医学实验设计范例

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临床试验知情同意书的设计规程及范例

临床试验知情同意书的设计规程及范例

临床试验知情同意书的设计规范及范例临床试验知情同意书分“知情告知”与“同意签字”两部分,其设计应符合完全告知、充分理解、自主选择的原则,必要时还应设计帮助受试者理解研究目的、程序、风险与受益的视听资料。

临床试验前需作筛选检查,收集生物标本,必须得到两种知情同意,一种用于生物标本的收集和分析,另一种用于得出满意实验室结果并符合纳入标准后参加试验。

临床试验中保证受试者权益的主要措施之一就是知情同意。

知情同意书(informed consent form)是每位受试者表示自愿参加某一试验的文件证明。

1、设计依据根据“赫尔辛基宣言”、国际医学科学组织委员会(CIOMS)的“人体生物医学研究国际伦理指南”,国家食品药品监督管理局(SFDA)“药物临床试验质量管理规范”以及临床试验方案进行设计。

2、设计原则符合“完全告知”的原则。

采用受试者能够理解的文字和语言,使受试者能够“充分理解”,“自主选择”。

知情同意书不应包含要求或暗示受试者放弃他们获得赔偿权利的文字,或必须举证研究者的疏忽或技术缺陷才能索取免费医疗或赔偿的说明。

3、知情同意书格式页眉和页脚:页眉左侧为试验项目名称,右侧为知情同意书版本日期;页脚为当前页码和总页码。

知情同意书分“知情”与“同意”两部分,前者为“知情告知”(必要时还应设计帮助受试者理解研究目的、程序、风险与受益的视听资料),后者为“同意签字”。

临床试验前需作筛选检查,收集生物标本,必须得到两种知情同意,一种用于生物标本的收集和分析,另一种用于得出满意实验室结果并符合纳入标准后参加试验。

筛选时发现不合格(医学方面的原因)的研究对象,应给予有帮助的参考意见、任何必要的和有用的治疗或推荐到其它部门就诊。

知情同意书一式两份,受试者保存其副本。

4、“知情告知”的内容研究背景(包括研究方案已得到伦理委员会的批准等)与研究目的;哪些人不宜参加研究;可替代的治疗措施;如果参加研究将需要做什么(包括研究过程,预期参加研究持续时间,给予的治疗方案,告知受试者可能被分配到试验的不同组别,检查操作,需要受试者配合的事项);根据已有的经验和试验结果推测受试者预期可能的受益,可能发生的风险与不便,以及出现与研究相关损害的医疗与补偿等费用;个人资料有限保密问题;怎样获得更多的信息;自愿参与研究的原则,在试验的任何阶段有随时退出研究并且不会遭到歧视或报复,其医疗待遇与权益不受影响的权力。

安医大基础医学实验技能

安医大基础医学实验技能

安医大基础医学实验技能
1. 实验设计与操作:学生需要学习如何设计和执行科学实验,包括选择适当的实验方法、控制变量、收集和分析数据等。

2. 生物化学与分子生物学实验:学生将学习生物大分子的提取、分离、纯化和鉴定技术,以及基因克隆、PCR 技术、蛋白质表达等分子生物学实验技能。

3. 生理学与药理学实验:学生将进行生理学实验,如血压测定、心电记录、平滑肌收缩等,以及药理学实验,如药物剂量效应关系的测定。

4. 解剖学与组织学实验:学生通过解剖实验,学习人体解剖结构和器官的位置关系,同时进行组织学切片的观察和分析。

5. 微生物学与免疫学实验:学生将学习微生物的培养、鉴定和药敏试验,以及免疫学实验技术,如血清学检测、免疫细胞功能测定等。

通过这些实验技能的学习和训练,安医大的学生将掌握基础医学研究的基本方法和技术,培养科学思维和实践能力,为进一步的医学研究和临床实践打下坚实的基础。

病例对照实验的经典 Doll和Hill关于吸烟与肺癌关系的研究

病例对照实验的经典 Doll和Hill关于吸烟与肺癌关系的研究

敦和英国其他地区重复回顾调查,均得到一致性结果。
1.病例组与对照吸烟习惯与肺癌的关系 Doll 和 Hill 用回顾性配对调查方法分析了
649 例男性肺癌病人,60 例女性肺癌病人与 649 例男性 60 例女性对照者吸烟习惯。男性肺
癌病人不吸烟者为 0.3%,对照组不吸烟者为 4.2%(P=0.00000064),女性肺癌不吸烟者为 31.7%,对照组为 53.3%(P<0.02),说明肺癌病人不吸烟者很少,绝大多数都有吸烟习惯。 见表 2。
3、病例组与对照组消耗烟叶最大量和消耗总量 回顾性调查分析了男性肺癌病人 647 例,对照 622 例,女性肺癌 41 例,对照 28 例。肺癌病人消耗烟叶的最大量和消耗总量均显 著大于对照病例,见表 6,表 7。
表 5 肺癌病人各年龄组 10 年内平均每日吸烟叶量与每年肺癌期望死亡率(‰)
性别与年龄 不吸烟 <5
的随访观察,阐明了吸烟与肺癌的相关性,这为研究癌症病因提供了一个范例。现将其方法、
设计及结果综述如下:
一、回顾性研究
(一)回顾性研究设计的要点
1. Doll 和 Hill 设计的基本要求 首先选定病例组,病人要诊断明确,有代表性,要
设立相应的对照组,在病例与对照组中用同样的方法回顾有无暴露于某因素,以及暴露的程
男 25~ 45~ 65~74
0 0.03 0.14 0.59
0 2.38
女 25~
0.006 0.04
死亡率(‰) 10 年内每日平均吸烟量
+
5~ 15~ 25~ 50
0.13 1.35 2.66
0.12 1.67 3.88
0.17 2.95 6.95
0.52 4.74 10.24

实验设计大纲范例--肺水肿

实验设计大纲范例--肺水肿

机能学实验设计大纲实验名称:外源性PS和内源性PS在肺水肿疗效中的比较课题来源:自选设计班级:2004级临床本科甲班设计人员:林静余英罗萍叶娟胡明娟设计日期:2006年10月8日指导老师:张晓梁楠成都医学院实验技术教研室2006年制二、实验设计方案(实验设计目标,拟解决的主要问题, 实验动物设计,实验专业设计,实验统计设计,实验方法设计,可行性分析,预期结果,实验设计工作时间安排)。

(一)实验设计目标,拟解决的关键问题设计目标:探讨外源性肺表面活性物质和内源性肺表面活性物质对实验性肺水肿治疗作用上所存在的区别,从而探讨外源性PS能否在肺水肿的防治中作为一种较为理想的内源性PS不足的替代药物。

拟解决的关键问题:实验模型的制备。

对试验性肺水肿的模型进行分组与实验结果分析。

(二)实验设计1、实验动物设计我们选用家兔作为实验动物,有以下几点理由:1)、家兔易得到,容易饲养,在科研工作中被广泛利用。

2)、家兔肺相对较大,易于得到样品,能在称重过程中减少实验误差。

2、实验专业设计选用家兔作为实验动物,给予外源性肺表面活性物质和内源性肺表面活性物质,观察对实验性肺水肿治疗作用,观察兔子死亡时间(min),肺系数(g/kg),肺湿/干重比(g/g),血管外肺水(g)等实验指标。

3、实验统计设计实验统计设计中应始终贯彻随机、对照、重复三大原则。

(1)随机:选正常成年健康重相近的家兔80只,将80只家兔按体重由小变大编号后,从随机数字表中查取随机数字,依次抄录于家兔编号下。

具体方法:动物编号为1—80号,随机数字从11行第一个数字开始接着抄写80个,按照能被4除的规律:不余到A组,余1到B1组,余2到B2组,余3到B3组,每组20只。

(2)对照:本组实验做了空白对照和实验对照,在前面的专业设计里已经提及。

(3)重复:本实验采用的是每实验小组有20只家兔,具有一定的重复性。

(4)统计数据收集:本实验搜集计量资料,初步确定对各组实验数据的比较分为实验值和基础值比较。

临床医学开题报告范例

临床医学开题报告范例

临床医学开题报告范例一、研究题目基于大数据分析的慢性病患者健康管理模式优化研究二、立题依据随着现代医疗技术的不断进步,临床医学对于疾病的诊断和治疗已经达到了前所未有的高度。

然而,在慢性病患者的管理方面,仍然存在着诸多挑战。

慢性病患者通常需要长期的医疗照护和生活方式调整,而传统的健康管理模式往往难以满足他们的个性化需求。

因此,本研究旨在通过大数据分析技术,对慢性病患者健康管理模式进行优化,以提高患者的生活质量和医疗效果。

三、研究目的与意义本研究的主要目的是利用大数据分析技术,对慢性病患者的健康数据进行深入挖掘和分析,以发现患者健康状态与生活方式、环境因素等之间的关联,从而提出针对性的健康管理策略。

通过优化健康管理模式,本研究期望能够降低慢性病患者的并发症发生率,提高患者的生活质量,减轻医疗系统的负担。

四、国内外研究现状目前,国内外在慢性病管理领域已经取得了一定的研究成果。

然而,大多数研究仍然停留在传统的健康管理模式上,缺乏对大数据技术的深入应用。

近年来,随着大数据技术的快速发展,越来越多的学者开始尝试将其应用于慢性病管理中。

然而,由于数据收集、处理和分析的复杂性,目前的研究仍处于起步阶段。

因此,本研究具有重要的理论和实践意义。

五、研究内容与方法本研究将采用文献综述、问卷调查和大数据分析等方法,对慢性病患者的健康数据进行收集和分析。

首先,通过文献综述了解国内外在慢性病管理领域的研究现状和发展趋势;其次,设计问卷调查,收集慢性病患者的健康数据和生活方式信息;最后,利用大数据分析技术,对收集到的数据进行深入挖掘和分析,以发现患者健康状态与生活方式、环境因素等之间的关联。

六、预期成果与贡献通过本研究,预期能够提出一套基于大数据分析的慢性病患者健康管理模式优化方案。

该方案将能够根据患者的个性化需求和生活环境,为其提供精准的健康管理建议和服务。

此外,本研究还将为临床医学领域提供一种新的研究方法和思路,推动慢性病管理领域的创新和发展。

医学科研选题范例

医学科研选题范例

医学科研选题范例篇一:大学生医学科研课题大学生医学科研课题医学科学研究探索生命和疾病的现象,阐明健康和疾病的关系,建立有效的防病治病的方法,这就是医学科学研究1. 研究对象的特殊2. 研究方法困难3. 研究内容复杂(1)医学科学研究的类型基础研究应用研究(2)根据场地实验研究临床研究调查研究(3)根据创新研究的程度认识的深度研究方法研究的范畴医学研究的一般方法1. 选题定题(鲜明,具体,确切)立题新颖2. 建立假说3. 科研设计4. 实验观察5. 数据处理6. 论文形成7. 成果应用8. 科研设计篇二:医学科研设计与选题END医学科研文献与选题心得体会学院:年级:姓名:学号:医学院武玉飞1433651医学科研设计与选题是我们每个同学都应该认真去学习的一门课,因为我们每一位博士或者硕士研究生都将会遇到这样的难题,都应该学会去如何设计,如何选题,如何选择真正有意义的课题。

在短短近10节课的学习过程中,我们深刻体会到医学科研设计与选题不是那么容易的,至少对于现在的我来说,是一件极不可能的事,因为我不具备那样的能力:首先,我们每个人都应该具有对于自己喜欢的领域有最基本的认识,包括基本的理论知识、该领域国际国内研究进展。

当我们确定了我们的研究方向时,我们首先做的不是去看文献,因为有些我们真的看不懂,也可能会出现错误的理解。

那我们应该做什么呢?首先,我们应该做的是学习理论知识,扎实的掌握,并且学会运用该知识分析案例,比方说临床上出现某疾病现象,那我们就应该去分析该现象的发生,并进行论证,只有这样你才可以真正的成为知识的拥有者。

接下来,我们应该做是什么呢?在充分掌握我们自己领域的理论知识后,我们就需要去阅读写相关文献,尤其是影响因子比较高的综述,这样才可以快速的进入我们的研究领域。

然后,我们就需要去阅读写具体文献,重大发现,该领域大亨的经典论文,他们的设计方法,他们的发现以及他们还未曾解决的问题。

在边看文献的同时尽量在Word里面做笔记,这样对于我们的今后回顾充分了解也是有很大帮助的。

医学标书研究内容怎么写 范例

医学标书研究内容怎么写 范例

医学标书是医学研究过程中非常重要的一部分,通过对医学标书研究内容的撰写,可以提高研究的质量和效率,下面我们将从以下几个方面来介绍医学标书研究内容的写作范例。

一、研究背景与意义在医学标书的研究内容中,首先需要明确研究的背景和意义。

研究背景部分需要阐明当前研究领域的研究现状和存在的问题,概述国内外相关研究的进展和不足,为本研究的开展提供必要的前期知识储备。

应当明确研究的意义和价值,阐述该研究对医学领域的重要意义,以及对临床实践和医学科研的促进作用,从而引起评审人员的兴趣和重视。

二、研究目的与重点在医学标书的研究内容中,必须明确研究的目的和重点。

研究目的部分需要清晰地阐述本研究的总体目标和具体目的,指出解决的科学问题和临床需求。

应当明确研究的重点和难点,为评审人员展示本研究的创新点和亮点,使其能够清晰地了解本研究的独特之处。

三、研究方法与设计在医学标书的研究内容中,研究方法与设计是至关重要的部分。

研究方法与设计部分应当详细描述研究的方法论和技术路线,包括研究设计、样本选取、实验操作、数据收集和统计分析等内容。

应当说明本研究的合理性和可行性,为评审人员展示研究的科学性和严谨性,使其能够信服该研究的可靠性。

四、预期成果与应用价值在医学标书的研究内容中,需要明确研究的预期成果和应用价值。

预期成果部分应当展望本研究取得的预期结果,并阐述预期成果对医学科研和临床实践的贡献。

应用价值部分则需要说明本研究的应用前景和市场需求,为评审人员展示研究的应用潜力和经济价值,使其能够看到该研究的发展前景。

医学标书的研究内容应当包括研究背景与意义、研究目的与重点、研究方法与设计、预期成果与应用价值等内容,全面而细致地展现本研究的特点和优势,以期获得更多的支持和认可。

在医学标书的研究内容中,除了以上提到的几个方面之外,还有一些其他值得关注的内容需要进一步展开和说明。

五、研究流程与时间安排在医学标书的研究内容中,研究流程与时间安排是十分关键的一部分。

药理学实验与设计

药理学实验与设计

实验八
实验设计(二) 肝损伤对药物作用的影响
【目的】观察肝功能损伤对戊巴比妥钠作用的影响。 【器材】天平,1 ml注射器,组织剪。 【药品】25%四氯化碳油溶液,0.15%戊巴比妥钠。 【动物】小白鼠。 【方法】在实验前24h先取小鼠2只,25%四氯化碳油溶 液灌胃 0.1 ml/10g 造成肝损伤。实验时取给予 四氯化碳小鼠和正常小鼠各 2 只,均腹腔注射 0.15 %戊巴比妥钠 0.2 ml/10g ,观察动物反应 。记录各鼠翻正发射消失和恢复时间,并计算 入睡时间和睡眠时间。 【结果】将所观察的实验结果填入下表。
容量生理盐水。于末次注射庆大霉素后,收集24 h总尿量 ,并断头处死动物。取血制备血清,测定血清 BUN 和Cr
。剖腹取肾,经10%甲醛固定后,常规制片,进行组织学
检查。 【统计】血清BUN、Cr 和24h 总尿量采用组间 t 检验,肾 组织切片采用光镜观察。
实验设计(五)
当归注射液 对实验性IUGR的保护作用 及机制
天置于烟气中4次(8AM, 12AM, 2PM, 5PM), 每次15
min 。被动吸烟时孕鼠置于0.02 m3半封闭容器内,2 min内连续抽吸0.3只香烟,烟雾浓度10 g/m3。正常对
照组每天同时半封闭容器内4 次, 每次15 min 。
标本采集:妊娠第20天,2%戊巴比妥钠40mg/kg腹腔 麻醉。剖腹取胎, 留取胎盘。
药理学实验与设计


武汉大学医学院药理学系
一、实验设计的三个基本要素
处理因素 实验对象 实验效应
(一) 处理因素
药物
根据研究目的由实验者施加给受试对象的因素。 1. 处理因素的标准化 有来源、批号、剂型、给药途径、给药剂量等 2. 处理因素的数量、水平与设计 分单、多因素设计,单、多水平设计等。 3. 消除非处理因素干扰 年龄、性别等,注意构成比,要一致。
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医学实验设计范例篇一:实验设计范例4~6岁儿童风险决策中的损失规避效应研究(实验设计参考)1 前言(1500字以上)1.1 问题提出1.2 相关理论基础1.3 前人研究2 实验设想2.1 实验目的采用赌博任务,测查幼儿在一次赌博完成以后继续赌博的可能性,探讨4~6岁儿童风险决策中的损失规避效应的发展水平、规律及其机制。

2.2 实验方法2.2.1 设计本研究采用3 × 2多因素设计。

自变量1为年龄,分为4岁、5岁、6岁三个水平,被试间变量。

自变量2为赌注价值,分为重要和不重要两个水平,被试间变量。

因变量为儿童继续进行赌博的可能性。

2.2.2 材料糖果若干,卡通图片若干,玩具若干,一元钱的硬币1个。

2.2.3 被试4~6岁儿童各60名,共180名,性别大致均衡。

2.2.4 程序把幼儿平均分成2组,一组为赌注价值重要组(A组),另外一组为赌注价值不重要组(B组)。

所有实验均为单独施测。

主试作为赌博的另外一方参与游戏。

每次正式实验之前都有一次预实验,直到幼儿完全明白规则以后才开始正式实验。

正式实验持续两轮赌博,每轮赌博的赌注数量均由幼儿自行决定,主试记录幼儿每次的赌注数量。

第一轮赌博结束后,清点幼儿的输赢情况,观察记录幼儿赌博后与赌博前表情变化,并询问幼儿是否想继续赌博。

如果幼儿不想再继续,则询问为什么并记录其原因,然后结束实验;如果幼儿想继续,则询问为什么并记录其动机,然后继续下一轮赌博,最后记录幼儿的输赢情况。

预实验:首先,拿出糖果、卡片和玩具各一件,问幼儿最喜欢哪样东西或者最不喜欢哪样东西(A组问最喜欢,B组问最不喜欢)。

然后把幼儿选择的物品分发5件给幼儿。

主试也拿出相应数量的同样物品。

这时,主试告诉幼儿游戏规则。

指导语如下:小朋友,今天我们来玩一个“抛硬币”的游戏好吗?现在你手里有5个X(X表示物品,单位随物品而变化,下同),它们都是你的了。

老师也有5个X。

接下来,老师要和你做一个游戏,看看游戏完了以后谁的X多。

这个游戏就是“抛硬币”。

看,这个硬币有两个面,一面是一朵花,另外一面是一个数字。

当老师把这个硬币往上抛之后(主试示范),我们来猜猜它掉下来的时候会是哪面向上,花还是数字。

如果你猜对了,老师就给你X;如果老师猜对了,你就给老师X。

我们先拿几个X出来,随便你拿几个,你拿多少,老师就拿多少。

谁猜对了,就可以把这些X全部拿走。

明白了吗?好了,我们来试一下吧。

你先拿X出来,多少个?好,老师也拿N个(N表示主试拿出与幼儿同样多的数量)。

好,下面,老师开始抛硬币了,你猜猜它掉下来会是什么,花还是数字?嗯,老师猜它是F(F表示花或数字,主试让被试先猜,然后主试说与幼儿相反的一面)。

看,小朋友真聪明,猜对了,这些X全是你的了,来,给你(主试把X给幼儿。

如果幼儿输了,主试就说:噢,你猜错了,这些X是老师的了,然后把X从幼儿那里拿走)。

小朋友,知道怎么做了吗?(知道了就直接进入正式实验;如果幼儿还没有理解,则再向幼儿讲解和演示,直到幼儿明白为止。

)正式实验:指导语:(第一轮)好了,现在我们开始正式比赛了。

你出多少个X?好,老师也出N个X(主试拿出与幼儿一样多的X,并在记录单上记下该数量)。

老师要开始抛硬币了,你猜猜它掉下来会是哪面向上,花还是数字?嗯,老师猜它是F(主试让被试先猜,然后主试说与幼儿相反的一面)。

看,小朋友真聪明,猜对了,这些X全是你的了,来,给你(主试把X给幼儿。

如果幼儿输了,主试就说:噢,你猜错了,这些X是老师的了,然后把X从幼儿那里拿走)。

小朋友,我们来看看,你现在有多少X啊?(观察记录幼儿赌博后与赌博前表情变化)想不想再来一次啊?(如果幼儿回答想,则询问为什么并记录其动机,然后继续下一轮赌博;如果不想,则直接问为什么,然后记录幼儿的回答,结束实验)。

(第二轮)好,现在我们开始第二次比赛。

你拿几个X出来啊?嗯,你为什么要拿N个X呀?(记录幼儿给出的赌注数量和动机)好,老师也拿N个X出来(接下来的指导语与第一轮相同,直至赌博结束)。

好了,今天我们就玩到这里,谢谢你,你可以把这些X带走了。

表1 记录单3 实验的不足注:前言部分引用了他人文献,需要在最后整理出参考文献列表。

篇二:医学免疫学实验设计例子《医学免疫学》实验设计期别:xxx 班级:xx学号:xxxxxxxx 姓名:OOO IL-35对小鼠Ⅰ型糖尿病的治疗效果及免疫机制【立题依据】自身免疫性疾病(Autoimmune diseases)是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病。

如今越来越多的自身免疫性疾病被不断发现和认识,也越来越引起人们的关注。

Ⅰ型糖尿病(T1DM 自身免疫性胰腺炎)就是其中的一员,在全球大约有XX万患者,中国至少有100万的患者,但是Ⅰ型糖尿病常常在幼儿和青少年时期发生且为一种多基因遗传病有较高的遗传度(75%),表现为明显的家族遗传性。

同时,Ⅰ型糖尿病患者如治疗不善将引发严重的并发症,如失明、肾衰竭、心脏病、截肢等。

因此如果能正确了解Ⅰ型糖尿病的免疫学机制,并探索更加有效治疗及预防方案,对于患者本身乃至整个家族的身体和生活质量的提高意义重大。

Ⅰ型糖尿病的免疫学发病机制是体内除了抗原提呈细胞(APC)和活化的T淋巴细胞外正常细胞几乎不表达MHC-Ⅱ类分子,研究表明IFN-γ转基因小鼠的胰岛β细胞分泌IFN-γ,由于IFN-γ刺激MHC-Ⅱ分子的表达这种小鼠的胰岛β细胞高表达MHC-Ⅱ类分子,这样以来免疫细胞就会结合并识别胰岛β细胞然后对其进行攻击,使其丧失胰岛素分泌活性,最终导致体内胰岛素缺乏。

调节性T细胞(Treg)是一些CD4+T cell还可高表达IL-2受体的α链(CD25)分子,胞质中表达Foxp3转录因子的T细胞分化亚群。

它的主要功能是通过抑制CD4+ Tcell和CD8+ Tcell的活化与增殖从而达到免疫的负调节作用。

通过协调Treg水平来调节Ⅰ型糖尿病患者的免疫功能可能成为新的治疗手段。

白细胞介素-35(IL-35)是XX年新发现的一种独特的具有免疫抑制功能的调节因子,属于IL—12细胞因子家族,IL-35为异源二聚,主要由活化的Treg分泌,对多种免疫细胞和细胞因子均有明显的抑制作用,参与介导机体免疫耐受的形成。

IL-35是否对Ⅰ型糖尿病患者具有治疗作用及其相关的免疫机制,还不十分清楚,仍有待继续研究和解决。

【实验目的】本实验就是通过提高NOD系小鼠(Ⅰ型糖尿病患鼠)体内的IL-35水平,观测小鼠各期的血糖尿糖等水平及后期的Ⅰ型糖尿病发病率、胰岛炎评分等,评定IL-35对Ⅰ型糖尿病的预防及治疗效果,并与其它一些免疫抑制性的药物(环孢菌素A)等,进行药敏对比;同时,体外测定小鼠体内IL-4及干扰素-γ(IFN-γ)的等含量及调节性T淋巴细胞的含量等,对小鼠的免疫体质及IL-35对Ⅰ型糖尿病(本文来自:小草范文网:医学实验设计范例)作用的免疫学机制有大体认识及方向把握,为以后的研究打下基础。

从而为新药(联合药)的开发,免疫抑制领域的深入研究有一定意义。

【实验对象】NOD系Ⅰ型糖尿病鼠和NON系正常不患病鼠(雌性4周龄)起源在对ICR/Jcl小鼠进行近郊培育的第6代,从白内障易感亚系分离出非肥胖糖尿病品系(NOD)和非肥胖正常品系(NON)。

在近交20代时,首先发现NOD雌鼠有胰岛素依赖性糖尿病。

特征自发Ⅰ型糖尿病以及多种自身免疫疾病小鼠。

通过病理学观察发现,NOD小鼠自身免疫性胰岛炎发生于4周龄。

NOD小鼠发病后,充分呈现该品系小鼠糖尿病的生理生化特征即:尿频·多饮·高血糖症状。

在几周的时间內,血糖迅速升高,饮水量剧增,大量的排尿,体重迅速下降,在这个过程中,患鼠血糖呈现迅速上升,后逐步下降,但仍维持高于正常值的状态,体重直线下降,最后昏迷而死亡。

于12周龄时出现明显糖尿病症状,至30周龄时雌性小鼠累计发病率可达到80%。

【实验材料】试剂及仪器 IL-35试剂,磷酸盐缓冲液(PBS), 酶联免疫吸附试验(ElISA)试剂盒,流式细胞仪,CD8及CD4单克隆抗体,注射器等基础实验器械。

【实验方法及步骤】1.小鼠的分组与处理选取NOD系Ⅰ型糖尿病鼠20只和NON系正常不患病鼠10只,分为三组。

10只NOD系小鼠作为实验组,10只NOD 系小鼠作为实验对照组,10只NON系正常不患病鼠作为正常对照组。

对各组四周龄小鼠采取:实验组注射IL-35注射液,每三天注射一次,注射量根据生物试剂公司提供的IL-35试剂说明书为准,连续注射7周;实验对照组和正常对照组注射等量的磷酸盐缓冲液(PBS),注射方式同实验组。

各组小鼠自由饮食,饮水不限。

2.糖尿病及体重检测从各组小鼠10周龄开始每周记录体重,每天采取断尾方式测血糖含量和尿糖含量,血糖连续2天超过16.00mmol/L 即诊断为糖尿病,30周后观察期满终止观察,计算各组小鼠发病率;3.胰腺炎严重程度评分30周后,颈椎脱臼法处死各组小鼠,取各组小鼠胰岛做HE染色切片进行病理性胰岛炎评分:0级:胰岛完整无淋巴细胞浸润,计0分;1级:有胰岛周围淋巴细胞浸润(即胰岛周围炎)或50%的面积受累,计3分。

记录各组小鼠评分值。

4.细胞因子水平测定取足等量的各组小鼠外周血用ELISA法检测IL-4及干扰素-γ(IFN-γ)的含量;5. CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞亚群测定取各组小鼠脾脏制成单核细胞悬液,应用流式细胞法检测大鼠脾脏CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞水平。

7.统计学处理应用SPSS统计学软件进行数据处理分析。

【预期结果及结论】预期结果实验组小鼠的发病率远低于对照组小鼠发病率;体重较对照组重;且对照组饮食饮水量远多于实验组和正常对照组;血糖和尿糖含量比对照组低,并接近于正常对照组(可偏高);干扰素-γ(IFN-γ)的含量实验组数据远低于对照组和正常对照组鼠,IL-4则恰恰相反;调节性T(Treg)细胞实验组计数和活性较对照组和正常对照组高。

结果分析IL-35具有明显减少Ⅰ型糖尿病发生及减轻病情的作用;由于IL-35使Th0细胞向Th2细胞分化,抑制Th1细胞分化,并升高调节性T(Treg)细胞水平。

所以IL-35可能通过上调机体Treg,诱导Th1与Th2的平衡向Th2转化,从而不会减少免疫细胞对自体胰岛β细胞识别与破坏,保证了胰岛β细胞的正常胰岛素分泌功能,维持血糖的正常。

为探索治疗Ⅰ型糖尿病的新方法提供理论依据。

【实验可行性分析】虽然没有用直接注射免疫抑制细胞因子来治疗自身免疫病的相关报道,但本实验设计方案合理;分组、对照完备;体内和体外实验兼有;技术方法和路线可行。

通过免疫学基础实验和理论的学习,已掌握免疫细胞、免疫分子的检测技术(ELISA法),具有可操作性;实验所需药品、试剂及动物均较易获得,具备开展实验的条件。

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