熟地黄(毛蕊花糖苷)高效液相色谱图(对照和样品)
成品药材熟地黄质量标准
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质保部
质控部
质保部
技术部
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质保部、质控部
本品为生地黄的炮制加工品。
【制法】（1）取生地黄，照酒炖法（附录Ⅱ D）炖至酒吸尽，取出，晾晒至外皮黏液稍干时，切厚片或块，干燥，即得。
每100 kg生地黄，用黄酒30～50 kg。
(2) 取生地黄，照蒸法（附录Ⅱ D）蒸至黑润，取出，晒至约八成干时，切厚片或块，干燥，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 µl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品按干燥品计算，含毛蕊花糖苷（C29H36O15）不得少于0.020%。
【性味与归经】甘，微温。归肝、肾经。
【功能与主治】补血滋阴，益精填髓。用于血虚萎黄，心悸怔忡，月经不调，崩漏下血，肝肾阴虚，腰膝酸软，骨蒸潮热，盗汗遗精，内热消渴，，眩晕，耳鸣，须发早白。
【检查】 水分不得过14.0%（附录Ⅸ H第一法）。
杂质、灰屑检查不得过3.0%。
二氧化硫残留量不得过150mg/kg。
总灰分不得过8.0%（附录Ⅸ K）。
酸不溶性灰分不得过3.0% （附录Ⅸ K）。
【浸出物】照水溶性浸出物测定法（附录Ⅹ A）项下的冷浸法测定，不得少于65.0%。
【含量测定】照高效液相色谱法(附录Ⅵ D)测定。
色谱条件及系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1 %醋酸溶液（16׃84）为流动相；检测波长为334 nm。理论板数按毛蕊花糖苷峰计算应不低于5000。
对照品溶液制备取毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定， 加入流动相，制成每1 ml含10 µg的溶液，即得。
高效液相色谱法测定地黄中梓醇及毛蕊花糖苷的含量
科技 论 坛
高效液相色谱法测定地黄中梓醇及毛蕊花糖苷的含量
吴 涛 （黑龙江瑞格制 药有 限公 司，黑龙江 庆安 １５２４００）
摘 要：本文采 用高校液相测 定了地黄 中梓 醇和 毛蕊 花糖 苷的含 量 ，固定相 为 ：安捷伦 ｃ１８（４．６ ｍｉｎｘ２５０ ｍｉｌｌ，５ｕｍ】，以 乙腈一０．１５％磷 酸为流动相进 行梯度洗脱为流动相 ，检 测波长为 ２ｌＯｎｍ；－ｔ￣，－花糖苷在 ｌＯ￣２００ｉｘｇ·ｍＬ－ 范围内呈 良好的线性 关系；梓 醇在 ５０￣３５０ｉｘｇ·ｍＬ－ 范围 内呈 良好 的线性 关系。毛蕊花糖苷和梓 醇的平均回收率分别为 ９９．３％、９９．５％，ＲＳＤ为 ０．５６％（ｎ：６）、０．５５％（ｎ＝６）；此 方法简便 、准确 、重 现性好 ，可 用于地黄 中毛蕊花糖苷和梓 醇的含量测定。
ＤＣ－Ｏ５０６Ａ高精度 液 晶显示低温 恒温槽 （上海衡 平仪 器仪表 下供试 品制备方法制备供试 品 ，按质量标准含量测定项下方法测定
厂 ）；北京格瑞德曼仪器设备有限公 司（北京格瑞德曼仪器设备有 限 含量 ，并计算样品的 ＲＳＤ值 ，ＲＳＤ值为 ０．５５％，０．５１％，结果表 明 ，此
公 司）；ＷａｔｅｒＰｒｏ超 纯水系统（照生有 限公 司）；Ｐ２３０高效液相色谱仪 含量测定方法的重现性 良好 。
市盛德化工有 限公 司）、磷酸二氢钠（东 莞市 多正化 工有 限公 司 ）、溴 品各 ６份 ，分精密添加一定量 的毛蕊花糖苷和梓醇 对照 品 ，按供试
化 四丁基铵 （嘉兴市 盛德化工有 限公 司 ）、磷 酸（广州市江顺化 工科 品制备所述方法制备供试品溶液 ，测定含量 ，计算 回收率。６次测定
酸 （ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ）、丙 氨 酸 （ａｌａｎｉｎｅ）、亮 氨 酸 （１ｅｕｃｉｎｅ）、 一氨 基 丁 酸
熟地黄饮片质量标准与检验操作规程
xxxxxxxxxxx有限公司成品质量标准与检验操作规程1 品名：1.1 中文名：熟地黄1.2 汉语拼音：Shudihuang2 代码：3 取样文件编号：4 检验方法文件编号：5 依据：《中国药典》（2020年版一部）。
6 质量标准：7 检验操作规程：7.1 试药与试剂：甲醇、水、正丁醇、三氯甲烷/毛蕊花糖苷对照品、乙酸乙酯、甲酸、2，2-二硝基-1-苦肼基无水乙醇、乙腈、醋酸、6mol/l盐酸溶液、3%过氧化氢溶液、甲基红乙醇溶液，0.01mol/l氢氧化钠滴定液、甲基红乙醇溶液指示剂、氢氧化钠滴定液。
7.2 仪器与用具：电子天平、硅胶G薄层板、干燥箱、水浴锅、马弗炉、二氧化硫检测装置、高效液相色谱仪、二氧化硫测定仪。
7.3 性状：取本品适量，自然光下目测色泽，嗅闻气味。
7.4 鉴别：7.4.1取本品粉末1g，加80%甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5ml使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取4次，每次10ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。
另取毛蕊花糖苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取供试品溶液5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸(16：0.5：2)为展开剂，展开，取出，晾干，用0.1%的2，2-二苯基-1-苦肼基无水乙醇溶液浸渍，晾干。
供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点。
7.5检查：7.5.1水分（附录15第二法）。
7.5.2总灰分不得过8.0％（附录17）。
7.5.3酸不溶性灰分不得过3.0%（附录17）。
7.5.4二氧化硫残留量照二氧化硫残留量测定法（附录58）测定，不得过150mg/kg。
7.6浸出物：照水溶性浸出物测定法项下的冷浸法（附录19）测定，不得少于65.0％。
7.7含量测定：7.7.1毛蕊花糖苷照高效液相色谱法（附录8）测定。
熟地黄的炮制及有效成分和微量元素的检测研究
第 29 卷第 4 期分析测试技术与仪器Volume 29 Number 4 2023年12月ANALYSIS AND TESTING TECHNOLOGY AND INSTRUMENTS Dec. 2023分析测试经验介绍(392 ~ 399)熟地黄的炮制及有效成分和微量元素的检测研究陈胜强1, 2 ，杨克培1 ，康文利2 ，周永昌1 ，陶思曼1 ，关伊辰1 ，蒲秀瑛1（1. 兰州理工大学，甘肃兰州 730050；2. 甘肃农垦药物碱厂有限公司，甘肃兰州 730000）摘要：炮制出熟地黄，并建立熟地黄中5种有效苷类成分的高效液相色谱（HPLC）及微量元素的电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）的测定方法，以此优选熟地黄的最佳炮制工艺. 以传统酒蒸熟地黄工艺为对照，5种有效苷类成分及微量元素的含量为评价指标，确定熟地黄不同次数炮制的最优工艺. 结果发现，通过“七蒸七晒”炮制工艺所获熟地黄显著增加了其中梓醇、地黄苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷含量以及铁、锌、铜微量元素含量，同时降低了镉、砷有害元素含量. 利用HPLC和ICP-MS分别精准的检测到熟地黄中5种有效苷类成分和微量元素的含量，确定“七蒸七晒”为熟地黄最佳炮制工艺，为熟地黄炮制方法提供了科学依据.关键词：熟地黄；炮制方法；高效液相色谱法；电感耦合等离子体质谱法中图分类号：O657. 7＋2；O657. 63 文献标志码：B 文章编号：1006-3757（2023）04-0392-08DOI：10.16495/j.1006-3757.2023.04.008Study on Concoction and Detection of Active Components and TraceElements of Radix Rehmanniae PraeparataCHEN Shengqiang1, 2， YANG Kepei1， KANG Wenli2， ZHOU Yongchang1， TAO Siman1，GUAN Yichen1， PU Xiuying1（1. Lanzhou University of Technology, Lanzhou 730050, China；2. Gansu Agricultural Reclamation DrugAlkali Plant Co. Ltd., Lanzhou 730000, China）Abstract：A high performance liquid chromatography (HPLC) for the determination of five effective glycosides and an inductively coupled plasma mass spectrometry (ICP-MS) for the determination of trace elements in Radix Rehmanniae Praeparata were established to optimize the processing technology of Radix Rehmanniae Praeparata. The traditional wine-steaming process of Radix Rehmanniae Praeparata was used as a control, and the contents of five effective glycosides and trace elements were used as evaluation indexes to determine the optimal process for the different frequencies of Radix Rehmanniae Praeparata concoctions. The results showed that the content of Catalpol, Rehmannioside D, Leonuride, Acteoside, Isoacteoside as well as the content of trace elements of iron, zinc and copper were increased, while the content of harmful elements of cadmium and arsenic were reduced in Radix Rehmanniae Praeparata obtained by the "seven-steaming and seven-sun-drying" concocting process. Five kinds of effective glycosides and trace elements in Radix Rehmanniae Praeparata were accurately detected by HPLC and ICP-MS, respectively, and "seven-steaming and seven-drying" was determined as the best processing technology for Radix Rehmanniae Praeparata, which provided a scientific basis for the preparation of Radix Rehmanniae Praeparata.Key words：Radix Rehmanniae Praeparata；processing method；HPLC；ICP-MS收稿日期：2023−09−19； 修订日期：2023−10−26.基金项目：甘肃省科技厅重点研发计划项目（编号：20YF8FA060）[Gansu Provincial Science and Technology Department Key R&D Program Projects (NO. 20YF8FA060)]作者简介：陈胜强（1995−），男，硕士，主要从事药品临床前药学研究，E-mail：***********************通信作者：蒲秀瑛（1968−），女，教授，主要从事药理学和毒理学方面的研究，E-mail：**************.熟地黄为玄参科植物地黄的块根，又名伏地，经加工炮制而成. 熟地黄具备补血滋阴功效，可用于血虚萎黄、眩晕、心悸失眠、潮热骨蒸、盗汗、遗精等病症，是非处方药六味地黄丸主要成分之一.通常以酒、砂仁、陈皮为辅料经反复蒸晒，至表里色黑油润，质地松软黏腻. 常切片或炒炭入药[1].目前可参照的黄酒蒸制熟地黄工艺步骤为：将洗干净的生地黄放入桶内，加入黄酒搅拌均匀后静置，待黄酒被充分吸尽，取出，晾晒至外皮黏液稍干时，切厚片，干燥即得熟地黄. 陈子月等[2]描述的高压炮制时间过长，产品不合格率较高. 张丽萍等[3]描述的炮制工艺中黄酒质量不可控，且操作缺乏客观可控的技术参数指导，无法精确控制其工艺，致使人为因素偏多，所得熟地黄中5种苷类成分（梓醇、地黄苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷）含量相差很大，有益微量元素含量偏低，有害微量元素超标. 徐廉松等[4]研究的双波长含量检测方法基线不稳定，且分析时间过长，所测得苷类成分含量不稳定. 刘明等[5]研究熟地黄质量标准时未涉及微量元素的研究. 本研究采用的水蒸制“七蒸七晒”炮制方法可有效增加熟地黄中铁、锌、铜微量元素含量，同时降低镉、砷有害元素含量. 此外，梓醇、地黄苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷及多糖含量较高.1 仪器与试剂仪器：蒸煮锅（ZYG-700，南京润邦机械科技有限公司）；卤素快速水分测定仪（XF-720MA，厦门雄发仪器）；高效液相色谱仪Waters 2695（沃特世科技有限公司）；安捷伦电感耦合等离子体质谱仪（7800，安捷伦科技（中国）有限公司）；微波消解仪（赛默飞世尔科技（中国）有限公司）；紫外分光仪（ZF-7，上海金达生化仪器有限公司）；旋转蒸发仪（RE52CS，上海亚荣生化仪器厂）.试剂：乙腈（MERCK公司，色谱纯）；水为自制纯水；磷酸（山东西亚化工，≥85.0%）；浓硫酸（国药，95.0%~98.0%）；苯酚（国药，≥99.0%）；无水乙醇（国药，≥99.8%）；葡萄糖标准品（Solarbio，≥98%）；硝酸（国药，65.0%~68.0%）.砷单元素标准溶液（GBW08611-18126，中国计量科学研究院，1 000µg/mL）；锌单元素标准溶液（199018，国家有色金属及电子材料分析测试中心，1 000 µg/mL）；铝单元素标准溶液（19106，中国计量科学研究院，1 000µg/mL）；镁单元素标准溶液（19C008，国家有色金属及电子材料分析测试中心，1 000 µg/mL）；镉单元素标准溶液（08614-17012，中国计量科学研究院，1 000 µg/mL）；铁单元素标准溶液（29018，国家有色金属及电子材料分析测试中心，1 000 µg/mL）；铜单元素标准溶液（GBW(E)080122-17071，中国计量科学研究院，1 000 µg/mL）.梓醇对照品（Solarbio，≥98%）；地黄苷D对照品（Solarbio，≥98%）；益母草苷对照品（Solarbio，≥98%）；异毛蕊花糖苷对照品（Solarbio，≥98%）；毛蕊花糖苷对照品（Solarbio，≥98%）.2 试验方法2.1 熟地黄的炮制将清洗干净的生地黄在全自动蒸汽发生装置中进行蒸制（蒸制压强为0.35~0.5 MPa），每次蒸制4 h，得到蒸制地黄. 然后将蒸制地黄在太阳棚中进行干燥（干燥温度为50~70 ℃，需具有良好的换气设施），且每隔2 h翻料1次，得到干燥地黄. 按照上述步骤重复蒸制和干燥7次，得到“七蒸七晒”的熟地黄.2.2 苷类成分的测定2.2.1 溶液配制混合对照品溶液1：取梓醇对照品5 mg、地黄苷D与益母草苷对照品各7 mg，分别用25%甲醇溶液稀释定容至50 mL容量瓶中，再稀释成质量浓度为50 µg/mL的溶液.混合对照品溶液2：分别取异毛蕊花糖苷对照品、毛蕊花糖苷对照品适量，用25%甲醇溶液稀释成质量浓度为50 µg/mL的溶液.供试品溶液：取“七蒸七晒”的熟地黄0.5 g 置于具塞锥形瓶中，加入20 mL 25%甲醇溶液溶解，超声提取1 h后过滤，再经0.45 µm滤膜过滤，即得.2.2.2 高效液相色谱（HPLC）条件色谱柱：Waters Symmetry® C18（250 mm×4.6 mm，5 µm）；流动相：0.3%磷酸溶液（A）∶乙腈（B）（体积比为97∶3）；流速：1 mL/min；柱温：35 ℃；进样量：20 µL；梓醇、地黄苷D、益母草苷检测波长：210 nm；异毛蕊花糖苷、毛蕊花糖苷检测波长：334 nm[6]；各峰的理论塔板数不低于5 000.第 4 期陈胜强，等：熟地黄的炮制及有效成分和微量元素的检测研究3932.3 多糖含量的测定精密称量5 g熟地黄置于锥形瓶中加100 mL 纯水溶解，沸水浴回流提取，每次2 h，提取2次，8层纱布趁热过滤，减压浓缩至50 mL左右，80%乙醇醇沉，减压干燥，得到熟地黄多糖，称量熟地黄多糖，按式（1）计算多糖提取率. 采用苯酚-硫酸法进行熟地黄多糖提取率的测定[7-8].式（1）中：m为熟地黄多糖提取物质量（g），M为熟地黄样品质量（g）.2.4 微量元素的测定2.4.1 溶液配制配制铁、砷、锌、铝、镁、镉、铜标准溶液，其质量浓度均为10 µg/mL[9].供试品溶液：精密称量0.3 g熟地黄粉末于消解管中，精准加入3 mL硝酸，置于微波消解仪中进行样品消解54 min，待消解完成后放置室温30 min[10]. 将消解后的样品使用超纯水冲洗3遍，移入50 mL容量瓶，定容至刻度，摇匀备用.铁、砷、锌、铝、镁、镉、铜标准曲线：分别量取所配制的铁、砷、锌、铝、镁、镉、铜元素标准溶液0.1、0.2、0.4、0.5、1.0、2.0 mL置于100 mL聚四氟乙烯容量瓶中[11]，补加2%硝酸至100 mL，摇匀，即得.使用电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS），载气为氩气[12-13]，以待测元素浓度（X）为横坐标、待测元素与所选内标元素响应信号值的比值（Y）为纵坐标绘制上述元素标准曲线，计算线性回归方程.2.4.2 样品微量元素上机检测将空白溶液和试样溶液分别注入电感耦合等离子体质谱仪中，测定待测元素和内标元素响应信号值，根据标准曲线得到消解液中待测元素的浓度[14].试样中待测元素的质量分数或质量浓度计算如式（2）：式（2）中：c为试样中待测元素的质量分数或质量浓度，mg/kg或mg/L；ρ为试样溶液中被测元素质量浓度，µg/L；ρ0为试样空白溶液中被测元素质量浓度，µg/L；v为试样消化液定容体积，mL；f为试样稀释倍数；m为试样称取质量或移液体积，g或mL；1 000为换算系数.3 结果与讨论3.1 性状经“七蒸七晒”的熟地黄，色漆黑，外表皱缩不平，质柔软，断面滋润，黏性较大，味较甜.3.2 HPLC测定5种苷类成分的方法学验证3.2.1 方法的线性范围、检出限和定量限考察取适量2.2.1项下所配制的梓醇、益母草、地黄苷D、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷混合对照品溶液于进样小瓶中，按进样量依次进样2、4、8、10、12、16、20 µL[15]，以各成分色谱峰面积（y）为纵坐标，进样质量浓度（x）为横坐标分别绘制5种对照品的标准曲线. 检出限以信噪比（S/N）为3对应的质量浓度建立，定量限以S/N为10对应的质量浓度建立.结果如图1所示，5种苷类成分在1~20 mg/L质量浓度范围内均呈良好的线性关系，相关系数均大于0.99，方法检出限为0.33~3.30 mg/L，定量限为1.0~10.0 mg/L，说明该方法能够满足对5种苷类成分的分析.3.2.2 精密度与重复性考察取适量2.2.1项下所配制的梓醇、地黄苷D、益母草、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷混合对照品溶液于进样小瓶中，按2.2.2项下色谱条件，水平连续进样6次[16]，计算方法的精密度[相对标准偏差（RSD）]. 精密称取同一批熟地黄样品粉末6份，以峰面积RSD计算方法的重复性[17]. 精密度考察中，梓醇、地黄苷D、益母草、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷峰峰面积RSD分别为0.16%、0.17%、0.24%、0.24%、0.22%. 重复性考察中，梓醇、地黄苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷含量RSD值分别为6.89%、5.36%、3.21%、6.62%、7.54%. 上述数据表明本试验方法精密度与重复性良好.3.2.3 稳定性考察取适量2.2.1项下所配制供试品溶液于进样小瓶中，分别于0、2、4、8、16、20 h进样[18]，以峰面积RSD值确定样品的稳定性. 供试品溶液中梓醇、地黄苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷在20 h内峰面积的RSD分别为2.29%、0.69%、0.81%、1.97%、1.83%. 表明供试品溶液在20 h内稳定性良好.3.2.4 加标回收率考察取适量2.2.1项所配制供试品溶液于进样小瓶394分析测试技术与仪器第 29 卷中，向供试品溶液中分别精密加入梓醇、地黄苷D 、益母草苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷对照品溶液，每份样品均做平行样[19]，以峰面积RSD 计算样品加标回收率，结果如表1所列. 梓醇、地黄苷D 、益母草苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷平均回收率在98.08%~101.09%之间，RSD 在0.19%~3.07%之间，试验方法回收率高，能够满足熟地黄中5种有效苷类成分的检测要求.3.3 ICP-MS 测定微量元素的方法学验证按2.4项下方法对铁、砷、锌、铝、镁、铬、铜标准曲线进行ICP-MS 方法学验证. 结果如表2所列，7种微量元素在相应质量浓度范围内均呈良好的线性关系，相关系数均大于0.98，方法检出限为0.002 0~1.001 2 µg/g ，定量限为0.004 9~3.000 1 µg/g ，能够满足7种微量元素的检测分析.3.4 不同炮制工艺下熟地黄中有效成分的检测结果对比3.4.1 苷类成分含量的测定采用上述HPLC 分析方法，对不同炮制工艺下熟地黄中5种有效苷类成分进行含量检测，结果如图2所示. “一蒸一晒”至“七蒸七晒”，随蒸晒次数的增加熟地黄中5种有效苷类成分含量呈上升趋势，“七蒸七晒”至“九蒸九晒”，随蒸晒次数的增加熟地黄中5种有效苷类成分含量无明显变化. 以传统“黄酒蒸制”熟地黄中5种有效苷类成分含量作为对照，“七蒸七晒”熟地黄中5种有效苷类成分含量显著高于传统“黄酒蒸制”工艺.3.4.2 多糖含量的测定按2.3项下方法对葡萄糖标准曲线进行方法学验证. 结果如图3所示，葡萄糖在0.01~0.10 mg/mL 质量浓度范围内呈良好的线性关系，相关系数大于0.99，方法能够满足多糖的测定.熟地黄多糖提取率按公式（1）计算，得到“一蒸一晒”至“九蒸九晒”过程中葡萄糖质量分数分别为3.05%、6.41%、11.59%、5.51%、10.23%、10.35%、11.84%、9.02%、18.37%. “一蒸一晒”至“七蒸七晒”，随蒸晒次数的增加熟地黄多糖含量呈上升趋势，“七蒸七晒”至“九蒸九晒”，随蒸晒次数的增加熟地黄多糖含量呈下降趋势. 其中“七蒸七晒”得到的熟地黄中多糖质量分数最高，多糖质量分数为30.10%. 而“黄酒蒸制”得到的熟地黄中多糖质量分数仅为22.91%.3.4.3 微量元素的测定如图4、5所示，铁、砷、锌、铝、铅、镉、铜元素在“一蒸一晒”至“九蒸九晒”中的质量分数变化图，随蒸晒次数的增加，锌、铜、铁、镉微量元素含量呈现先上升后下降的趋势，镉、砷、铅含量随着蒸晒次数逐渐降低.据文献报道[20]，铁元素作为血红蛋白的核心部分，可以补充机体对铁的大量需求. 在“七蒸七晒”炮制工艺下，铁与锌含量较高，不仅可以满足机体对铁与锌的需求，同时还可以调整体内铜、锌比值，增强机体氨基酸的代谢能力. 通过2.4项下方法测定，“七蒸七晒”得到的熟地黄中微量元素铁、锌、4.0×1053.5×1053.0×1052.5×1052.0×1051.5×1051.0×1050.5×105峰面积/(μV ·s )510152025质量浓度/(mg/L)y =17 628x +12 770R 2=0.992 3 1.4×1051.2×1051.0×1050.8×1050.6×1050.4×1050.2×105峰面积/(μV ·s )510152025质量浓度/(mg/L)y =6 187x −7 554R 2=0.997 84.0×1053.5×1053.0×1052.5×1052.0×1051.5×1051.0×1050.5×105峰面积/(μV ·s )510152025质量浓度/(mg/L)y =18 156x −4 812R 2=0.999 91.8×1061.6×1061.4×1061.2×1061.0×1060.8×1060.6×1060.4×1060.2×106峰面积/(μV ·s )510152025质量浓度/(mg/L)y =85 133x −32 678R 2=0.999 9 1.8×1061.6×1061.4×1061.2×1061.0×1060.8×1060.6×1060.4×1060.2×106峰面积/(μV ·s )510152025质量浓度/(mg/L)y =81 597x −35 173R 2=1.000 0(a)(b)(c)(e)(d)图1 （a ）梓醇，（b ）益母草苷，（c ）地黄苷D ，（d ）毛蕊花糖苷，（e ）异毛蕊花糖苷的对照品标准曲线Fig. 1 Standard curves of (a) Catalpol, (b) Leonuride, (c) Rehmannioside D, (d) Acteoside, (e) Isoacteoside第 4 期陈胜强，等：熟地黄的炮制及有效成分和微量元素的检测研究395396分析测试技术与仪器第 29 卷表 1 5种苷类成分的加标回收率试验结果Table 1 Results of spiked recovery of 5 glycoside components成分样品质量/mg加入质量/mg测得质量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%梓醇8.658.7017.1697.8298.080.368.618.7017.1898.518.758.7017.2497.598.738.7017.2898.288.708.7017.1997.598.698.7017.2898.74地黄苷D 1.30 1.50 2.7093.6099.36 3.071.21 1.502.7199.981.25 1.502.81103.891.31 1.502.81100.001.32 1.502.8199.331.30 1.502.7999.33益母草苷0.95 1.50 2.4398.67100.080.861.01 1.502.51100.000.92 1.50 2.4098.670.96 1.50 2.46100.000.93 1.50 2.44100.671.02 1.502.56102.47毛蕊花糖苷0.320.200.5298.5198.390.190.340.200.5499.300.320.200.5298.500.370.200.5797.550.360.200.5698.500.310.200.5198.00异毛蕊花糖苷0.530.50 1.04101.74101.090.520.510.50 1.01100.000.500.50 1.02103.390.520.50 1.02100.000.500.50 1.01101.400.510.50 1.01100.00表 2 7种微量元素方法学参数Table 2 Methodological parameters of 7 trace elements元素线性方程相关系数（R2）检出限/（µg/g）定量限/（µg/g）Fe Y=7.018×10−2X + 7.406×10−10.997 9 1.001 2 3.000 1Cu Y=1.004×10−1X + 5.290×10−2 1.000 00.050 00.203 1Al Y=2.337×10−3X+ 1.959×10−20.999 70.500 1 2.001 0Zn Y=2.204×10−2X + 5.121×10−20.989 60.500 0 2.000 0Pb Y=1.092×10--2X+ 6.857×10−40.999 80.020 00.049 1As Y=1.787×10−2X + 8.729×10−40.999 90.002 00.004 9Cd Y=9.511×10−2X + 5.462×10−10.999 90.002 00.004 9铜的质量分数分别为1 763.40、62.77、17.39 µg/g ，“黄酒蒸制”得到的熟地黄中微量元素铁、锌、铜的质量分数分别为860.50、21.25、12.32 µg/g. 其中铁、铝、锌是所测定的7种元素中含量较高的元素.同时，随炮制工艺中蒸晒次数的增加，有害元素镉、砷、铅含量不断降低，可减少有毒物质在人体软组织中的积累. “七蒸七晒”炮制工艺与传统“黄酒蒸制”工艺相比，有益微量元素含量更高，有害元素更低，为“七蒸七晒”工艺炮制而成的熟地黄更加安全、可靠的用药提供了相应的理论支持.4 结论本文通过水蒸制“七蒸七晒”炮制工艺制得熟地黄，其中梓醇、地黄苷D 、益母草苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷含量均高于“黄酒蒸制”工艺.同时有益微量元素铁、锌含量均高于“黄酒蒸制”工艺，有害微量元素砷含量低于“黄酒蒸制”工艺，表明在新工艺条件下“七蒸七晒”炮制熟地黄的工艺方法具有提高各苷类主成分含量，提高有益微量元素含量，降低有害微量元素含量的显著优势.使用蒸汽压强约为0.35 MPa ，蒸制4 h 干燥过程中每2 h 翻料一次，经太阳棚曝晒干燥至快速水分测定仪检测水分不高于30%的“七蒸七晒”炮制工艺，此工艺炮制的熟地黄5种苷类成分含量高，多糖含量相对稳定，且有益微量元素铁、锌、铜含量最高，有害微量元素砷、镉、铅含量低. HPLC 等分析方法具有分离效果好，测定简单，数据准确等优势，避免了熟地黄的浪费，为后期深入研究熟地黄提供了有力参考.参考文献：李红霞, 许闵, 孟江, 等. 怀地黄多糖的含量测定[J ].河南科学，2002，20（2）：144-146. [LI Hongxia, XU Min, MENG Jiang, et al. Determination of polysac-charide in rehmannia glutinosa libosch [J ]. Henan Sci-ences ，2002，20 （2）：144-146.]［ 1 ］梓醇毛蕊花糖苷异毛蕊花糖苷益母草苷地黄苷D1.501.750.750.500.250含量/%黄酒蒸制一蒸一晒二蒸二晒三蒸三晒四蒸四晒五蒸五晒六蒸六晒七蒸七晒八蒸八晒九蒸九晒e ef f f f d d dc aa ab bb bb bb b bc c c c c ab b bc dd be bc cd cd ec c c bc ddd c a b b图2 不同炮制工艺下熟地黄中5种有效苷类成分含量的变化（不同小写字母表示差异显著，p < 0.05）Fig. 2 Changes of content of 5 active glycosides in Radix Rehmanniae Praeparata under different concoction processes (different lowercase letters indicate significantdifferences, p < 0.05)1.21.00.80.60.40.2吸光度/A 00.020.040.060.080.10质量浓度/(mg/mL)y =10.672x +0.012 8R 2=0.999 6图3 葡萄糖标准曲线Fig. 3 Standard curve of glucoseCd As Pb4.003.503.002.502.000.750.500.250含量/(μg /g )黄酒蒸制一蒸一晒二蒸二晒三蒸三晒四蒸四晒五蒸五晒六蒸六晒七蒸七晒八蒸八晒九蒸九晒图4 不同炮制工艺下熟地黄中有害微量元素含量的变化Fig. 4 Changes of content of harmful trace elements in Radix Rehmanniae under different concoction processesFeAlZnCu1 8001 6001 4001 2001 0008006040200含量/(μg /g)黄酒蒸制一蒸一晒二蒸二晒三蒸三晒四蒸四晒五蒸五晒六蒸六晒七蒸七晒八蒸八晒九蒸九晒图5 不同炮制工艺下熟地黄中有益微量元素含量的变化Fig. 5 Changes of content of beneficial trace elements in Radix Rehmanniae under different concoction processes第 4 期陈胜强，等：熟地黄的炮制及有效成分和微量元素的检测研究397陈子月, 彭小园, 解伟松, 等. 熟地黄高压炮制工艺研究[J ]. 中国药业，2022，31（7）：53-56. 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HPLC测定熟地黄有效成分毛蕊花糖苷在九蒸九制过程中的含量变化
熟地黄第五次蒸制 ( 批号为 ２０１９０１０２ ) 样品约 １ｇꎬ平行取 ６
份ꎬ分别加入适量的对照品毛蕊花糖苷ꎬ按上述供试品溶液制
备方法和拟定的色谱条件ꎬ分别精密吸取 １０μＬꎬ注入高效液
相色谱仪ꎬ测定并计算( 见表 ４) ꎮ
关键词:熟地黄ꎻ九蒸九制ꎻ毛蕊花糖苷ꎻ含量变化
中图分类号:Ｒ９２７ 文献标识码:Ａ 文章编号:１００６￣３７６５(２０２０) ￣０６￣０１０８６￣００７６￣０３
熟地黄为生地黄的炮制加工品ꎬ历代医家视其为补血要
２ ２ 色谱条件 色谱柱:色谱柱为 Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＧＯＬＤ ａＱ Ｃ１８ ꎻ流
南北朝时期雷敩的« 雷公炮炙论» 中 〔１〕 ꎮ 通过整理历代医药
２７℃ ꎻ检测波长:３３４ｎｍꎬ进样量 １０μＬꎮ
法有以下 规 律: 由 两 次 蒸 制 发 展 到 九 蒸 九 制ꎬ 从 单 一 辅 料
２ ３ １ 供试品溶液:取不同炮制次数的酒蒸熟地黄约 １ｇꎬ精
药ꎬ熟地黄之名始载于« 本草图经» ꎬ但炮制工艺最早出现在
０ ２５２０μｇ 范围内与峰面积有良好关系( ｒ ＝ ０ ９９９５) ꎬ平均加样回收率为 １００ ０４％ ꎬＲＳＤ 为 １ ８４％ ( ｎ ＝ ６) ꎮ 熟地黄一蒸一制测得的毛蕊花糖苷含
量最高ꎬ为 ０ ０２５７％ ꎬ高于 ２０１５ 年版« 中国药典» ( 一部) 规定的含量 ０ ０２％ ꎮ 随着蒸制次数的增加ꎬ毛蕊花糖苷的含量逐渐减少ꎬ从七蒸七制开
海峡药学 ２０２０ 年 第 ３２ 卷 第 ６ 期
ＨＰＬＣ 测定熟地黄有效成分毛蕊花糖苷在九蒸九制过程中的含量变化
蔡 超( 漳州市中医院ꎬ福建漳州 ３６３０００)
摘要:目的 探究熟地黄在九蒸九制过程中其有效成分毛蕊花糖苷含量所发生的变化ꎬ为九蒸九制的熟地黄在实际生产过程中提供一定的参
高效液相色谱法检测中药有效成分研究
Ｈ ＰＬＣ Ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｅｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｃｏ ｍ ｐｏ ｎｅ ｎ ｔ ｓ ｏ ｆ Ｃｈｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｈｅ ｒ ｂ ａ ｌ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎｅ
Ｍ Ａ Ｘｉ ａ ｏ — ｑ ｉ ａ ｎｇ ． Ｈ Ｕ Ｏ Ｓｈｅ ｎｇ — ｄ ｏ ｎｇ 。
２ ．Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ｌ ｉ ｆ ｅ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ａ ｎ ｄ Ｅ ｎ ｇ ｉ ｎ ｅ ｅ ｒ ｉ ｎ ｇ， Ｎｏ ｒ ｔ ｈ ｗｅ ｓ ｔ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｆ ｏ ｒ Ｎａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ ｉ ｔ ｙ ）
羟 基二 苯 乙烯一２ 一 Ｏ一 ８ 一 Ｄ一 葡 萄 糖 苷 （ Ｃ 。 Ｈ。 Ｏ。 ） 的平 均 回 收 率 分 别达 到 了 ９ ７ ． ３ ９ 、 ９ ７ ． ９ 、
９ ６ ． ７ 和 ９ ７ ． ２ ５ 。苦 杏仁 苷 、 熟地 黄 、 葛根 和 何 首 乌 的 有 效 成 分含 量 分 别 为 ２ ． ８ ５ 、 ０ ． ０ ５ ９ 、 ３ ． ２ ２ ８ 和 ２ ． ０ ２ 。说 明 ＨＰ Ｉ Ｃ法检 测 中药有 效成 分操 作 快速 ， 结果 准确 ， 精 密度 高， 稳 定性 好 地 陕 西） 四种 中药 的有效 成 分进 行检 测 ， 为其 质量 评 价提 供 依 据 。结 果表 明 ， 以十八烷 基硅 烷键 合硅胶 为填 充剂 的 色谱 柱 ， ４种 中药有效 成分 呈现 极 强 的相 关性 ， 其 相 关 系数 为
快速溶剂萃取 -hplc 法测定 5 种中药中的毛蕊花糖苷
医药界 2020年02月第03期—61—医药与临床（上接第60页）生活质量的影响[J].中国老年学杂志，2018，38(24):5957-5959.[7] 李培培.康艾注射液联合ＮＰ 方案治疗乳腺癌的临床效果观察[J].河南医学研究，2018，27(20):3794-3795.[8] 李琳慧，田劲猛.康艾注射液对介入手术后晚期原发性肝癌患者免疫功能的影响[J].内蒙古中医药，2016，35(2):105-106.[9] 楼亭.康艾注射液对结肠癌化疗患者免疫功能的影响[J].陕西中医，2014，35(4):461-463. [10] 毛文娟，张健，于显凤等.康艾注射液联合TP 方案对晚期卵巢癌免疫功能的影响[J].中国中医药现代远程教育，2018，16(7):121-123.[11] 王志峰.一线含铂化疗联合康艾注射液治疗晚期非小细胞肺癌效果观察[J].临床医学，2017，37(10):101-102.[12] 王碧荣，李卫东，曾剑等.康艾注射液联合化疗治疗晚期卵巢癌临床观察[J].国际医药卫生导报，2016，22(24):3797-3800.[13] 董蕙，王存德，龚泉.康艾注射液辅助化疗对老年中晚期非小细胞肺癌患者免疫功能及肿瘤标志物的影响[J].中国老年学杂志，2019，39(1):52-54.[14] 蒋晗，郑恺，童流妹.康艾注射液联合吉西他滨+顺铂方案化疗对晚期非小细胞肺癌患者的疗效及生活质量影响[J].中国基层医药，2018，25(11):1447-1451.[15] 许同宪.康艾注射液联合支气管动脉灌注化疗治疗中晚期肺癌临床研究[J].现代中西医结合杂志，2015，24(27):3015-3017.[16] 许洪春.康艾注射液配合乳腺癌术后化疗的应用效果评析[J].实用妇科内分泌杂志，2016，3(20):186-187.[17] 路颜增，谭柏清，孙东平等.康艾注射液辅助化疗治疗晚期肺癌的临床观察[J].中国药房，2017，28(35):4984-4987.[18] 邱冬梅.康艾注射液配合化疗对乳腺癌术后的影响[J].长春中医药大学学报，2016，32(3):526-527.[19] 金惠敏.TP 化疗方案腹腔灌注疗法联合康艾注射液治疗卵巢癌晚期患者的效果分析[J].河南医学研究，2018，27(6):1081-1082.[20] 陈伦.康艾注射液对中晚期非小细胞肺癌患者化疗期间免疫功能和生活质量的影响[J].中医药导报，2014，20(5):29-34.[21] 马玉荣，胡彦萍，吴丽娟等.康艾注射液对子宫颈癌患者抗肿瘤作用机制分析[J].临床合理用药，2015，8(1A):110-111.[22] 马鸣.康艾注射液联合TP 化疗治疗中晚期非小细胞肺癌临床研究[J].亚太传统医药，2017，13(20):163-165.[23] 高卓维，曾少容，黄景彬等.康艾注射液对鼻咽癌患者外周血T 细胞亚群的影响[J].中医研究，2015，28(7):5-7.快速溶剂萃取-HPLC 法测定5种中药中的毛蕊花糖苷覃 蓝 温 宇通讯作者 罗达龙（梧州市食品药品检验所，广西 梧州 543002）【摘要】目的：建立一种快速溶剂萃取(ASE)-HPLC 检测，测定5种药物（大叶紫珠、车前子、肉苁蓉、五子衍宗丸、裸花紫珠片）中毛蕊花糖苷含量的方法，并与药典方法进行对比。
高效液相色谱法测定养阴清肺口服液中毛蕊花糖苷的含量
高效液相色谱法测定养阴清肺口服液中毛蕊花糖苷的含量目的用高效液相色谱法测定养阴清肺口服液中毛蕊花糖苷的含量。
方法色谱柱为Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.1%醋酸溶液（16∶84），检测波长为334 nm，流速为1.0 ml/min，柱温为28℃。
结果毛蕊花糖苷进样量在10.12～253.00 μg（r=0.9995）线性范围内线性关系良好，平均回收率为99.68%，RSD=0.8%（n=6）。
结论高效液相色谱法方法准确，重复性好，可用于养阴清肺口服液的质量控制。
标签：养阴清肺口服液；毛蕊花糖苷；高效液相色谱法养阴清肺口服液收载于原卫生部药品标准中药成方制剂第十五册，由地黄、麦冬、白芍、薄荷脑等8味药制备而成的口服液，具有养阴清肺、清肺利咽之功效，用于阴虚肺热，咽喉干痛，干咳少痰，或痰中带血[1-10]。
由于原标准没有对其主药进行质量控制，本研究采用高效液相色谱法测定养阴清肺口服液中主药地黄的毛蕊花糖苷含量，结果满意。
1 仪器与试药岛津LC-2010A型高效液相色谱仪（包括LC-2010型紫外检测器，LC solution 色谱工作站），毛蕊花糖苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111530-201208）；养阴清肺口服液（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，批号：2150006，2150007，2150010），乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂为分析纯。
2 方法与结果2.1 色谱条件与系统适用性试验色谱柱Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.1%醋酸溶液（16∶84），检测波长为334 nm，流速为1.0 ml/min，柱温28℃，进样量为20 μl。
理论板数按毛蕊花糖苷计算不低于5000。
2.2 对照品溶液的制备精密称取毛蕊花糖苷对照品适量于100 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密吸取1 ml置10 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得10.12 μg/ml的对照品溶液。
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２０１０版药典方法，岛津ＬＣ－２０１０Ｃ，迪马柱子（Ｃ１８＼２５０＊４０６）
D:\杨通银\2-4-20 16:54:04 1 / 1
==== Shimadzu LCsolution 分析报告 ====
采集人 样品名称 样品 ID 样品架 样品瓶# 进样体积 数据文件名 方法文件名 批处理文件名 报告文件名 数据采集 数据处理
: Admin : 射干 : :2 : 22 : 10 uL : 样品001.lcd : 射干方法.lcm : 射干.lcb : Default.lcr : 2012-3-12 17:25:10 : 2012-3-13 8:37:27
<色谱图>
F:\中药材\射干\Z010-1203003\样品001.lcd mV 3
2012-5-16 15:36:57 1 / 1
==== Shimadzu LCsolution Analysis Report ====
Acquired by Sample Name Sample ID Vail # Injection Volume Data File Name Method File Name Batch File Name Report File Name Data Acquired Data Processed : Admin : 熟地黄 : STD-0002 :0 : 20 uL : (工艺室送检)对照002.lcd : 熟地黄.lcm : 淫羊藿.lcb : Default.lcr : 2011-6-2 10:44:53 : 2011-6-2 14:28:07
<Chromatogram>
D:\杨通银\PDF文件资料\中药材\熟地黄\(工艺室送检)对照002.lcd mV
30.352
检测器 A 通道1
3
2
1
0
0
5
10
15
20
25
30
35
40 min
1 检测器 A 通道1/334nm PeakTable Detector A Ch1 334nm Peak# Ret. Time 1 30.352 总计 Area 224162 224162 Height 3601 3601 Area % Theoretical Plate# 100.000 6318.164 100.000
２０１０版药典方法，岛津ＬＣ－２０１０Ｃ，迪马柱子（Ｃ１８＼２５０＊４０６）
F:\中药材\射干\Z010-1203003\样品001.lcd
46.175
50.483
检测器 A 通道1
2
1
0 0 1 检测器 A 通道1/266nm 10 20 30 40 50 60 min
峰表 检测器 A Ch1 266nm 峰# 保留时间 1 46.175 2 50.483 总计 面积 44704 267667 312371 高度 601 3185 3786 分离度 0.000 2.047 理论塔板# 8605.649 8298.873