UHPLC-LTQ-Orbitrap分析硫磺熏蒸麦冬中高异黄酮硫酸酯和亚硫酸酯
Q-Orbitrap高分辨质谱快速筛查及定量分析改善睡眠类保健品中非法添加的18个药物成分
药物分析杂志药物分析杂志药物分析杂志药物分析杂志b.艾司唑仑（estazolam）c.氯氮䓬（chlordiazepoxide）d.氯美扎酮（chlomezanone）e.咪达唑仑（midazolam劳拉西泮（lorazepam） h.地西泮（diazepam） i.阿普唑仑（alprazolam） 号改善睡眠类药物标准溶液的提取离子流图Extracted chromatograms of reference solution with No.1-9 improving sleep drugs质谱条件的优化利用Q-Orbitrap高分辨质谱的优2模式进行分析。
该扫描模式包含2个扫描事件：首先进行一级全扫描，定的母离子做MS2扫描。
本文采用正、扫描的检测方式，18个化合物中，司可巴比妥钠、Journal of Pharmaceutical Analysis 药物分析杂志） k.马来酸氯苯那敏（chlorphenamin maleate） l.盐酸氯丙嗪（chlorpromazine hydrochloride） m.硝西泮o.司可巴比妥钠（secobarbital sodium） p.巴比妥（barbital） q.苯巴比妥（phenobarbital） r.异戊巴比妥（amobarbital 号改善睡眠类药物标准溶液的提取离子流图Extracted chromatograms of reference solution with No.10-18 improving sleep drugs异戊巴比妥为负离子模式检测，其余个化合物均在正离子模式下检测。
高分辨率可带来更好的质量精度，但同时也会降低响应的灵敏度并减少采集的扫描点数。
对于正、负离子的同时检测，建议设置较低的分辨率，因此本研究在一级和二级扫描时都选用分辨率R=17 500。
在此分辨率下，Journal of Pharmaceutical Analysis药物分析杂志Chinese药物分析杂志药物分析杂志药物分析杂志。
硫磺熏蒸对黄芪中黄酮类和皂苷类成分的影响
Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge. var. mongholicus (Bge.) Hsiao 的根。参照当地熏蒸方法对黄芪药材和 饮片进行硫磺熏蒸。取黄芪药材（饮片）5 kg，置 于密封有小开口的熏箱中，放置天然硫磺 50 g，使 其燃烧，散发烟雾，连续熏蒸 10 h。1、2 号重复 3 次得到样品 X1-1、X1-2、X1-3、X2-1、X2-2、X2-3， 3、4 号熏蒸 1 次得样品 X3、X4。
1
A
2
4
3
1
B
2 3
4
0
10
20
30
40 50 酮苷 2-芒柄花苷 3-毛蕊异黄酮 4-芒柄花素 1-calycosin glucoside 2-ononin 3-calycosin 4-formononetin
图 1 混合黄酮对照品（A）和黄芪（B）的 HPLC 色谱图 Fig. 1 HPLC chromatograms of flavonoids mixed reference
Water 高效液相色谱仪（2690 型泵，996 检测 器，自动进样器，Empower 色谱工作站）。Waters Acquity UPLC system（二元泵处理器，样品处理器， ELSD 检测器）。 1.2 试药
毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷对照品购于成
都曼斯特公司（产品批号 2009-A0511，HPLC 法测 定质量分数＞98%）；毛蕊异黄酮、芒柄花素、黄芪 皂苷 I、黄芪皂苷 II、黄芪皂苷 III、黄芪甲苷对照 品均购于天津马克生物技术有限公司（HPLC 法测 定质量分数＞98%）。乙腈（色谱纯，美国 Fisher 公司）；娃哈哈纯净水；其他试剂均为分析纯。 1.3 材料
211061049_UHPLC-Orbitrap_HRMS技术分析常通口服液的化学成分
UHPLC-Orbitrap HRMS 技术分析常通口服液的化学成分Δ王龙＊，刘文钦，侯楚祺，陈靖瑶，王春霞，侯连兵 #（南方医科大学南方医院临床药学中心，广州 510515）中图分类号 R 917 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2023）07-0796-06DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2023.07.06摘要 目的 明确常通口服液（CTOL ）中的化学成分，为其药效物质基础研究及二次开发提供参考。
方法 采用超高效液相色谱-静电场轨道阱高分辨质谱（UHPLC-Orbitrap HRMS ）技术进行分析。
将CTOL 检测样品上样Hypersil Gold 色谱柱，以0.1%甲酸（含5 mmol/L 甲酸铵）-乙腈作为流动相进行梯度洗脱；采用电喷雾离子源，在正、负离子模式下进行检测，数据使用Xcalibur qual browser 4.3和Compound Discoverer 3.3软件进行处理。
收集各化合物的一级、二级质谱数据，根据仪器自带的质谱库以及网络数据库mzCloud 、mzVault 等对未知化合物进行鉴定，并通过同中药系统药理学数据库与分析平台进行匹配，从而对各化学成分进行药材归属。
结果 从CTOL 中共鉴定分析出53个化学成分，包括24个黄酮类化合物、8个醌类化合物、5个苯丙素类化合物、4个糖和苷类化合物、5个有机酸类化合物、3个氨基酸类化合物、1个生物碱类化合物、1个酚类化合物和2个其他类化合物。
53个化合物中有12个来源于丹参，9个来源于枳实，7个来源于大黄，4个来源于当归，1个来源于厚朴，16个来源于甘草，4个来源于多味药材。
结论 CTOL 中主要含黄酮类、醌类、苯丙素类、糖和苷类化合物，且化学成分主要来源于甘草、丹参和枳实。
关键词 常通口服液；超高效液相色谱-静电场轨道阱高分辨质谱技术；化学成分；鉴定Analysis of chemical components of Changtong oral liquid by UHPLC -Orbitrap HRMS WANG Long ，LIU Wenqin ，HOU Chuqi ，CHEN Jingyao ，WANG Chunxia ，HOU Lianbing （Clinical Pharmacy Center ，Nanfang Hospital ，Southern Medical University ，Guangzhou 510515，China ）ABSTRACTOBJECTIVE To identify the chemical components of Changtong oral liquid （CTOL ），and to provide reference forthe basic research and secondary development of its pharmacological substances. METHODS UHPLC-Orbitrap HRMS technique was adopted. CTOL sample was separated on a Hypersil Gold column with mobile phase consisted of 0.1% formic acid （containing 5 mmol/L ammonium formate ）-acetonitrile （gradient elution ）. The eluent was detected in positive and negative ion modes using an electrospray ionization source. The data was processed by Xcalibur 4.3 and Compound Discoverer 3.3 software. The primary and secondary mass spectra data of each compound were collected. The unknown compounds were identified according to the mass spectrometry library of the instrument and the network databases mzCloud ，mzVault ，etc. Through matching with the pharmacology database and analysis platform of the traditional Chinese medicine system ，the chemical components could be attributed to the traditional Chinese medicine. RESULTS Fifty-three chemical components were identified and analyzed from CTOL ，such as 24 flavonoids ，8 quinones ，5 phenylpropanoids ，4 sugars and glycosides ，5 organic acids ，3 amino acids ，1 alkaloid ，1 phenolic and 2 other compounds. Among them ，12 components were derived from Salvia miltiorrhiza ，9 from Citrus aurantium ，7 from Rheum palmatum ，4 from Angelica sinensis ，1 from Magnolia officinalis ，16 from Glycyrrhiza uralensis ，and 4 from many kinds of medicinal materials. CONCLUSIONS CTOL mainly contains flavonoids ，quinones and phenylpropanoid compounds ，and its chemical components mainly come from G. uralensis ，S. miltiorrhiza and C. aurantium .KEYWORDSChangtong oral liquid ； UHPLC-Orbitrap HRMS ； chemical components ； identification常通口服液（Changtong oral liquid ，CTOL ）是南方医科大学南方医院自行研制的首个中药创新药（批准文号为粤药制字- Z 07022807）。
UHPLC-MS法测定黄芪降压方中两种活性成分
海峡药学 ２０１８年 第 ３０卷 第 ３期
分析 ，色谱 柱为 Ａｇｉｌｅｎｔ ＳＢ Ｃｌ８（２．１ ｘ１００ｍｍ，２．７ ｍ）柱 ，流动相采用 乙腈一去 离子水（６０：４０，ｖ／ｖ），测定黄 芪甲苷和柚皮苷 ，采用 ＥＳＩ离子 源，检测 离子对分别为 ８２９／７８３和 ５７９／２７１。 结 果 制备 的 １０批黄 芪降压方 中，黄芪 甲苷的平均含量为 ０．１３８２ｍｇ·ｍＬ～ ，柚皮苷平均含量为 ０．３３８６ｍｇ ·ｍＬ＿。。结 论 该方 法快速 、灵敏 、准确 ，适 宜用于对黄 芪降压方进行 活性导 向的 多指标质量控制。 关 键 词 ：黄 芪降压方；活性成分 ；Ｌｃ．Ｍｓ 中图分 类号 ：Ｒ９２７ 文献标识码 ：Ａ 文章编号 ：１００６－３７６５（２０１８）－０３－１２１６８－００２３－０４
参 考 文 献
［１］国家药典委员会 编 ．中国药典 ［Ｓ］．北 京 ：中国医药科技 出版社 ，
２０１５版 ，四部 ，通则 ，１１４３．
［２］国家药典委员会编 ．中国药典 ［Ｓ］．北京 ：中国医药科技 出版社 ，
２０１５版 ，三部 ，１７８． ［３］杨晨曦 ．细菌 内毒素 试验凝胶定 性法与 动态浊 度定 量法的 比较
３ 讨 论
［Ｊ］．临床血液学杂
．
ＵＨＰＬＣ－ＭＳ法 测 定 黄芪 降压 方 中两种 活性 成 分
梁妙 莲 ，谭梅 英 ，詹 利之 。（１．广 东省 佛 山市 中 医院 三水 医院 佛 山 ５２８１００；２．广 东 省 第二 中 医院 （广 东省 中 医药 工程 技术 研 究院 ）广 州 ５１００９５；３．广 州 中医药 大学 热 带医学 研 究所 广 州 ５１０４０５）
证疫 苗的质量 。与凝胶 法相 比 ，动 态浊度法 从技术 上可最大
茵陈提取物中化学成分的UHPLC—LTQ—Orbitrap快速鉴定
茵陈提取物中化学成分的UHPLC—LTQ—Orbitrap快速鉴定应用UHPLC-HR-MSn技术分析检测茵陈提取物中的化学成分。
采用ACQUITY UPLC HSS T3 （2.1 mm×100 mm，1.7 μm）色谱柱和0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）流动相系统进行梯度洗脱；应用LTQ-Orbitrap质谱负离子模式检测茵陈提取物中的化学成分。
根据精确分子量数据和多级质谱碎片离子，结合对照品比对和文献报道，共从茵陈提取物中分析鉴定了50个化学成分，包括21个黄酮、22个有机酸、6个香豆素和1个其他类成分。
应用UHPLC-LTQ-Orbitrap 高分辨液质联用技术较为全面地阐明了茵陈提取物中的化学成分，为进一步研究茵陈提取物的全面质量控制方法、体内代谢过程以及药效物质基础提供了科学依据。
标签：茵陈提取物；液质联用技术；化学成分鉴定[Abstract]A rapid and sensitive UHPLC-HR-MSN method was developed for the identification of chemical constituents in capillary wormwood extract. ACQUITY UHPLC HSS T3 chromatography column （2.1 mm×100 mm，1.7 μm）was used with 0.1% formic acid-acetonitrile solution as the mobile phase in gradient elution. The extract was detected by ESI-LTQ-Orbitrap equipped with an ESI ion source in a negative mode. Based on the accurate mass measurements，retention time，mass fragmentation patterns and literature reports，a total of 50 compounds including 21 flavonoids，22 phenolic acids，6 coumarins and 1 other compound were tentatively screened and characterized. These results are helpful for the comprehensive quality control，better comprehension of the metabolism and further study of pharmacodynamic substance from capillary wormwood extract.[Key words]capillary wormwood extract；UHPLC-LTQ-Orbitrap MS；chemical constituent identification茵陳为菊科植物濱蒿Artemisia scoparia Waldst.et Kit.或茵陈蒿A. capillaries Thunb.的干燥地上部分。
UPLC法同时测定硫磺熏蒸前后当归中7种活性成分的含量
UPLC法同时测定硫磺熏蒸前后当归中7种活性成分的含量目的：建立同时测定硫磺熏蒸前后当归中阿魏酸、藁本内酯、丁烯基苯酞、洋川芎内酯A、洋川芎内酯H、洋川芎内酯I、欧当归内酯A等7种活性成分含量的方法。
方法：采用超高效液相色谱法。
色谱柱为Waters BEH C18，流动相为1%醋酸-甲醇（梯度洗脱），柱温为30 ℃，流速为0.35 mL/min，检测波长为254 nm，进样量为2 μL。
结果：阿魏酸、藁本内酯、丁烯基苯酞、洋川芎内酯A、洋川芎内酯H、洋川芎内酯I、欧当归内酯A检测进样量的线性范围分别为0.021 6～0.324 0、0.327 2～4.908 0、0.011 51～0.172 7、0.055 0～0.825 0、0.002 248～0.033 72、0.007 2～0.108、0.001 08～0.016 2 μg（r2=0.999 1～1.000 0）；检测限分别为3.7、0.56、0.52、2.02、0.007 6、1.16、0.64 ng；定量限分别为11.5、1.85、1.66、6.26、0.076、3.36、1.79 ng；精密度、稳定性、重复性试验的RSD均98%）；丁烯基苯酞对照品（批号：YL2013020907）、洋川芎内酯A对照品（批号：YL2013021705）、洋川芎内酯H对照品（批号：YL2013020301）、洋川芎内酯I 对照品（批号：YL2013021501）均购自上海一林生物科技有限公司（纯度：均>98%）；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：Waters BEH C18（100 mm×2.10 mm，1.7 ?m）；流动相：1%醋酸（A）-甲醇（B），梯度洗脱（0～4.34 min，5%～50%B；4.34～6.72 min，50%～70%B；6.72～8.51 min，70%～75%B；8.51～12.08 min，75%～100%B）；流速：0.35 mL/min；检测波长：254 nm；柱温：30 ℃；进样量：2 ?L。
改进HPLC法测定门冬氨酸鸟氨酸原料药中的有关物质
改进HPLC法测定门冬氨酸鸟氨酸原料药中的有关物质目的：改进测定门冬氨酸鸟氨酸原料药中有关物质的方法。
方法：采用高效液相色谱法。
色谱柱为Phenomenex Luna NH2（两根串联），流动相为0.02 mol/L 磷酸二氢钾缓冲液（pH 5.6）-乙腈（40 ∶60，V/V），流速为1.0 mL/min，检测波长为205 nm，柱温为35 ℃，进样量为20 μL。
结果：马来酸、3-氨基-2-哌啶酮、琥珀酸、苹果酸、富马酸、β-门冬氨酰门冬氨酸检测质量浓度线性范围分别为5.398～26.992 ?g/mL（r=0.999 1）、5.204～26.021 ?g/mL（r=0.999 3）、5.149～25.749 ?g/mL（r=0.999 6）、5.174～25.874 ?g/mL（r=0.999 3）、5.164～25.823 ?g/mL （r=0.999 3）、5.194～25.973 ?g/mL（r=0.999 5）；定量限分别为0.22、0.53、51.50、103.50、0.26、8.31 ng，检出限分别为0.13、0.26、10.30、20.70、0.13、2.08 ng；精密度、稳定性、重复性试验的RSD均不超过2%；加样回收率分别为99.30%～102.31%（RSD=1.02%，n=9）、99.88%～100.89%（RSD=0.37%，n=9）、99.36%～101.53%（RSD=0.70%，n=9）、99.13%～102.65%（RSD=1.15%，n=9）、100.18%～101.45%（RSD=0.38%，n=9）、99.39%～100.81%（RSD=0.58%，n=9）。
6批样品均未检出马来酸、琥珀酸和β-门冬氨酰门冬氨酸；3-氨基-2-哌啶酮含量为0.006%～0.056%，苹果酸含量为0.014%～0.071%，富马酸含量为0.000 5%～0.003 4%，最大未知杂质含量为0.013%～0.110%，未知杂质总含量为0.013%～0.120%。
HPLC法检测硫磺熏蒸食品及中药材
HPLC法检测硫磺熏蒸食品及中药材摘要】目的建立经硫磺熏蒸后食品及中药材中残留硫的HPLC定量法。
方法采用高效液相色谱法，以C18为色谱柱，流动相为甲醇，检测波长为254 nm。
结果硫磺在 0.01024～20.48μg范围内，,进样量与峰面积线性关系良好（r=0.9999）。
平均加样回收率99.9%（RSD=0.21%）。
结论该方法操作简便、结果准确、重现性好，可用于硫磺熏蒸后食品及中药材中残留硫的检测。
【关键词】 HPLC 硫磺食品中药材【中图分类号】R282 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）37-0033-03【Abstract】Objective :To establish an HPLC method for the determination of sulfur fumigated food and Chinese herbal medicine. Methods: HPLC analysis was performed on a C18 column. The mobile phase was methanol and the detection wavelength was 254 nm. Results: This method had good linearity in the rangeof 0.01024～20.48μg（r=0.9999）.The average recovery was 99.9%（RSD=0.21%）.Conclusion: The method was shown to be convenient, accurate with good repeatability, so it was suitable to determine sulfur fumigated food and Chinese herbal medicine.【Key words】 HPLC sulfur food Chinese herbal medicine我国国标和药典中检测硫磺熏蒸的方法通常是采用蒸馏法检测食品中二氧化硫的含量，操作比较繁琐，且试验时间长，需准备的试剂也较多。
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UHPLC-LTQ-Orbitrap分析硫磺熏蒸麦冬中高异黄酮硫酸酯和亚硫酸酯SHANG Zhan-peng;WANG Fei;WANG Zi-jian;ZHAO Wen-jing;MEI Xiao-dan;LU Jian-qiu;ZHANG Jia-yu【摘要】为了阐明麦冬中高异黄酮类成分在硫磺熏蒸过程中的变化,采用U HPLC-LTQ-Orbitrap高分辨质谱法,利用Waters HSS T3 UPLC色谱柱(2.1 mm×100 mm×1.7μm),以0.1％甲酸水(A)-乙腈/甲醇(3:1,V/V)(B)为流动相进行梯度洗脱,并采用ESI离子源负离子扫描模式对样品进行分析.根据得到的高分辨质谱数据及多级质谱裂解碎片离子,从硫磺熏蒸麦冬药材中筛选了41个高异黄酮含硫衍生物,并对其中的31个化合物进行了结构鉴定,包括16个硫酸酯和15个亚硫酸酯.结果表明,麦冬高异黄酮在硫磺熏蒸过程中除了发生硫酸酯化和亚硫酸酯化外,其自身母核结构也可能发生改变.本研究阐明了麦冬中高异黄酮在硫磺熏蒸过程中的转变情况,可以为硫磺熏蒸麦冬药材中化学成分的体内ADME过程、药效学以及毒理学等研究奠定基础.【期刊名称】《质谱学报》【年(卷),期】2018(039)002【总页数】12页(P180-191)【关键词】硫磺熏蒸;麦冬;UHPLC-LTQ-Orbitrap高分辨质谱;高异黄酮含硫衍生物【作者】SHANG Zhan-peng;WANG Fei;WANG Zi-jian;ZHAO Wen-jing;MEI Xiao-dan;LU Jian-qiu;ZHANG Jia-yu【作者单位】;;;;;;【正文语种】中文【中图分类】O657.63硫磺熏蒸法常应用于食品、农产品以及中药材等产品门类的储藏养护和加工过程，具有防虫蛀、防腐、防霉变、灭菌等诸多作用[1]，且有利于干燥和改善中药材外观色泽等[2-4]。
据文献[5-6]报道，硫磺熏蒸会造成中药材化学成分种类及含量的改变，甚至会影响药材的整体性味，从而导致药效物质的转变和流失。
此外，硫磺熏蒸还会导致SO2残留，以及砷、汞等重金属超标，可能对人体肝、肾等脏器造成严重危害。
因此，从2000年版《中国药典》以来，收录的硫磺熏蒸中药材数目逐年减少；2010年版《中国药典》增加了中药材及其饮片的SO2残留限量标准。
然而，在实际的中药材加工贮藏和炮制过程中，由于其简便易行且成本低，硫磺熏蒸现象仍然屡见不鲜，这不仅扰乱了中药材市场的秩序，也带来了很多用药安全隐患。
麦冬为百合科(Liliaceae)沿阶草属(Ophiopogon)植物麦冬Ophiopogon japonicus (L. f.) Ker-Gawl.的干燥块根，作为临床常用的著名中药，其始载于《神农本草经》，列为上品，具有养阴生津、润肺清心之功效。
麦冬的主要有效成分为甾体皂苷、高异黄酮和多糖等，常用于各中药复方制剂的生产中[7]。
基于美化外观的目的，硫磺熏蒸也常被用于麦冬药材的前处理过程中[8-10]，但相关的有效成分变化情况却未见报道。
超高效液相色谱-高分辨质谱法(UHPLC-HRMS)结合了超高效液相色谱的快速分离能力和高分辨质谱的高灵敏度、高质量精度、高专属性的检测能力，现已成为中药化学成分及其体内代谢过程研究的常用方法[11-13]。
线性离子阱-静电场轨道阱质谱(LTQ-Orbitrap MS)可提供高分辨率(最高达100 000)的相对分子质量和丰富的碎片离子信息，能够为中药复杂物质体系的快速解析提供更可靠的依据[14-15]。
基于前期研究的基础[16]，本研究拟采用UHPLC-LTQ-Orbitrap高分辨质谱法筛选鉴定硫磺熏蒸麦冬中高异黄酮的含硫衍生物，以期为阐明麦冬在硫磺熏蒸过程中主要成分的转变机制提供参考。
1 实验部分1.1 仪器Thermo Fisher DIONEX Ultimate 3000超高效液相色谱仪和LTQ-Orbitrap XL 线性离子阱-静电场轨道阱质谱仪：美国Thermo Fisher公司产品，配有电喷雾离子源(ESI)，Xcalibur 2.1工作站；R200D型电子分析天平(十万分之一)：德国Sartorius公司产品；Milli-Q Synthesis超纯水纯化系统：美国Millipore公司产品；热恒温鼓风干燥箱：上海一恒科技有限公司产品；KQ-250DE型超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司产品。
1.2 材料与试剂4批次新鲜麦冬药材：由四川代为本农业科技有限公司麦冬种植基地提供，经北京中医药大学中药学院乔延江教授鉴定为百合科植物麦冬Ophiopogon japonicus 的块根；固相萃取小柱(200 mg/3 mL，59 μm，70 Å)：美国Grace Davison Discovery Science公司产品；甲醇、乙腈和甲酸：均为质谱级，美国Thermo Fisher公司产品；实验用水：由Millipore超纯水机制备；其余试剂均为分析纯。
1.3 麦冬药材的模拟硫磺熏蒸取新鲜川麦冬药材洗净，粉碎成粗粉，混匀，每批次称取20 g，备用；点燃10 g 硫磺放入干燥器底部，药材置于带孔隔离板上，密闭熏蒸24 h[4,17]；之后置于50 ℃烘箱中鼓风干燥12 h，得干燥的硫磺熏蒸麦冬药材[18]。
1.4 供试品溶液的制备将硫磺熏蒸麦冬药材粉碎，过筛，精密称取3.0 g，加入25 mL 70%甲醇溶液，超声处理(功率250 W，频率40 kHz)30 min，混匀，静置至室温；过滤，收集滤液，于50 ℃水浴中烘至近干，加2 mL水使之溶解，通过预平衡的固相萃取C18-Low小柱，依次用2 mL水和2 mL甲醇洗脱，收集洗脱液，以0.22 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液。
1.5 实验条件1.5.1 色谱条件色谱柱：Acquity UHPLC HSS T3柱(2.1 mm×100mm×1.7μm)；柱温25 ℃；流动相：A为0.1%甲酸-水溶液，B为乙腈-甲醇溶液(3∶1, V/V)；梯度洗脱条件：0～2 min(10%B)；2～10 min(10%～20%B)；10～28 min(20%～26%B)；28～31 min(26%B)；31～45 min(26%～32%B)；45～55 min(32%～46%B)；55～90 min(46%～67%B)；90～93 min(67%～80%B)；流速0.30 mL/min；进样量2 μL。
1.5.2 质谱条件电喷雾离子源(ESI)，负离子检测模式，毛细管温度350 ℃，鞘气流速30 L/h，辅助气流速10 L/h，喷雾电压3 kV，毛细管电压-35 V，管透镜电压-110 V。
采用高分辨傅里叶(FTHM)对样品进行一级和二级扫描，分辨率分别为30 000(一级)和15 000(二级)，质量扫描范围m/z 100～800，隔离宽度2 u；二级和三级质谱采用数据依赖性扫描(data dependent scan, DDS)，选取上一级丰度最高的2个峰进行碰撞诱导解离(CID)碎片离子扫描，激活能量单位0.25 q，激活时间30 ms，归一化碰撞能量(normalized collision energy)为35%。
2 结果与讨论对硫磺熏蒸麦冬中含硫衍生物类成分进行色谱分析，设定高分辨质谱数据处理参数如下：最大分子质量误差为5×10-6，C、H、O和S原子数目的范围分别为16～30、12～40、4～17和1～5。
结合高分辨质谱数据及多级质谱碎片离子信息，从4批硫磺熏蒸麦冬中共筛选出41个高异黄酮含硫衍生物，包括18个硫酸酯和23个亚硫酸酯。
负离子模式下的提取离子流图(EIC)示于图1，3种可能的母核结构示于图2，各化合物的保留时间、高分辨质谱质量数理论值与实测值、误差以及多级碎片离子信息列于表1。
2.1 高异黄酮硫酸酯的结构鉴定结合多级质谱信息、保留时间及特征碎片离子，本研究共从硫磺熏蒸麦冬药材供试品溶液中筛选了18个高异黄酮硫酸酯类成分。
在其二级质谱图中，均出现[M-H-SO3]-特征碎片离子峰，可作为硫酸酯类成分的快速筛选依据。
在负离子检测模式下，化合物23和26的保留时间分别为45.24 min和49.05 min，其理论准确相对分子质量为377.032 5 [M-H]-，根据Xcalibur软件推测其分子式为C17H13O8S(误差<±5×10-6)。
在二级质谱中，二者均产生m/z 297.055 8 [M-H-SO3]-的特征碎片离子峰，由此推断它们为硫酸酯类衍生物。
在三级质谱中，出现了m/z 204 [M-H-SO3-B ring+CH]-和m/z 191 [M-H-SO3-B ring]-的高异黄酮特征性的裂解碎片，可推断B环上有1个羟基取代，而A环上有1个羟基和1个甲基取代。
根据色谱保留行为以及文献报道[16]，8位甲基取代相对于6位甲基取代的ClogP值越小，在反向色谱柱上的保留时间越短。
因此，将二者分别鉴定为5,7,4’-三羟基-8-甲基高异黄酮硫酸酯和5,7,4’-三羟基-6-甲基高异黄酮硫酸酯，其多级质谱图及裂解规律示于图3。
图1 4个批次硫磺熏蒸麦冬中高异黄酮含硫衍生物的提取离子流图Fig.1 Extracted ion chromatograms (EIC) of homoisoflavonid sulfated derivatives in sulfur fumigated Ophiopogon japonicus for 4 batchs图2 硫磺熏蒸麦冬中高异黄酮含硫衍生物可能的3种母核结构Fig.2Three parent structures of homoisoflavonid sulfated derivatives in sulfur fu migated Ophiopogon japonicas化合物32和35，其准确理论相对分子质量为m/z 421.022 4(C18H13O10S，误差<±5×10-6)。
二级碎片离子m/z 341.065 3(C18H13O7)为母核特异性脱去SO3基团生成；三级碎片离子m/z 204及m/z 191则与化合物23和26相似。
但是，与化合物23和26相比，化合物32和35的B环上多了44 u，推测B环上存在亚甲二氧基取代。
结合文献报道[19]及ClogP值大小，将它们分别鉴定为5,7,2’-三羟基-3’,4’-亚甲二氧基-8-甲基高异黄酮硫酸酯及5,7,2’-三羟基-3’,4’-亚甲二氧基-6-甲基高异黄酮硫酸酯。