玉竹中新高异黄酮类化合物及其生物活性研究

玉竹中新高异黄酮类化合物及其生物活性研究
李丽红*
，任风芝，陈书红，郑智慧，高月麒，张华，贺建功（华北制药集团新药研究开发有限责任公司天然药物室，河北 石家庄 ）
摘要：目的 研究玉竹的生物活性成分。

方法 利用各种柱色谱及高压液相色谱等方法进行分离和纯化，根据理化性质和光谱数据对化合物结构进行鉴定；并应用高通量筛选模型对化合物进行评价。

结果 从玉竹中分离得到三个高异黄酮类化合物，确定结构分别为，(′，′)（Ⅰ），， (′，′) （）, (′) （Ⅲ）, 三个化合物均显示了较强的抗肿瘤活性和抗炎活性。

结论 化合物～为未见文献报道的新化合物，其抗肿瘤和抗炎活性为首次报道。

关键词：玉竹；高异黄酮；化学成分；抗肿瘤；抗炎；人白细胞弹性蛋白酶 (.)
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玉竹为百合科()黄精属()植物玉竹( (.))的干燥根茎，为常用中药。

最早以葳蕤之名始载于《神农本草经》，列为上品。

玉竹味甘性平，能养阴润肺，益胃生津，用于燥热、伤阴、热伤和胃阴之症，有提高免疫力、强心、降血糖、降血脂等功效[], 其综合利用经济价值正逐渐引起人们的重视。

主要含有多糖、皂苷、甾醇、黄酮类等成分。

我们对玉竹的化学成分进行了研究，从中得到多个高异黄酮类化合物，其中三个为未见文献报道的新化合物 。

本文主要对三个新的高异黄酮类化合物及其抗肿瘤活性进行报道。

仪器与材料
型（内标）核磁共振波谱仪， 型质谱仪（公司）；
型高效液相色谱仪；制备色谱柱（ ，μ ， ×）； (公司)；柱层析用硅胶（～目，青岛海洋化工厂）；薄层层析用硅胶板（美国默克公司）。

显色剂：硫酸乙醇溶液。

除色谱纯乙腈外其余试剂均为分析纯。

玉竹药材购自石家庄乐仁堂大药房，经鉴定为黄精属植物玉竹的干燥根茎。

提取与分离
玉竹根茎经％乙醇提取次，每次两小时，提取液浓缩至无乙醇味。

浓缩液经水稀释，不溶部分用甲醇溶解。

甲醇溶部分经硅胶柱色谱，石油醚－丙酮洗脱，分为部分。

第二部分经硅胶柱色谱，石油醚－乙酸乙酯洗脱，得到各流份。

流份经 柱色谱，制备液相得到化合物Ⅲ（）；流份经硅胶柱色谱， 柱色谱，，制备液相得到化合物Ⅰ（），（）；。

化合物结构如下所示：
O
CH 3
HO
H 3CO
OH
OH O
HO 234
4a
5
6
78
8a
9
1'
6'
2'3'4'
5'
O O
OH
HO OH HO H 3C
O CH 3
HO H 3CO
OH OCH 3
O
Ⅰ Ⅱ Ⅲ
结构鉴定
化合物Ⅰ为淡黄色针状结晶(甲醇水)，紫外（）下显红棕色斑点，％硫酸乙醇显色后呈桔红色。

显示准分子离子峰为[]，结合，推断其分子式为。

（，）谱显示，δ (, , , ，)，(, , , ，，)，（，，）, (, , , ，)，(, , , ，)五组脂肪氢信号，为二氢高异黄酮，，位五个氢的特征信号峰；δ (, , ，′)，(, , ，′)，（, , , ，′）呈偶合系统，为二氢高异黄酮环间位取代的特征信号峰；δ（，, ），（，，）为一甲基信号峰。

谱中未显示
其他取代基的氢信号，推测该化合物的其余位置均为羟基取代，结构中应有四个羟基的存在。

（，）谱显示，δ为一羰基信号，δ ，，，为连羟基碳信号，进一步证实了羟基取代基的存在；个脂肪碳δ（）（）,一个亚甲基碳信号δ（）为二氢高异黄酮的特征信号峰；其余碳数据见表。

谱中可看到，δ（）与δ（），（）（），（）相关，可确定该甲基连在碳位；结合谱（见表）对其余取代基位置进行了确定并对其碳、氢信号作了归属，确定该化合物结构为，(′，′)。

化合物Ⅱ为淡黄色针状结晶(甲醇水)，紫外（）下显红棕色斑点，％硫酸乙醇显色后呈桔红色。

显示准分子离子峰为[]，结合，推断其分子式为。

（，）谱显示，δ (, , , ，)，(, , , ，)，（，，）, (, , , ，)，(, , , ，)五组脂肪氢信号，显示该化合物为二氢高异黄酮类化合物。

δ(, , ，′)，(, , ，′)，（, , , ，′）为二氢高异黄酮环间位取代的特征信号峰；δ（，，）为一甲基信号峰。

（，）谱显示，δ为一羰基信号，δ，，，，为连氧碳信号。

其余碳数据见表。

该化合物的氢谱碳谱数据与化合物相似，只有由于取代基的不同而引起的信号差别。

谱中可看到δ（）与δ（），（）（），（）相关，可确定该甲基连在碳位；结合谱（见表）对其余取代基位置进行了确定并对其碳、氢信号作了归属，确定该化合物结构为，(′，′)。

化合物Ⅲ为淡黄色针状结晶(甲醇水)，紫外（）下显红棕色斑点，％硫酸乙醇显色后呈桔红色。

显示准分子离子峰为[]，结合，推断其分子式为。

（，）谱显示，δ (, , , ，)，(, , ，′，)，（，，）, (, , , ′，)，(, , , ，)五组脂肪氢信号，为二氢高异黄酮，，位五个氢的特征信号峰；δ（, , , ′′），（, , , ′′）呈′′偶合系统，推测环′取位；δ（, , ），（, ,′）为两个甲氧基信号峰，δ （，，）为一甲基信号峰。

谱中未显示其他取代基的氢信号，推测其余取代位置均为羟基取代。

（，）谱显示，δ为一羰基信号，δ，，，为连氧碳信号，其余碳数据见表。

谱中可看到，δ（）与δ相关，而与δ相关的还有δ(, , )，δ(, , )，由此可确定δ（）连在环的′(δ)。

结合谱，对化合物其余部分信号进行归属。

确定该化合物结构为, (′)。

表化合物的(，) 数据
′
′
′
′
′
′
′
表化合物的数据
, ，, , , , ,
, ,
, , , ,
, , ,
′′, ′, ′′, ′,′
′′, ′′, ′, ′
′′, ′, ′
′, ′′, ′, ′
′, ′ ′, ′, ′
′ ′
化合物
顺铂
化合物的抗炎活性评价
人白细胞弹性蛋白酶（，）活性测定原理是以化学标记的多肽为底物，测定酶反应前后值的变化。

反应式如下：
多肽多肽
由于产物在处有特定吸收，因此测定酶反应前后附近处值的变化可间接测定的活性。

活性测定过程：在孔板的样品孔中加入测试样品的溶液，加酶液和缓冲液共μ；对照孔用代替样品溶液；空白孔用代替样品溶液并用缓冲液代替酶液。

使用多标计数仪在波长下，读取每孔值（样品本底）；加入底物μ，℃保温反应分钟后再次读取每孔的值（），并计算样品的抑制率。

化合物
讨论
高异黄酮类化合物是黄酮化合物中特殊的一类，这类化合物在植物中较少见，主要分布于百合科植物中。

我们从百合科玉竹中分植物离得到了多个该类化合物，活性评价显示所得的高异黄酮对多种肿瘤细胞增殖具有明显的抑制作用，同时具有很强的抗炎作用。

人白细胞弹性蛋白酶是人体中的一种主要的蛋白酶，它的直接作用底物是肺、肝脏、肾脏等结缔组织中的弹性蛋白、胶原蛋白、蛋白多糖等胞外基质。

弹性蛋白酶可以破坏胶原纤维及组织基底膜层，在肿瘤的形
成和肿瘤转移方面起关键作用，所以弹性蛋白酶成为抗癌新药的作用靶点[]。

本实验结果显示，抑制活性可能是高异黄酮抗癌、抗炎的机理之一。

玉竹在我国分布广，资源丰富，并且是药食两用中药材，通过本文的研究，为玉竹在植物抗癌药方面的进一步研究提供了科学依据。

[] （中国药典）[]. ：.
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