抗生素的理论效价
抗生素的效价测定方法
抗生素的效价测定方法一、引言抗生素是指能够抑制或杀灭某些细菌的化学物质，被广泛应用于临床医学和兽医学中。
为了保证抗生素的质量和安全性，需要对其效价进行测定。
本文将详细介绍抗生素效价测定的方法。
二、理论基础1. 抗生素效价抗生素效价是指单位体积或单位重量的抗生素所能杀灭或抑制的菌落数量。
通常使用最小抑菌浓度（MIC）或最小杀菌浓度（MBC）来表示。
2. 测定原理抗生素效价测定是通过比较不同浓度的抗生素与一定数量的细菌接触后，确定其最小有效浓度来评估其功效。
通常使用微量稀释法、滤纸片扩散法、管式稀释法等方法进行测定。
三、实验步骤1. 实验前准备（1）准备所需试剂和设备：包括培养基、试管、移液管、显微镜等。
（2）选择适当的细菌株：选取适合该种类药物敏感性测试的细菌株，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。
（3）制备细菌悬液：将选定的细菌株接种于含有适当营养成分的培养基中，培养至对数生长期，然后用生理盐水将其稀释到一定浓度。
2. 测定方法（1）微量稀释法① 准备不同浓度的抗生素溶液：将抗生素溶解于含有适当营养成分的培养基中，制成不同浓度的药物溶液。
② 在试管中加入细菌悬液和药物溶液：取一系列标准试管，分别加入相同数量的细菌悬液和不同浓度的药物溶液，混匀后孵育。
③ 观察并记录结果：观察每个试管内是否有细菌生长，记录最低有效（2）滤纸片扩散法① 准备不同浓度的抗生素滤纸片：将抗生素溶解于无菌蒸馏水中，然后在无菌平板上放置一张过滤纸片，在过滤纸片上滴入不同浓度的药物溶液。
② 在平板上接种细菌悬液：在已经凝固的无菌平板上均匀涂布一层细菌悬液。
③ 孵育并观察结果：将含有药物滤纸片的平板孵育，观察抑菌圈的大小，记录最小有效浓度。
（3）管式稀释法① 准备不同浓度的抗生素溶液：将抗生素溶解于含有适当营养成分的培养基中，制成不同浓度的药物溶液。
② 在试管中加入细菌悬液和药物溶液：取一系列标准试管，分别加入相同数量的细菌悬液和不同浓度的药物溶液，混匀后孵育。
抗生素及维生素计量单位的换算
抗生素及维生素计量单位的换算(一)抗生素效价与质量的换算抗生素的剂量常用重量和效价来表示。
化学合成和半合成的抗菌药物都以重量表示;生物合成的抗生素以效价表示，并同时注明与效价相对应的重量。
效价——是以抗菌效能(活性部分)作为衡量的标准，因此，效价的高低是衡量抗生素质量的相对标准。
效价以“单位”(U)来表示。
经由国际协商规定出来的标准单位，称为“国际单位”(IU)。
1.理论效价——系指抗生素纯品的质量与效价单位的折算比率，多以其有效部分的1μg作为1IU(国际单位)。
如：链霉素、土霉素、红霉素等以纯游离碱1μg作为1IU。
少数抗生素则以其某一特定1μg的盐或一定重量作为1IU。
青霉素G钠盐以0.6μg为1IU;青霉素G钾盐以0.6329μg为1IU;盐酸四环素和硫酸依替米星以1μg为1IU。
一些常用抗生素的理论效价表链霉素碱1000单位/mg链霉素硫酸盐798单位/mg土霉素碱1000单位/mg土霉素碱(含二分子结晶水)927单位/mg土霉素盐酸盐927单位/mg红霉素碱1000单位/mg红霉素碱(含二分子结晶水)953单位/mg红霉素乳糖酸盐672单位/mg金霉素盐酸盐1000单位/mg四环素盐酸盐100O单位/mg四环素碱1082单位/mg青霉素钠1670单位/mg青霉素钾1598单位/mg普鲁卡因青霉素1009单位/mg苄星青霉素(长效西林)1211单位/mg新霉素1000单位/mg卡那霉素1000单位/mg多粘菌素B10000单位/mg庆大霉素1000单位/mg巴龙霉素1000单位/mg2.原料含量的标示：抗生素原料在实际生产中混有极少的但质量标准许可的杂质，不可能为纯品。
如：乳糖酸红霉素的理论效价是1mg为672IU，但《中华人民共和国药典》规定1mg效价不得少于610IU，所以产品的效价在610-672IU之间，具体效价需在标签上注明，并在调配中进行换算。
(二)维生素类药物常用单位与质量的换算维生素A的计量常以视黄醇当量(RE)表示，每1U维生素A相当于RE0.344μg。
抗生素效价的测定
单位（unit,位 以抗生素的生物活性部分重量作单 位
１微克（ｕｇ）＝１单位，１毫克＝１０００单 位。
２、类似重量单位 以特定的纯粹抗生素盐类的重量 作为１单位。如纯粹金霉素盐酸盐及四环素盐酸 盐（包括无生物活性的盐酸根在内）１微克（ｕ ｇ）＝１单位，１毫克＝１０００个单位。这是 根据国际使用习惯而来的。
2 供试品及标准品的配制
标准品与样品从冰箱取出后，使与室温平衡。 供试品应放于干燥器内至少30min方可称取。 称量最好为一次取样称量，动作迅速，不得反 复称取，取样后立即将称量瓶瓶盖盖好，以免 吸水。
标准品的称量最好用1/100,000克的分析天 平，样品称量不得低于1/10,000克的分析天平 。天平中的干燥加入剂应保持经常注意更换。
３、质量折算单位 以特定的纯抗生素盐的质量为单 位而加以折算。青霉素0.6ug为1单位
４、特定单位 以特定的抗生素标准品的某一质量 定为一单位。
微生物发的分类
稀释法 浊度法 双碟法
2、浊度法系利用抗生素在液体培养基中 对试验菌生长的抑制作用，通过测定培 养后细菌浊度值的大小，比较标准品与 供试品对试验菌生长抑制的程度，以测 定供试品效价的种方法。
抗生素效价赵微永成生生物工检10定01 法
4104100139
1.概述
一、抗生素的概念及抗生素的生物检定
抗生素是由微生物所产生的极微量 便具有选择性地杀死或抑制其他病原微 生物生长的一类天然有机化合物。
抗生素的生物检定是以抗生素对微 生物的抗菌效力作为效价的衡量标准。
一、抗生素的效价和单位
抗生素的含量用效价和单位表示。该 词有时不加区别统称为效价单位。
抗生素效价
用管碟法（2.2）法，测定链霉素活菌剂的效价，估计效价为1 000 000 u/g，供试品最终浓度为1.4u/ml 及0.7u/ml。
链霉素的效价测定抗生素微生物检定法本法系在适宜条件下，根据量反应平行线原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效性）的方法。
抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。
测定结果经计算所得的效价，如低于估计效价的90%或高于估计效价的110%时，应调整其估计效价，重新试验。
除另有规定外，本法的可信限率不得大于5%。
第一法管碟法本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。
菌悬液的制备枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）悬液取枯草芽孢杆菌［CMCC（B）63501］的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在35～37℃培养7日，用革兰氏染色法涂片镜检，应有芽孢85％以上。
用灭菌水将芽孢洗下，在65℃加热30分钟，备用。
短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)悬液取短小芽孢杆菌［CMCC(B)63202］的营养琼脂斜面培养物，照上述方法制备。
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）悬液取金黄色葡萄球菌［CMCC（B）26003］的营养琼脂斜面培养物,接种于营养琼脂斜面上，在35～37℃培养20～22小时。
临用时，用灭菌水或0.9％灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。
藤黄微球菌（Micrococcus luteus）悬液取藤黄微球菌［CMCC（B）28001］的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在26～27℃培养24小时，或采用适当方法制备的菌斜面,用培养基Ⅲ或0.9％灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。
大肠杆菌（Escherichia coli）悬液取大肠杆菌［CMCC（B）44103］的营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35～37℃培养20～22小时。
抗生素类药物的计量单位介绍
各种抗生素因其单位定义不同, 所以商品上 标签的g , m g 等的意义各不相同, 为了确切 地标示出抗生素的含量, 规定标签上以单位 表示, 并加以g 、m g等, 例如土霉素2 5 0 0 0 。 单位(相当于土毒素纯碱25 0m g) 。国际上 通常用m g , 此处的m g 不是指称重而是 指重量单位。
2、类似重量单位
以特定的纯抗生素制品盐的重量1微克 作为一个单位，即1毫克＝1000单位，其中 包括了无抗菌活性的酸根在内。 如：四环素盐酸盐（包括无生物活性的盐 酸根在内），1微克=1单位。这种类似重量 单位，虽然并不合理，但在国际上已经习 惯沿用。
3、重量折算单位
以特定的纯抗生素制品的某一重量为一单 位而加以折算。 如：青霉素钠纯品称重0．5998微克为1单 位；青霉素钾纯品称重 0.625微克为1单位
化学合成和半合成的抗菌药物 一般以重量表示，如：“双氯青霉
素（BRL1702）每片：0.5g”或“硫酸链 霉素：片：0.1g；注：1g(100万u）”
生物合成的抗生素一般以效价表示， 并同时注明与效价相对应的重量。如： “青霉素钠盐：注：20万u 1670以一特定量的抗生素标准品（或对照品） 作为1单位。 如：第一批杆菌肽国际标准品（1953年）杆 菌肽A为1毫克=55单位；制霉菌素（1963年） 为1毫克=3000单位等。
5、 理论效价
理论效价是指抗生素纯品的重量与效价单 位的折算比率。 如：链霉素碱 1000单位／mg 链霉素硫酸盐 798单位／mg 土霉素碱 1000单位／mg
抗生素类药物计量单位
抗生素是一种生理活性物质, 可以利用抗 菌性能表示它的效价, 通常以“单位”来表 示。 经生物检定，具有一定生物活性（抗 菌作用）的单元称为单位（U）。
抗生素常用制剂规格、重量与单位之间关系
抗生素常用制剂规格、重量与单位之间关系2008-12-17 14:22:03名称制剂规格重量与单位（u）之间的关系（理论效价）青霉素G钠盐注①：20万u 、40万u、100万u1670u/mg青霉素G钾盐注：20万u、40万u、100万u 1595u/mg普鲁卡因青霉素G（青霉素混悬剂）注：40万u、80万u，内含青霉素G10万u、20万u1009u/mg苄星青霉素G（长效西林）注：60万u、120万u、300万u1211u/mg二甲氧苯青霉素钠（新青霉素Ⅰ，BRL1241）注：0.5g、1.0g苯甲恶唑青霉素钠（新青霉素Ⅱ，青霉素P12，BRL1400胶囊：0.25g；注：0.5g乙氧萘青霉素钠（新青霉素Ⅲ）胶囊： 0.25g；注：0.5g 邻氯新青霉素钠（BRL1621）胶囊： 0.25g双氯青霉素（BRL1702）片：0.5g氨基苄青霉素（广谱青霉素，BRL1341）片： 0.25g；注：0.5g羧苄青霉素（BRL2064）注：0.5g（50万u）、1g（100万u）硫酸链霉素片：0.1g；注：1g(100万u）、2g（200万u）；滴：1%1000u/mg(碱）；798u/mg(硫酸盐）；842u/mg(盐酸盐）；779u/mg（氯化钙复盐）硫酸双氢链霉素注：1g(100万u）、1ml(25万u)、2ml(50万u）1000u/mg(碱）；799u/mg(硫酸盐）；842u/mg(盐酸盐）硫酸新霉素滴0.5%；片：0.1g；注：1g 1000u/mg(碱）；600u/mg（盐）硫酸卡那霉素片：0.25g；1g(100万u）、2ml（0.5g)1000u/mg(碱）；812u/mg（盐）硫酸巴龙霉素片：10万u、20万u 1000u/mg氯霉素片：50mg、0.25g；注：1ml(0.125g)、2ml(0.25g)1000u/mg(左旋体）；575u/mg（棕榈酸酯）氯霉素琥珀酸钠注：0.69g（含氯霉素0.5g）、1.38g（含氯霉素1g）910u/mg盐酸土霉素片：50mg、0.25g；注：2ml（0.1g）供肌注：0.25g（粉针，供静注或静滴）1000u/mg(碱）；927u毫克（碱含二分子结晶水）；927u/mg(盐酸盐）盐酸金霉素片：0.125g、0.25g；注：0.1g、0.2g1000u/mg盐酸四环素片：50mg、0.25g；注：0.125g、0.25g1082u/mg（碱）；1000u/mg（盐酸盐）红霉素片：0.1g；注：0.3g 1000u/mg(碱）；953u/mg(碱含二分子结晶水）；721u/mg（棕榈酸酯）；910u/mg（琥珀酸酯）；672u/mg（乳糖酸盐）新生霉素胶囊：0.25g；注：0.25g、0.5g 970u/mg(1u=0.001031mg) 盐酸万古霉素注：0.5g（50万u）1007u/mg(1u=0.000993mg)杆菌肽注：5万u：含片：500u；眼用软膏：500～1000u；外用软膏：10g（500～1000u）74u/mg（杆菌肽辛）1u=0.01351mg先锋霉素Ⅰ注：0.5g、1g硫酸庆大霉素（硫酸正泰霉素）片：20mg；注：1ml（20mg）、1ml（40mg）、1000u/mg硫酸多粘菌素B 片：50mg（50万u）；注：50mg（50u）784u/mg(1u=0.000127mg)硫酸多粘菌素E（硫酸抗敌素）片：12.5万u、25万u；注：25万u（内含1%丁卡因1ml，供肌注）、50万u（供静注）10000u/mg(1u=0.00005128mg)盐酸多胜菌素甲粉剂（可制成2%～5%）糖浆）；注：25万u、50万u盐酸春雷霉素注：0.5g制霉菌素片：25万u、50万u 3000u/mg(1u=0.000333mg) 二性霉素B 注：50mg 940u/mg(1u=0.001064mg) 灰黄霉素片：0.1g曲古霉素（发霉素、抗滴虫霉素、杀霉菌素）肠溶片：5万u争光霉素注：2mg含盐酸争光霉素5000u、15000u、30000u冷冻干燥品：5000、15000、30000u光辉霉素注：冷冻干燥品5mg，水针2ml 含2mg自力霉素C 注：2mg自力霉素加48mg氯化钠（粉针）。
抗生素生产一万个为什么
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菌丝生长需要利用碳源和氮源、无机盐的营养物质，为使菌丝体能在短时间内迅速的大量生长，发酵培养基中应提供能被迅速利用的碳源和氮源。葡萄糖属于迅速利用碳源。对于淀粉酶活力高的菌种。糊精也能被迅速利用，液化淀粉中含有一部分糊精，麦芽糖和葡萄糖可供前期生长菌丝用，玉米浆、硫酸安、尿素等属于迅速利用氮源。供前期菌丝生长用的迅速利用碳、氮源加量不宜过多，以免菌丝过量生长。葡萄糖的加量要视菌种特性而定，一般在1%左右，菌丝生长慢的放线菌可是当增量，当不宜超过5%。玉米浆、硫酸安等的总量控制在0.2—1.5%之间，发酵培养基还应有足够量的缓慢利用碳、氮源供抗生素合成期逐步分解和利用。乳糖和淀粉等属于缓慢利用的碳源，黄豆饼粉、花生饼粉都是缓慢利用的氮源。加量根据菌种的利用能力、发酵单位的高低、周期的长短而不同。缓慢利用碳、氮源的特点是可由微生物自我控制逐步分介利用，避免分解代谢物过量积累而引起代谢的反馈调节作用，以致抗生素的合成，发酵培养基中的磷主要供合成贮能物质和核酸、磷脂等含磷细胞物质。因此，加量不能太大，一般控制在初期，既培养10小时前培养也含有一定量的磷，菌丝长浓后。培养基还需要少量的供应菌体生长和抗生素合成所需要的矿质元素和前体物质。
27
国内抗生素工厂主要用生理酸性和生理碱性营养物质调节PH值。在组成基础培养基配方时，合理搭配生理酸性和生理碱性营养物质，使培养基具有适宜的PH值。但培养基的原始PH值不会太多影响发酵液的酸碱性，原始PH值不论高低都能在菌丝生长后加以调节，。影响PH值得最主要的因素是微生物对各种营养物质分解氧化的结果。微生物在代谢过程中，分解利用某一类物质后，使培养基变酸；而在分解利用另一类物质后又使培养基变碱。所以在发酵的补料工艺中应选择适宜的生理酸性营养物质和生理碱性营养物质搭配使用以调节PH值。PH值高而氨氮低，补加生理性酸性氮源如硫酸铵；PH值高，同时氨氮也高，但残糖量低时可补加糖液是PH值下降。PH值低而氨氮也低时选择补加尿素或氨水来提高残氮量和PH值；PH值低，而氨氮高、残糖量低时则应该结合补糖和补碳酸钙来调节。碳酸钙不溶于水，本身是中性，能与酸起反应生成中性化合物硫酸钙和二氧化碳，使发酵液不至于太酸。又不会促使菌丝体大量繁殖，可在适当条件下采用。总之，要根据PH值、含糖量、氮含量、菌丝浓度、菌丝形态等具体情况合理调节。
31 抗生素效价的测定
A=1u/ml
continue
A B
第一组 0.4u/ml
B
A C A
A B
A B
B
A C A
A
B
A B
B
A
A B
第二组 0.6u/ml
A C
A C
A C
A C
A CБайду номын сангаас
C A
A C
第三组 0.8u/ml
A D
D A
A D
A D
D A
A D
A D
D A
A D
共18个培养皿，分为6组:B、C、D、E、F、G
continue
第四组 1.0u/ml A E
E
A F A G A
A E
A E
E
A
A
E
A E
E
A F A
A E
第五组 1.2u/ml
A F
A F
A F
F A
A F
A F
A F
第六组 1.4u/ml
A G
A G
A G
G A
A G
A G
G A
A G
continue
加好，盖盖，37度培养16~18h，精确测量各个 抑菌圈的直径。 分别求出每组3个培养皿中1U/mL标准品抑菌圈直 径的平均值n1，n2，n3，n4，n5，n6，再求出 6组中1U/mL标准品抑菌圈直径的平均值a，总平 均值与每组1U/mL标准品抑菌圈直径的平均值的 差，即为各组的校正值。即： a1=a-n1； a2=a-n2； a3=a-n3； a4=a-n4； a5=a-n5； a6=a-n6；
稀释法 比浊法 管碟琼脂扩散法（中国）