糖化血红蛋白标准化及检测方法比较
糖化血红蛋白标准化和检测准确度现状(续)
糖化血红蛋白标准化和检测准确度现状(续)冯仁丰【摘要】糖化血红蛋白A1c(HbA1c)是诊断糖尿病和监测其治疗效果的重要指标.在国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)定义了HbA1c的被测量之后,经过各方的努力,全球各临床实验室HbA1c检测结果间的差异正逐步减小.所有提供HbA1c检测产品的厂商都不会客观地描述自己产品的弱点,只会强调其优点和临床价值.面对HbA1c检测的现状,临床实验室必须充分了解每个产品的特性及其不足之处,在将产品用于临床检测前必须验证产品的分析性能.只有确认其分析性能能够用于临床检测时,才能使用.一个实验室内必须具备2种不同检测方法的产品,这样才能识别患者样品内有无异常血红蛋白.目前,尽管人们认为免疫学方法检测HbA1c时无异常血红蛋白的干扰,但国际上尚未从临床上对各种异常血红蛋白的影响作出客观的判断.为了患者的利益,临床实验室一定要充分了解更多的信息.【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2016(031)006【总页数】5页(P437-441)【关键词】糖化血红蛋白;标准化;准确度【作者】冯仁丰【作者单位】上海市临床检验中心,上海200126【正文语种】中文【中图分类】R446.11968年，RAHBAR等[1-2]首次发现糖尿病患者HbA1c升高。
40余年以后，HbA1c已成为糖尿病诊断和治疗一个不可或缺的指标。
自从DCCT、UKPDS等临床试验开展以来，HbA1c检测的标准化工作获得了相当大的进展，明确了糖尿病患者血糖控制（由HbA1c检测确定）与其并发症之间的关系[3]。
由于HbA1c检测方法的发展，各大厂商在其产品特点和检测准确度宣传上有很多针对异常血红蛋白影响HbA1c检测结果的介绍。
尤其是我国，在厂商刻意夸大宣传的情况下，临床实验室对其产品优点和缺点的了解很模糊。
其实，任何一个检测方法都有其特点和优点，也一定有不足之处。
（一）血红蛋白病血红蛋白病是由于血红蛋白分子结构异常（异常血红蛋白病）或珠蛋白肽链合成速率异常（珠蛋白生成障碍性贫血，又称地中海贫血）所引起的一组遗传性血液病。
糖化血红蛋白高效液相色谱法和金标法的区别
糖化血红蛋白高效液相色谱法和金标法是两种常用的检测糖尿病患者血糖控制情况的方法，它们在原理、操作流程、应用范围等方面存在着一定的差异。
本文将从这些方面对这两种方法进行比较，帮助读者更好地理解它们的异同。
一、原理1. 糖化血红蛋白高效液相色谱法（HPLC）糖化血红蛋白高效液相色谱法是利用高效液相色谱仪对血液中的糖化血红蛋白进行检测的方法。
其原理是利用高效液相色谱柱对血浆样品中的糖化血红蛋白和非糖化血红蛋白进行分离，并通过检测器检测各组分的信号强度，从而 quantitatively 测定血浆中糖化血红蛋白的浓度。
2. 金标法金标法是一种基于化学发光原理的糖化血红蛋白检测方法，其原理是将血浆样品中的糖化血红蛋白与金标记的抗糖化血红蛋白抗体结合，形成复合物，然后通过化学发光仪测定复合物的发光强度，根据发光强度来确定糖化血红蛋白的浓度。
二、操作流程1. 糖化血红蛋白高效液相色谱法（HPLC）（1）取血浆样品，处理样品使之具备色谱法测定的条件。
（2）注射样品至高效液相色谱仪中，经过柱分离和检测器检测。
（3）根据检测结果计算糖化血红蛋白的浓度。
2. 金标法（1）取血浆样品，加入金标记的抗糖化血红蛋白抗体，形成糖化血红蛋白-抗体复合物。
（2）加入化学底物，产生化学发光反应。
（3）用化学发光仪测定发光强度，根据发光强度计算糖化血红蛋白的浓度。
三、应用范围1. 糖化血红蛋白高效液相色谱法（HPLC）HPLC法需要专门的设备和技术人员进行操作，适用于临床检测中心或大型医院。
2. 金标法金标法操作简便，不需要复杂的设备，可以在医院的常规化验室中进行。
金标法更适用于基层医疗机构和社区诊所等地方。
四、总结糖化血红蛋白高效液相色谱法和金标法是两种常用的检测糖尿病患者血糖控制情况的方法，它们在原理、操作流程、应用范围等方面存在着一定的差异。
熟悉这些差异，有助于临床医生根据实际情况选择合适的方法进行检测，以更好地指导糖尿病患者的治疗和管理。
糖化血红蛋白几种常见检测方法
直存在 ， 故体 内衰老红细胞 比新生红细胞的糖化 血红蛋 白含量约 公司产品 ， 相应 的仪器 以英 国 Ｄ Ｅ Ｓ ＩＮ ＩＩ Ｒ Ｗ ＣＥ ＴＦＣ公司 Ｄ 糖 化 Ｓ５ 高出 １５倍 。每一个红细胞 内都有血红蛋 白， ． 而红细胞 的寿命为 血红蛋 白仪为例（ ｉ ａ 司 ＩＳ Ａ亦为 同一产 品） 采用微 Ｂｏ—Ｒ ｄ公 ＡＴ ，
白结合越多 ， 糖尿病 病情 也越 重 。它 避免 了每 日的血糖 值 的波 白 Ｓ Ｈ Ｓ 与血红蛋 白 Ｃ Ｈ Ｃ 的存 在与否 ， （ ｂ） （ｂ） 在计算糖 化血红蛋
动， 与病人抽血时问、 是否空腹 、 否使用胰 岛素等因素无关 。当 是 白值 时会 自动扣除变异体产生 的影响 ， 从而使 结果更为准 确 ， 可 变异系数 （ Ｖ） ＜２ Ｃ 值 ％。同时该 仪器 配有专 门 的稀 释 溶血 糖尿病控制较好时其浓度在一定值范围 ， 如糖尿病控制不佳时其 靠 ， 可直接进行全血操作 ， ｍ ｎ即可 报告结果 ， 自动储 存样 品 ５ ｉ 并 浓度可高至正常 的 ２倍 以上 。因此成为糖 尿病治疗 过程 中疗 效 器 ， 层析柱价格也较为低廉 ， 适合 于较多标本的医院检测 ， 监测的重要手段 。Ｈ Ａ ｃ检测 用于 常规实验 室始 于 ２ 纪 ７ 检测结果 ， ｂ１ ０世 ０
Ｈ ｂ及 Ｈ Ａ ｂ １带正电荷 ， 电泳时向负极
ｂ 带 目前临床实验室 中应用的糖化 血红蛋 白检测方法 主要有两 移动 。因为 Ｈ Ａ的 Ｂ链 Ｎ一末端所 带电荷被 糖基 消除 ， 电量 ｂ 等 泳 所 ｂ １即 Ｇ ｂ 身带 红 Ｈ 本 大类 ： 一类 方法基 于糖化血红蛋 白与非糖化血红蛋 白所带的电荷 少 于 Ｈ Ａ， 电点 低 ， 动速 度慢 ， 以 Ｈ Ａ 所 ｂ ｂ的量来表示 。毛细 不 同， 如离子层析法 、 电泳等方法 ； 另一类方法基于血红蛋 白上糖 色 ， 以可直接 比色或扫描 。用 Ｈ Ａ１占 Ｈ 化基团 的结构特点 ， 如亲 和层析 、 离子捕 获法和免疫 法等 。其 中 管 电泳也能分离检测糖化血红 蛋 白和血红 蛋 白的变 异体。普通 高效液相离子层析法（ Ｐ Ｃ 被公认为金标法 。 ＨＬ）
三种方法检测糖化血红蛋白的结果对比分析
三种方法检测糖化血红蛋白的结果对比分析目的：评估免疫比浊法、酶法与离子交换高效液相色谱法测定HbA1c 的结果是否具有可比性。
方法：随机抽取2013年5月检测糖化血红蛋白的标本，同时用三种方法检测糖化血红蛋白。
结果：（HPLC）法的检测结果的平均值与酶法、免疫比浊法检测结果的平均值差异明显，在使用免疫比浊法、酶法检测HbA1c 时，应在报告中注明方法学及标准化的溯源。
以便临床医生对检验科使用的方法学、原理与及参考范围的了解，对病人的诊断、治疗方案、疗效等作出正确判断。
标签：糖尿病、糖化血红蛋白、方法学糖尿病（DM）是常见的、多系统的疾病，影响了碳水化合物、蛋白和脂类的代谢，以及伴有许多退化的并发症。
糖尿病是全世界主要的公共健康问题，已经影响了数亿人，在中国同样情况严重[1]。
糖化血红蛋白是葡萄糖与血红蛋白β链氨基酸末端缬氨酸残基结合产生的一种特定的糖化血红蛋白，它能客观地反应测定前2～3 个月的平均血糖水平，已作为诊断糖尿病的一个标准，在临床上诸多方面广泛应用。
测定方法主要有电泳法、免疫法、层析法、酶法等，其中离子交换高效液相色谱（HPLC）法是公认的金标准检测法[1，2]。
HPLC 法需要特定的仪器，价格昂贵；免疫法、酶法由于可在生化仪上测定，所以已被广泛使用。
为了评估免疫比浊法、酶法测定HbA1c 的结果与离子交换高效液相色谱法的测定结果是否具有可比性，对在我院随机抽取的40例到我院检测糖化血红蛋白的病人的标本，用三种方法检测后，对结果比对分析，现将结果报道如下：1.对象与方法1.1研究对象随机抽取2013年5月40例在安顺市人民医院检测糖化血红蛋白的病人的血标本，同时用三种方法检测糖化血红蛋白。
1.2标本采集清晨空腹采肘静脉血4ml，分装两管用EDTA-2K抗凝，于2小时内同时测定。
1.3检测方法HPLC法的仪器为伯乐D-10，试剂包、校准品、质控品均为原装配套试剂。
免疫比浊法、酶法的仪器使用OLYMPUS AU2700全自动生化分析仪，免疫比浊法的试剂盒为美康试剂盒，酶法试剂盒、标准品均为日本积水医疗株式会试剂。
两种不同方法测定糖化血红蛋白的比较
两种不同方法测定糖化血红蛋白的比较目的比较硼酸亲和层析法(A法)与离子交换高效液相层析法（B法）在测定糖化血红蛋白中的差别，选择一种方便、快捷、准确、适合大批量及自动化的检测方法。
方法A法、B法分别采用硼酸亲和层析法和离子交换高效液相层析法，对两种方法的精密度、变异系数、相关性、甘油三酯的干扰等予以评价。
结果B法在SD、CV等方面的统计数据优于A法，而两种方法的相关系数r ＝0.98，表明两种方法有高度的相关性，并且高甘油三酯对两种方法均无明显影响。
结论A法人为影响因素大，但是无需特殊仪器，检测时间短，单独标本可随机检测，适合急诊、基层卫生机构的使用。
而B法准确度及精密度高，可进行自动化控制，测量速度快。
[Abstract] Objective To compare the differences of boric acid affinity chromatography (A method) and ion exchange high performance liquid chromatography method (B method) in the determination of glycated hemoglobin, to select a detection methods of convenient, fast, accurate and suitable for high-volume and automated. Methods Method A and method B were used boric acid affinity chromatography and ion exchange high performance liquid chromatography respectively. Evaluated the two methods about precision,coefficient of variation,correlation analysis and the interference of triglyceride etc. Results Method B was superior to method A in the the statistical data of SD, CV, etc , while the correlation coefficient of two methods was 0.98, indicating that the two methods were highly correlated, and high triglycerides was no significant effect to the two methods. Conclusion Method A is easily influenced by artificial factors, but no special equipment, testing time is short, single specimens can be random testing for the emergency and the use of primary health facilities. Method B is very good in accuracy and precision, can be automated control and with high speed.[Key words] Glycosylated hemoglobin ; Boric acid affinity chromatography; High-performance liquid chromatography糖尿病是一种常见的、终生性的内分泌代谢障碍性疾病，具有慢性高血糖，伴随因胰岛素分泌不足或作用无效引起的糖、脂肪和蛋白质代谢紊乱，可导致不同脏器的损伤、功能障碍和衰竭，目前发病率仅次于心脑血管疾病和肿瘤。
两种糖化血红蛋白测定方法的比较
６ １ ） 异 常 组 （ ． ～ １ 和 不 分 组 （ ～ １ ） 并 埘 ． 、 ６１ ４ ． ０ ４） ３ ４ ，
有 关数 据进 行 统 计 分 析 。
１ ４ 统 计 学 处 理 用 Ｅ ｃ ｌ 件 进 行 统 计 学 处 理 ， Ｐ＜ ． ｘｅ 软 以 ０ ０ 为 差 异 有统 计 学 意义 。 ．５
２～７ ３ ６岁 。结 果 表 明 ， 同性 别 、 同年 龄 间 差 异 无 统 计 学 意 不 不
Ｅ Ｊ 樊 国萍 ， 定 勇． 清 ａＬ 岩 藻 糖 苷 酶 在 原 发 性 肝 癌 诊 断 ２ 周 血 —一 中 的应 用 Ｅ］ 淮 海 医 药 ，０ １ ２ （ ）１ ４ Ｊ． ２ １ ，９ ２ ：５． ［ ］ 窦 爱 华 ， 斌 ． 藻 糖 苷 酶 对 原 发 性 肝 癌 的诊 断 意 义 再 评 ３ 徐 岩 价 Ｅ］ 中 国误 诊 学 杂 志 ，０ １ １ （ ）８ ６ Ｊ． ２ １ ，１ ４ ：０ ． ［ ］ Ｎ Ｃ Ｓ Ｅ ａ ａｉｎｏ ｒｃ ｉｎｐｒｏｍ ｎｅｏ ｕｎｉ — ４ Ｃ Ｌ ． ｖ ｌ ｔ ｆ ｅｉｏ ｅｆｒ ａ ｃ ｆｑ ａ ｔａ ｕ ｏ ｐ ｓ ｔ
Ｅ］ 李庆琳 ， ６ 叶跃 红 ， 波 ． 指 标 联 合 检 测 在 肝 病 诊 断 中 的 唐 多 意义 Ｅ］重 庆 医学 ，０ ７ ３ （ Ｏ ：０ ． Ｊ． ２０ ，６ １ ） ９ ７ ［ ］ 刘 培 香 ， 正 泉 ． Ｐ、 Ａ１９ Ａ Ｕ 联 合检 测 对 原 发性 肝 ７ 袁 ＡＦ Ｃ ９ 、 Ｆ 癌 的诊 断 价 值 上 ［］ 中 华 现 代 中 西 医 杂 志 ， ０ ５ ３ ６ ： Ｊ． ２ ０ ， （ ）
（ Ｄ Ａ） 凝 全 血 标 本 ７ 份 Ｅ Ｔ 抗 ３ １２ 试剂与仪器 ． Ｈｂ ｃ Ｈｂ试 剂 及 标 准 、 控 品 来 源 于 北 Ａｌ 、 质 京利德曼公 司， 仪器 为 日立 ７ ０ ６ ０全 自动 生 化 仪 。ＭＱ ２ ０ － ０ ０全
糖化血红蛋白几种常见检测方法
糖化血红蛋白几种常见检测方法2018-8-21 15:41目前临床实验室中应用的糖化血红蛋白检测方法主要有两大类: 一类方法基于糖化血红蛋白与非糖化血红蛋白所带的电荷不同, 如离子层析法、电泳等方法; 另一类方法基于血红蛋白上糖化基团的结构特点, 如亲和层析、离子捕获法和免疫法等。
其中高效液相离子层析法(HPLC )被公认为金标法。
1. 离子层析法离子层析法精密度高、重复性好且操作简单, 被临床广泛采用。
检测原理由于血红蛋白β 链N 末端缬氨酸糖化后所带电荷不同, 在偏酸溶液中总糖化血红蛋白( GH b) 及H bA 均具有阳离子的特性, 因此经过阳离子交换层析柱时可被偏酸的缓冲液平衡过的树脂来吸附, 但二者吸附率不同, GH b正电荷较少吸附率较低, HbA 正电荷较多吸附率较高。
用不同pH 的磷酸盐缓冲液可以分次洗脱出GH b 和H bA, 用KCN 可将H b转化为高铁氰化血红蛋白, 用分光光度计测定。
或者得到相应的H b层析谱, 其横坐标是时间, 纵坐标是百分比。
HbA1c值以百分率来表示。
现在大部分都用全自动测定仪测定,如日本TOSOH 公司生产的全自动糖化血红蛋白分析仪曾应用于美国糖尿病控制和并发证试验( DCCT) 研究, 其离子交换H PLC法是H bA1c检测的金标准。
当前推出的HLC- 723G7从开机到报告第一个结果仅需3. 6 m in, 标本无需前处理, 操作维护都非常方便, 是目前测试GH b精密度、准确性最高的方法。
国内主要采用Bio- Rex70阳离子树脂微柱层析法, 其微柱可重复使用多次,更大型的仪器有SCIENTIFIC公司的Hb- Gold, 除可全自动测定糖化血红蛋白外, 还可分离检测血红蛋白的600多种变异体和亚型, 用于地中海贫血等疾病的诊断。
但其缺点是价格昂贵, 仅在一些发达国家使用, 且容易受到如下干扰: 胎儿血红蛋白(H B -F)与HbA1 c的带电性很相近, 在离子交换HPLC分析图上可能呈现一个独立的H b- F 峰, 也可能与H bA1c 峰重叠( 视离子交换柱的分辨能力而定)。
糖化血红蛋白酶法与HPLC法检测方法学比对分析
［ ２ ］ 张建立 ， 石春雷 ， 汪英 ， 等． 应用 右旋糖酐应 注意 的几个 问题［ Ｊ ］ ．
中国社区医师 ， １ ９ ９ ３ ， ８ （ １ ） ： １ ２ — １ ３ ．
［ ３ ］ 张利军． 用甘油 消除右 旋糖 酐对 总蛋 白测定 的干扰 Ｅ Ｊ ］ ． 检 验 医
检 验 医 学 与 临床 ， ２ ０ ０ ９ ， ６ （ ４ ） ： ２ ８ ６ ．
约为 ３ ｈ ［ 。但 从 以上 的病 例来 看 在 使 用 右 旋 糖 酐 的 过 程 中 蛋 白测 定 均 有 异 常 升 高 ， 而停 药 后 有 复 查 的 ３例 病 例 来 看 ， 最 短 的是 ５ ｄ ， 因此 建 议 临 床 医 生 如 果 在 使 用 右 旋 糖 酐 过 程 中 发 现
学， １ ９ ９ １ ， ６ （ １ ） ： ９ ．
以上 再 复 查 ， 以 确 定 血 清 蛋 白的 准 确 值 。 ３ ． ４ 有文献报道 ， 在 双 缩 脲 试 剂 中添 加 １ ５ ｍＬ ／ Ｌ甘 油 ， 可 有
［ ４ ］ 高志亮． 防 止 右旋 糖 酐 对 血 清 总 蛋 白定 量 的 干 扰 ［ Ｊ ］ ． 检验 医学 ，
右 旋 糖 酐 之 前应 先进 行 蛋 白 的 测定 ， 消 除 由此 造 成 的总 蛋 白测
定影响。
（ 收稿 日期 ： ２ Ｏ １ ３ － ０ ４ — １ ８ ）
参 考 文 献 ［ １ ３ 宋新华． 右旋糖酐干 扰双缩脲法 检测血清 总蛋 白的实验研 究［ Ｊ ］
－
检 验技 术与 方法 ・
Ｄ ｏＩ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ Ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ３ — ４ １ ３ ０ ． ２ ０ １ ３ ． ２ ０ ． ０ ４ ４ 文献标识码 ： Ａ 文 章编 号 ： １ ６ ７ ３ — ４ １ ３ ０ （ ２ ０ １ ３ ） ２ Ｏ 一 ２ ７ ３ ０ — ０ ２
糖化血红蛋白国际标准
糖化血红蛋白国际标准糖化血红蛋白（HbA1c）是一种血红蛋白与葡萄糖结合而形成的化合物，它可以反映出人体血糖的平均水平。
因此，糖化血红蛋白作为糖尿病患者血糖控制的重要指标，其国际标准的制定对于临床诊断、治疗及疾病预防具有重要意义。
国际标准的制定是为了统一全球范围内对糖化血红蛋白的检测方法和结果解释，从而使不同地区、不同实验室的检测结果具有可比性和可信度。
目前，国际上采用的糖化血红蛋白检测标准是由国际糖尿病联盟（IDF）和美国糖尿病协会（ADA）共同发布的，其标准是在全球范围内得到广泛认可和应用的。
根据国际标准，糖化血红蛋白的检测方法主要是采用离子交换层析法（HPLC）和免疫测定法（Turbidimetric Immunoassay），这两种方法都具有高灵敏度、高特异性和较好的重复性，能够准确地测定血液中的糖化血红蛋白含量。
此外，国际标准还规定了糖化血红蛋白的浓度范围和临床意义的解释，以便临床医生能够根据标准化的结果进行病情评估和治疗决策。
在临床应用中，糖化血红蛋白国际标准的制定为医生提供了一个客观、标准化的评价指标，有助于准确评估糖尿病患者的血糖控制情况，及时调整治疗方案，减少并发症的发生。
同时，国际标准的推广和应用也为研究人员提供了一个统一的检测方法和结果解释，有利于开展多中心、多地区的临床研究和流行病学调查，为糖尿病的防控和治疗提供科学依据。
总之，糖化血红蛋白国际标准的制定和应用，对于提高糖尿病患者的血糖控制水平，减少并发症的发生，推动糖尿病研究和防控工作具有重要意义。
我们应当充分认识到国际标准的重要性，积极推广和应用国际标准，以促进全球范围内糖尿病的防治工作，提高人民群众的健康水平。
糖化血红蛋白国际标准的制定是一个长期的过程，需要各方的共同努力和支持。
希望各国政府、医疗机构、科研单位和医疗工作者能够加强合作，积极参与国际标准的制定和推广工作，为全球范围内糖尿病的防治作出更大的贡献。
糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化
临床意义：
◦ HbA1c不受短期的血糖浓度波动 所影响，反映近2～3个月血糖控 制的总体水平。
◦ HbA1c可作为糖尿病患者长期血 糖控制的监测指标。
◦ 与糖尿病慢性并发症的发生及发展 有密切关系，影响患者长期预后。
◦ 血糖控制达标的糖尿病患者每半年 检查一次HbA1c。
◦ 血糖控制未达标或治疗方案调整后， 糖尿病患者应每3个月检查一次 HbA1c。
其反义概念可以用数字表示，分别为不确定度、偏差标准差或 变异系数 。
陈文祥、申子瑜、郭健、杨振华,临床检验量值溯源中的重要术语与概念及有关问题 中华检验医学杂志2005年2月第28卷第2期
日本东曹（TOSOH）HLC-723 G7糖化血红蛋白测定 仪及其配套试剂及校准品（简称G7）。
日本爱科来（Arkray）ADAMSTMA1c HA-8160 糖化 血红蛋白测定仪及其配套试剂及校准品（简称8160）。
65%
免疫比浊法 离子交换层析法 亲和层析法 电泳法
2011年
1% 28%
71%
美国伯乐质控品（Lyphochek Diabetes Control，批 号：33810，冻干粉，两个浓度水平），用于验证各系统 的精密度；复溶混匀后分装，-80℃保存。
JCTLM 认证的标物JCCRM411-2（日本JDS Lot4，新鲜
The Diabetes Control and Complications Trial Research Group. N Engl J Med 1993;329:977-86 UK Prospective Diabetes Study Group. Lancet 1998; 352: 837-53
释比例，使用各系统的稀释液对样本进行稀释混匀后，再
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糖化血红蛋白
标准化及不同检测方法的差异
基蛋生物 市场推广部
内容目录
1 2 3 4
糖化血红蛋白（GHB） 检测方法及产品示例 糖化血红蛋白标准化 常用检测方法之比较
糖化血红蛋白（GHb）
Hb 血红蛋白
成人血红蛋白分三种， HbA为主要成人Hb
HbA (?? ??)
SEBIA蛋白质电泳仪
检测方法：等电点聚集法
在聚丙烯酞凝胶中加入载体两性介 质（如ampholin）的薄板上形成一 个由阳极到阴极逐渐增加的pH梯度。 溶血液中各个组分将移动到各自等 电点的pH位置上，这样就得到比一 般电泳法更好的分划效果和比较集 中的色带。
GE Ettan IPGphor 3等电聚焦电泳仪
伯乐In2it糖化血红蛋白仪
Alere Afinion? AS100 Analyzer
检测方法：免疫法
化学发光法：又叫离子捕获法，采用 离子捕捉免疫分析法，应用抗原抗体 反应原理，联合荧光标记物，通过连 接带负电的多阴离子复合物，吸附到 带正电的纤维表面，经过一系列彻底 清洗等步骤后，测定荧光强度变化率， 计算浓度。
检测方法：毛细管电泳法
毛细管电泳能分离检测糖化血红蛋 白和血红蛋白的变异体，样品用量 少、操作简便、重复性好、省时、 高效。 完全自动化操作，简单易用，在减 少人为误差的基础上，重复性也得 到了极大提高。
SEBIA全自动高压液相毛细管电泳仪
检测方法：琼脂凝胶电泳法
Hb于酸性缓冲液条件下(pH6.0)，在 琼脂糖凝胶上的电泳迁移取决于Hb 在凝胶上的吸附情况及其所带的电 荷。HbA0因其Ｎ末端的缬氨酸残 基对凝胶的负电荷有高度的亲和力， 因此它的迁移速率减慢。HbA1c因 它所连接的糖的阻断作用，不可再 与凝胶结合，利用HbA1c和HbA0对 凝胶的亲和力不同，导致的电泳迁 移速率也不同，通过电泳将各成分 分开。
检测方法：亲和层析法
由交联了间氨基苯硼酸的琼脂糖珠作 为分离载体。当总的GHb通过载体时，
硼酸可与整合在血红蛋白分子中的葡 萄糖顺位二醇基发生可逆性结合，使 糖化的Hb选择性地结合于凝胶柱上， 其他非糖化Hb等随缓冲液流出；然
后用另一种含糖或多羟化合物的缓冲 液将GHb洗脱下来，利用两部分Hb本 身的颜色，在415nm条件下测定并计 算出亲和色谱所测的GHb。
积水医疗酶法生化试剂
糖化血红蛋白检测标准化
●IFCC法：2007 年国际临床化学联合会(IFCC) 重新明确了HbA1c 的命名、 性质、单位: 全称为β 链血红蛋白β链N 末端脱氧果糖基血红蛋白; 特 别强调HbA1c 测定的是“物质分数”，而不是“质量分数”; 推荐使 用( mmol /mol) 作为HbA1c 的单位，此建议为HbA1c 结果数据提供了 非常明确的计量单位，可溯源到溯源链的最高等级国际单位制。
HbA 2 (???? )
HbF (???? )
非糖化Hb HbA0
95%
1-3.5%
<2%
HbA1
糖化Hb
87-89%
HbA1a
<1%
6-8%
HbA1b
<1%
HbA1c
4%-6%
GHb是指结合了任何形式 碳水化合物的血红蛋白， 血红蛋白与糖基发生非酶 促，形成了不可逆的复合 物。
糖化血红蛋白的形成
Bayer 拜安时手持式糖化检测仪
检测方法：酶法
全血经溶血处理后，用特异蛋白内切 酶将Ｈｂ酶解消化成果糖氨基酸，再 经果糖氨基酸氧化酶作用下产生过氧 化氢（H2O2），H2O2的浓度与血液中 GHb的含量呈正比。 H2O2在过氧化物 酶的作用下与相应的色原耦联，发生 颜色变化，根据其变化程度可得H2O2 浓度，进而得知样本中GHb的含量。
亚基的氮端缬氨酸主链氨基的糖化概率最高， 因此体内大部分糖基化血红蛋白为β 亚基氮端
缬氨酸与葡萄糖的加合物，该物质被命名为 HbA1c。
检测方法学分类
根据Ghb和非 GHb带电不同 1、离子交换层析 2、电泳法 3、等电点聚焦法
基于Hb上糖基化 基团的结构特点
1、亲和层析 2、免疫法 3、酶法 4、显色法
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血红素
血红蛋白HbA由两个α亚基和两个β亚基组成，α和β亚 基上都有糖化位点，其中β亚基第1位缬氨酸主链氨基 糖化率最高。
血红素
α亚基 β亚基
血红素 血红素
HbA1c 糖基化位点结构图
根据糖种类，糖基化血红蛋白可分为葡萄糖糖 化、果糖糖化及乳糖糖基化血红蛋白等。人体 内游离的葡萄糖含量远高于其他糖类物质，β
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检测方法：离子交换层析
主要有高效液相色谱法( high performance liquid chromatography， HPLC) 和手工微柱法。此方法是基 于血红蛋白β 链N 末端缬氨酸糖化 后所带电荷不同而建立。在中性 pH条件下，HbA1c 携带的正电荷 相对较少，因此可通过离子交换 层析法将其与其他组分分离。
检测方法：免疫法
比浊法：又有胶乳凝集法和免疫比浊 法两种。可实现和自动化分析仪很好 地结合起来，具有快速、准确、特异 性强、重复性好、灵敏度高、线性范 围宽等优点，可以使用自动化分析仪 进行批量检测。
检测方法：免疫法
免疫层析法：免疫层析法操作简便易 行、快速准确、试剂稳定。更易于实 现POC检测，有助于医生即时获悉患 者血糖水平，并及时给予患者医疗指 导，以避免糖尿病诊断和治疗的延误， 未来有着较为广阔的应用前景。