动物血液原虫病病原检查技术
25601218_猪附红细胞体病的诊断及防治技术
浙江畜牧兽医２０２１年第５期欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍５．２ 方法 产前２０～３０ｄ的母猪，应接种大肠杆菌等疫苗，或根据兽医的要求接种一些其他的疫苗，在对怀孕１００ｄ左右的母猪进行驱虫，这包括体外和体内的寄生虫。
分娩前４日开始减少饲喂量，每头饲喂量从２．５ｋｇ／ｄ逐步减少到０．５ｋｇ／ｄ，以防妊娠延长及子宫炎、乳房炎、无乳综合症的发生，并可将死胎头数减少到最低。
产仔舍及产床在临产母猪进入前必须做好清洗、消毒等的准备工作。
临产前３～７ｄ的母猪清洗消毒后进入产仔舍，还要在母猪产仔时必须要做到人工监护分娩，在其产仔过程中给予一些必要的帮助，以最大程度地提高活产仔数。
产后要对母猪作适当的药物护理及个别有问题母猪的药物综合处理（包括产道冲洗、抗菌素和催产素的使用等）。
分娩当天喂料０～０．５ｋｇ／头，随后每天增加０．５～１ｋｇ，４天时达到日采食量２．５ｋｇ以上。
６ 哺乳期母猪６．１ 目标 提高母猪泌乳量和乳汁质量；提高母猪采食量，以防止母猪膘情迅速下降；提高仔猪的成活率；提高仔猪的断奶体重。
６．２ 方法 尽可能地把产房的温度控制在１５～２０℃，不要高于２２℃，但要对哺乳仔猪作小范围的保温工作。
在１８℃的室温产仔的母猪热应激较小，产仔较快，死胎较少。
在高的屋舍温度时，母猪采食量减少，背膘下降，且体重下降，从而导致仔猪死亡率升高而且断奶时体重减少。
产后５ｄ可以敞开饲喂，平时每天可喂２～３次不等，但在高温季节，如采食量不够，那每天就应喂４～５次。
要保证充足的饮水，照明时间维持在１２～１６ｈ。
收稿日期：２０２１ ０３ ０４猪附红细胞体病的诊断及防治技术王惠强（兰溪市黄店镇人民政府，浙江兰溪３２１１１１）中图分类号：Ｓ８５２．７２ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１００５－７３０７（２０２１）０５－００３０－００２ 猪附红细胞体病是由附红细胞体寄生于人和动物血液中红细胞表面或血浆中而引起的一种人畜共患传染病，临床上以贫血、黄疸和发热为特征，故又称为黄疸性贫血、类边虫病、赤兽体病和红皮病等。
牛泰勒虫病的诊断及防治技术
50牛泰勒虫病的诊断及防治技术牛泰勒虫病主要是由环形泰勒虫寄生在牛体内而引起的血液原虫病，该病主要通过中间宿主——蜱传播，当携带有该病病原的蜱虫叮咬牛时可导致牛患病。
笔者采用临床观察和实验室诊断相结合的方法，对牛场疑似患有泰勒虫病的病牛进行诊断，并制定相应的治疗方案，现将诊治情况介绍如下。
一、发病情况2022年8月上旬，安徽省合肥市蜀山区金华奶牛场1头2岁奶牛精神不振，后期沉郁，食欲减退，反刍减弱，体温升至41℃，可视黏膜苍白黄染。
肩前淋巴结肿大，触诊有痛感，步态蹒跚，行动不便，喜孤立。
静卧在阴凉偏僻的地方，鼻镜干燥，便秘，后期拉稀。
用抗菌类药物治疗未见好转。
后来在对牛全身检查过程中，在腋下发现璃眼蜱。
二、实验室检验采集耳静脉血涂片，干燥后先用吉姆萨染液（A 液）固定，再滴加吉姆萨染液（B液）3分钟染色，经水洗、吸干置于1600倍油镜下镜检观察，红细胞内见有环形、椭圆形、逗点儿形虫体，数量1至10个不等，肩前淋巴结穿刺发现有石榴体。
三、诊断根据流行病学及实验室检验，诊断该奶牛患牛泰勒虫病。
牛泰勒虫病是牛的一种原虫病，曾称泰氏焦虫病，以病牛出现高热、贫血、出血、消瘦和体表淋巴结肿胀为特征。
四、剖检变化对病死牛剖检可见全身性出血，淋巴结肿大3～5倍，切面有暗红色病灶和灰白色结节；皱胃黏膜肿胀、充血，有针头至黄豆大暗红色或黄白色结节，坏死后形成糜烂或溃疡，边缘不整稍隆起，周围黏膜充血、出血，构成细窄的暗红色带；脾脏肿大，被膜有出血点；肾脏肿大、质软；肝脏肿大、质软，有灰白或暗红色病灶。
五、病原寄生虫病原寄生虫是环形泰勒虫和瑟氏泰勒虫，寄生于红细胞内的虫体呈环形、椭圆形、逗点形或杆形，环形泰勒虫圆形虫体多于杆形虫体，瑟氏泰勒虫杆形虫体多于圆形虫体。
红细胞内一般寄生虫体。
寄生在网状内皮系统细胞的环形泰勒虫，进行裂体增殖形成多核虫体，裂殖体呈圆形、椭圆形或肾形，位于淋巴细胞、单核细胞胞浆内或细胞外。
泰勒虫的生活史需要2个宿主参加，传播者蜱为终宿主，牛为中间宿主。
实验动物病原微生物检测中的标本采集技术
实验动物病原微生物检测中的标本采集技术实验动物的病原菌和寄生虫多定植于身体的特定部位，检测时需从相应部位采样以提高检出率，因此实验动物的细菌学、真菌学和寄生虫学检测涉及的标本种类众多，且采样方法和样品的制备各不相同。
一、细菌和真菌检测时的标本采集（一）皮毛、鳞屑标本将动物进行吸入麻醉（乙醚等）后适当保定，待检部位用75%乙醇消毒，直接用灭菌接种刀、镊刮取皮毛、鳞屑少许。
（二）呼吸道分泌物标本将动物麻醉后仰卧保定，并使四肢舒展固定。
用75%乙醇从腹股沟到颈部进行逆毛涂刷消毒，沿腹正中线从腹部以下至下颌剪开皮肤，使腹部、胸部以及颈部肌肉全部暴露，无菌分离颈部肌肉暴露气管，于咽部以下5mm左右气管上剪一“V”形口，插入无菌接种针由下至上直达咽部轻轻转动数下，沾取气管分泌物。
如分泌物过少，可将咽部及部分气管剪下增菌培养。
（三）回盲部内容物标本将动物麻醉后仰卧保定，并使四肢舒展固定。
用75%乙醇从腹股沟到颈部进行逆毛涂刷消毒，沿腹正中线从腹部以下至下颌剪开皮肤，使腹部、胸部以及颈部肌肉全部暴露，无菌剪开腹部肌肉暴露回盲部，在回盲部剪一小口，用接种环伸入直接挑取适量内容物。
如内容物过少，可剪下包括回盲部在内的一段肠组织适当剪碎后作增菌培养。
（四）粪便标本将粪便前段弃去，取中段粪便，加适量PBS或培养液匀浆后接种，如为稀软便可直接接种。
（五）肛拭标本将灭菌棉签用生理盐水或培养液浸润后，轻轻插入动物肛门深处3～4cm，缓缓转动后取出。
（六）病灶组织分泌物及浓汁标本标本用于直接接种时，保定动物并对病灶周围用75%乙醇消毒，用接种环直接沾取分泌物或脓汁进行接种，或取下少量病变组织（对已死亡动物）于培养基表面接触后再划线接种；标本用于制备涂片时，可于载玻片上滴加适量灭菌生理盐水，挑取少量脓汁与之混匀且风干，火焰上固定，或取适量病灶分泌物与生理盐水混匀涂抹成相对较浓的涂片。
二、检测体内寄生虫的标本采集和制备体内寄生虫寄生于肠道、血液和组织内，检测时须根据不同的寄生部位采集相应标本。
家禽常见的血液原虫性寄生虫病及其防治
2021年第05期多种禽鸟是许多血液原虫的宿主,本文提及的禽血液原虫包括球虫、变形血原虫、住白细胞虫和疟原虫。
大部分感染不明显也不易确诊,这种信息不明对诊断和防控提出了挑战。
诊断通常经显微镜检查血涂片或组织切片,对寄生虫在组织的分布、大小和物理结构特点进行辨别。
从经济效益考虑,这些疾病很少进行治疗,且有效的疗法很少。
必要时,可考虑应用氯羟吡啶。
养禽场重在做好生物安全防控措施。
1禽常见血液原虫性寄生虫病球虫类原虫主要寄生于笼养禽鸟,也可能有雀形目野鸟。
这些微生物与其他已知的艾美耳亚目成员如弓形虫、兰克斯特球虫属或等孢子球虫属等多年存在分类学关系的争议。
寄生虫通过粪-口途径传播;生活史包括肠道和肠道外两个阶段。
卵囊在鸟粪中排出。
通过显微镜检查与等孢子球虫属区别卵囊是困难的。
孢子化的卵囊有两个胞囊和四个子孢子。
雏鸟会发生急性死亡,成鸟可慢性感染并且没有症状。
常见肝脾肿大。
慢性感染的鸟的肝和脾有类似肿瘤的病变。
当清楚的切面位于单核细胞的细胞核时寄生虫可在显微镜下观察到,有时在红细胞中。
细胞学检测对肠道外阶段有效,组织病理学对肠道阶段有效。
,并与疟原虫和住白细胞虫有相似性。
感染有宿主特异性。
在家禽和观赏鸟发病的是火鸡变形血原虫,已经在家养和野生火鸡确诊;在鸽子的鸽变形血原虫和萨氏变形血原虫,以及水禽的小鸭变形血原虫。
(2)流行。
叮咬的蚊蝇是传播的媒介。
孢子生殖发生在昆虫宿主体内,进入禽鸟宿主是通过蚊虫叮咬。
裂殖体一般感染肺血管内皮或其他血管内皮细胞。
裂殖子入侵红细胞并成熟。
有些种类的变形血原虫有第二个分裂生殖周期,裂殖子入侵红细胞之前在心肌和骨骼肌中有大裂殖体。
(3)临诊。
多数感染是不明显的,且不能诊断。
报道在鹌鹑、火鸡、鸽子和一些鹦鹉有临床症状。
一般只有少部分的感染禽鸟表现出临床症状。
对火鸡实验性感染火鸡变形血原虫会出现严重跛行、腹泻、精神萎靡、消瘦和厌食。
也有贫血和肝肿大的报道。
与大裂殖体相关的肌肉病在野生火鸡有报道,横纹肌内有平行于肌纤维方向的纺锤形包囊。
5-1寄生虫病的诊断技术-兽医学概论(动物科学专业使用)
组织或组织液内寄生虫病诊断
1.淋巴结穿刺、染色检查（泰勒虫柯赫氏蓝体） 2.取腹水抹片、染色检查(适用于弓形虫病) 3.生殖道原体检查法： 寄生于生殖道的虫体主要有牛胎儿三毛滴虫和马媾疫 锥虫。 牛胎儿毛滴虫存在于病母牛的阴道与子宫的分泌 物、流产胎儿的羊水、羊膜或其第四胃内容物中，也存在 于公牛的包皮鞘内，应采取以上各处的病料寻找虫体。
离心集虫法
其操作过程是，采病畜抗凝血 6~7 毫升，以每分钟 500 转的速度，离心5 分钟，使其中大部分红细胞沉降；而后 将含有少量红细胞，白细胞和虫体的上层血浆移入另一离 心管中，补加一些生理盐水，以每分钟 2500 转的速度离 心10分钟。取沉淀物制成抹片，按上述染色法染色检查。 此法适用于伊氏锥虫病和梨形虫病。 其原理是锥虫和感染有梨形虫的红细胞较正常红细胞 的比重为轻，所以在第一次沉淀时，正常红细胞下降，而 锥虫和感染有梨形虫的红细胞尚悬浮在血浆中。第二次离 心沉淀时，则将其浓集于管底。
（2） 幼虫检查法
1.漏斗幼虫分离法（贝尔曼法）：取粪便15~20克，放在漏斗 内的金属筛上，漏斗下接一短橡皮管，管下再接一小试管。 2.粪便培养法：在培养皿底部加滤纸一张，而后将欲培养的粪 便加水调成硬糊状，塑成半球形，放于皿内的纸上，并使半球 形粪球的顶部略高出平皿边沿，使加盖时与皿盖相接触。将此 皿置25℃温箱中，注意保持皿内湿度（应使底部的垫纸保持潮 湿状态）。经7天后，多数虫卵即可发育成第三期幼虫，并集 中于皿盖上的水滴中。将幼虫吸出置载玻片上，放显微镜下检 查。 3.毛蚴孵化法：日本血吸虫
外寄生虫病的诊断-检查方法
1.肉眼检查： 适用于痒螨
2.显微镜检查：适用于疥螨，将刮下的皮屑，放于载玻片 上，滴加50%甘油溶液，覆以另一张载玻片。搓压玻片使 病料散开，分开载玻片，置显微镜下检查。 3.虫体浓集法
规模化养牛场血液原虫病的诊断报告
规模化养牛场血液原虫病的诊断报告作者：黄涛谭召军来源：《湖北畜牧兽医》2014年第03期摘要：对贵州省某规模化养牛场出现临床症状的奶牛29头进行血液原虫检查。
结果表明，所送检的29头奶牛的血液样本均有不同程度的血液原虫的感染。
感染血液原虫的种类包括附红细胞体、牛巴贝斯虫及牛环形泰勒虫。
发病奶牛场进行治疗之后，疫情得到缓解。
关键词：血液原虫；临床症状；诊断；治疗中图分类号：S858.23文献标识码：A文章编号：1007-273X（2014）03-0050-01血液原虫病是根据动物的病原原虫的寄生部位命名[1]。
牛血液原虫病主要为动物梨形虫病，由顶复门（Apicomplexa）、梨形虫纲（Piroplasmea）中的巴贝斯科（Babesiidae）和泰勒科（Theileriidae）原虫所引起一类血液原虫病，并包括易与梨形虫病混合感染的牛的红细胞的边缘边虫（Anaplasmamarginale）和附红细胞体（Eperythrozoon）病[1-3]。
该类病在世界各地流行，我国各地也常有发生，造成畜牧业巨大经济损失。
临床上常常引起牛羊的高度贫血，黄疸，高热，巴贝斯虫亦能引起血红蛋白尿[4]。
1材料与方法1.1材料无菌采集贵州省某发病牛场牛静脉血液样本29份。
1.2方法1.2.1流行病学调查对该养殖场进行发病牛的流行病学调查，记录结果。
1.2.2临床症状观察对规模养牛场的29只发病牛进行临床症状观察，并记录结果。
1.2.3实验室检查及诊断从牛静脉无菌采取肉牛血液制成涂片，经甲醇干燥、固定和姬姆萨染色后镜检，观察虫体形体、大小和位置，判断有无血液原虫并确认血液原虫的种类。
2结果2.1流行病学调查结果该养牛校区牛存栏约2 000头，其中本地黄牛有1 000头左右；、外地引进黄牛约1 000头。
牛场自2013年8月开始出现以上症状。
养殖方式兼有山地放牧，且根据贵州省调查血液原虫常发生于5～10月。
2.2临床症状牛只出现咳嗽，体温升高至40.5℃，呈稽留热。
家禽常见的血液原虫性寄生虫病及其防治
饲料营养不全面，各种营养物质之间的不平衡,尤其是 维生素缺乏时不利于肠道粘膜的健康发育,诱发鸡群感染球 虫病。饲料中盐分含量过高时，鸡群饮水量增加,不利于水线 管理、增加漏水的频率，引起鸡体肠道代谢紊乱，肠道菌群失 去平衡，发生肠道炎症，从而诱发鸡群感染球虫病。饲料发生 霉变，发生霉菌毒素超标，致使鸡群霉菌中毒，引起肠道炎 症，从而诱发鸡群感染球虫病。另外免疫接种不科学,球虫免 疫失败，也是造成鸡群暴发球虫病的主要因素。 2 临床症状
DOI:10.3969/J.ISSN.1671-6027.2021.05.169
在鸡群饲养过程中，球虫病的发生相对普遍，给鸡群带 来的危害非常严重，必须做好完善的防治措施，同时还要正 确掌握鸡球虫病的临床症状和诊断技巧，每天认真观察鸡群 精神状态，一旦发现有感染球虫病的征兆,立即采取相应的、 合理化的防治措施,才能有效控制球虫病，降低养鸡成本和 对鸡群的危害。 1发病原因
作者简介:房德明1 972〜)，山东诸城人,大专,助理畜牧师, 研究方向:动物养殖和疫病防治。
根据典型的临床症状、剖检病变可以初步诊断鸡群是否 感染了球虫病, 通过实验室粪便涂片检查是否存在球虫虫 卵,还可以刮取病变部粘膜少许，放在载玻片上再滴1~2滴 甘油饱和盐水混合均匀,盖上盖玻片,放在显微镜下观察是 否有典型的球虫卵囊。如有球虫卵终可确诊感染球虫病。
(1) 概况。住白细胞虫病是禽鸟的急性或慢性的原生动 物病,包括:火鸡、鸭、鹅、珍珠鸡和鸡。这种病最早在野生鸟 类发现，并于1 895年有对火鸡的报道。最近十年很少有急性 住白细胞虫病在家禽暴发的报道。这种病一般临床症状不明 显。 急性暴发多数是雏鸟袁而成鸟( 种群) 一般发生慢性病症。
羊寄生虫病实验室检验技术
一、尿液的采集与保存 采集：直接与导尿法 保存：加入防腐剂
甲笨： 0.5—1% 硼酸:1/400 甲醛:100ML 加 3—4 滴 麝香草酚 :100ML 加 0.1G
二、尿液的物理学检查
1 、尿量： 2 、尿色： 3 、气味 4 、密度
三、尿液的化学检查
1 、 PH 值：草食动物呈碱性，肉食动物呈酸 性
许多传染性疾病
血红蛋白尿（血红蛋白分解形成） 意义：新生幼龄动物溶血病、焦虫病、锥虫病、 大面积烧伤、氟化物中毒、四氯化碳中毒等。
5 ）肌红蛋白检查 意义：见于马麻痹性和地方性肌红蛋白尿病、白
肌病、重剧肌肉损伤。 6 ）酮体检查 意义：酮体增多，见于牛酮血症、前胃弛绶、 脂肪分解代谢增强（糖尿病，产后瘫痪等）。 另外长期饥饿，衰竭症、恶性肿瘤、磷中毒、氯
内 容 ： １、红
细胞计数
２、白细胞计数
３、白细胞分类计数
意义：
增加 红
细
胞
计
数
减少
各种 脱水
各种 贫血
营养 代谢 病
血孢子 白血病
病
恶性肿瘤
白
增加
细
胞
计
数
减少
嗜中性白细胞
白 细
嗜酸性白细胞
胞
分
嗜碱性白细胞
类
计
淋巴细胞
数
单核细胞
细菌与 真菌感染
病毒或长期药物 某些血液原虫病
营养衰竭
嗜中性白细胞
1 、增多：细菌性传染病、化脓性炎症、酸中毒及大 手术后 1 周内。
减少 --- 肠道阻塞、多尿性肾炎后期、
腹泻、口服抗生素药物。
四、尿液沉楂显微镜检验
尿沉楂主要有两种：无机（各种盐类结晶）与 有机沉楂（上皮细胞、红、白细胞与脓细胞、 各种管型及微生物）
动物血液常规检查工作流程
动物血液常规检查工作流程动物血液常规检查工作流程如下：
１．采样。
根据医生处方领取EDTA抗凝管，根据动物体型选用合适的静脉采集静脉血，注意采血时间不能过长负压不能过大，将血液沿着侧壁注入抗凝管，注入后盖紧帽盖并上下颠倒4-5次充分混匀，样品编号。
２．血常规检测。
打开SYSMEX血球仪样本室，打开盖帽，在操作界面选择动物种类、样本编号，将样品放入样本室进行检测，检测结束后记录结果并审核。
３．结果分析与报告。
医生需要仔细阅读报告，并进行结果的分析，将报告和分析结果告知宠物主人。
应用间接ELISA法检测牛(牦牛)原虫病感染的试验报告
１ 。 取 出试 剂 盒 ，用蒸 馏 水 或 去 离 子 水稀 释 ２ ．１ ４ ０ 倍 浓度 的洗 涤液 （ 释之 前确保 所 有 的结 晶 已经溶 稀
解 ， 用 时溶液 置于 ４Ｉ 存 ） 不 ｃ保 ＝ 。
作 为 免 疫 学 检 查 法 之 一 的 酶 联 免 疫 吸 附试 验
音 布鲁克 、 塔城 、 昌吉 、 克逊 等 ５个地 区共 ９ 托 １份样
１２ 仪器 设 备 ＿
新孢 子 虫 是一 种 细胞 内寄 生性 原 虫 ， 为其 主 犬
要 的终 末 宿 主 ， 他 多 种 哺乳 动 物 和犬 本 身 都 可作 其
为 中间 宿主 。新孢 子虫 病是 由犬 新孢 子虫 寄生 于多
（ ＬＳ ， 作 简 便 ， Ｅ ＩＡ） 操 不需 要 特 殊 仪器 设 备 ， 于标 易
准化 ， 济实用 。作者应 用 酶联 免疫 吸 附试 验 （ 经 主要
１４２ 加 一 抗 ： 洗 涤缓 冲 液 冲 洗 ２次 ； 稀 释缓 ．． 用 用 冲液按 １ ０ ： ０滴 度稀 释 被检 血 清后 ，每个 样 品 平行 １ 加 到微量 板 的两 个孔 中 ， 每孔 １０ ｌ置 ３ ℃生 化 培 ０１， ７ ｘ 养箱 温育 １ 。 ｈ １４３ 加二 抗 ： 洗 涤 缓 冲 液 冲洗 ２次 ； 稀 释 液 ．． 用 用
种 动物 引起 的 ， 泛分 布于 世界 各地 ， 广 主要 危 害是 引
Ｋ Ｓ － ３ ０型酶 标仪 ；０ ｌ１０ ｌ２ ０ ｌ 量 ＨＢ Ｔ ６ ５ ｕ 、０ ｕ 、０ ｕ 微 移液 器 ； ＬＳ Ｅ ＩＡ板 、 Ｉ Ｉ Ｅ ２ 一 Ｒ 型高 速 低 温离 心 ＤＧＣ Ｎ ０
机购 ［ 西班 牙 Ｏ Ｔ Ｌ Ｅ Ａ公 司 。 ｊ Ｒ ＯＡ Ｒ Ｓ １３ ｒ Ｓ ． Ｅ ｌＡ试 剂盒 及其 组装 Ｌ
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动物血液原虫病病原检查技术
一、实验目的要求
掌握动物血液原虫病的血液涂片技术和染色方法；正确判断各种常见血液原虫的形态特点。
二、实验器材
（一）仪器设备生物显微镜（带油镜镜头）、载玻片、注射针头、剪刀、染色缸
（二）试剂姬姆萨氏染料、甘油、甲醇、香柏油
（三）实验动物鸡
（四）示教标本
1．伊氏锥虫
2．双芽巴贝斯虫
3．环形泰勒虫
4．卡氏住白细胞虫
5．沙氏住白细胞虫
三、实验方法、步骤和操作要领
（一）姬姆萨氏染色液的配制
1．姬姆萨氏染色液原液配方。
姬姆萨氏染色粉 0.5g
中性纯甘油 25ml
无水中性甲醇 25ml
2．姬姆萨氏染色液原液配制过程。
（1）先将姬姆萨氏染色粉置研钵中，加少量甘油充分研磨，再加甘油再研磨，直至甘油全部加完为止。
将其倒入棕色小口试剂瓶中，在研钵中加入少量甲醇以冲洗甘油染液，冲洗液仍倒入上述瓶中，再加甲醇再洗再倒入，直至25 ml甲醇全部用完为止。
（2）塞紧瓶盖，充分摇匀，而后将瓶置于65℃温箱中24h或室温3～5d，并不时摇动，然后过滤到棕色小口试剂瓶中，即为原液。
（二）血液涂片的制作及染色
1．血液涂片的制作。
（1）薄片法（适合于观察红细胞内虫体，如巴贝斯虫）。
①用消毒注射针头刺破鸡的翅下静脉。
②用洁净载玻片的一端，从鸡的翅下静脉穿刺处接触血滴表面，蘸取少量血液。
③另取一块边缘光滑的载玻片，作为推片。
先将此推片的一端置于血滴的前方，然后稍向后移，触及血滴，使血液均匀分布于两玻片之间，形成一线。
④推片载玻片与血片载玻片成30～45°角，平稳地向前推进，使血液接触面散布均匀，即成薄的血片。
⑤抹片完成后，立即置流动空气中干燥，以防血球皱缩或破裂，并加甲醇固定，待干。
（2）厚滴法（适合于观察血浆内虫体，如伊氏锥虫）。
①取血液1～2滴置洁净载玻片上。
②用另一块载玻片之角，将血滴涂散至直径1cm即可。
③置室温中待其自行干燥(至少经1h之久，否则血膜附着不牢，染色时易脱)。
④染色前先将血片置于蒸馏水中，使红细胞溶解，血红蛋白脱落，血膜呈灰白色为止，再进行染色。
2．血液涂片的染色过程。
（1）血片用甲醇固定2 min。
（2）将血片浸于用10份蒸馏水加1份染液稀释的染色液缸中30 min (过夜最好)。
或将蒸馏水与染液按2∶1稀释好的染色液直接滴加于血片上，染色10 min 。
（3）血片取出后，用洁净的水冲洗。
待干镜检。
附：血液涂片的制作及染色流程图。
（图16-1）
图16-1 血液抹片的制作及染色流程图
四、实验注意事项
1．配制染色液时姬姆萨氏染料必须充分研磨。
2．采血前先用酒精棉消毒待干，以免皮屑污染血片和酒精溶血。
3．取血滴时必须在针头刺破后流出的表层血液用玻片迅速蘸取，以免血液凝固。
4．注意在病畜出现高温期，未作药物处理前采血，以提高虫体检出率。
5．涂片时血膜不宜过厚，使红细胞均匀分布于玻片上。
6．血片必须充分干燥后再用甲醇固定，以免血膜脱落。
五、实验报告
如何制作染色效果好且无杂质污染的血液涂片？试作分析、阐述。
附：参考资料
1．家畜常见血液原虫的形态特征描述。
（1）伊氏锥虫。
伊氏锥虫寄生于动物血浆内，虫体呈纺锤或柳叶状，体长18～24µm，宽1～2µm。
前端比后端更尖。
经姬姆萨染色后，虫体呈淡蓝色。
在显微镜下可看见下列几部分构造：①原生质：浅蓝色部分。
②核：在虫体中部呈紫红色椭圆形。
③副基体：在虫体后端呈紫红色的小圆点。
④波动膜：在虫体的一侧呈波状。
⑤鞭毛：在虫体后端，从付基体附近的毛基体开始围绕波动膜边缘，直到虫体的前端游离，呈细长鞭毛状。
（图16-2、图16-3）
（2）双芽巴贝斯虫。
双芽巴贝斯虫寄生在红细胞内。
虫体较大，有梨形、环形、椭圆形、变形虫形等。
典型虫体呈双梨形，细的一端联在一起成锐角排列。
虫体大于红细胞半径，经姬姆萨染色后，原生质浅蓝色，边缘较深，有二团紫红色的染色质。
（图16-4）
图16-2 锥虫模式图
1.核
2.波动膜
3.副基体
4.生毛体
5.颗粒
6.空泡
7.鞭毛
图16-3 血液涂片中的锥虫
（3）环形泰勒虫。
环形泰勒虫寄生在牛的淋巴细胞、巨噬细胞及红细胞内。
配子体呈小环形，短棒状或逗点状。
在每个红细胞中通常有1～5个虫体，大小为0.7～2.9µm，染色后原生质呈浅蓝色，染色质呈紫红色。
（图16-5）
裂殖体，又称石榴体，有不同形状和大小，存在于淋细胞的胞浆中或淋巴液中。
通常可看到浅蓝色的原生质背景上有暗紫色数目不等的染色质核。
（图16-6）
2．家禽常见血液原虫的形态特征描述。
（1）卡氏住白细胞虫。
卡氏住白细胞虫配子体寄生在鸡的血细胞内。
配子体刚侵入红细胞时呈圆点状或逗点，每个红细胞内可有1～3虫体（图16-7）。
随着虫体的发育长大，红细胞的胞浆及胞核萎缩消失，配子体变为近圆形，大小为15.5×15.0μｍ；有一紫红色的核仁（图16-8）。
图16-4 血液涂片中的双芽巴贝斯虫
图16-5 泰勒虫配子体图16-6 泰勒虫裂殖体（石榴体）
（2）沙氏住白细胞虫。
沙氏住白细胞虫配子体寄生在鸡的血细胞内。
虫体常把红细胞的核推至一边，引起红细胞严重变形，呈梭状或纺锤形。
（图16-9）
图16-7 卡氏住白细胞虫第Ⅰ期配子体
图16-8 卡氏住白细胞虫第Ⅴ期配子体
图16-9 沙氏住白细胞虫配子体。