桑黄菌丝体培养条件优化

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药理作用包括： 药理作用包括：
1.抗癌、抗肿瘤作用（阻止磷酸化用、对肿瘤的直接杀伤作 抗癌、抗肿瘤作用 抗癌 用、抗诱变、抗突变作用、抗血管生成作用）； 2.保肝、抗肝硬化作用（抗脂质过氧化作用、抑制黄嘌呤氧 保肝、抗肝硬化作用 保肝 化酶活性作用、降血糖作用）； 3.免疫调节作用 免疫调节作用； 免疫调节作用 4.抗肺炎作用 抑菌及消炎作用）。 抗肺炎作用（ 抗肺炎作用
30 25
桑黄(g/100mL)
20 15 10 5 0 黄豆粉 尿素 蛋白胨 酵母膏 牛肉膏 空白
实验结果与讨论
酵母膏梯度试验
30 25 桑黄(g/ /100ml) 20 15 10 5 0 0 0.5 1 1.5 2 酵母膏(g/100ml) 2.5 3 3.5
yeast extract gradient test
桑黄(g/100 100mL)
最佳添加量： 最佳添加量：0.3g/100mL
Байду номын сангаас 实验结果与讨论 磷酸二氢钾的梯度试验
35 30
桑黄(g/ /100mL)
potassium dihydrogen phosphate gradient test
25 20 15 10 5 0 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7
实验结果与讨论 因素与指标趋势图
The analysis of crosscut exprimentation trend
30 25 桑黄(g/100 100mL) 20 15 10 5 0 A1 A2 A3 B1 B2 B3 C1 C2 C3 D1 D2 D3 因素(A:可溶性淀粉 B:酵母膏 C:硫酸镁 D:磷酸二氢钾)
25 20 15 10 5 0 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
可溶性淀粉(g/100mL)
最佳添加量： 最佳添加量：0.5g/100mL
实验结果与讨论 氮源对菌丝体生长的影响
桑黄液态培养基的氮源筛选试验
Phellinus linteus liquid nitrogen source of medium screening tests
实验材料与方法
四因素三水平L-9(34 )正交试验因素水平安排 四因素三水平 正交试验因素水平安排
Concentration of ariables and revels orthogonal experiment
水平
A B C D 可溶性淀粉 酵母膏 硫酸镁 磷酸二氢钾 （g/100mL） （g/100mL） （g/100mL） （g/100mL） ） ） ） ）
磷酸二氢钾(g/100mL)
最佳添加量： 最佳添加量：0.4g/100mL
实验结果与讨论 发酵时间对菌丝生长量的影响 桑黄生长曲线
30 25 桑黄(g/100 100mL) 20 15 10 5 0 0 2 4 6 生长时间(day) 8 10
the Phellinus linteus growth curve
pH自然 自然
接菌量： 接菌量： 15% 摇瓶转数： 摇瓶转数： 125r/min
装液量： 装液量： 100mL 温度： 温度： 27.5℃ ℃
实验材料与方法
实验流程：
单因素 实验
母种 活化
绘制生长 曲线
L9(34) 正交试验
实验材料与方法
种子活化： 种子活化：
1.斜面培养： 斜面培养：
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(MgSO4、KH2PO4)
梯度试验
确定最 优碳源 及最佳 添加量
确定最 确定最 优氮源 优氮源及其最 及最佳 佳添加 添加量
确定矿物 质元素 (MgSO4、 KH2PO4) 的最佳添加量
实验材料与方法 桑黄菌丝体培养时间的确定
在温度27.5℃,摇瓶转数 ℃ 摇瓶转数 摇瓶转数125r/min， 在温度 ， 条件下通过对其不同生长时间的菌丝 湿重进行测定并绘制生长曲线得出桑 黄菌丝体的最优生长天数。 黄菌丝体的最优生长天数。
实验确定桑黄菌丝体液态培养最优天数为7天 实验确定桑黄菌丝体液态培养最优天数为 天。
四因素三水平正交试验确定桑黄菌液体培养基优化配 0.5g/100mL、 2.5g/100mL、 方为：可溶性淀粉0.5g/100mL 酵母膏2.5g/100mL 方为：可溶性淀粉0.5g/100mL、酵母膏2.5g/100mL、 硫酸镁0.4g/100mL 磷酸二氢钾0.4g/100mL 0.4g/100mL、 0.4g/100mL。 硫酸镁0.4g/100mL、磷酸二氢钾0.4g/100mL。
培养步骤： 培养步骤：
250mL 三角瓶
（100mL培养基）
高压灭菌
冷却 接菌
（取斜面菌种挑边缘为0.3cm菌丝体3块）
空气浴振荡器中培养7天 空气浴振荡器中培养 天
（27.5℃，125r/min）
实验材料与方法
单因素实验： 单因素实验：
碳源筛选 试验及梯 度试验 氮源筛选 试验及梯 度试验 矿物质元素
桑黄(Phellinus 桑黄 linteus)，属担子 菌纲、多孔菌目、 多孔菌科、木层孔 菌属是一种具有重 要药用价值珍贵的 多年生大型药用真 菌。
桑黄的相关研究
实验研究的意义
桑黄中富含生理活性物质，目前 它是生物抗癌领域中药效较好的一种 药用真菌。通过本实验的研究为桑黄 活性物质进行提取分离、结构分析活 性研究及其功能性产品、药用保健品 的开发工作奠定了基础。并给桑黄大 规模培养的广阔前景提供依据。
1 2 3
0.30 0.50 0.70
1.50 2.00 2.50
0.20 0.30 0.40
0.25 0.40 0.55
实验结果
培养基成分对菌丝体生长的影响
1.碳源对菌丝体生长的影响 碳源对菌丝体生长的影响
桑黄液态培养基碳源筛选试验
Phellinus linteus liquid medium carbon source screening tests
桑黄的相关研究
桑黄的活性成分： 桑黄的活性成分：
桑黄含有的药理活性物质以多糖为主， 桑黄含有的药理活性物质以多糖为主，除此之外还含 有黄酮、三萜等多种活性成分。此外， 有黄酮、三萜等多种活性成分。此外，还含落叶松蕈 木糖氧化酶、过氧化氢酶、尿酶脲酶、酯酶、 酸、木糖氧化酶、过氧化氢酶、尿酶脲酶、酯酶、蔗 糖酶、纤维素酶等多种酶，及十多种微量元素。 糖酶、纤维素酶等多种酶，及十多种微量元素。
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桑黄液态培养条件下的营养成分优化
指导老师： 指导老师：侯红漫
班级学号：食质062班级学号：食质062-22 062
专业： 专业：食品质量与安全
姓名： 姓名：韩小溪
桑黄液态培养条件下的营养成分优化 1
桑黄的相关研究 实验材料与方法 实验结果 实验结论
2
3
4
桑黄的相关研究
实验研究对象： 实验研究对象：
最优组： 最优组：A2,B3 ,C3,D2
实验结论
1 2 3 4 5
桑黄液态培养基的最佳碳源为可溶性淀粉， 桑黄液态培养基的最佳碳源为可溶性淀粉，最佳 添加量应为0.5g/100mL 0.5g/100mL。 添加量应为0.5g/100mL。 桑黄液态培养基中的最佳氮源为酵母膏， 桑黄液态培养基中的最佳氮源为酵母膏，最佳添 加量为2.5g/100mL 2.5g/100mL。 加量为2.5g/100mL。 梯度实验测得矿物质硫酸镁与磷酸二氢钾的最佳 添加量分别为0 g/100mL、0.4g/100mL。 添加量分别为0.3g/100mL、0.4g/100mL。
致
谢
本论文是在导师老师侯红漫教授的指导下完成的。 本论文是在导师老师侯红漫教授的指导下完成的。 导师严谨的治学态度、渊博的专业知识、 导师严谨的治学态度、渊博的专业知识、孜孜不倦的 敬业精神使我受益匪浅。 敬业精神使我受益匪浅。在论文的完成过程中叶淑红 老师、张公亮老师，祝明思、张文姬、张馨予师姐， 老师、张公亮老师，祝明思、张文姬、张馨予师姐， 成功师长，以及604 604实验室的所有同学们也给了我许多 成功师长，以及604实验室的所有同学们也给了我许多 的指导和帮助，让我获益良多， 的指导和帮助，让我获益良多，并让我能如期完成我 的论文。在此一并致以诚挚谢意。 的论文。在此一并致以诚挚谢意。 最后， 最后，感谢食品学院所有给予我关心和帮助的老 师和同学！ 师和同学！
最佳添加量： 最佳添加量：2.0g/100mL
实验结果与讨论 矿物质含量对桑黄菌丝体生长的影响 硫酸镁的梯度试验
45 40 35 30 25 20 15 10 5 0 0 0.1 0.2 0.3 0.4 硫酸镁(g/100mL) 0.5 0.6 0.7
magnesium sulfate gradient test
桑黄的相关研究
实验研究内容
通过单因素实验和正交实验 针对桑黄液态培养基中的碳源、 氮源、矿物质等因素对桑黄菌丝 体生物量的影响进行研究。从而 达到对桑黄液态培养基营养成分 的优化。
桑黄的相关研究
桑黄的人工培养方法
1. 液态发酵培养 2. 固体培养 3. 人工栽培法 4. 原生质体诱变培育
桑黄的相关研究 桑黄液态培养关键控制条件： 桑黄液态培养关键控制条件：
50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0
糖 糖 糖 糖 淀 粉 葡 萄 乳 麦 芽 蔗 性 空 白
桑黄(g/100mL)
可 溶
实验结果与讨论
可溶性淀粉梯度实验
45 40 35 30
桑黄(g/100 100mL)
soluble starch gradient experiment