Muralcells的一个关键原理是细胞-细胞相互作用。

在壁画结构中，细胞之间可以靠近并相互交流，从而模拟体内组织细胞之间的相互作用。

细胞通过细胞间连接和信号传导进行协调，从而保持组织结构的稳定性和功能。

二、Muralcells培养方法的步骤1.准备壁画结构：首先，需要准备壁画结构。

这可以通过将聚合物或其他可降解材料制成微小颗粒，然后通过特定的技术将这些颗粒组装成所需形状的结构。

例如，可以使用3D打印技术将颗粒打印成相应的形状。

2.细胞接种：接下来，将细胞接种到壁画结构上。

可以选择适合特定细胞类型的培养基，并通过离心等方法使细胞均匀地附着在壁画结构上。

为了促进细胞的生长和扩散，可以将培养基添加到系统中，以提供适当的营养和生长因子。

3.维持培养环境：为了保持细胞的健康生长，需要提供适宜的培养环境。

这包括适当的温度、湿度和氧气浓度等。

此外，还可以通过添加适量的培养基来提供细胞所需的营养物质和生长因子。

4.细胞观察和记录：定期观察和记录细胞的生长情况。

可以使用显微镜等工具来观察细胞的形态和结构。

此外，还可以使用生化分析方法来检测细胞的代谢活性和功能。

三、Muralcells培养方法的应用前景Muralcells培养方法具有很大的应用前景。

首先，该方法可以用于体内组织的工程重建。

通过调整壁画结构和细胞类型，可以模拟不同组织的结构和功能。

例如，可以利用Muralcells培养方法来构建人工血管或人工心脏等。

细胞培养技术的书

细胞培养技术的书1. 《细胞培养》（Cell Culture）- 作者：R. Ian Freshney本书是细胞培养领域的经典教材，被广泛用于生命科学和生物医学研究领域的教学和实践。

它全面介绍了细胞培养的基本原理、技术和方法，涵盖了细胞培养的各个方面，包括设备、培养基、细胞传代、污染控制等。

书中还提供了大量实用的技巧和案例，帮助读者更好地理解和应用细胞培养技术。

2. 《细胞培养技术》（Cell Culture Techniques）- 作者：A. K. M. Anisul Islam 等这本书详细介绍了细胞培养的各种技术和方法，包括细胞分离、培养条件、细胞鉴定、细胞保存等。

书中还讨论了细胞培养在生物医学研究、药物研发和生物技术等领域的应用。

对于初学者和有经验的研究人员来说，这本书都是一本非常实用的参考资料。

3. 《动物细胞培养：基本技术与实践》（Animal Cell Culture: Basic Techniques and Practices）- 作者：K. Vijaya Kumar 等本书专注于动物细胞培养的技术和实践，包括细胞培养的基本原则、培养基制备、细胞培养操作、质量控制等方面。

书中还介绍了一些常见的细胞系和它们的培养方法。

对于从事动物细胞培养研究的人员来说，这本书是一本非常有价值的资源。

4. 《植物细胞培养技术》（Plant Cell Culture Techniques）- 作者：Roberta H. Smith这本书主要关注植物细胞培养的技术和应用，包括培养基制备、外植体处理、细胞增殖和分化、遗传转化等方面。

书中还介绍了一些常见的植物物种和它们的细胞培养方法。

对于植物生物技术和相关研究领域的人员来说，这本书提供了丰富的信息和实用的指导。

5. 《细胞培养工程》（Cell Culture Engineering）- 作者：M. L. Shuler 等本书从工程学的角度介绍了细胞培养技术，涵盖了细胞培养过程的设计、优化和放大等方面。

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面。见于各种造血系统肿瘤细胞
每代贴附生长细胞的生长过程
游离期贴壁期潜伏期对数生长期停止期（平台期）
游离期：
细胞接种后在培养液中呈悬浮状态．也称悬浮期。此时细胞质回缩，胞体呈圆球形。
10分钟一4小时
贴壁期：
细胞附着于底物上，游离期结束。细胞株平均在10分钟一4小时贴壁。
离心法传代：离心（1000转/分）去上清，沉淀物加新培养液后
再混匀传代。直接传代法：悬浮细胞沉淀在瓶壁时，将上清培养液去除1/2一
2/3，然后用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代。 2 半悬浮生长细胞传代（Hela细胞）此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可用直接吹打法
使纫胞从瓶壁脱落下来，进行传代。 3贴壁生长细胞传代采用酶消化法传代。常用的消化液有0.25％的胰蛋白酶液。
肿瘤放射敏感性实验等。
操作步骤
（1）单细胞悬液接种于96孔培养板；103-104细胞/孔，每孔培养基总量200微升（96孔培养板每孔容积370微升），37℃、5％
CO2培养箱中培养一段时间（根据实验目的决定培养时间）（2）加入2毫克／毫升的MTT液（50微升／孔）；继续培养3小
的速度，在40分钟内降至液氮表面，停30分钟后，直接投人液氮
中。
低温保护剂的应用
在细胞冻存时加入温保护剂，能大大提高冻存效果。
常用的低温保护剂是DMSO，它是一种渗透性保护剂，可迅速透入细胞，提高胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损伤。
胞群体形成肉眼可见的克隆。克隆形成卒用来表示细胞的增殖能力。克隆形成率比＝克隆形成数／接种细胞数缺点：操作繁琐优点：精确、可靠
2.台盼蓝法
活细胞不被染色，死细胞染成蓝色，用活细胞占细胞中的百分比表示细胞活力
已淘汰
3. 四唑盐（MTT）比色法
四唑盐（MTT）商品名为噻唑蓝，
在生长因子、蛋白质工程、基因表达调控等研究领域，迫切需要用无血清培养基培养细胞．
无血清培养基的主要研制策略：在基础培养基中补充各种必需因子，如激素、生长因子、结合蛋白、贴壁和扩展因子等。
无血清培养基由基础培养基和替代血清的补充成分组成。
1975年，Sato首次成功地用无血清培养基培养了垂体细胞株，近 20多年来已报道了几十种细胞系在无血清培养基中成功地生长和增殖。
原代培养细胞的生命归宿
原代培养期传代期衰退期
有限细胞系，无限细胞系细胞系 cell line 细胞株 cell strain
培养细胞的特性
培养细胞的生长方式
贴附生长：

必须贴附于支持物表面才能生长。见于各种实体
瘤细胞
悬浮生长：

于悬浮状态下即可生长，不需要贴附于支持物表
时。
（3）吸出孔内培养液后，加入DMSO液（150微升／孔），将培养板置于微孔板扳荡器上振荡10分钟，使结晶物溶解。
（4）酶标仪检测各孔OD值（检测波长570纳米）。记录结果，绘制
细胞冻存和复苏
细胞低温冷冻贮存是细胞室的常规工作。细胞冻存与细胞传代保存相比可以减少入力、经费，减少污染，减少细胞生物学特性变化。
底物：胶原、玻璃、塑料、其它细胞等
血清中有促使细胞贴壁的冷析球蛋白和纤粘素、胶原等糖蛋白（生长基质），这些带正电荷的糖蛋白的促贴壁因子先吸附于底物上，悬浮细胞再与吸附有促贴壁因子的附着。
进口塑料培养瓶涂有生长基质（化学合成的功能基团）
潜伏期
此时细胞有生长话动，而无细胞分裂。细胞株潜伏期一般为6～24小时。
对数生长期：
细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳，最适合进行实验研究。
停止期（平台期）：
细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂机制：接触抑制、密度依赖性
培养细胞生长的条件
1 细胞的营养需要
2 细胞的生存环境
温度: 37 ℃

O2
CO2: 5%
CO2 +H2O ← →H2CO3 ← →H+ + HCO3-
慢冻程序
标准程序：

当温度在-25 ℃以上时， 1～2 ℃/min

当温度达-25 ℃以下时， 5～10 ℃/min

当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中

细胞冻存器
简易程序：

将冷冻管（管口要朝上）放入纱布袋内，纱布袋系以线绳，
通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口，按每分钟温度下降1～2 ℃
无血清细胞培养基的使用保证了实验结果的准确性、可重复性和稳定性，，减少了细胞污染，简化了提纯和鉴定各种细胞产物的程序。
向无血清培养液中能促进细胞系生长的补加物都是独特的。适用于某种细胞株的培养液，很可能不适合另一种细胞株的生长。即使同源组织的不同细胞株，所需补加物也不同。
无血清培养基尚处于研究阶段，难以推广。
抗菌素的使用：
在培养液配制后，培养液内常加适量抗菌素，以抑制可能存在的细菌的生长。
通常是青霉素和链霉素联合使用。培养基内青霉素、链霉素最终使用浓度为每毫升100单位。
庆大霉素：每毫升100单位——方便、广谱、稳定
完全培养基的组成
基础培养基血清碳酸氢钠青、链霉素
细胞计数
血细胞计数器：手工计数细胞 Coulter计数仪：人工计数
培养细胞活力测定
细胞活力测定是肿瘤体外研究中应用最广的技术手段之一。
任何培养瓶内生长的细胞都由死细胞和活细胞组成，从形态上区别死、活细胞是困难的。
1. 细胞克隆形成率实验：单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细
细胞培养基本技术
细胞培养的甚本概念
传代：

细胞在培养器皿中生长一定时间后，被分开接种
到新的培养器皿中。
原代培养
取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。

细胞培养：使用单个细胞悬液
组织培养：使用组织块（O.5～1立方毫米）或薄片（厚0.2 毫米）
器官培养：使用器官原基或器官的一部分或整个器宫
自动双重纯水蒸馏器
纯水仪
酶标仪
微孔板震荡器
培养板
培养瓶
常用玻璃器皿清洗
浸泡（自来水）、刷洗（洗衣粉）、酸泡（24小时）、流水冲洗、蒸溜水浸泡和冲洗、50℃烘干
清洁液的配制
细胞培养用液的配制
水：新鲜配置的三蒸水或去离子水
平衡盐溶液：无Ca2+、Mg2+的缓冲液
PBS：NaCl
8.0 g
KCl
0.2 g
Na2HPO4.H2O
KH2PO4 加水至1000 ml
1.56 g 0.20
消化液：
胰蛋白酶作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽健，除去细胞间粘蛋白及糖蛋白，影响细胞骨架，从而使细胞分离
胰蛋白酶液浓度越高，作用越强，但超过一定限度会ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ伤细胞。胰蛋白酶是一种黄白色粉末，用无Ca2+、Mg2+的PBS缓冲液配制常
贴壁生长细胞传代方法：
1. 吸光培养瓶中的培养液 2.加入1-2 ml 0.25％的胰蛋白酶液(以消化液能覆盖整个瓶底为准）
静置2-10 min（显微镜下动态监测）。 3. 吸去胰蛋白酶液，加入培养液。 4. 用吸管吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞，形成细胞悬液。 5. 吸取1/10—1/40细胞悬液，接种于新的培养瓶内。 6. 加适量新鲜培养液于接种了细胞悬液的新培养瓶内。 7. 将后者放入培养箱中培养。
结果的分析。易发生支原体污染
合成培养基:
合成培养基是根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。目前已设计出许多种培养基，如TC199、MEM、RPMI-1640、 DMEM等。
合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。
优点：标准化生产，组分和含量相对固定。成本低缺点：缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需
冻存和复苏的原则：慢冻快融
当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。

如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反．结晶就大，大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。
目前，绝大多数人工合成培养基使用时还需添加血清
血清质量好坏是实验成败的关键。
常用血清有胎牛血洁、新生牛血清、小牛血情、兔血清、马血清等，其中以胎牛血清质量最好。
优质血清的标准：透明，淡黄色，无沉淀物，无细菌、支原体、病毒污染。
血清的灭活（消除补体活性）：56 ℃ ，30 分钟血清的消毒：过滤除菌
细胞冻存方法
1预先配制冻存液：含20%血清培养基10% DMSO
四唑盐比色法的原理：活细胞中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶干水的蓝紫色产物（formazan)，并沉淀在细胞中，而死细胞没有这种功能。二甲亚砜（DMSO）能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物，溶液颜色深浅与所含的formazan量成正比。再用酶标仪测定OD值
MTT法简单快速、准确，广泛应用于新药筛选、细胞毒牲试验、
一般说来．含5％小牛血清的培养基对大多数细胞可以维持细胞不死．但支持细胞生长一般需加 10％血清．
对于血清支持细胞生长的生物学效应已得到证明，但对血清中的复杂成分至今尚未完全清楚．
血清中不仅存在促细胞生长因子，同对也存在细胞生长抑制因子或毒性因子，因此在含血清培养基中培养的细胞所反映的生物学特性是细胞和复杂血清因子的综合反应。