水中微生物的检测
水体微生物检测方法
水体微生物检测方法1 水体微生物检测方法水是生命存在的必要条件，水体中的微生物是水质健康状况的重要指示物，所以检测水体微生物是监测污染质量、污染程度以及保证水生态环境健康、生物多样性等的重要技术手段之一。
检测水体中的微生物，常用的方法有活性测定法、培养分离法、PCR以及荧光探针法等。
1.1 活性测定法活性测定是水体微生物检测中应用最为广泛的方法之一。
在活性测定法中，样品会添加选定的培养基，配合观察和测定时间、温度、湿度以及添加凝结剂等来选择培养条件，通过特殊的检测仪器可以观测到微生物的活动，得出结论。
优点是流程简单、方法全面、检测灵敏，适应性强；但方法不适用于菌类多样性检测。
1.2 培养分离法培养分离法是最常用的一种微生物检测方法，在样品中添加特殊培养基，用于培养水体中的微生物。
采集不同条件下培养出的细菌株进行形态学分析、生理与生化特性分析和分子生物学分析等操作，从而获取对应的菌类信息。
优点是检测单元多、可检测菌类多样性；缺点是方法较复杂，时间较长。
1.3 PCR聚合酶链反应法（PCR）是水质检测的一种快速、灵敏的检测方法，它能够实现对特定微生物核酸序列片段的快速，灵敏的检测。
PCR采用不同条件，以几个温度周期反复扩增，以此形成检测抗原特异性的DNA 片段，最终得出该片段的扩增结果，通过特殊的检测仪器，得出检测结论。
优点是抗原检测的特异性更高、检测灵敏度高，时间短；缺点是不能检测到活体细菌，技术成本较高。
1.4 荧光探针法荧光探针法是运用荧光或发射荧光的探针分子，通过其与特定抗原发生特异性结合，以检测活态微生物的一种分子方法。
从而检测水体中活态微生物类型及数量，快速精准地检测水样中的微生物活性。
与传统活性测定法相比，优点是检测时间短、灵敏度高、减少误报率，方法进行简单；缺点是设备成本较高。
以上就是四种常用的水体微生物检测方法，每种方法都有优缺点，检测人员根据实际情况来选择恰当的检测方法。
除此之外，正确使用相关设备、操作标准的熟悉度对水体微生物的检测也是非常重要的。
水质微生物检测
第二节饮用水种类及卫生微生物指标
一、饮用水分类 1、生活饮用水：供人生活的饮水和生活用水 2、包装饮用水： • 饮用天然矿泉水 • 饮用天然泉水 • 其他天然饮用水 • 饮用纯净水 • 饮用矿物质水 • 其他包装饮用水
二、饮用水介绍
（一）、生活饮用水 • 新发布的产品标准 GB5749-2006 • 标准检验方法为 GB/T5750-2006 • 水质检验项目由原35项增加至106项，旧标准微生
0 MPN/100mL
0 CFU//250mL 0 CFU//250mL 0 CFU//50mL
各类水质的微生物指标要求(续)
瓶 装 饮 用 纯 净 GB17324 － 水卫生标准 1998
菌落总数 ≤ 大肠菌群 ≤
霉菌和酵母 ≤
致病菌（沙门氏菌、
志贺氏菌、金黄色葡萄
球菌）
瓶（桶）装饮用 GB19298 － 水卫生标准 2003
• PH：水中微生物适宜范围是pH6.5～8.5，这与一般自然水 的pH值范围相适应。 海水的pH7.5～8.5，海水中多数微生 物生长的最适pH7.2～7.6；
• 化学物质：有机物，无机物：氨、硝酸盐、磷酸盐、硫酸 盐、碳酸盐，金属离子：汞、铜；
• 营养物质：异养微生物，营养贫乏时，微生物倾向吸附颗 粒。
第三节生活饮用水微生物检测
一、水样中微生物项目检测方法 GB/T 5750.12
1 菌落总数
1 平皿计数法
2 总大肠菌群大肠菌群
1 多管发酵法
2 滤膜法
4大肠埃希氏菌
二、水微生物的种类
• 水微生物的种类很多，有细菌、真菌、病毒、藻 类和原生动物；
• 水中大多数微生物属于异养微生物，它能利用水 中有机物质生长，另一类为自养微生物，它只需 无机物质就能合成新的细胞。
平板菌落计数法水中微生物的检测
2、由于细菌易吸附玻璃器皿表面，菌液加入后应 尽快倒培养基，立即摇匀；
3、倾注平板时的培养基温度冷却至45℃左右。 4、计数时，30―300个菌落的稀释度计算每毫升
的菌数最为合适 5、同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊
菌落计数方法及原则：
1）若只有一个稀释度的平均菌落数在30-300范围 时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。
2）若有两个稀释度，其生长的菌落数均在 30~300之间，则视二者之比值来决定，若 其比值小于2应报告两者的平均数。若大于 或等于2则报告其中较小的菌落总数。
3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300， 则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释 倍数报告之
水中细菌总数的测定
——平板菌落计数法
一、细菌总数测定的意义
水中细菌总数往往同水中有机物污染的程度呈 正相关，它是评价水质污染程度重要指标之一
细菌总数：指水样在一定条件下培养后，1mL水样 所含菌落的总数。
我国生活饮用水标准（GB5749-85）规定，细 菌总数不得超过100个/ml
含细菌10-100个/ml的水体为极清洁
代表性：多采几个部位，液体样品需经过震摇，以 获得均匀稀释液。
2 水样的10倍稀释
第一步 稀释 水样 第二步： 接种平板
注意：稀释 度的选择
平板混合分离法： 将菌液分离样品摇匀，用无菌移液管取1 ml的
菌液移至无菌培养皿中，然后将融化，凉至45℃ 左右的培养基，在每个培养皿内各倒入约15 ml， 摇匀，凝固，制成平板。
4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30， 则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀 释倍数报告之
水中微生物的测定-国标法(水质检测)
水中微生物的测定-国标法(水质检测)
摘要
本文介绍了水中微生物的测定方法，以国家标准法为基础。
水中微生物的测定是水质检测的重要环节，可以评估水的卫生状况，以及相关的环境健康风险。
引言
水是人类生活中必不可少的资源，保证水质安全对于人类健康至关重要。
水中微生物作为一种主要的水质指标，可以反映水中存在的微生物污染程度。
因此，精确测定水中微生物的数量是进行水质检测的基本要求之一。
国标法测定方法
样品收集与处理
1. 确定采样点及采样时间，避免样品受到外界干扰。
2. 使用干燥及密闭的收集水样，并尽量防止样品受到氧气、光照和高温的影响。
3. 避免采样与外界环境接触，以防止二次污染的发生。
样品制备与预处理
1. 根据国家标准法的要求，将收集的水样进行适当的稀释，使其微生物数量在可测量的范围内。
2. 使用适当的培养基进行预处理，以促进微生物的生长。
微生物测定方法
1. 平板计数法：将经稀释处理的水样均匀地分布在培养基上，通过培养基固化后，计数形成的菌落数量，并据此推算出水样中微生物的浓度。
2. 膜过滤法：通过将水样通过细孔滤膜，然后将膜过滤板放置在含培养基的平板上，根据过滤后膜上菌落的数量计算水样中微生物的浓度。
结论
本文介绍了水中微生物的测定方法，基于国家标准法。
这些测定方法可以用于水质检测，评估水的卫生状况，以及相关的环境健康风险。
采样、制备和处理样品的正确操作，以及准确的测定方法选择，对于保证测定结果的可靠性至关重要。
水中微生物的取样、检测及处理方法2024
引言：水中微生物是指存在于水体中的微生物种类，包括细菌、藻类、真菌等微生物。
它们在水体中具有重要的生态功能和环境影响，对水质的评估和监测具有重要意义。
本文旨在介绍水中微生物的取样、检测及处理方法，以帮助读者更好地理解和应用这些方法。
概述：水中微生物的取样、检测及处理是水环境监测的重要组成部分，在水资源管理、环境保护和水污染治理中起到关键作用。
准确、有效地进行水中微生物的取样、检测及处理对于判断水体是否受到微生物污染、评估水体生态健康状况具有重要意义。
本文将围绕水中微生物的取样方法、检测技术和处理方法展开讨论，以提供读者所需的专业知识。
正文内容：一、水中微生物的取样方法1.表面水样品的取样方法\t1.1.表层水样品的采集\t1.2.底层水样品的采集\t1.3.水体剖面取样方法2.地下水样品的取样方法\t2.1.井口取样法\t2.2.地下水位下降法\t2.3.地下水位抬升法3.沉积物样品的取样方法\t3.1.瓶采法\t3.2.气体驱动采样法\t3.3.容器示踪剂法二、水中微生物的检测技术1.传统微生物检测技术\t1.1.培养法\t1.2.电镜法\t1.3.染色法2.分子生物学检测技术\t2.1.PCR技术\t2.2.实时荧光定量PCR技术\t2.3.基因测序技术3.免疫学检测技术\t3.1.酶联免疫吸附试验（ELISA）\t3.2.免疫荧光分析技术\t3.3.免疫电泳技术三、水中微生物的处理方法1.混凝絮凝处理技术\t1.1.金属盐混凝剂处理法\t1.2.有机高分子絮凝剂法\t1.3.硝酸盐法混凝絮凝法2.过滤处理技术\t2.1.砂滤法\t2.2.膜过滤法\t2.3.离子交换法3.抗生素处理技术\t3.1.抗生素消毒法\t3.2.抗生素筛选法\t3.3.抗生素生物降解法四、水中微生物的监测与评估1.基于微生物指标的水质评价方法\t1.1.总大肠菌群指数测定法\t1.2.肠球菌体群指数测定法\t1.3.总菌落数测定法2.水中微生物的生态学指标\t2.1.生物多样性指数\t2.2.生物量指数\t2.3.功能状况指数3.进一步分析处理结果\t3.1.统计分析方法\t3.2.GIS技术\t3.3.模型模拟方法五、水中微生物的污染防治策略1.源头减排措施\t1.1.农田非点源污染治理\t1.2.工业废水治理\t1.3.城市雨水管理2.水体净化技术\t2.1.人工湿地技术\t2.2.高级氧化技术\t2.3.光催化技术3.微生物修复技术\t3.1.天然微生物修复技术\t3.2.基因工程微生物修复技术\t3.3.内源微生物修复技术总结：水中微生物取样、检测及处理方法的正确应用对于水环境管理与保护至关重要。
水的微生物检验
水的微生物检验一、器材：1 •培养基：PCA、灭菌双料5支、单料10支/每个样品（乳糖蛋白胨）2．仪器或其他用具：灭菌三角烧瓶（带塞）且加入稳定剂，灭菌培养皿、灭菌吸管、灭菌镊子、灭菌棉球、灭菌10 ml 生理盐水（灭菌9 ml 生理盐水）、酒精灯（打火机、酒精棉球）、样品筐二、水样的采集：1 • 用灭菌棉球将水龙头擦干（钢铁管口用酒精灯烧灼消毒水龙头周围 3 分钟）2. 完全打开水龙头使水流2-5分钟后，将水龙头关小，以灭菌三角烧瓶接取水样。
方法二：1. 流1-2分钟2. 关上，擦水龙头四周3. 打开水龙头，流2-5 分钟4. 接水注意：1.加硫代硫酸钠的量：500 ml水加1.5%硫代硫酸钠2ml或每500 ml加0.4ml硫代硫酸钠。
2. 样品瓶必须专瓶专用，灭菌后须干燥。
3. 人手和手套不得与样品瓶内壁或瓶塞接触。
4. 采样记录用胶纸粘贴或悬挂标签于水样瓶上，注明水样编号、采样者、日期、时间及地点等。
5. 运送水样应避免瓶摇动（充满容器并密封，除冷冻样品），以免水样溢出后又回流瓶中增加污染。
6. 取样后2 小时内检验，冷藏4小时内检验7. 做样在无菌间做。
三、细菌总数、大肠菌群测法参照GB5750-85 （2001 版）水的余氯检测程序一、器材：配好的比色管10 支，洁净的50ml 比色管1 支，三角锥瓶2个（带塞）二、水样采集：打开水龙头流水1-2 分钟后，以三角烧瓶接取水样，涮洗3 次，接取200ml 左右，迅速送到实验室比色。
三、操作：准确吸取2.5ml 邻联甲苯胺溶液于50ml 比色管中，加水样至50ml 刻度处。
当接近刻度时，改用滴管加至刻度处，以与眼平行时，凹液面与刻度相平为准。
（盖上瓶塞，颠倒混匀2-3 次），迅速比色，然后审核并做记录。
四、注意事项：1. 抽取时间：车间上班30 分钟后。
2. 每天三角锥瓶、比色管用完后刷洗并控干。
3. 5ml 吸管每月换1（或2）支。
4. 抽取按编号顺序抽取。
纯化水微生物限度检测
纯化水微生物限度检测纯化水微生物限度检测包括了对水中微生物污染程度的评估与监测，其重要性在于确保水的纯度达到合适的标准。
该检测是环境监测中的重要部分，相对于检测其他物质，水质检测需要对多种微生物进行监测。
本文将从纯化水微生物限度检测的必要性、检测方法、影响因素等方面展开分析。
一、纯化水微生物限度检测的必要性纯化水微生物限度检测是确保现代社会得到健康饮用水供应的必要手段。
水是支撑人类生产和生活不可缺少的资源，为了保障水的安全，国际水研究会提出了对水安全的三条标准：化学安全、生物学安全和物理学安全。
其中生物学安全主要是指检测水体中的细菌、病毒、藻类、真菌等微生物是否达到了国家卫生标准水净化处理后的标准要求。
通常情况下，对于自然水源或市政供水，人们都会采用纯水处理技术，除去其中存在的大部分异质物、有机物、无机物和微生物，但这并不意味着此时的水已经完全可供直接饮用或是直接应用于生产和科研实验等领域。
因此，水质检测是必要的，并且其微生物检测部分尤为重要。
二、纯化水微生物限度检测的方法微生物检测主要包括菌落计数法和涂布法等。
菌落计数法是确定水中菌落总数的标准方法，其主要包括直接计数法和滤膜计数法。
直接计数法是指直接将样品涂在平板上，然后通过计算实现细菌数目的统计。
滤膜计数法与直接计数法类似，我们可以先将样品过滤然后直接将过滤膜放在培养基上，然后进行培养，统计出菌落数。
涂布法是将样品涂在培养基上，通过培养时间、培养温度等环境条件来判断样品中有无微生物存在。
当然根据实验需要，也可对微生物进行分离鉴定。
三、影响纯化水微生物限度检测的因素微生物检测在水质检测中占有重要的位置，但同时在微生物检测过程中也有一些因素可能引起检测结果的偏差，例如缺氧、污染源、物种种类等因素将影响样品的真实性。
使用的培养基和培养条件也会影响到微生物的生长情况。
当检测样品来源于管道、水井等地下水源时，还需注意该地区自然生存的微生物种类、菌株以及排放规模等因素。
实验室生活饮用水微生物检测SOP(一)
实验室生活饮用水微生物检测SOP（一）引言概述：实验室生活饮用水微生物检测SOP是为了确保实验室饮用水的安全与卫生，检测水中的微生物污染情况，并采取相应的措施进行处理。
本文将详细介绍实验室生活饮用水微生物检测的步骤和要点。
正文：一、实验室生活饮用水微生物检测前的准备工作1. 准备所需的检测设备和试剂，包括培养基、平板计数器、显微镜等。
2. 清洗和消毒检测设备，确保设备的洁净和无菌。
3. 确保实验室供水管道的安全和干净，避免水源污染。
二、水样采集和处理1. 选择合适的水样采集器具，如钢质水样容器或无菌采样瓶。
2. 在采集水样前进行必要的洗手和佩戴消毒手套，以避免污染水样。
3. 选取水源合适的位置采集水样，尽量避免水源受到外界污染。
4. 采集水样后立即送至实验室进行处理，避免样品在运输过程中受到污染。
三、水样预处理1. 对水样进行过滤，以去除大颗粒物质和悬浮物。
2. 进行稀释处理，确保微生物数量在检测范围内。
3. 根据需要进行pH调节或添加抑菌剂，以保证后续检测的准确性和可靠性。
四、微生物检测方法1. 采用培养法进行微生物定量分析，包括总菌落计数和特定菌群检测。
2. 根据需求选择合适的培养基和培养条件，如温度、pH值等。
3. 加入样品到培养基中，进行平板计数或液体培养，并进行恰当的菌落计数。
4. 进行特定菌群的检测，如大肠杆菌、沙门氏菌等，采用相应的培养基和检测方法。
5. 采用显微镜观察法进行微生物形态和特征的检测，确保检测结果的准确性。
五、结果分析和处理1. 根据检测结果进行微生物数量统计和分析，比较检测结果与相关标准的符合情况。
2. 如发现微生物污染超过标准限值，及时采取措施进行处理和消毒。
3. 记录检测结果，并保留相关文件和数据，以备日后参考和审查。
总结：实验室生活饮用水微生物检测SOP的实施可以确保实验室饮用水的卫生安全。
通过准备工作、水样采集和处理、微生物检测方法的选择和结果分析处理，可有效地监测和控制实验室饮用水中的微生物污染，保障实验室工作人员的身体健康和实验室环境的卫生安全。
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综合实验二：水中细菌总数和大肠菌群的测定
一、实验目的
1学习并掌握水样采集的方法、规则及注意事项；
2了解检查水中细菌总数和总大肠菌群的测定方法及检测意义；
3学习对所检测的水样作综合分析。
二、实验原理
1.水体的微生物污染问题日趋严重：
在各种水体，特别是污染水体中存在有大量有机物质，适于各种微生物的生长；
水中的微生物污染来源：土壤，以及人类、动物的排泄物污染；
水体中少数致病微生物（主要来自人或动物的粪便污染）可导致某些肠道传染病传播。
2.水微生物检测可用于评价水质情况，预报水质的污染趋势，以保证水质的卫生安全。
在实际工作中，对水质卫生质量的评价和控制，是无法对水体中各种可能存在的致病性微生物一一进行检测。
一般选择有代表性的一种或一类微生物作为指示菌，通过对指示菌的检测，来了解水体是否受到过的微生物污染，是否有肠道病原微生物存在的可能。
3.水微生物的监测指标：
⑴菌落总数
①是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。
②检测意义：作为一般性污染的指标，即评价被检样品的微生物污染程度和安全性。
水样菌落总数越多，说明水被微生物污染程度越严重，病原微生物存在的可能性越大，但不能说明污染的来源。
⑵总大肠菌群
①是指一群需氧及兼性厌氧的，37℃生长时能使乳糖发酵，在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
②检测意义：作为粪便污染的指标。
水样总大肠菌群数的含量，表明水被粪便污染的程度，而且间接地表明有肠道致病菌存在的可能。
4.多管发酵法测定总大肠杆菌群
⑴初发酵试验：采用乳糖蛋白胨培养液37℃培养24h，观察产酸产气情况，产酸产气说明水中存在大肠菌群，为阳性结果。
但是，有个别其他类型细菌在此条件下可能产气，而不属于大肠菌群；产酸不产气的发酵管，也不一定是非大肠菌群，因其量少，可能延迟48 h后产气，这两种视为可疑结果，需进行下面的实验，才能确定是否是大肠菌群。
⑵平板分离：对阳性管培养物及假阳性管培养物，接种于伊红美蓝培养基，观察菌落特征，将符合大肠菌群菌落特征的菌落并进行革兰氏染色和镜检，只有染色为革兰式阴性、无芽孢杆菌的菌落才是大肠菌群菌落。
⑶复发酵证实试验：将以上两次实验已证实为大肠菌群阳性的菌群，接种于乳糖蛋白胨培养液，进行复发酵证实试验，经24 h培养产酸又产气的，最终确定为大肠菌群阳性结果。
最后，根据确定有大肠菌群存在的初发酵管（瓶数目），查阅专用统计表，得出总大肠菌指数。
三、实验用品
1.溶液及试剂：
蛋白胨、Nacl、20%乳糖、2%伊红水溶液、0.5%美兰水溶液、牛肉膏、1.6%溴甲酚紫乙醇溶液、草酸铵结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、番红复染液、蒸馏水、NaOH溶液、HCl 溶液等
2.仪器和其他用品：
试管、德汉式小管、三角瓶、注射器、搪瓷缸、培养皿、载玻片、电磁炉、玻璃棒、移液管、酒精灯、接种环、试管架、恒温培养箱、灭菌锅、显微镜等
四、实验内容及步骤
1.培养基配制
一倍乳糖蛋白胨培养液三倍乳糖蛋白胨培养液
蛋白胨 2g 6g
牛肉膏 0.6g 1.8g
乳糖 1 g 3g
NACL 1g 3g
1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 0.2ml 0.6ml
蒸馏水 200ml 200ml
⑴将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及NaCl加热溶解于蒸馏水中，调PH至7.2~7.4，加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，分装于试管和三角瓶中（初发酵试管10支各5ml,初发酵三角瓶2个各50ml;复发酵试管12支各5ml），并加入德汉式小管。
115℃灭菌20min.
伊红美兰培养基
蛋白胨 2g
NACL 1g
蒸馏水 200ml
20%乳糖 4ml
2%伊红水溶液 4ml
0.5%美兰水溶液 2ml
⑵将蛋白胨、NACL加入蒸馏水加热溶化，再加入乳糖、伊红水溶液、美兰水溶液。
摇匀后，115℃灭菌20min。
灭菌后稍加冷却，无菌操作倒平板12个，每个培养皿约15ml。
2.自来水采样
先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再开放水龙头使水流5 min（经常用水的水龙头放水1～3min）后，采集水样于无菌锥形瓶，约占瓶容量80%，以便摇匀水样。
3.初发酵试验
在2个含50ml3倍浓缩的乳糖蛋白胨发酵烧瓶中，各加入100ml水样。
在10支含有5ml 3倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管中，做好标记，各加入10ml水样，混匀后，37℃培养24h，24h 未产气的继续培养至48h。
4.平板分离
将24h培养后产酸产气和48h培养后产酸产气的发酵管，分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于37℃下培养18-24h，将符合下列特征菌落：深紫黑色，有金属光泽；紫黑色，不带或略带金属光泽；淡紫红色，中心颜色较深，其中的一小部分，进行涂片，革兰氏染色，镜检。
5.复发酵试验
经涂片、染色、镜检，如果是革兰氏阴性无芽孢杆菌，则挑取该菌落的另一部分，重新接种于普通浓度的乳糖蛋白胨发酵管中，每管可接种来自同一发酵管的同类型菌落1-3个，37℃培养24h，实验结果若产酸又产气，即证实有大肠杆菌群存在。
证实有大肠杆菌群存在后，再根据初发酵实验的阳性管数查表，即得总大肠杆菌群。
五、注意事项
1.当接种量超过一毫升时，一般采用多倍浓度培养液。
如配制3倍浓缩乳糖蛋白胨培养液50ml，加入100ml水样后，总体积为150ml，培养液恢复到正常浓度。
2.做好标记。
3.注意无菌操作，避免杂菌污染，影响检测结果。
六、实验结果与分析
1.初发酵
（注：1-2为三角瓶，100ml水样；3-12为试管，10ml水样）
3.复发酵：7号菌群复发酵结果：产酸又产气，最终确定为大肠杆菌菌群阳性结果。
4.结果分析：
100ml水样的阳性管数：0，10ml水样的阳性管数：1。
根据总大肠菌群检数表，查得每升水样中总大肠菌群为3，符合我国饮用水标准。
（每升水中总大肠菌群≤1000）
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