金黄色葡萄球菌检验与相关知识
食品中微生物的检测-金黄色葡萄球菌检验
免疫学方法
抗原制备
从金黄色葡萄球菌中提取特异性抗原，制备 成免疫原。
抗体制备
利用抗原抗体特异性结合的原理，通过凝集 反应、沉淀反应等方法检测样品中的金黄色
葡萄球菌。
抗原抗体反应
将免疫原注射到动物体内，刺激机体产生特 异性抗体。
结果判定
根据反应结果判断样品中是否含有金黄色葡 萄球菌。
分子生物学方法
食品中微生物的检测-金黄 色葡萄球菌检验
目录
• 引言 • 金黄色葡萄球菌概述 • 样品采集与处理 • 微生物学检测方法 • 理化检测方法 • 结果分析与报告 • 质量控制与实验室安全
01
引言
目的和背景
保障食品安全
金黄色葡萄球菌是一种常见的食品污染源，可引起食物中毒，对公众健康构成威胁。因此，检测食品中的金黄 色葡萄球菌对于保障食品安全具有重要意义。
适量性
根据检测方法和目的，采 集适量样品，以满足检测 需求。
样品保存与运
低温保存
样品应尽快放入低温环境 （如4℃冰箱）中保存，以 减缓微生物的生长速度。
避免反复冻融
尽量避免样品在保存过程 中反复冻融，以免影响微 生物的存活和检测结果的 准确性。
快速运输
样品在运输过程中应保持 低温，并尽快送达实验室 进行检测。
04
微生物学检测方法
传统培养法
增菌培养
将液体样品接种到选择性增菌液 中，于适宜温度下培养一定时间 ，使金黄色葡萄球菌得以增殖。
鉴定
通过观察菌落形态、革兰氏染色 、血浆凝固酶试验等生化特征进 行鉴定。
01
02
样品处理
取适量食品样品，进行均质化处 理，得到均匀一致的液体样品。
03
04
3.金黄色葡萄球菌及其检验
1、 金黄色葡萄球菌的生物学特性
2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、
金黄色葡萄球菌的抗原构造及分型简介 金黄色葡萄球菌的致病性 金黄色葡萄球菌的流行病学 金黄色葡萄球菌的检验方法 金黄色葡萄球菌肠毒素的检测 金黄色葡萄球菌的快速检测方法 金黄色葡萄球菌污染的控制
一、金黄色葡萄球菌的生物学的流行病学一般有如下特点： 季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、 鱼及其制品。此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒 事件也有报道。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%，所以人畜化 脓性感染部位常成为污染源。 一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品： 食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食 品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒 素，引起食物中毒；熟食制品包装不严，运输过程受到污染；奶 牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染。
金黄色葡萄球菌检验方法
用3 mm接种环,从有细菌生长的各管中移取1 环,划线接种于表 面干燥的Baird- Parker琼脂平板,置36±1℃培养45～48h。
怎样在平板上进行细菌的划线分离。
1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法
金黄色葡萄球菌的单个菌落在 Baird-Parker琼脂平板上呈圆形,表 面光滑、凸起、湿 润,直径2～3mm。 灰黑色至黑色,有光泽,常有浅色(非白 色)的边缘,周围绕以不透明圈 (沉淀), 其外常有一清晰带。当用接种针触及 菌落时具有黄油样粘稠感。有时可见 到不分 解脂肪的菌株,除没有不透明 圈和清晰带外,其他外观基本相同。从 长期贮存的冷冻或脱 水食品中分离的 菌落,其黑色常较典型菌落浅些,且外 观可能较粗糙,质地较干燥。
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种常见的革兰氏阳性球菌，广泛存在于自然界中，同时也是人体皮肤和黏膜的正常微生物。
金黄色葡萄球菌也是人体病原微生物中的一种，并且可以引起一系列的感染疾病，包括皮肤感染、肺炎、败血症等严重疾病。
及时、准确地检测金黄色葡萄球菌对于预防和控制与该菌相关的疾病具有重要意义。
金黄色葡萄球菌的检验技术主要包括细菌培养、生化鉴定、药敏试验等，下面将对这些技术进行介绍。
一、细菌培养1. 培养基金黄色葡萄球菌主要可在营养琼脂、大豆肉汤琼脂、牛肉心脏培养基等细菌培养基上生长。
营养琼脂是最常用的培养基，可用于对金黄色葡萄球菌的初步筛查。
2. 培养条件金黄色葡萄球菌在37°C下培养24-48小时，产生充分的菌落。
3. 形态特征金黄色葡萄球菌在琼脂培养基上可形成金黄色的圆形菌落，直径一般在1-2mm左右。
二、生化鉴定1. 皮肤试验皮肤试验是金黄色葡萄球菌的特异性鉴定方法之一，又称为凝集素试验。
通过皮肤试验，可以判断金黄色葡萄球菌是否具有产生凝集素的能力。
2. 协和试验协和试验又称凝集酶试验，是用于检测金黄色葡萄球菌产生凝集酶的一种生化试验。
该试验通过将金黄色葡萄球菌的培养液加入到含有凝集酶专一底物的试管中，观察底物被溶解的情况，用于判断金黄色葡萄球菌是否产生凝集酶。
3. 床旋试验床旋试验又称为巯基甲酸盐试验，是一种利用巯基甲酸盐来检测金黄色葡萄球菌的特异性试验。
通过观察琼脂培养基上金黄色葡萄球菌菌落周围出现的红色环的形成情况，判断金黄色葡萄球菌是否产生巯基甲酸盐酶。
4. 溶血酶试验溶血酶试验是一种通过检测金黄色葡萄球菌产生的溶血酶来鉴定其特性的生化试验。
溶血酶试验主要有两种方法：血凝素试验和牛血红蛋白试验。
这两种方法都是通过观察金黄色葡萄球菌对红细胞造成的溶血现象来判断其产生的溶血酶。
三、药敏试验药敏试验是检测金黄色葡萄球菌对抗生素的敏感性的一种方法。
金黄色葡萄球菌检验与计数1
检验程序
检样25g(mL) ＋225mL生理盐水或磷酸 盐缓冲液
10倍稀释
选择三个连续的适宜浓度的
样品匀液，接种Baird-
3P6a±rk1e℃r平板
45~48h
计数及血浆酶试验
报告
典型菌落计数与计算公式的应用
计数范围要求：选择合计菌落数在20~200的平板，计数典型 菌落。
公式一
T=AB/Cd T:样品中金黄色葡萄球菌落数； A:某一稀释度典型菌落的总数 ； B:某一稀释度血浆凝固酶阳性的菌落数 ； C:某一稀释度用于血浆凝固酶试验的菌落数；
金黄色葡萄球菌的菌落形态：呈金黄色，有时也呈白色， 大而突起，圆形、不透明、表面光滑，周围有透明的β 溶血环。
金黄色葡萄球菌的重要鉴定血浆凝固酶试验
试验原理：致病性的金黄色葡萄球菌产生的血浆凝固 酶，使血浆中纤维蛋白原转变为纤蛋白，附着于细菌 表面 ，产生凝固。
金黄色葡萄球菌可产生两种凝固酶：一种是与细胞壁 结合的凝固酶，为结合凝固酶；另一种是菌细胞释放 于培养基中，为游离凝固酶。二者的抗原性不同。
7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨
大豆3肉6±汤1℃
18~24h
Baird-Parker平板，血
36±1℃
平板血平板18~24h， Baird-Parker 平板18~24h或45~48h。
涂片染色
观察溶血
BHI肉汤和营养琼脂 小斜面
血浆凝固酶 试验
报告
Baird-Parker琼脂平板 •金黄色葡萄球菌的菌落形态：圆形、光滑凸起、湿润， 直径约2~3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围 为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌 落似有奶油树胶的硬度，偶而可见无混浊带和透明圈 的非典型菌落。
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析金黄色葡萄球菌是一种常见的细菌，它是引起人体多种感染的病原菌之一。
金黄色葡萄球菌检验技术是通过分离、培养和鉴定来检测和确定金黄色葡萄球菌的存在与类型。
以下是金黄色葡萄球菌检验技术的介绍及分析。
金黄色葡萄球菌的分离是检验的第一步。
样品通常是从患者的伤口、分泌物或体液中获取的，也可以从环境中收集。
分离可以通过将样品涂抹到适当的察尔染色的琼脂平板上，然后进行培养和鉴定来完成。
金黄色葡萄球菌会在琼脂平板上形成金黄色的菌落。
培养是金黄色葡萄球菌检验的关键步骤。
常用的培养基包括牛肉蛋白胨琼脂、亚洲互联网的Tag：脑心制剂琼脂、亚洲互联网的Tag：镜光菌属琼脂等。
金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性球菌，它可以在各种营养富集培养基中生长，但最好使用富含血液、蛋白质和碳水化合物的培养基。
培养的时间通常为24小时，金黄色葡萄球菌菌落会呈现金黄色且凸起。
鉴定是确认金黄色葡萄球菌的类型的步骤。
鉴定方法包括形态学观察、生化试验和分子生物学方法。
形态学观察是通过显微镜观察菌落和细胞形态来判断。
金黄色葡萄球菌是圆形或椭圆形的，常呈簇状分布。
生化试验可以通过检测金黄色葡萄球菌对特定底物的代谢能力来进行鉴定。
一些常用的测试包括氧化酶试验、半乳糖发酵试验等。
分子生物学方法可以通过检测特定基因或DNA序列来鉴定金黄色葡萄球菌。
金黄色葡萄球菌检验技术的分析主要集中在以下几个方面。
金黄色葡萄球菌的检验可以帮助医生确定感染的病原菌，从而指导合理的治疗方案。
金黄色葡萄球菌是耐药菌中的重要成员，对多种抗生素具有耐药性，因此及早检测和鉴定金黄色葡萄球菌可以避免无效的药物治疗。
金黄色葡萄球菌还可以引起食物中毒和医院相关感染等，检验技术的应用可以有助于减少相关疾病的发生。
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种常见的细菌，它存在于人体的鼻腔、口腔、皮肤和肠道中。
虽然大多数金黄色葡萄球菌是无害的，但也有些菌株可以引起感染，导致严重的疾病。
对金黄色葡萄球菌进行及时而准确的检验至关重要。
本文将介绍金黄色葡萄球菌的检验技术及分析。
一、金黄色葡萄球菌检验技术介绍1. 大肠杆菌萤光素酶法大肠杆菌萤光素酶法是一种快速、敏感的金黄色葡萄球菌检验技术。
该方法基于金黄色葡萄球菌产生蛋白A（Protein A）的特性，利用蛋白A对大肠杆菌萤光素酶的亲和力来检测金黄色葡萄球菌。
具体步骤如下：- 取一定数量的待测样品，加入培养基中，并培养一定时间使细菌繁殖；- 加入大肠杆菌萤光素酶，与待测样品中的金黄色葡萄球菌结合；- 通过检测发光信号的强度来判断金黄色葡萄球菌的存在。
2. PCR技术PCR技术是一种常用的分子生物学技术，可以快速、准确地检测金黄色葡萄球菌。
该方法利用PCR扩增金黄色葡萄球菌的特定基因序列，然后通过凝胶电泳等手段对扩增产物进行分析，从而确定金黄色葡萄球菌的存在与否。
3. 生化检验生化检验是通过分析金黄色葡萄球菌产生的代谢产物来确定其存在与否。
常用的生化检验方法包括酶活性检测、代谢产物检测等，通过观察细菌在不同培养基中的反应来判断金黄色葡萄球菌的存在。
以上介绍的几种金黄色葡萄球菌检验技术各有优缺点，可以根据实际需求选择合适的方法进行检验。
二、金黄色葡萄球菌检验技术分析1. 大肠杆菌萤光素酶法的优点是快速、敏感，可以在短时间内得到检测结果。
但该方法对培养基的选择要求严格，容易受到其他细菌的干扰，且需要特殊设备（如发光计）进行检测，成本较高。
2. PCR技术的优点是高度特异性和灵敏度，可以检测样品中极微量的金黄色葡萄球菌。
PCR技术无需培养细菌，可以在短时间内完成检测，因此被广泛应用于金黄色葡萄球菌的检验中。
PCR技术需要特殊的实验条件和设备支持，成本较高。
金黄色葡萄球菌的检验
金黄色葡萄球菌的检验(定性检测)一．金黄色葡萄球菌的生物学特性金黄色葡萄球菌革兰氏阳性球菌，直径为0.8-1.0微米，镜检时呈单个、成对、四联或不规则的簇群；无芽孢，无鞭毛、无荚膜、不运动；兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好；大多数菌株产生类胡萝卜素，使细胞团呈现出深橙色到浅黄色，色素的产生取决于生长的条件，故称金黄色葡萄球菌，营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃，最适生长pH 7.4。
普通平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。
血平板菌落周围形成透明的溶血环。
主要存在于主要为淀粉类(如剩饭、米面、粥等)、牛乳及乳制品，以及鱼、肉、蛋类等。
二、培养基7.5%的氯化钠（三角瓶135mL）；BP平板培养基；血平板培养基；BHI肉浸液肉汤培养基（试管5个）。
三、金黄色葡萄球菌的定性检测主要包含四个步骤：样品处理；增殖培养；平板分离培养；鉴定（染色镜检和血浆凝固酶实验）。
1.样品的处理和增殖培养：样品为冷冻鱼丸，每组称量15g，放于研钵中，用研磨棒捣碎，放于135mL 7.5%的氯化钠肉汤中进行增菌培养，36℃±1℃培养18h～24h后，可观察到金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长。
2.血平板划线培养：将样品增菌培养物，用接种环取一环划线接种于血平板上，36℃±1℃培养18h～24h。
（每组2个血平板接种增殖样品，1个平板划线接种金黄色葡萄球菌，每组共3个血平板）。
金黄色葡萄球菌在血平板上的菌落特征：菌落较大，圆形，光滑突起，湿润，金黄色（有时为白色），菌落周围为完全透明溶血圈。
3.BP平板划线培养：将样品增菌培养物，用接种环取一环划线接种于BP平板上，36℃±1℃培养18h～24h。
（每组2个BP平板接种增殖样品，1个平板划线接种金黄色葡萄球菌，每组共3个BP平板）。
金黄色葡萄球菌在BP平板上的菌落特征：菌落直径2-3mm，颜色从灰色到黑色，边缘为淡色，周围有一浑浊带，其外层有一透明圈，用接种针触碰有奶油树脂的硬度。
微生物检测技术-金黄色葡萄球菌检测
国内检测标准
GB 4789.10-2010
食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验
GB/T 20944.32008
食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素的测定 第3部分：黄曲霉毒素 M1的测定
GB/T 23511.42008
食品安全国家标准 食品中脱氢乙酸的测定 第4部分：脱氢乙酸含量的 测定
样品中的快速检测。
纳米技术
纳米材料如纳米金、纳米孔等在 金黄色葡萄球菌检测中展现出巨 大潜力，具有高灵敏度、低检测
限和快速响应等优点。
未来研究方向
开发更高效、特异性的检测方法
01
针对金黄色葡萄球菌的不同表型和基因型，开发更高效、特异
性的检测方法，提高检测的准确性和可靠性。
集成化与自动化
02
将多种检测方法集成于一体，实现金黄色葡萄球菌的自动化检
治疗方案的选择。同时，对于流行病学调查和疾病监测也具有重要意义。
05
CATALOGUE
金黄色葡萄球菌检测技术展望
新技术发展与应用
基因组学技术
利用全基因组测序技术，能够快 速准确地检测金黄色葡萄球菌，
并识别其耐药性和毒力基因。
生物传感器技术
生物传感器能够实时、快速地检 测金黄色葡萄球菌，具有高灵敏 度和特异性，适用于食品和环境
测，提高检测效率，降低人工误差。
多重耐药性研究
03
深入研究金黄色葡萄球菌的多重耐药性机制，为遏制耐药性的
传播提供科学依据和技术支持。
对公共卫生的影响与意义
保障食品安全
金黄色葡萄球菌是常见的食源性致病菌，通过改进检测技 术，能够及时发现和控制食品中的污染，保障公众的食品 安全。
预防疾病传播
金黄色葡萄球菌的检验
鉴定
A 染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，
排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为0.5m～ 1m。
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等
四个步骤，具体操作方法是：
1）涂片固定。 2）草酸铵结晶紫染1分钟。 3）用水冲洗。 4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。 5）水洗，用吸水纸吸去水分。 6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒 后水洗，吸去水分。
基本原理
金黄色葡萄球菌可产生多种毒素和酶。在血 平板上生成金黄色色素使菌落呈现金黄色；由于 产生溶血素使菌落周围形成大而透明的溶血圈， 金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固，多 数致病菌株能产生溶血素，使血琼脂平板菌落周 围出现溶血环，在试管中出现溶血反应。这些事 鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。在B-P 平板上生长时，因将亚碲酸钾还原成碲酸钾使菌 落呈灰黑色；因产生脂酶使菌落周围有一混浊带， 而在其外层饮产生蛋白水解酶有一透明带。
将上述样品匀液于 36 ℃±1 ℃培养 18 h～ 24 h。金黄色葡萄球菌在 7.5%氯化钠肉汤中呈混 浊生 长，污染严重时在 10%氯化钠胰酪胨大豆肉 汤内呈混浊生长。
将上述培养物，分别划线接种到 BairdParker 平板和血平板，血平板 36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h。 Baird-Parker 平板 36 ℃±1 ℃培 养 18 h～24 h 或 45 h～48 h。
金黄色葡萄球菌的检验
目的
参考:GB 4789.10-2010
1、了解金黄色葡萄球菌的生物学特征级临床 症状。
2、了解食品中掌握金黄色葡萄球菌群的检验方法。
基本原理
肉汤中培养时菌体可生成血浆凝固酶 并释放于培养基中，此酶类类似凝血酶原 物质，不直接作用到血浆纤维蛋白原上， 而是被血浆中的致活剂激活后,变成耐热的 凝血酶样物质,此物质可使血浆中的液态纤 维蛋白原变成纤维蛋白,血浆因而成凝固状 态。
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种常见的致病菌，广泛存在于环境中和人体的皮肤黏膜上。
它是一种革兰氏阳性球菌，通过空气、飞沫、直接接触等途径传播。
金黄色葡萄球菌引起的感染包括皮肤感染、呼吸道感染、骨髓炎、心内膜炎等，严重时还可以导致败血症和中毒性休克。
为了诊断金黄色葡萄球菌感染，需要进行相关的检验技术。
以下是金黄色葡萄球菌检验的常用技术介绍及分析：1. 细菌培养：将样品（如血液、脓液、分泌物等）接种到适当的培养基上，利用培养器将细菌培养在适当的温度和湿度下。
金黄色葡萄球菌能够在常规寒温培养基上生长，并产生特征性的金黄色色素。
2. 葡萄糖发酵试验：用含葡萄糖的培养基培养金黄色葡萄球菌，通过观察培养基的酸碱指示剂变化，如果培养基变为黄色，则说明金黄色葡萄球菌能够发酵葡萄糖产生酸。
3. 凝固酶试验：用凝固酶试剂与金黄色葡萄球菌接触，在一定时间内观察是否发生凝固反应。
凝固酶是金黄色葡萄球菌特有的酶，可以将凝血蛋白原转化为凝血蛋白，从而导致液体凝固。
4. 硝酸盐还原试验：将含有硝酸盐的培养基与金黄色葡萄球菌接触，观察是否产生还原反应。
正常情况下，金黄色葡萄球菌可以将硝酸盐还原为亚硝酸盐和硝酸，导致培养基变为红色。
5. 蛋白酶试验：用含有牛血清蛋白的培养基培养金黄色葡萄球菌，观察是否溶解蛋白质。
金黄色葡萄球菌能够产生多种蛋白酶，可以分解牛血清蛋白，形成溶解区。
通过以上的检验技术，可以初步判断金黄色葡萄球菌的存在和性质。
这些检验方法并不是专门针对金黄色葡萄球菌的，也不能确定金黄色葡萄球菌的毒力和抗药性等重要特征。
要做进一步的分析和确认，需要使用专门的分子生物学方法，如聚合酶链反应（PCR）和基因测序等。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
形态与染色
形态与染色
金黄色葡萄球菌的基本特性
v营养要求低，在普通培养基中生长良好 v需氧或兼性厌氧 v能在pH4.2-9.3之间生长(最适pH 7.4) v耐盐性强（10%~15%） v10~45℃可生长(最适温度 37℃ ) v对干燥有一定耐受性 v对热敏感
金黄色葡萄球菌生化特性
v发酵糖或醇时产酸不产气 v能产生溶血素 v能产生血浆凝固酶
§ 3M测试平板法（GB 4789.37-2008第三法）
金黄色葡萄球菌的检验与计数方法
v检验方法（定性）GB 4789.10第一法 v定量方法
§ 平板法GB 4789.10-2010第二法（GB 4789.372008第一法）
§ MPN法GB 4789.10-2010第三法（GB 4789.372008第二法）
金黄色葡萄球菌分布—人类
30%以上的普通人群长期携带
30% 金黄色葡萄球菌
分布
鼻腔、皮肤 喉咙、会阴
易感染
皮肤侵入（痤疮、睑腺炎） 伤口处、呼吸道感染
金黄色葡萄球菌分布—常见动物
v鸡：存在于鸡的皮肤 v奶牛：健康牛乳房与奶头，大量存在于乳腺
炎中 v猪：扁桃体和皮肤
流行病学
v金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问 题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的 食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%，加 拿大则更多，占45%，我国每年发生的此类 中毒事件也非常多。
危害及致病性
v 金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强弱 主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：
§ 溶血素：外毒素，分α、β、γ、δ四种，能损伤血小 板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死；
§ 杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； § 血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液
或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细 胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化脓与此酶有 关； § 脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶 能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌； § 肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋 白质性肠毒素，分为A、B、C、D、E五种。
§ 补充：结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到5 mL BHI，36℃±1℃培养18 h～48 h，重复实验
§ 计算出阳性比率（如2/5,3/5,4/5等等）
金黄色葡萄球菌平板法详解
v 计数要求：（类似于菌落总数）
§ a） 如果只有一个稀释度平板的菌落数20CFU~200CFU 之间且有典型菌落，计数该稀释度平板上的典型菌落；
§ 鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标
v能产生肠毒素
§ 与食物中毒密切相关 § 在温度条件适宜时，经8-10小时即可相当数量的
肠毒素
v能产生蛋白类、多糖类抗原
葡萄球菌肠毒素
v 食品引发疾病的最主要原因之一 v 能在没有微生物的情况下存在 v 单链蛋白质 v 不受胰蛋白酶的影响 v 经煮沸30～40分钟后仍不破坏 v 几乎是细菌蛋白质类毒素中唯一耐热的 v 根据肠毒素的血清型，可分A、B、C（C1、C2、
金黄色葡萄球菌检验与计数方法
GB 4789.10-2010
李天添
目录
金黄色葡萄球菌的危害及致病性 细菌学及生化特性 分布及流行病学
金黄色葡萄球菌的检验与计数方法
概述
v葡萄球菌属微球菌科，本属有19个菌种，从 人体上可检出12个种。
v葡萄球菌属主要与皮肤腺体和温血动物的粘 膜相关系，有些种是人及动物的条件致病菌。
v公式（2）举例（固体样品）：
1:10 50 60 80 验证5个菌落，4个凝固酶阳性
1:100 6 10 16 验证5个菌落，3个凝固酶阳性
报告：[(50+60+80)*4/5+(6+10+16)*3/5]/(1.1*1/10)
=[(190 *4/5+32 *3/5)/1.1]*10 =[(152+19.2) )/1.1]*10 =155.64*10=1556.4
§ 使用前如B-P平板表面有水珠，可放在25℃~50℃ 的培养箱里干燥，直到平板表面的水珠消失。
§ 平板静置10 min，如样液不易吸收，可将平板放 在培养箱36℃±1℃培养1 h；等样品匀液吸收后 翻转平皿，倒置于培养箱
§ 36℃±1℃培养，45 h～48 h
金黄色葡萄球菌平板法详解——平板原理
§ 3M测试平板法（GB 4789.37-2008第三法）
金黄色葡萄球菌的检验与计数方法
v检验方法（定性）GB 4789.10第一法 v定量方法
§ 平板法GB 4789.10-2010第二法（GB 4789.372008第一法）
§ MPN法GB 4789.10-2010第三法（GB 4789.372008第二法）
金黄色葡萄球菌平板法详解
v Day4（血浆凝固酶试验及报告）
§ 操作：取新鲜配置兔血浆0.5 mL，放入小试管中，再加入 BHI培养物0.2 mL～0.3 mL，振荡摇匀，置36℃±1 ℃温 箱或水浴箱。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌 菌株的BHI肉汤培养物作为对。
§ 观察：每半小时观察一次，观察6 h，如呈现凝固（即将 试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积大于原体积的 一半，被判定为阳性结果。
金黄色葡萄球菌平板法详解
vDay3（计数与血浆凝固酶试验准备）
§ 计数：选择有典型的金黄色葡萄球菌菌落的平 板，且同一稀释度3个平板所有菌落数合计在20 CFU～200 CFU之间的平板，计数典型菌落数。
§ 从典型菌落中任选5 个菌落（小于5 个全选）， 分别接种到5 mL BHI和营养琼脂小斜面，36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h
§ 3M测试平板法（GB 4789.37-2008第三法）
金黄色葡萄球菌平板法详解
金黄色葡萄球菌平板法详解
vDay1（涂布选择性平板）
§ 25g(mL)样品+225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水 中，均质，逐倍梯度稀释
§ 选择2~3个稀释度，取1mL，分为0.3mL、0.3mL、 0.4mL分别加入三块B-P平板表面，用无菌L棒涂 布均匀，注意不要触及平板边缘
§ 直径为2 mm～3 mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊 带，在其外层有一透明圈
§ 用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类 似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌 落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。
• 金黄色葡萄球菌—黑色菌落，外围有晕圈和透明环 • 表皮葡萄球菌—黑色菌落 • 奇异变形杆菌—褐色菌落 • 大肠埃希氏菌—被抑制
1.6×103CFU/g 思考：若无菌落生长如何报告？
金黄色葡萄球菌的检验与计数方法
v检验方法（定性）GB 4789.10第一法 v定量方法
§ 平板法GB 4789.10-2010第二法（GB 4789.372008第一法）
§ MPN法GB 4789.10-2010第三法（GB 4789.372008第二法）
感染
金黄色葡萄球菌 是人类化脓感染中最 常见的病原菌，临床 表现多种多样，可引 起局部化脓感染，也 可引起肺炎、伪膜性 肠炎、心包炎等，甚 至败血症、脓毒症等 全身感染。
食物中毒
v葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引 起的疾病，是最常见的细菌性食物中毒之一
§ 症状：急性胃肠炎症状，恶心、呕吐、腹痛、头 痛、腹泻等
§ b） 如果最低稀释度平板的菌落数小于20CFU且有典型菌 落，计数该稀释度平板上的典型菌落；
§ c） 某一稀释度平板的菌落数大于200CFU且有典型菌 落，但下一稀释度平板上没有典型菌落，应计数该稀释度 平板上的典型菌落；
§ d） 某一稀释度平板的菌落数大于200CFU且有典型菌 落，且下一稀释度平板上有典型菌落，但其平板上的菌落 数不在20CFU～200CFU之间，应计数该稀释度平板上的 典型菌落；以上情况按公式（1）计算；
金黄色葡萄球菌平板法详解
v 公式（2）： T ＝（A1B1/ C1＋ A2B2/ C2）/ 1.1d ……（2） 式中： T ——样品中金黄色葡萄球菌菌落数； A1——第一稀释度（低稀释倍数）典型菌落的总数； A2——第二稀释度（高稀释倍数）典型菌落的总数； B1——第一稀释度（低稀释倍数）血浆凝固酶阳性的菌落数； B2——第二稀释度（高稀释倍数）血浆凝固酶阳性的菌落数； C1——第一稀释度（低稀释倍数）用于血浆凝固酶试验的菌落数； C2——第二稀释度（高稀释倍数）用于血浆凝固酶试验的菌落数； 1.1——计算系数； d ——稀释因子（第一稀释度）
量淀粉的食物，肠毒素易生成。
目录
金黄色葡萄球菌的危害及致病性 细菌学及生化特性 分布及流行病学
金黄色葡萄球菌的检验与计数方法
金黄色葡萄球菌的检验与计数方法
v检验方法（定性）GB 4789.10第一法 v定量方法
§ 平板法GB 4789.10-2010第二法（GB 4789.372008第一法）
§ MPN法GB 4789.10-2010第三法（GB 4789.372008第二法）
§ 3M测试平板法（GB 4789.37-2008第三法）
金黄色葡萄球菌的检验与计数方法
v检验方法（定性）GB 4789.10第一法 v定量方法
§ 平板法GB 4789.10-2010第二法（GB 4789.372008第一法）
§ MPN法GB 4789.10-2010第三法（GB 4789.372008第二法）
§ 3M测试平板法（GB 4789.37-2008第三法）
金黄色葡萄球菌3M测试平板法详解
v PetrifilmTM金黄色葡萄球菌测试平板 是一种预先制备好的快速检验系统。 它含有具有显色功能并经改良的 Baird-Parker培养基，对金黄色葡 萄球菌具有很强的选择性，并含有冷 水可溶性凝胶。测试片上的紫红色菌 落为金黄色葡萄球菌。当测试片上出 现除紫红色以外的其它任何颜色(如黑 色或蓝绿色)，则必须使用确认反应片。 此确认反应片含有显色剂和脱氧核糖 核酸。金黄色葡萄球菌产生的脱氧核 糖核酸酶会和反应片中的显色剂形成 粉红色晕圈。